NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ LOÀI TRONG CHI NHÀU (MORINDA L.) Ở VIỆT NAM

Header Page of 148 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT -VŨ HƯƠNG GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ LOÀI TRONG CHI NHÀU (MORINDA L.) Ở VIỆT NAM TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: THỰC VẬT HỌC Mã số: 62 42 01 11 Hà Nội, 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 Công trình hoàn thành tại: Viện Sinh thái & Tài nguyên sinh vật Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Ninh Khắc Bản PGS TS Phan Văn Kiệm Phản biện 1: PGS.TS Trần Thế Bách Phản biện 2: GS.TS Nguyễn Văn Tuyến Phản biện 3: TS Trần Thị Phương Anh Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Viện Tại Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Vào hồi: 9h00 ngày 19 tháng năm 2016 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Thư viện Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật Footer Page of 148 Header Page of 148 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Lãnh thổ Việt Nam có tới 3/4 diện tích rừng núi, địa hình chia cắt nên điều kiện khí hậu đa dạng, có nhiều tiểu vùng khí hậu đặc trưng Theo ước tính, Việt Nam có khoảng gần 13000 loài thực vật bậc cao có mạch có khoảng 4000 loài sử dụng làm thuốc Việc sử dụng sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên làm dược phẩm chữa bệnh ngày thu hút quan tâm nhà khoa học cộng đồng nhiều ưu điểm tác dụng phụ, dễ hấp thu chuyển hóa thể so với dược phẩm tổng hợp Morinda L chi có số lượng loài tương đối lớn (hơn 40 loài), số loài thể khả điều trị bệnh tốt, loài Morinda citrifolia L xem vị thuốc có tác dụng nhuận tràng, lợi tiểu, điều hòa thần kinh, hạ huyết áp; loài Morida officinalis F C How sử dụng làm thuốc bổ trí não, ôn thận trợ dương, mạnh gân cốt, trừ phong thấp Hiện nay, hai loài sản xuất rộng rãi thị trường dạng thực phẩm chức hỗ trợ điều trị bệnh tim mạch, xương khớp, tai biến mạch máu não, ung thư… Ở nước ta, chi Morinda L sử dụng chủ yếu theo kinh nghiệm tri thức địa mà có nghiên cứu mang tính hệ thống Luận án tập trung nghiên cứu đặc tính sinh học khả sử dụng 03 loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam gồm: Nhàu lông mềm (Morinda tomentosa Heyne in Roth), Nhàu tán (Morinda umbellata L.) Nhàu dài (Morinda longifolia Craib) dựa vào nghiên cứu thành phần loài, tri thức địa, thành phần hóa học hoạt tính sinh học, từ lựa chọn loài có triển vọng để tiến hành nhân giống, tạo nguồn nguyên liệu làm sở khoa học cho nghiên cứu Mục tiêu luận án Nghiên cứu sở khoa học sinh học, hóa học nhằm góp phần khai thác, phát triển, bảo tồn sử dụng có hiệu nguồn tài nguyên loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Footer Page of 148 Header Page of 148 Ý nghĩa luận án Góp phần làm sở khoa học cho việc đánh giá tiềm triển vọng khai thác, gây trồng sử dụng bền vững loài chi Nhàu (Morinda L.) nước ta Những đóng góp luận án 4.1 Ghi nhận loài Nhàu dài (Morinda longifolia Craib) cho Hệ Thực vật Việt Nam 4.2 Ghi nhận bổ sung thêm điểm phân bố loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam 4.3 Lần cung cấp số dẫn liệu thành phần hóa học chủ yếu loài: Nhàu lông mềm (M tomentosa), Nhàu tán (Morinda umbellata L.), Nhàu dài (M longifolia) Việt Nam Đã phát công bố 06 hợp chất từ tự nhiên Trong đó: 02 hợp chất từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) morintoside A morintoside B; 02 hợp chất từ thân loài Nhàu tán (M umbellata) umbellatolide A umbellatolide B; 02 hợp chất từ thân loài Nhàu dài (M longifolia) longifolide A longifolide B 4.4 Lần thử nghiệm hoạt tính sinh học dịch chiết từ loài: Ba kích lông (M cochinchinensis), Nhàu lông mềm (M tomentosa), Nhàu tán (M umbellata) Nhàu dài (M longifolia) Việt Nam, đó, thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định, hoạt tính chống oxi hóa, hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư vú (MCF7), ung thư biểu mô (KB), ung thư phổi (LU-1) hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase chất phân lập từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) 4.5 Lần nghiên cứu khả nhân giống hom cành hạt loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) Bố cục luận án Luận án gồm 119 trang, 45 bảng, 39 hình, 03 sơ đồ 16 phụ lục Luận án gồm phần: Mở đầu (02 trang); Chương 1: Tổng quan tài liệu (31 trang); Chương 2: Địa điểm, thời gian, nội dung phương Footer Page of 148 Header Page of 148 pháp nghiên cứu (12 trang); Chương 3: Kết nghiên cứu (72 trang); Kết luận, kiến nghị (02 trang); Danh mục công trình công bố tác giả có liên quan đến luận án; Tài liệu tham khảo; Phụ lục Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Phần tổng quan tài liệu tập hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề:  Tình hình nghiên cứu loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.)  Công dụng loài chi Nhàu (Morinda L.)  Các nghiên cứu thành phần hóa học loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.)  Các nghiên cứu hoạt tính sinh học (chống oxi hóa, gây độc tế bào, kháng vi sinh vật kiểm định ức chế enzyme α-glucosidase) loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Chương ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu Điều tra, nghiên cứu khảo sát số tỉnh Việt Nam như: Sơn La (Chiềng An), Hà Tĩnh (Kỳ Anh), Quảng Trị (Tà Long), Thừa Thiên Huế (Phú Lộc, Nam Đông), Khánh Hòa (Nha Trang) 2.2 Vật liệu nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu loài đại diện chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam, bao gồm mẫu khô lưu giữ phòng tiêu thực vật mẫu tươi thu Sơn La (Chiềng An), Hà Tĩnh (Kỳ Anh), Quảng Trị (Tà Long), Thừa Thiên Huế (Phú Lộc, Nam Đông), Khánh Hòa (Nha Trang) Các nguyên liệu tiến hành thí nghiệm gồm hóa chất thiết bị cần thiết Viện Hóa học, Viện Hóa sinh biển Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH&CNVN 2.3 Nội dung nghiên cứu Footer Page of 148 Header Page of 148 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học, tri thức địa nhân giống số loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) 2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 03 loài: Nhàu lông mềm (M tomentosa), Nhàu tán (M umbellata) Nhàu dài (M longifolia) Việt Nam Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 2.3.3 Nghiên cứu hoạt tính sinh học (kháng vi sinh vật kiểm định, chống oxi hóa, gây độc tế bào khả ức chế enzyme α-glucosidase) dịch chiết số hợp chất phân lập từ 04 loài: Ba kích lông (M cochinchinensis), Nhàu lông mềm (M tomentosa), Nhàu tán (M umbellata) Nhàu dài (M longifolia) Việt Nam 2.4 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp điều tra thực vật: Xác lập ô tiêu chuẩn khảo sát trạng khả tái sinh tự nhiên loài Nhàu dài (M longifolia) Thừa Thiên Huế loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) Khánh Hòa - Phương pháp xác định đặc điểm tái sinh - Phương pháp điều tra cộng đồng - Phương pháp nhân giống: Sử dụng hom giống (có ảnh hưởng nhân tố) hạt từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) - Phương pháp phân lập xác định cấu trúc hoá học hợp chất: Phân lập phương pháp sắc ký lớp mỏng, sắc ký lớp mỏng điều chế Xác định cấu trúc hoá học hợp chất kết hợp xác định thông số vật lý với phương pháp phổ đại - Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học: Trong luận án này, dịch chiết thô chất phân lập thử nghiệm hoạt tính chống ôxi hóa theo phương pháp bảo vệ tế bào gan, gây độc tế bào in vitro, kháng vi sinh vật kiểm định ức chế enzym α-glucosidase 2.5 Xử lý số liệu: Bằng phần mềm Microsoft Excel, TableCurve 2D Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân bố số loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Footer Page of 148 Header Page of 148 3.1.1 Đặc điểm sinh học loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam 3.1.1.1 Đặc điểm chung chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Chi Nhàu (Morinda L.) dạng dây leo, bụi đứng gỗ nhỏ Phân nhánh từ nách Lá: Mọc đối; phiến thuôn dài (M longifolia, M citrifolia…) bầu dục (M umbellata, M parvifolia), mép đơn nguyên uốn lượn Lá kèm dạng rộng hình tim (M longifolia, M citrifolia…), dài nhọn, mỏng (M cochinchinensis, M officinalis) kèm (M longissimi, M tomentosa…); toàn kèm hợp lại ôm lấy thân Hoa: Cụm hoa tán (M cochinchinensis, M officinalis…) hình đầu (M citrifolia, M tomentosa…); mọc nách đầu cành Hoa có cuống (M longifolia, M officinalis…) không cuống (M cochinchinensis) Hoa lưỡng tính Thùy đài ngắn, lượn sóng Tràng hoa màu trắng, vàng nhạt hồng nhạt, hình phễu hình chuông, bên họng tràng nhẵn (M tomentosa, M longifolia) có nhiều lông (M citrifolia, M parvifolia), thùy 4-6, loe rộng phía đầu thùy Có 4-6 nhị nhô lên khỏi ống tràng (M longifolia, M villosa…) nằm phía họng tràng (M tomentosa…), nhị đính ½ đính đáy ống tràng, bao phấn đính lưng Bầu 1-2 ô, bầu ô, ô chứa từ 1- noãn Quả: Thường dính với thành kép, gần hình cầu (M tomnetosa, M umbellata) hình trứng (M citrifolia, M longifolia…), phần bụng phẳng có rãnh Hạt: Hạt cứng, phôi nhỏ, mầm hình thuôn 3.1.1.2 Khóa định loại loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam 1A Thân đứng 2A Tràng nhẵn 3A Ống tràng dài 15 mm, thùy tràng dài 6-7 mm M tomentosa 3B Ống tràng dài hay 20 mm, thùy tràng dài hay mm 4A Ống tràng dài hay 30 mm, thùy tràng dài 11 mm, đầu nụ hoa màu trắng-xanh M longissima Footer Page of 148 Header Page of 148 4B Ống tràng dài 20-25mm, thùy tràng dài 8-10 mm, đầu nụ hoa màu tím .3 M longifolia 2B Tràng có lông 5A Cuống cụm hoa dài 0-4 mm M persicaefolia 6A Đài thùy, cuống dài 7-8 mm.4a M persicaefolia var oblonga 6B Đài có thùy, cuống dài 1-3 cm 4b M persicaefolia var pandurifolia 5B Cuống cụm hoa dài 10-15 mm M citrifolia 1B Thân leo 7A Cụm hoa mọc đối diện M polyneura 6a M polyneura var aspera 7B Cụm hoa mọc nách hay đỉnh cành 8A Thùy tràng dài ống tràng M officinalis 8B Thùy tràng dài ống tràng 9A Lá kèm dạng màng mỏng 10A Số đôi gân bên nhiều hay 11A Ống tràng dài 1-1,2 mm, số đôi gân bên 10-13 M villosa 11B Ống tràng dài 1,5-2 mm, số đôi gân bên 7-10 .9 M cochinchinensis 10B Số đôi gân bên 4-5 10 M parvifolia 9B Lá kèm không dạng màng mỏng 12A.Số đôi gân bên 11 M umbellata 12B Số đôi gân bên 7-10 11a M umbellata var tonkinensis 3.1.1.3 Mô tả loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Morinda citrifolia L (1753) – Nhàu chanh Cây gỗ nhỏ, cao 7-10 m Thân cành nhẵn Phiến hình trái xoan, nhẵn Kích thước 12-30 cm x 6-15 cm Có kèm Cụm hoa hình đầu, mọc nách Hoa màu trắng, có lông họng; nhị 5, nhị ngắn; bầu ô Cụm hình trứng cầu; hạt nhiều Hình 3.2 Nhàu chanh (M citrifolia) Footer Page ofKỳ 148 chụp8tại Anh, Hà Tĩnh (ảnh Vũ Hương Giang) Header Page of 148 Sinh học sinh thái: Cây mọc rải rác rừng thường xanh, rừng phục hồi sau nương rẫy Cây hoa quanh năm Mẫu nghiên cứu: HÀ TĨNH, TNSV22-HT; NHA TRANG (Phú Khánh), 0000053452 (HN); KHÁNH HÒA (huyện đảo Trường Sa), 0000053452 (HN) Phân bố: Khá phổ biến Việt Nam Còn có Ấn Độ, Mianma, nước nhiệt đới Châu Á Australia Giá trị sử dụng: Chữa cao huyết áp, tiểu đường, nhức mỏi chân tay, đau lưng, sài uốn ván, chữa lỵ, ỉa chảy, cảm sốt bồi bổ sức khỏe Morinda cochinchinensis DC (1830) – Ba kích lông Cây bụi trườn, thân phủ lông dày màu vàng Lá kèm mỏng, dài nhọn, có lông Cụm hoa tán mọc đầu cành (30-40 hoa/cụm) Hoa không cuống Quả kép, đường kính khoảng 0,6-1,0 cm, chín có màu vàng Sinh học sinh thái: Mọc rải rác rừng ẩm, nơi có nhiều ánh sáng Phân bố: Kon Tum, Gia Lai, Đăk Lăk, Lâm Đồng, Kiên Giang Còn có Campuchia, Trung Quốc Mẫu nghiên cứu: THỪA THIÊN HUẾ, TNSV13-BM; ĐĂK LĂK, 0000053463 (HN); KON TUM, 0000053458 (HN) Giá trị sử dụng: Chữa phong thấp, gân cốt yếu, bổ trí não, chữa xuất tinh sớm, liệt dương, kinh nguyệt không đều, phong thấp, huyết áp cao Hình 3.4 Ba kích lông (M cochinchinensis) chụp Nam Đông, T.T.Huế (ảnh Vũ Hương Giang) Morinda longifolia Craib (1932) - Nhàu dài Cây gỗ, cao 3-5 m, cành nhẵn Phiến to, cỡ 15-25 x 6-8 cm; gân bên có 6-10 đôi, có kèm hình tim Các cụm hoa hình đầu mọc nách Hoa màu trắng, tràng 6, họng tràng nhẵn, nhị Bầu dưới, ô Quả kép hình trứng, đường kính 2,5-3cm, màu tím, rãnh sâu phần bụng Hạt nhiều, hình bầu dục, nhọn đầu, màu nâu đen Footer Page of 148 Header Page 10 of 148 10 Dạng sống sinh thái: Sống rải rác rừng thưa, rừng nghèo, ven sông, ven suối, nơi có độ ẩm cao Ra hoa, từ tháng 3-9 Phân bố: Thừa Thiên Huế Mẫu nghiên cứu: THỪA THIÊN HUẾ, TNSV10-BM; Missouri Botanical Garden Herbarium HAL10993 (MO) Giá trị sử dụng: Dùng phần thân già chữa vàng da (dân tộc Katu – Thừa Thiên Huế) Hình 3.6 Nhàu dài (M longifolia) chụp Nam Đông, T.T.Huế (ảnh Vũ Hương Giang) Morinda longissima Y Z Ruan (1999) – Nhó đông Cây gỗ nhỏ, cao từ 2-4m, phân cành nhiều; cành non vuông Phiến hình bầu dục, kích thước 12-18 x 8-10 cm; mặt có lông; gân bên 8-10 cặp Cụm hoa ngù nách Hoa màu trắng; tràng 4-5; nhị đính họng tràng, nhị ngắn Bầu ô Quả kép hình cầu trứng Sinh học sinh thái: Mọc rải rác rừng thường xanh thứ sinh, nương rẫy đồi trụi, độ cao 300-800 m Ra hoa vào tháng 4-5, già tồn đến tháng 12 Hình 3.8 Nhó đông (M longissima) chụp Chiềng An, Sơn La (ảnh Vũ Hương Giang) Phân bố: Sơn La, Lai Châu, Nghệ An, Thừa Thiên Huế, Quảng Nam, Quảng Ngãi Còn có Trung Quốc Mẫu nghiên cứu: SƠN LA, C-520 Giá trị sử dụng: Rễ làm thuốc trị viêm gan đồng bào Thái (Sơn La) K’Dong (Trà My – Quảng Nam) Morinda officinalis F.C.How (1958) – Ba kích Footer Page 10 of 148 Header Page 14 of 148 14 viêm gan cấp, trị đau lưng, tê thấp Ở Indonesia, dùng để chữa đau bụng, bệnh đái đường, lao phổi, đau ngực, gan, vết cắn, đứt 10a var tonkinensis Pitard (1924) – Nhàu tán Bắc Sinh học sinh thái: Bụi trườn Ra hoa tháng 5-8 Phân bố: Hà Tĩnh, Kon Tum Mẫu nghiên cứu: HÀ TĨNH (Kỳ Phú), 0000053480 (HN) KON TUM (Konplong), 0000053481 (HN) 11 Morinda villosa Hook F (1890) – Nhàu lông Cây bụi trườn, dài 1-2 m Phiến hình bầu dục, kích thước 5-11 cm x 24,5 cm Cụm hoa hình đầu, mọc đầu cành kẽ Hoa màu trắng; tràng 4-5, ống tràng có lông họng; nhị 4-5; bầu ô Quả kép hình cầu Dạng sống sinh thái: Mọc hoang bờ sông suối Ra hoa tháng 5-6, có tháng 8-9 Phân bố: Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hòa Bình, Hà Nội, Hà Nam, Kon Tum, Lâm Đồng Còn có Ấn Độ, Mianma, Trung Quốc Mẫu nghiên cứu: VĨNH PHÚC, TNSV35-TĐ; KON TUM, 0000053518 (HN) Hình 3.20 Nhàu lông (M villosa) chụp Tam Đảo, Vĩnh Phúc (ảnh Ninh Khắc Bản) Giá trị sử dụng: Chữa đau lưng, tê thấp, lỵ Lá tươi giã nát chữa mụn nhọt 3.1.2 Sự phân bố loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Kế thừa tài liệu tham khảo, luận án bổ sung thêm khu vực phân bố loài Nhàu Việt Nam, từ thấy rằng, chi Nhàu nước ta có phạm vi phân bố tương đối rộng (Bảng 3.4) 3.1.3 Khả tái sinh tự nhiên mật độ phân bố loài Morinda longifolia, Morinda tomentosa Footer Page 14 of 148 Header Page 15 of 148 15 Bảng 3.4 Sự phân bố loài thuộc chi Nhàu Việt Nam Loài MCF MC ML MLS MO Vùng TL BS TL BS TL BS TL BS TL BS phân bố Khu vực Trung du miền núi phía Bắc Hà Giang + Cao Bằng Lao Cai + Lai Châu + + Sơn La © + C Phú Thọ + C Thái Nguyên + C Bắc Kạn + Lạng Sơn + Quảng Ninh + C Bắc Giang + Hòa Bình + Khu vực Đồng Sông Hồng Vĩnh Phúc + C Hà Nội + Hà Nam Bắc Ninh + Ninh Bình © + Khu vực Bắc Trung Thanh Hóa Nghệ An + Hà Tĩnh © Quảng Bình © © © Quảng Trị + © T.T Huế © © + Khu vực Nam Trung Quảng Nam + + Quảng Ngãi + + Khánh Hòa + Ninh Thuận + Khu vực Tây Nguyên Kon Tum + + Gia Lai + + C Đăk Lăk © + Lâm Đồng + + Khu vực Đông Nam Bộ Bình Bương + Tây Ninh + © Đồng Nai + TP HCM + Khu vực Tây Nam Bộ Đồng Tháp + An Giang + Kiên Giang + + MPV MP MT MU MV TL BS TL BS TL BS TL BS TL BS + + + + + + + + + + + + © + + © + © + © © © © + C © + + + + + + + + + + + + © C C + Chú thích: MCF: M citrifolia; MC: M cochinchinensis; ML: M longifolia; MLS: M longissima; MO: M.officinalis; MPV: M parvifolia; MP: M persicaefolia; MT: M tomentosa; MU: M umbellata; 10 MV: M villosa TL: Các điểm phân bố theo tài liệu ghi nhận (ký hiệu +) BS: Các điểm phân bố theo nghiên cứu luận án (ký hiệu C) Các điểm phân bố bổ sung luận án (ký hiệu ©) Footer Page 15 of 148 Header Page 16 of 148 16 3.1.3.1 Loài Nhàu dài (M longifolia) Qua Bảng 3.6 cho thấy, tái sinh chồi từ gốc, rễ chân núi (OTC1) sườn núi (OTC2) chiếm ưu so với tái sinh chồi từ hạt Chất lượng tái sinh điểm có khác rõ rệt Ở chân núi, tỷ lệ tốt (đạt 73,9%) có so với sườn núi (57,1%); tỷ lệ trung bình (23,9%) thấp sườn núi (33,3%) Như vậy, loài M longifolia phân bố chân núi bị tác động ngoại cảnh so với sườn núi có khả tái sinh chồi từ gốc khỏe, đỉnh núi (OTC3) chưa thấy xuất loài Bảng 3.6 Đặc điểm tái sinh chất lượng tái sinh tự nhiên loài M longifolia Nguồn gốc tái sinh OTC cấp I Gốc, rễ Số 34 16 % 73,9 76,2 Chất lượng tái sinh Hạt Số 12 Trung bình Tốt Tổng % 26,1 23,8 46 21 Số 34 12 % 73,9 57,1 Số 11 % 23,9 33,3 Xấu Số % 2,2 9,5 Đặc điểm phân bố: Loài M longifolia phân bố theo kiểu thảm thực vật phục hồi sau nương rẫy, chủ yếu chân núi (OTC1) sườn núi (OTC2), xuất độ cao từ 100 m – 420 m so với mặt nước biển 3.1.3.2 Loài Nhàu lông mềm (M tomentosa): Bảng 3.8 cho thấy, khu vực, tái sinh chồi từ gốc, rễ chiếm ưu từ hạt Chất lượng tái sinh có khác Loài M tomentosa có khả tái sinh chồi từ gốc khỏe Điều làm sở cho khả nhân giống hình thức giâm hom Đặc điểm phân bố: Loài M tomentosa phân bố kiểu thảm thực vật rừng phòng hộ ven biển, chủ yếu chân núi (OTC1) sườn núi (OTC2), xuất độ cao từ 20 m – 100 m so với mặt nước biển Footer Page 16 of 148 Header Page 17 of 148 17 Bảng 3.8 Đặc điểm tái sinh chất lượng tái sinh tự nhiên loài M tomentosa Nguồn gốc tái sinh OTC cấp I Chất lượng tái sinh Trung Xấu bình Tổng Số Số Số Số Số % % % % % cây cây 69 75,8 22 24,2 91 67 73,6 21 23,1 3,3 21 72,4 27,6 29 15 51,7 20,7 27,6 0 0 0 0 0 3.2 Điều tra tri thức địa việc sử dụng loài Nhàu Gốc, rễ Hạt Tốt (Morinda L.) cộng đồng dân tộc tỉnh Thừa Thiên Huế, Quảng Trị Khánh Hòa Kết điều tra cho thấy, Tà Long, người Vân Kiều sử dụng loài Ba kích (M officinalis) làm thuốc Ở Cam Lâm, người Raglai sử dụng loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) Ở Xuân Lộc, có tới 03 loài thuộc chi Nhàu (M cochinchinensis, M longifolia, M umbellata) sử dụng chữa bệnh (Bảng 3.10) Bảng 3.10 Đa dạng phận sử dụng làm thuốc từ loài Nhàu T T Loài nghiên cứu Ba kích lông (M cochinchinensis) Nhàu dài (M longifolia) Ba kích (M officinalis) Nhàu lông mềm (M tomentosa) Nhàu tán (M umbellata) Bộ phận sử dụng Số người sử dụng làm thuốc theo loài Ka tu % Vân Kiều % Raglai % Rễ 08 12,5 18 28,1 - - Gốc thân 12 18,8 36 55,4 - - Rễ - - 27 84,4 - - Vỏ, rễ - - - - 11 39,3 16 25,0 29 44,6 - - Lá, thân, rễ Qua trình khảo sát cộng đồng dân tộc Ka tu, Bru Vân Kiều Raglai khu vực nghiên cứu, thông qua phiếu điều tra thu thập thuốc dân gian từ loài: Ba kích lông (M Footer Page 17 of 148 Header Page 18 of 148 18 cochinchinensis), Nhàu dài (M longifolia), Ba kích (M officinalis), Nhàu lông mềm (M tomentosa), Nhàu tán (M umbellata) (Chi tiết thuốc trình bày luận án chính) 3.3 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam 3.3.1 Loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) MT1 (new) MT2 R=H MT4 MT5 (new) MT3 R=CH3 MT8 MT7 MT6 MT9 MT10 MT11 MT12 Hình 3.25 Tổng hợp hợp chất phân lập từ loài M tomentosa Bằng phương pháp hóa học xác định hợp chất phân lập là: morintoside A (MT1, chất mới), asperulosidic acid (MT2), daphylloside (MT3), asperuloside (MT4), morintoside B (MT5, chất mới), dehydroepoxymethoxygaertneroside (MT6), (1R,6R,9R) 6,9,11-trihydroxy-4-megastigmen-3-one (MT7), 4-epi-borreriagenin (MT8), trans-phytol (MT9), ursolic acid lactone (MT10), 3βhydroxyurs-12-en-28-al (MT11), ursolic acid (MT12) 3.3.2 Loài Nhàu tán (M umbellata) Bằng phương pháp hóa học xác định hợp chất phân lập là: umbellatolide A (MU1, chất mới), umbellatolide B (MU2, Footer Page 18 of 148 Header Page 19 of 148 19 chất mới), deacetylasperulosidic acid (MU3), 4-epi-borreriagenin (MU4), 1-C-syringyl-glycerol (MU5) MU2 (new) MU1 (new) MU4 MU3 Hình 3.28 Tổng hợp hợp chất phân lập từ loài M umbellata MU5 3.3.3 Loài Nhàu dài (M longifolia) ML1 ML2 (new) ML3 (new) 28 21 23 18 15 10 HO 27 13 19 26 25 20 17 11 O O ML4 ML5 Hình 31 Tổng hợp hợp chất phân lập từ loài M longifolia Bằng phương pháp hóa học xác định hợp chất phân lập là: cerbinal (ML1), longifolide A (ML2, chất mới), longifolide B (ML3, chất mới), 5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol (ML4), oleanolic acid (ML5) 3.4 Kết đánh giá hoạt tính sinh học số loài thuộc chi Nhàu 3.4.1 Kết sàng lọc hoạt tính dịch chiết thô Sử dụng 04 mẫu dịch chiết thô từ loài: M tomentosa (MT), M cochinchinensis (MC), M umbellata (MU) M longifolia (ML) để tiến hành sàng lọc, kết cho thấy: mẫu MT MC thể hoạt Footer Page 19 of 148 Header Page 20 of 148 20 Ức chế (%) tính chống oxi hóa tốt với giá trị ED50 thấp, đặc biệt mẫu MT Mẫu MU biểu có hoạt tính dòng MCF7; mẫu MC biểu có hoạt tính gây độc dòng LU-1 Khi thử hoạt tính kháng loại vi sinh vật kiểm định phiến vi lượng 96 giếng cho thấy, có hai mẫu MC MT thể có hoạt tính chủng Staphylococcus aureus 3.4.2 Kết đánh giá hoạt tính hợp chất phân lập từ số loài Nhàu 3.4.2.1 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào Hợp chất ML5 thể có hoạt tính gây độc tế bào dòng KB 3.4.2.2 Kết đánh giá hoạt tính chống oxi hóa Tất mẫu thí nghiệm chưa thể có hoạt tính chống oxi hóa 3.4.2.3 Đánh giá hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase 50.96 60 50 40 23.8 30 19.42 18.22 19.5 17.13 17.79 20 14.53 14.69 13.41 7.29 9.96 6.55 10 Hợp chất Hình 3.32 Mức độ ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất phân lập từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) Kết Hình 3.32 cho thấy, tất hợp chất phân lập từ loài M tomentosa thể có hoạt tính, đó, hợp chất MT10 thể hoạt tính mạnh với phần trăm ức chế 23,8% nồng độ 50 µM, tiếp đến hợp chất MT7 (19,50%); MT12 (19,42%); MT6 (18,22%); thấp hợp chất MT9 (6,55%) 3.5 Nhân giống loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) Footer Page 20 of 148 Header Page 21 of 148 21 3.5.1 Nhân giống giâm hom 3.5.1.1 Ảnh hưởng độ dài tuổi hom giống đến tỷ lệ sống, khả nảy chồi rễ Bảng 3.20 Ảnh hưởng độ dài hom tới tỷ lệ sống loại hom Kết Bảng 3.20 cho thấy, loại hom non sử dụng để nhân giống Các hom già bánh tẻ có tỷ lệ sống cao lại giảm dần từ giai đoạn sau 40 ngày, 60 ngày 90 ngày Giữa loại hom có độ dài khác hom giống có độ dài 13 cm đạt tỷ lệ sống cao thí nghiệm Kết Bảng 3.21 cho thấy, tất loại hom non không nảy chồi Khả nảy chồi loại hom bánh tẻ tăng dần So sánh hom giống có độ dài khác loại hom già ta thấy, tỷ lệ chồi hom giống có độ dài 13 cm 20 cm cao (89,62% 83,55%) Các hom giống già có độ dài cm có tỷ lệ chồi mức độ thấp (76,35%) Kết thu tương tự nghiên cứu khả rễ Sau thời gian giâm 60 ngày, 100% số hom sống độ dài 13 cm, 20 cm rễ Còn loại hom ngắn (7 cm) tỷ lệ rễ có thấp đạt tới 88,46% Bảng 3.21 Ảnh hưởng độ dài hom tới tỷ lệ chồi hom giống Footer Page 21 of 148 Header Page 22 of 148 22 Như vậy, để nhân giống sinh dưỡng loài M tomentosa, việc sử dụng hom giống có độ dài 13 cm từ cành già thích hợp nhất, đạt hiệu cao khuôn khổ thí nghiệm 3.5.1.2 Ảnh hưởng giá thể độ che sáng đến tỷ lệ sống rễ hom già Bảng 3.25 Ảnh hưởng độ che sáng tới tỷ lệ sống hom già giâm giá thể Các hom giống dùng để thí nghiệm loại hom già, chiều dài 13cm Các kết Bảng 3.25 cho thấy, tỷ lệ sống hom giống giảm dần Đến sau 60 ngày giâm, tỷ lệ sống hom giống cao Footer Page 22 of 148 Header Page 23 of 148 23 mức độ che sáng 30%, thấp mức che tới 70% Như vậy, hom già, có độ dài 13 cm, giá thể cát sạch, với độ che sáng 30% cho tỷ lệ sống cao Bảng 3.26 Ảnh hưởng độ che sáng tới khả nảy chồi loại hom già giâm loại giá thể khác Bảng 3.26 cho thấy, hom giống già giâm giá thể cát cho tỷ lệ chồi đạt giá trị cao tất mức độ chiếu sáng Khả chồi thấp dần từ mức che sáng 50% đến 70% tất giá thể giâm Khả rễ hom già cho kết tương tự, giâm giá thể cát cho tỷ lệ rễ đạt giá trị cao tất mức độ chiếu sáng (100%) Trên loại giá thể giâm khác với mức độ che 30% ánh sáng, số hom giống rễ cho tỷ lệ đạt giá trị cao 3.5.1.3 Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng đến tỷ lệ sống rễ hom già Từ kết Bảng 3.30 khẳng định, thí nghiệm này, sử dụng chất điều hòa sinh trưởng α-NAA nồng độ 1,0 ppm, hom giống già cho tỷ lệ sống cao (92,00%) Với ba loại chất kích thích sinh trưởng tỷ lệ chồi rễ hom già đạt giá trị cao xử lý nồng độ 1,0 ppm (lần lượt 96,38%, 100%) thấp dần nồng độ 0,5 ppm đến 1,5 ppm Footer Page 23 of 148 Header Page 24 of 148 24 Bảng 3.30 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nồng độ khác đến khả sống loại hom già Như vậy, kết nghiên cứu thu từ thí nghiệm thấy rằng: Nhân giống sinh dưỡng loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) loại hom già, có độ dài 13 cm, có xử lý chất điều hòa sinh trưởng α-NAA với nồng độ 1,0 ppm cho hiệu cao 3.5.2 Nhân giống hạt Kết theo dõi thời gian nảy mầm hạt cho thấy, khả nảy mầm hạt tươi tương đối chậm Thời gian bắt đầu nảy mầm khoảng 120 ngày (4 tháng) sau gieo, hạt phơi khô hoàn toàn khả nảy mầm 3.6 Bàn luận Với tiêu thu được, đến khẳng định chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam gồm 10 loài Ghi nhận bổ sung thêm nhiều điểm phân bố đó, ghi nhận thêm điểm phân bố miền Trung (Quảng Bình, Quảng Trị) cho loài Ba kích (M officinalis) Quảng Nam cho loài Nhàu nước (M persicaefolia) Khi nhân giống loài Nhàu lông mềm (M tomentosa), sử dụng loại hom giàm đạt hiệu cao Trong thành phần hóa học loài nghiên cứu xác định hợp chất 22 hợp chất biết Các dịch chiết chất thể có hoạt tính, đặc biệt loài Nhàu lông mềm Footer Page 24 of 148 Header Page 25 of 148 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trên sở tiêu 09 loài thu được, kết hợp với mẫu vật có, xây dựng khóa phân loại, giám định tên khoa học, mô tả đặc điểm hình thái, sinh thái cho 10 loài 04 thứ (variety) chi Nhàu (Morinda L.) họ Cà phê (Rubiaceae) Việt Nam Trong số đó, ghi nhận bổ sung thêm 01 loài cho Hệ Thực vật Việt Nam loài Nhàu dài (Morinda longifolia Craib) Ghi nhận bổ sung thêm nhiều điểm phân bố cho 09 loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Các kết điều tra tri thức địa bước đầu đánh giá, nhiều phận (rễ, thân, lá…) số loài Nhàu (Morinda spp.) thường dùng làm thuốc chữa bệnh trị mụn nhọt, mẩn ngứa, ghẻ lở da, tẩy giun sán, nhuận tràng, lợi tiểu, vàng da, đau nhức xương khớp, hạ sốt, điều kinh, ôn thận trợ dương, mạnh gân cốt, trừ phong thấp, giúp tăng sức đề kháng, tăng khả co bóp ruột giảm huyết áp Tách chiết, phân lập xác định 22 hợp chất gồm: - 12 hợp chất từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) có hợp chất morintoside A (MT1), morintoside B (MT5) 10 hợp chất biết asperulosidic acid (MT2), daphylloside (MT3), asperuloside (MT4), dehydroepoxymethoxygaertneroside (MT6), (1R,6R,9R) 6,9,11-trihydroxy-4-megastigmen-3-one (MT7), 4-epiborreriagenin (MT8), trans-phytol (MT9), ursolic acid lactone (MT10), 3β-hydroxyurs-12-en-28-al (MT11), ursolic acid (MT12); - hợp chất từ cành loài Nhàu tán (M umbellata) có hợp chất umbellatolide A (MU1), umbellatolide B (MU2) 03 hợp chất biết deacetylasperulosidic acid (MU3), 4-epiborreriagenin (MU4), 1-C-syringyl-glycerol (MU5); - hợp chất từ cành loài Nhàu dài (M longifolia) có hợp chất longifolide A (ML2), longifolide B (ML3) 03 hợp Footer Page 25 of 148 Header Page 26 of 148 26 chất biết cerbinal (ML1), 5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol (ML4), oleanolic acid (ML5) Kết thử hoạt tính sinh học - Dịch chiết từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) thể tốt hoạt tính chống oxi hóa với giá trị ED50 đạt 2,93 µg/ml hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định chủng vi sinh vật Staphylococcus aureus với giá trị IC50 đạt 6,2 µg/ml - Các hợp chất (MT1, MT2, MT3, MT4, MT5, MT6, MT7, MT8, MT9, MT10, MT11, MTT12) phân lập từ loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) thể có hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase, hợp chất MT10 (ursolic acid lactone) thể hoạt tính mạnh với khả ức chế 23,8 % nồng độ 50 µM - Hợp chất ML5 (oleanolic acid) phân lập từ loài Nhàu dài (M longifolia) thể hoạt tính gây độc tế bào dòng KB tốt, với giá trị IC50 đạt 3,97 g/ml Để nhân giống loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) biện pháp giâm hom đạt hiệu cao nhất, cần chọn hom già, với chiều dài 13cm, có xử lý chất điều hòa sinh trưởng α-NAA với nồng độ 1,0 ppm, giâm giá thể cát có độ che sáng 30% Để nhân giống hạt cần sử dụng hạt to, gieo sau thu hái (hạt tươi) đất ẩm cho tỷ lệ hạt nảy mầm đạt 61,47% KIẾN NGHỊ Hầu tất loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam sử dụng làm thuốc dân gian Ngoài loài Ba kích (M officinalis) Nhàu chanh (M citrifolia), nghiên cứu sâu đầy đủ, loài Nhàu lông mềm (M tomentosa) loài có triển vọng công nghiệp dược nước ta Footer Page 26 of 148 Header Page 27 of 148 27 CÁC CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN NỘI DUNG LUẬN ÁN Vu Huong Giang, Ninh Khac Ban, Nguyen Xuan Nhiem, Phan Van Kiem, Chau Van Minh, Hoang Le Tuan Anh, Pham Hai Yen, Bui Huu Tai, Nguyen Xuan Cuong, Nguyen Hoai Nam, Seung Hyun Kim, Young-In Kwon, and Young Ho Kim (2013) Chemical Constituents of the Morinda tomentosa Leaves and their α-Glucosidase Inhibitory Activity Bull Korean Chem Soc., Vol 34, No 5, Page 1555-1558 Ninh Khac Ban, Vu Huong Giang, Tran My Linh, Le Quynh Lien, Ninh Thi Ngoc, Do Thi Thao, Nguyen Hoai Nam, Nguyen Xuan Cuong, Phan Van Kiem, Chau Van Minh (2013) Two new 11-noriridoids from the aerial parts of Morinda umbellata Phytochemistry Letters Page 267-269 Ninh Khắc Bản, Nguyễn Xuân Cường, Nguyễn Hoài Nam, Phan Văn Kiệm, Châu Văn Minh, Trần Mỹ Linh, Vũ Hương Giang, Lê Quỳnh Liên, Huỳnh Văn Kéo, Trần Thiện Ân, Regalado Jacito (2013) Tiềm sử dụng loài Morinda umbellata L vườn Quốc gia Bạch Mã Báo cáo hội nghị khoa học Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ V NXB Nông nghiệp ISBN: 978-60460-0730-2., Tr 945-949 Ninh Khắc Bản, Nguyễn Quốc Bình, Vũ Hương Giang, Trần Mỹ Linh, Lê Quỳnh Liên, Huỳnh Văn Kéo, Trần Thiện Ân, Jacito Regalado (2013) Tri thức sử dụng loài thuốc cộng đồng dân tộc Cơ tu Vân Kiều vùng đệm Vườn Quốc gia Bạch Mã Báo cáo hội nghị khoa học Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ V NXB Nông nghiệp ISBN: 978-604-60-0730-2., Tr 950-956 Ninh Khac Ban, Vu Huong Giang, Tran My Linh, Le Quynh Lien, Ninh Thi Ngoc, Le Duc Dat, Nguyen Phuong Thao, Nguyen Xuan Nhiem, Nguyen Xuan Cuong, Van Cuong Pham, Nguyen Hoai Nam, Jacinto Regalado, Huynh Van Keo, Phan Van Kiem and Chau Van Footer Page 27 of 148 Header Page 28 of 148 28 Minh (2014) Two Novel Iridoids from Morinda longifolia Natural Product Communications, Vol 9, No 7, Page 891 – 893 Vu Huong Giang, Tran My Linh, Le Quynh Lien, Do Thi Thao, Ninh Khac Ban (2014) Study on biological activities of Morinda species collected from the central of Viet Nam Hội thảo Khoa học Công nghệ VAST-BAS lần thứ I, Tr 525-530 Vu Huong Giang, Ninh Khac Ban, Tran My Linh, Le Quynh Lien, Nguyen Xuan Nhiem, Duong Thi Dung, Bui Huu Tai, Hoang Le Tuan Anh, Pham Hai Yen, Chau Van Minh, Phan Van Kiem* (2015) Iridoid glycosides from Morinda tomentosa and their endoplasmic reticulum stress modulation activity Tạp chí Hóa học ISSN 0866-7144 Tập 2E, số 53 Tr 112-115 Vũ Hương Giang, Ninh Thị Ngọc, Trần Mỹ Linh, Lê Quỳnh Liên, Ninh Khắc Bản (2015) Ghi nhận loài Morinda longifolia Craib thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam Báo cáo hội nghị khoa học Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VI NXB Nông nghiệp, ISBN: 978-604-913-408-1, Tr 96-99 Vũ Hương Giang, Ninh Khắc Bản, Trần Mỹ Linh, Lê Quỳnh Liên (2015) Điều tra tình hình phân bố khả tái sinh tự nhiên số loài chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Báo cáo hội nghị khoa học Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VI NXB Nông nghiệp, ISBN: 978-604-913-408-1, Tr 1357-1363 Footer Page 28 of 148 ... hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề:  Tình hình nghiên cứu loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.)  Công dụng loài chi Nhàu (Morinda L.)  Các nghiên cứu thành phần hóa học loài thuộc chi Nhàu (Morinda. .. 148 Header Page of 148 3.1.1 Đặc điểm sinh học loài thuộc chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam 3.1.1.1 Đặc điểm chung chi Nhàu (Morinda L.) Việt Nam Chi Nhàu (Morinda L.) dạng dây leo, bụi đứng gỗ... thư… Ở nước ta, chi Morinda L sử dụng chủ yếu theo kinh nghiệm tri thức địa mà có nghiên cứu mang tính hệ thống Luận án tập trung nghiên cứu đặc tính sinh học khả sử dụng 03 loài chi Nhàu (Morinda