Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của bệnh suy hô hấp ở gà do ort ornithobacterium rhinotracheale gây ra

Mức độ nghiêm trọng của bệnh phụ thuộc vào khả năng gây bệnh của các chủng vi khuẩn và các virus, vi khuẩn kế phát, các vấn đề thơng giĩ, độ tuổi bị nhiễm bệnh và đặc biệt là thời gian

MỤC LỤC

Lời cam ñoan ii

Lời cảm ơn iii

Mục lục iv

Danh mục bảng viii

Danh mục hình ix

Danh mục biểu ñồ x

MỞ ðẦU 1

TÍNH CẤP THIẾT CỦA ðỀ TÀI 1

MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ðỀ TÀI 2

CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 LỊCH SỬ NGHIÊN CỨU BỆNH ORT 3

1.2 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA VI KHUẨN ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE 4

1.3 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA BỆNH ORT 8

1.4 MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ THUỐC KHÁNG SINH 15

CHƯƠNG 2 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19

2.1 ðỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 19

2.1.1 ðộng vật nghiên cứu 19

2.1.2 Mẫu bệnh phẩm nghiên cứu 19

2.1.3 Hóa chất 19

2.1.4 Dụng cụ nghiên cứu 19

2.1.5 ðịa ñiểm nghiên cứu 19

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 20

2.2.1 Nghiên cứu tỷ lệ mắc và chết do ORT- Ornithobacterium rhinotracheale 20

2.2.2 Xác ñịnh ñặc ñiểm triệu chứng lâm sàng chủ yếu của bệnh ORT ở gà 20

2.2.3 Xác ñịnh ñặc ñiểm biến ñổi bệnh lý ñại thể chủ yếu của gà mắc bệnh ORT 20

2.2.4 Xác ñịnh ñặc ñiểm biến ñổi bệnh lý vi thể chủ yếu của gà mắc ORT 20

2.2.5 Xác ñịnh chỉ tiêu huyết học ở gà ISA Brown mắc bệnh ORT 20

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20

2.3.1 Quan sát và theo dõi triệu chứng lâm sàng ñiển hình của gà mắc bệnh 20

2.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn O.rhinotracheale 21

2.3.3 Xác ñịnh sự biến ñổi các chỉ tiêu huyết học ở gà bệnh 21

2.3.4 Mổ khám và quan sát các tổn thương ñại thể 22

2.3.5 Xử lý số liệu 23

2.3.6 Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý 24

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27

3.1 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH TỶ LỆ MẮC VÀ CHẾT Ở GÀ MẮC ORT TRÊN ðỊA BÀN HUYỆN BA VÌ – HÀ NỘI 27

3.1.1 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do bệnh ORT- O.Rhinotracheale gây ra trên ñịa bàn huyện Ba Vì- Hà Nội 27

3.1.2 Kết quả kiểm tra, phân lập vi khuẩn O rhinotracheale từ những gà mắc bệnh 29

3.1.3 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do ORT ở các giống gà trên ñịa bàn huyện Ba Vì - Hà Nội 31

3.1.4 Tỷ lệ mắc và chết do ORT theo mùa trên ñàn gà theo dõi ở một số xã tại Ba Vì- Hà Nội 35

3.1.5 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do ORT ở gà theo lứa tuổi trên ñịa bàn Ba Vì- Hà Nội 38

3.1.6 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do ORT ở những ñàn gà theo dõi theo phương thức chăn nuôi trên ñịa bàn xã Cẩm Lĩnh- Ba Vì- Hà Nội 41

3.2 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CHỦ YẾU CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT 44

3.3 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH BIẾN ðỔI BỆNH LÝ ðẠI THỂ CHỦ YẾU CỦA GÀ BỊ MẮC ORT 49

3.4 Kết quả xác ñịnh biến ñổi bệnh lý vi thể ở gà mắc ORT - O.rhinotrachale gây ra 55

3.5 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC Ở GÀ ISA

BROWN MẮC ORT- O.RHINOTRACHALE 62

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66

KẾT LUẬN 66

KIẾN NGHỊ 67

TÀI LIỆU THAM KHẢO 68

DANH MỤC BẢNG CHỮ VIẾT TẮT

PGS.TS : Phó Giáo sư- Tiến sỹ

ORT : Ornithobacterium rhinotracheale

SMN: Số mẫu nhiễm

SMC: Số mẫu chết

DANH MỤC BẢNG

Số bảng Tên bảng Trang

3.1 Tình hình bệnh do ORT gây ra trên ñịa bàn huyện Ba Vì- Hà Nội 28

3.2 Kết quả phân lập vi khuẩn ORT từ những gà mắc bệnh 30

3.3 Tỷ lệ mắc và chết do O.rhinotrachale ở các giống gà theo dõi trên ñịa bàn Ba Vì- Hà Nội 32

3.4 Tỷ lệ mắc ORT theo mùa trên ñàn gà theo dõi 36

3.5 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do ORT ở gà theo lứa tuổi trên ñịa bàn Ba Vì- Hà Nội 39

3.6 Tỷ lệ mắc và chết do ORT ở gà theo lứa tuổi 39

3.7 Tỷ lệ mắc bệnh ORT theo phương thức chăn nuôi trên ñàn gà theo dõi 41

3.8 Kết quả xác ñịnh triệu chứng lâm sàng chủ yếu của ñàn gà mắc bệnh ORT tại các xã ở Ba Vì- Hà Nội 44

3.9 Kết quả xác ñịnh triệu chứng lâm sàng chủ yếu ở gà mắc ORT 46

3.10 Tỷ lệ tổn thương ñại thể ở các cơ quan nội tạng gà bệnh 49

3.11 Kết quả xác ñịnh biến ñổi ñại thể ở các cơ quan nội tạng của gà mắc ORT khi mổ khám 50

3.12 Tổn thương vi thể ở gà măc bệnh ORT do O rhinotracheale gây ra 55

3.13 Chỉ tiêu hệ hồng cầu của gà ISA Brown mắc ORT ở 19 tuần tuôi 62

3.14 Chỉ tiêu sinh lý hệ bạch cầu ở gà ISA Brown 19 tuần tuổi mắc bệnh ORT 63

DANH MỤC HÌNH

STT Tên hình Trang

3.1 Gà ủ rũ, tái mào 48

3.2 Mũi có dịch 48

3.3 Gà thở ngáp 48

3.4 Gà Ủ Rũ, giảm ăn 48

3.5 Gà thở ngáp, rướn cổ thở 48

3.6 Gà há mỏ thở, thở gió 48

3.7 Nhánh khí quản có cục mủ 52

3.8 Khí quản viêm- có mủ 52

3.9 Phổi viêm- có mủ 53

3.10 Phổi Viêm- có mủ ở nhánh phế quản 53

3.11 Túi khí dày, ñục màu 54

3.12 Phổi viêm ñỏ có mủ 54

3.13 Khí quản gà khỏe, biểu mô sắp xếp trật tự, cấu chúc chặt chẽ HE10× 57

3.14 Phổi gà ñối chứng, lòng phế nang trong sáng HE10× 57

3.15 Hạ niêm mạc khí quản chứa nước phù HE10× 58

3.16 Niêm mạc khí quản bong tróc HE 10× 58

3.17 Ổ mủ ở phổi gà HE 10× 59

3.18 Ổ mủ ở phổi gà HE20× 59

3.19 Sung huyết phổi HE10× 60

3.20 Sung huyết phổi 60

3.21 Sung huyết biểu mô khí quản HE10× 61

3.22 Xuất huyết khí quản HE10× 61

DANH MỤC BIỂU ðỒ

STT Tên biểu ñồ Trang

3.1 Tỷ lệ mắc ORT ở các giống gà theo dõi trên ñịa bàn Ba Vì- Hà Nội 33

3.2 Tỷ lệ chết do ORT ở các giống gà theo dõi 35

3.3 Tỷ lệ mắc O.rhinotracheale theo mùa trên ñàn gà theo dõi 38

3.4 Tỷ lệ mắc và chết do ORT ở gà theo lứa tuổi 40

3 5 Tỷ lệ mắc và chết do ORT theo phương thức chăn nuôi 43

3.6 Tỷ lệ biến ñổi vi thể ở các cơ quan ở gà mắc ORT 56

3.7a Công thức bạch cầu của gà ISA Brown 19 tuần tuổi mắc ORT 64

3.7b Công thức bạch cầu của gà ISA Brown 19 tuần tuổi khỏe mạnh 64

MỞ ðẦU

TÍNH CẤP THIẾT CỦA ðỀ TÀI

Chăn nuơi gia cầm từ lâu đã đĩng một vị trí quan trọng trong chăn nuơi của nước ta, trong những năm gần đây chăn nuơi đã cĩ những thay đổi đáng kể

và gĩp phần khơng nhỏ trong quá trình phát triển của ngành nơng nghiệp việt nam, gĩp phần nâng cao mức sống cho người dân nơng thơn cũng như thành thị Với vai trị khơng nhỏ đĩ, ðảng và nhà nước đã và đang tiếp tục đầu tư và ngày càng quan tâm tới chăn nuơi, nhất là chăn nuơi gia cầm Bên cạnh những thành cơng đã đạt được, chăn nuơi đang gặp phải những khĩ khăn khách quan và những trở ngại khơng nhỏ do bệnh tật gây ra làm ảnh hưởng sâu sắc cho kinh tế ngành chăn nuơi

Trong năm 2013, chăn nuơi gia cầm và ngành thú y phải đối mặt với một khĩ khăn lớn đĩ là một dịch bệnh lạ trên gà Qua nghiên cứu được đánh

giá sơ bộ và được xác định là bệnh do Ornithobacterium rhinotracheale Bệnh Ornithobacterium là một bệnh nhiễm trùng của gà và gà tây gây ra do vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) Mức độ nghiêm trọng của

bệnh phụ thuộc vào khả năng gây bệnh của các chủng vi khuẩn và các virus,

vi khuẩn kế phát, các vấn đề thơng giĩ, độ tuổi bị nhiễm bệnh và đặc biệt là thời gian can thiệp chữa trị cĩ kịp thời hay khơng cùng với đĩ là việc dùng

thuốc đúng và phù hợp…

Vì vậy để hạn chế những thiệt hại cho bệnh này gây nên thì một trong những nhiệm vụ của người thú y là cần phải rút ngắn thời gian, nâng cao hiệu quả của việc chẩn đốn bệnh để tiến hành cơng tác phịng trị đạt hiệu quả cao Nhằm gĩp phần nâng cao năng lực hoạt động của ngành thú y nĩi chung, cơng tác chẩn đốn bệnh ORT nĩi riêng chúng tơi tiến hành thực hiện đề tài:

“Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của bệnh suy hơ hấp ở gà do ORT- Ornithobacterium rhinotracheale gây ra”

MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ðỀ TÀI

- Xác định được các đặc điểm bệnh lý chủ yếu của bệnh, làm cơ sở cho việc chẩn đốn phân biệt với các bệnh khác và lựa chọn phương pháp phịng trị thích hợp

CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 LỊCH SỬ NGHIÊN CỨU BỆNH ORT

Ornithobacterium rhinotracheale là một bệnh truyền nhiễm ở loài chim gây ra

các triệu chứng trụy hô hấp, gây chết và làm giảm khả năng sinh trưởng Triệu chứng lâm sàng ña dạng, trong suốt quá trình bệnh tỷ lệ gây chết rất cao và phụ thuộc vào các ñiều kiện môi trường nuôi như quản lý chăm sóc kém, mật ñộ ñàn cao, chất lượng của chất lót nền kém, chất lượng không khí trong chuồng nuôi kém

O rhinotracheale có thể gây ra các tổn thất kinh tế rất lớn do làm tăng tỷ lệ chết, tỷ lệ loại thải, giảm ñẻ hoặc không có khả năng sinh trưởng Hiện nay O rhinotracheale chưa thấy có bất kỳ liên quan nào tới sức khỏe cộng ñồng

O rhinotracheale lần ñầu tiên ñược mô tả năm 1993 bởi Charl- ton et al

Năm sau ñó, Vandamme, et al ñã công bố cây sinh dòng, các Genotype, phân loại hóa sinh học và các ñặc trưng phenotype cổ ñiển của 12 chủng và ñược ñề

xuất với cái tên O rhinotracheale Tuy nhiên, sự xuất hiện và phân lập ñược vi

khuẩn ñã ñược thực hiện từ những năm trước 1993

Vào 1981, là lần ñầu tiên người ta phân lập ñược một chủng O rhinotracheale tại phía bắc nước ðức từ một gà tây 5 tuần tuổi trong dịch nước

mũi, dịch phù trên mặt, và mủ tơ huyết trên túi khí bị viêm

Năm 1983, nó ñược nuôi cấy từ các khí quản của quạ non

Năm 1986, O rhinotracheale ñược phân lập ñược từ gà tây tại Israel ở rất

nhiều lứa tuổi với bệnh tích viêm xuất huyết cấp tính phổi và viêm túi khí

Giữa những năm 1986 và 1988, O rhinotracheale, là thời ñiểm phát hiện

ra một chủng vi khuẩn giống với Pasteurella-like trên các ñàn gà tây giống ở

Anh, với các triệu chứng như yếu ớt, giảm ñẻ, ho tỷ lệ chết thấp, viêm tơ huyết túi khí và viêm phổi

Việc phân phân lập O rhinotracheale tại California ñược bắt ñầu kể từ năm

1986, và Charlton ñã xác ñịnh ñược các ñặc ñiểm của 14 chủng vi khuẩn phân lập ñược trong giai ñoạn 1990 - 1991 trên các ñàn gà tây và gà có các triệu chứng hô hấp

Vào năm 1991, Du Preez thấy rằng các ñàn gà thịt thương phẩm tại Nam

Phi có các biểu hiện hô hấp và tiến hành phân lập, kết quả thu ñược O rhinotracheale

O rhinotracheale là nguyên nhân ñược công bố gây ra bệnh với các triệu

chứng, bệnh tích giống tụ huyết trùng trên các gà tây 23 tuần tuổi ở ðức vào năm

1993 và 1994 và 32 tuần tuổi tại Mỹ năm 1996

Và kể từ ñó tới nay ñã ñược báo cáo phân lập ñược nhiều chủng O rhinotracheale

1.2 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA VI KHUẨN ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE

O rhinotracheale thuộc họ rRNA V với

Cythophaga-Flavobacterium-Bacteroides phylum và có mối quan hệ mật thiết với 2 loại vi khuẩn gây bệnh

trên gia cầm là, Riemerella anatipestifer và Coenonia anatina Trước ñây vi khuẩn này ñược gọi với rất nhiều tên như: Vi khuẩn dạng Pasteurella, dạng Kingella, trực khuẩn gram âm ña hình trước khi có tên gọi Ornithobacterium rhinotracheale gen nov sp nov như bây giờ

Hình thái học và tính bắt màu

O rhinotracheale là một vi khuẩn Gram âm, không có khả năng di ñộng,

ña hình, dạng trực khuẩn, không hình thành nha bào Trên môi trường thạch, chúng thường có dạng ngắn, trực khuẩn dạng dùi trống, với kích thước ñường kính 0.2 - 0.9µm và dài 0.6 - 5µm Nhưng trong môi trường dạng lỏng, chúng rất dài, có thể dài tới 15µm

Hình 1.1 O rhinotracheale có tính ña hình tự nhiên cao Nhuộm Gram vi

khuẩn sau 48 giờ nuôi cấy (Charlton; Qing Pan)

Nuôi cấy

O rhinotracheale sinh trưởng trong ñiều kiện hiếu khí, hiếu khí tùy tiện

và yếm khí tùy tiện ðiều kiện sinh trưởng tối ưu là ở nhiệt ñộ 37°C; tuy nhiên chúng vẫn sinh trưởng tốt ở nhiệt ñộ từ 30 - 42°C Vi khuẩn này sinh trưởng mạnh trên môi trường thạch máu có 5 - 10% máu cừu, nhưng cũng sinh trưởng

ñược trên môi trường thạch tryptose soy và môi trường chocolate agar Vi khuẩn không sinh trưởng trên các môi trường MacConkey agar, Endo agar, Gassner agar, Drigalski agar hay Simon’s citrate Sự phát triển của vi khuẩn trong các môi trường dạng lỏng cần phải ñược lọc kỹ, như môi trường BHI (brain heart infusion broth), PB (Pasteurella broth), hay Todd Hewitt broth

Hình 1.2 Hình thái khuẩn lạc vi khuẩn ORT trên môi trường

O rhinotracheale có khuẩn lạc nhỏ, không gây dung huyết ra xung quanh,

xám màu tới xám trắng ñôi khi có ánh ñỏ hung, và mặt lồi với bờ rõ ràng ở

những lần nuôi cấy ñầu tiên, khuẩn lạc của O rhinotracheale kích thước sẽ ñạt

lớn nhất với khoảng (1—3 mm sau 48 h sau khi nuôi cấy) nhưng ở những lần sau thì thường khuẩn lạc nhỏ hơn và biến dạng không ñồng nhất

Nhạy cảm với các yêu tố vật lý và hóa học

Các chủng O rhinotracheale bị vô hoạt hoàn toàn bởi dung dịch 0.5% có

chứa formic and glyoxyl acid; và dung dịch 0.5% có chứa hợp chất của based (20% glutaraldehyde) sau 15 phút Các dung dịch hỗn hợp 0,5% này cũng

aldehyde-có thể vô hoạt O rhinotracheal in vitro trong 15 phút

Cấu trúc kháng nguyên và ñộc lực

Cho tới nay, chưa có bất kỳ phát hiện hay nghiên cứu nào về cấu trúc cho thấy chúng có cấu trúc ñặc trưng, hay có thành phần như các lông pili, tua diềm, plasmid hay các yếu tố ñộc lực ñược báo cáo

ðịnh Serotype và phân loại chủng

Sử dụng boiled extract antigens (BEAs) và kháng huyết thanh ñơn trong agar gel precipitation (AGP) và kit ELISA ñể ñịnh typ, 18 serotype (từ A tới R) của O rhinotracheale ñã ñược ñịnh rõ Serotype A là serotype phổ biến nhất

trong số các chủng phân lập từ gà (97%) và từ gà tây (61%) (95) Dường như có

sự tương quan về mối quan hệ giữa nguồn gốc ñịa lý của O rhinotracheale phân

lập với các serotype của chúng Serotype C có thể phân lập ñược chỉ từ gà và gà

tây ở Nam Mỹ và Mỹ Không thấy các dấu hiệu ñặc trưng của các serotype ở các vật chủ

Hafez và Sting so sánh hiệu quả của việc sử dụng các kháng nguyên tách chiết từ các chủng (heat-stable, proteinase K-stable và sodium dodecyl

sulfate) trong ñịnh type O rhinotracheale bằng xét nghiệm AGP và ELISA

Kết quả chỉ ra rằng với các xét nghiệm AGP với kháng nguyên các chủng bằng heat-stable hay proteinase K-stable là phương pháp thích hợp cho ñịnh typ Với kỹ thuật ELISA, có nhiều phản ứng chéo trong thực hiện, làm giảm

ñộ chính xác khi ñịnh type

Sử dụng một phương pháp thực nghiệm mới kết hợp sự suy giảm miễn dịch và vận chuyển thụ ñộng của hệ miễn dịch trong cùng một cơ thể, Schuijffel

và cs thấy rằng kháng thể trung gian gây miễn dịch ở gà là một thành phần quan

trọng trong việc bảo vệ giúp chúng chống lại O rhinotracheale

Khả năng gây bệnh của 119 chủng ñược phân lập từ gà tây và gà thưởng

sử dụng thử nghiệp gây chết phôi ñể nghiên cứu Nghiên cứu này cho thấy tiêm

khoảng 500 CFU O rhinotracheale vào túi niệu của phôi gà 11 ngày tuổi, phân tách giữa bên gây bệnh và bên không gây bệnh của O rhinotracheale phân lập

ñược Trên cơ sở tỷ lệ chết phôi, có thể chia ra các nhóm không gây bệnh có tỷ lệ chết phôi từ 10 – 20%, nhóm gây bệnh có tỉ lệ chết phôi từ 21 – 60% và nhóm chủng ñộc lực cao có tỷ lệ chết phôi > 60%

Soriano và cs thấy rằng in vitro có thể phân lập ñược O rhinotracheale

bám trên các tế bào biểu mô khí quản của gia cầm

1.3 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA BỆNH ORT

Nguyên nhân gây bệnh

Bệnh Ornithobacterium là một bệnh nhiễm trùng của gà và gà tây gây ra

do vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) Mức ñộ nghiêm trọng của

bệnh phụ thuộc vào khả năng gây bệnh của các chủng vi khuẩn và các virus, vi

khuẩn kế phát , các vấn ñề thông gió, ñộ tuổi bị nhiễm bệnh và ñặc biệt là thời

gian can thiệp chữa trị có kịp thời hay không cùng với ñó là việc dùng thuốc ñúng và phù hợp…

Do Ornithobacterium rhinotracheale là một vi khuẩn Gram âm, hình que Trước năm 1994, vi khuẩn ñược ñặt tên giống như là Pasteurella, Kingell

a hoặc Pleomorphic Gram Negative Rod ( PGNR ) Hiện nay các loại vi khuẩn t hường ñược gọi là ORT O rhinotracheale có thể gây bệnh cấp tính ở gia cầm O rhinotracheale ñã ñược phân lập từ nhiều loài như: gà, chim ña ña, vịt, ngỗng,

mòng biển, ñà ñiểu, chim trĩ, chim bồ câu, chim cút và gà tây

O rhinotracheale ñược phân lập ở các quốc gia trên thế giới trên rất nhiều

ñối tượng bao gồm gà, gà gô, vịt, gà tây, ngỗng, ngan, chim cút, bồ câu Ở gà thương phẩm, ở tất cả các lứa tuổi ñều nhạy cảm với bệnh mặc dù các thể gây bệnh thường gặp ở gà trưởng thành

Nhiều ca bệnh của O rhinotracheale thường ñược phát hiện gây bệnh ghép với các nguyên nhân gây bệnh hô hấp khác như Escherichia col, Bordetella avium, Newcastle virus, IB virus, metapneumovirus, Mycoplasma synoviae, Chlamydophila psittaci và gần ñây nhất là với chủng cúm H9N2 ở Trung Quốc

Hầu hết các thí nghiệm nghiên cứu ñều kết luận rằng, khi gây bệnh riêng lẻ, do

chính nó gây ra, O rhinotracheale thưởng chỉ gây các triệu chứng bệnh tối thiểu

ở gà và gà tây Chúng chỉ thực sự có các triệu chứng bệnh nghiêm trọng khi ñồng thời kết hợp với các virus, vi khuẩn gây bệnh hô hấp khác

Tuy nhiên, cũng có một số nghiên cứu cho rằng các tổn thương nghiêm trọng tương tự như trong thực ñịa ở các gà và gà tây chỉ xuất hiện khi gây nhiễm

thí nghiệm chỉ với O rhinotracheale

Truyền lây, vật mang và các vector dân truyền

O rhinotracheale xuất hiện và truyền ngang thông qua sự tiếp xúc trực

tiếp hay gián tiếp với mầm bệnh có trong không khí hay nước uống Do ñó, các chuồng hở, sự thông thoáng của chuồng nuôi tạo ñiều kiện cho quá trình phát tán

bệnh trở nên dễ dàng hơn O rhinotracheale có thể sống 1 ngày ở 37oC, 6 ngày ở

22oC, 40 ngày ở 4oC và ít nhất là 150 ngày ở - 102oC Sự tồn tại của O rhinotracheale ở nhiệt ñộ thấp có sự liên quan tới sự bùng phát các trường hợp

bệnh tập trung vào các tháng mùa ñông của năm Chúng không thể rồn tại quá 24 giờ ở nhiệt ñộ 42oC

Ngoài ra, vi khuẩn này có những bằng chứng cho thấy chúng có khả năng

truyền dọc Thêm nữa, O rhinotracheale cũng ñược phân lập từ buống trứng,

ống dẫn trứng, trứng nở, trứng ñã thụ tinh, trứng không ñược thu tinh, trứng chết

phôi và chết bên trong vỏ của gà và gà tây Tuy nhiên, khi tiêm O rhinotracheale vào trứng gà có phôi, phôi ñược giết ở ngày thứ 9 và không phân lập ñược O rhinotracheale từ trứng ñó Như vậy, có thể thấy rằng O rhinotracheale không

truyền qua trứng trong quá trình ấp

Giai ñoạn ủ bệnh

Gây nhiêm O rhinotracheale thí nghiệm với gà tây 22 tuần tuổi cho các

triệu chứng như ủ rũ, ho và giảm ăn sau 24 giờ (50) Trong vòng 48 giờ, gà tây

có triệu chứng ho ra niêm dịch lẫn máu Sau 5 ngày sau khi gây nhiễm, các triệu chứng ho có hiện tượng giảm ñi và các gà tây sống sót sẽ giảm sự ủ rũ

Ở thí nghiệm gây nhiễm bệnh cho gà 5 tuần tuổi, O rhinotracheale

xâm nhiễm vào các tổ chức phổi sau 2, và các triệu chứng bệnh sẽ bắt ñầu thấy sau 6 ngày

Triệu chứng lâm sàng

Triệu chứng lâm sàng, trong suốt giai ñoạn bệnh và tỷ lệ chết do O rhinotracheale ở các ổ dịch bùng phát và diễn biến khá ña dạng Chúng thường

chịu ảnh hưởng bởi rất nhiều các nhân tố môi trường như quản lý chăm sóc kém,

ñộ thông thoáng kém, mật ñộ nuôi cao, hàm lượng amoniac cao, chất lót nền

Ở gà ñẻ thương phẩm, giảm ñẻ, tăng trứng méo và tăng tỷ lệ chết có liên

hệ tới sự nhiễm O rhinotracheale

Roepke ñã tìm ra rằng các triệu chứng bệnh và tỷ lệ chết cao hơn ở gà tây trưởng thành và ở gà non chủ yếu chỉ có các triệu chứng bệnh thông thường

Ở một số trường hợp, gà non mắc bệnh từ 2 ñến 8 tuàn tuổi Tỷ lệ chết thường trong khoảng 1 - 15% trong pha cấp tính (8 ngày), nhưng tỷ lệ nhiễm có thể tăng cao với tỷ lệ chết tới 50%

Các triệu chứng ban ñầu bao gồm ho, vẩy mũi và kèm theo dịch nhầy; ở một số trường hợp có hiện tượng trụy hô hấp nặng, khó thở, vươn cổ và viêm xoang mũi Các triệu chứng sẽ kéo theo các triệu chứng giảm ăn và giảm uống nước Ở ñàn gà tây giống, cũng thấy có hiện tượng giảm ñẻ và tăng tỷ lệ trứng ấp

nở không ñạt tiêu chuẩn

O rhinotracheale ñược báo cáo là nguyên nhân gây ra các triệu chứng thần

kinh hoặc liệt do viêm màng não, viêm xương và viêm xương tủy ở gà và gà tây

Bệnh tích ñại thể

Ở gà thịt thương phẩm, các tổn thương ñại thể thường gặp bao gồm: viêm phổi, viêm màng phổi và viêm túi khí Khi giết thịt hoặc kiểm tra sau giết mổ sẽ thấy dịch dạng bọt, mầu trắng, chất dịch tiết này có màu giống sữa chua và có thể thấy rõ trong các tủi khí, (thùy túi bụng trước), hầu hết các tổn thương chỉ tiến triển ở một bên thùy phổi

Hình 1.3 Thùy túi bụng trước có nước bọt trắng

Các tổn thương do O rhinotracheale có thể làm tỷ lệ chết tăng cao tới

50% hoặc hơn Thêm nữa, phù thũng dưới da mặt, tại các ñiểm tiếp giáp có sụn gây viêm ñầu, viêm xương, viêm xương tủy và viêm màng não ñược báo cáo thấy ở gà

Ở gà tây, có hiện tượng phù và viêm một bên phổi hoặc ñối xứng 2 bên với các tơ huyết trên màng phổi Ngoài ra, có thể có các hiện tượng viêm mủ tơ huyết gây viêm túi khí, ngoại tâm mạc, màng bao tim, và khí quản Trong một số trường hợp, gan và lách có thể sưng cũng như có sự biến ñổi ở cơ tim có thể quan sát ñược Hiện tượng nhiễm khuẩn tại khớp, xương sống có thể bắt gặp ở gà lớn

Chẩn đốn

Rất khĩ để cĩ thể chẩn đốn dựa trên dấu hiệu lâm sàng hay bệnh tích mổ

khám ðể chẩn đốn chính xác phải dựa vào phân lập và xác định được O rhinotracheale và/ hay phát hiện được kháng thể

Phân lập và xác đinh tác nhân gây bênh

Phân lập vi khuẩn

Khí quản, phổi và túi khí là các mơ, cơ quan tốt nhất để cĩ thể phân lập

được O rhinotracheale Xoang dưới hốc mắt và hốc mũi cũng là những vị trí phù hợp phục vụ cho việc nuơi cấy, nhưng O rhinotracheale dễ dàng bị bao phủ

bởi sự phát triển quá nhanh của các vi khuẩn khác Nuơi cấy vi khuẩn từ máu tim

và mơ của gan dưới các điều kiện thực tế cho kết quả âm tính, mạc dù trước đĩ,

vi khuẩn đã được phân lập từ các cơ quan cũng như ở các khớp xương, não, buồng trứng và ống dẫn trứng sau khi gây bệnh thực nghiệm

O rhinotracheale cũng cĩ thể được phân lập một cách thơng thường, trên

thạch máu thường hoặc thạch chocolate Khuẩn lạc phát triển tốt trong 24 giờ, nhưng tốt nhất nên giữ các đĩa gây nhiễm từ 48 – 72 giờ trong điều kiện khơng khí làm giàu từ 7,5 – 10% CO2 Khuẩn lạc sẽ xuất hiện cĩ kích thước từ đầu đinh gim tới nhỏ (đường kính khoảng 1 – 2mm), màu xám màu tới xám trắng, mặt lồi với cạnh sắc nét Nhuộm gram cho kết quả vỉ khuẩn Gram âm đa hình thái đặc

trưng Vi khuẩn âm tính với catalase và dương tính với oxidase Nuơi cấy O rhinotracheale thuần khiết cĩ mùi riêng biệt, tương tự như mùi acid butyric Các thử nghiệm bộ sung là rất cần thiết để xác định các đặc tính của O rhinotracheale

Trong các mẫu bị tạp nhiễm với sự phát triển nhanh của các vi khuẩn khác

như E coli, Proteus sp hoặc Pseudomonas sp., khuẩn lạc của O rhinotracheale

cĩ thể phát triển quá mức và rất khĩ để xác định khi kiểm tra thường xuyên Vì

đã chứng minh được rằng hầu hết các O rhinotracheale đều kháng gentamicin,

nên khuyến khích sử dụng 10µg gentamicin cho mỗi ml mơi trường thạch máu để

cĩ thể phân lập được O rhinotracheale từ các mẫu bị tạp nhiễm Thạch máu cĩ

chứa 5µg/ ml gentamicin và polymixin B cũng cho hiệu quả tốt

Kiểm tra ngưng kết nhanh trên phiến kính cũng được sử dụng cho mục đích chẩn đốn Trong một nghiên cứu với 112 mẫu phân lập, tuy nhiên hiện tượng tự ngưng kết thường xuất hiện

Kiểm tra AGP sử dụng kháng huyết thanh dương tính dã biết cĩ thể được

sử dụng để xác định và định typ O rhinotracheale đã phân lập

Một phương pháp khác được sử dụng để phát hiện các chủng phân lập nghi ngơ là PCR

Phát hiện kháng nguyên

PCR được sử dụng để phát hiện các O rhinotracheale trong mẫu dịch khí

quản được lấy từ các gà mắc bệnh nặng Ngồi ra, xét nghiệm bằng miễn dịch

huỳnh quang và nhuộm hĩa mơ miễn dịch cũng đã được sử dụng để phát hiện O rhinotracheale trên gà Sau đĩ, Van Veen và cs đã thấy rằng các xét nghiệm

miễn dịch huỳnh quang và kỹ thuật peroxidase-anti peroxidase (PAP) nhạy cảm

như nhau Sử dụng các xét nghiệm này cĩ thể xác định một tỷ lệ nhiễm O rhinotracheale cao ở đàn gà thịt sau giết giết mổ khi so sánh với các phương

pháp chẩn đốn thơng thường như huyết thanh học và/ hoặc vi khuẩn học

Huyết thanh học

Huyết thanh học rất hữu dụng trong việc giám sát cũng như hỗ trợ chẩn

đốn bệnh do O rhinotracheale

Các phản ứng kiểm tra ngưng kết huyết thanh trên tấm (SPAT) được sử dụng

như một xét nghiệm nhanh cho việc phát hiện các kháng thể chống lại O rhinotracheale SPAT được phát triển bằng cách sử dụng một chủng của O rhinotracheale khơng phân lập từ Minnesota và báo cáo là cĩ độ nhạy và đặc hiệu

cao Tuy nhiên, trong một nghiên cứu khác SPAT chỉ phát hiện được 65% gia cầm

bị nhiễm bệnh trong 2 tuần đầu gây nhiễm và giảm đáng kể ở các thời gian tiếp theo ðiều này cho thấy rằng SPAT chỉ phát hiện được kháng thể IgM, cái chỉ cĩ khả năng gây ngưng kết với 1 kháng nguyên đặc hiệu Thêm nữa, hầu hết các SPAT chỉ phản ứng với một serotype nhất định, dù cho phảng ứng chéo xảy ra

ELISA đã được phát triến bẳng sử dụng các serotype khác nhau và chiết

tách kháng nguyên của O rhinotracheale Kháng nguyên cơ đặc được sử dụng

cho việc định typ, cĩ khả năng cho những kết quả chính xác nhất cho các serotype cụ thể Ngược lại, kháng thể SDS chiết tách và dịch chiết từ lớp màng

protein của O rhinotracheale sẽ cho kết quả nhiều phản ứng kháng chéo, cho

phép phát hiện các kháng thể chống lại của nhiều serotype khác nhau trong cùng một lần xét nghiệm

ðiều tra thực địa sử dụng các kỹ thuật ELISA hoặc các bộ kit ELISA thương mại (cĩ sẵn ở châu Âu) rất hữu dụng khi theo dõi đàn gia cầm và chẩn

đốn mắc O rhinotracheale

Erganis và cs phát triển phương pháp DIA (Dot Imimmobinding assay), một xét nghiệm dường như ít nhạy hơn so với các xét nghiệm ngưng kết khác Popp và Hafez đã nghiên cứu sự ảnh hưởng của việc sử dụng amoxicillin trong điều trị tới động học kháng thể sau khi gây bệnh thực nghiệm Họ nhận thấy rằng việc điều trị tức thì khơng ảnh hưởng đến sự đáp ứng miễn dịch, trong khi điều trị sau 7 ngày gây nhiễm sẽ cho một đáp ứng kháng thể thấp hơn

Chẩn đốn phân biệt

Các tổn thương do O rhinotracheale trên hệ thống hơ hấp khá giống với các nguyên nhân gây bệnh hơ hấp khác như E coli, Pasteurella multocida, R anatipestifer, Haemophilus paragallinarum, and Chlamydophyla psittaci

Phịng bệnh và điều trị

Quy trình chăm sĩc

O Rhinotracheale gây bệnh với tỷ lệ bùng phát thành dịch khá cao và các

tiêu chuẩn nghiêm ngặt về an tồn sinh học nên được sử dụng để ngăn chặn lây

lan ra tồn đàn Tuy nhiên sau khi tồn trang trại đã bị nhiễm, O rhinotracheale

trở thành một dịch địa phương, đặc biệt là ở các trại gà cĩ nhiều lứa gà trong cùng một khu vực và trại chăn nuơi với mật độ chăn nuơi lớn

amoxicillin, ampicillin, doxycycline, enrofloxacin, flumequine, gentamicin, lincomycin, trimethoprim sulfonamide, tetracycline và tylosin

Tính nhảy cảm với kháng sinh có thể phụ thuộc vào chế ñộ sử dụng kháng sinh ở ngành chăn nuôi gia cầm ở các quốc gia, khu vực khác nhau Ví dụ: Ở một

số quốc gia, trứng thường ñược nhúng vào một loại kháng sinh như enrofloxacin thì gần như tất cả các chủng sẽ có thể kháng với kháng sinh ñó

Vào năm 1996, Hafez báo cáo rằng sử dụng uống amoxicillin pha ở liều

250 ppm cho 3 - 7 ngày cho kết quả khá tốt ở nhiều trường hợp và việc sử dụng chlortetracycline với liều 500 ppm pha nước uống 4 – 5 ngày cũng cho hiệu quả Trong một vài trường hợp, tiêm tetracycline và penicillins cũng cho hiệu quả cao

68 chủng O rhinotracheale phân lập tại Mỹ cho kết quả mẫn cảm với

ampicillin, erythromycin, penicillin, spectinomycin và tylosin; 54 trong số 68 chủng phân lập mẫn cảm với neomycin, sarafloxacin và tetracyclin ðiều này cũng ñược kiểm chứng với các chủng phân lập ở ðức nhưng tỷ lệ mẫn cảm thấp hơn ñáng kể ñối với erythromycin và sarafloxacin khi so sánh với các chủng phân lập tại Mỹ

1.4 MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ THUỐC KHÁNG SINH

Khái niệm

Kháng sinh là những chất có nguồn gốc vi sinh vật, ñược bán tổng hợp hoặc tổng hợp hoá học Với liều thấp có tác dụng kìm hãm hoặc tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh

Ngày nay, từ kháng sinh còn ñược mở rộng ñối với các hợp chất trị vi khuẩn ñược phân chiết từ thực vật thượng ñẳng Người ta gọi những chất kháng sinh có nguồn gốc thảo mộc này là Phytoncid

Phân loại

Tùy theo mục ñích, ñối tượng nghiên cứu mà có nhiều cách phân loại khác nhau như: theo nguồn gốc, theo mức ñộ tác dụng, theo cơ chế tác dụng, theo cấu trúc hóa học Hiện nay theo cách phân loại tổng hợp dực vào các cách phân loại trên, người ta có các nhóm sau:

- Nhóm β – lactamin: gồm penicillin , cesphalosporin

- Nhóm phenicol gồm: choloramphenicol, thiamphenicol

-Nhóm tetracillin gồm: tetracillin thiên nhiên, oxytetracillin, chlotetracillin

- Nhóm aminoglucoside gồm; kanamycin, gentamycin, streptomycin

- Nhóm macrolid gồm: lincomycin, tylosin

- Nhóm polipeptid gồm: colistin, polymycin

- Nhóm kháng sinh chống nấm và virus gồm: nystatin, amphotericin, mycostaline

- Nhóm thuốc hóa học trị liệu có cơ chế tác dụng như kháng sinh gồm: quinolon, 5-nitromidazol, nhóm dẫn xuất của sulfamid, nhóm dẫn xuất nitrofuran,

và các thuốc có tác dụng kìm hẫm virus

Cơ chế tác dụng

Kháng sinh ñều có tác dụng ñịnh khuẩn, với liều lượng thích hợp sẽ ngăn trở sự sinh trưởng và sinh sản của tế bào vi trùng Nếu dùng với liều thấp hơn liếu ngăn trở sự sinh trưởng Những tế bào bị biến ñổi hình dạng rất nhạy cảm với yếu

tố chống ñối của cơ thể nên chúng bị phân hủy Một số kháng sinh có tác dụng diệt khuẩn Mỗi nhóm kháng sinh khác nhau lại có cơ chế tác ñộng khác nhau lên từng vị trí, giai ñoạn của vi trùng như:

- Cơ chế ức chế tổng hợp vách tế bào vi khuẩn

- Cơ chế tác dụng lên màng tế bào vi khuẩn làm thay ñổi tính thấm và khẳ năng chọn lọc của chúng

- Cơ chế ức chế tổng hợp axit nucleic

- Cơ chế cạnh tranh chất chuyển hóa như các loại thuốc sulfamid, chúng cạnh tranh PABA – là yếu tố sinh trưởng và phát triển của tế bào vi khuẩn làm chúng không nhân lên ñược

Theo nghiên cứu của Dod và cộng sự (1971) các thuốc kháng sinh có tác dụng ñộc lập với cấu trúc hóa học chính là do nó ñược gắn vào các ñiểm tác dụng Khi thuốc kháng sinh gắn vào các ñiểm này, liền theo ñó là các quá trình tổng hợp protein, sinh tổng hợp màng, quá trình hoạt ñộng màng, sự chuyển hóa ADN và ARN, sự tổng hợp purin và pirimidin, sự oxy hóa – khử sinh học, sự photphorin hóa trong cơ thể sinh vật bị thay ñổi, ñảo lộn hay mất ñi

Bằng những con ựường khác nhau, chất kháng sinh làm thay ựổi các yếu tố trao ựổi chất của các quá trình trên và từ ựó thể hiện tác dụng diệt khuẩn, tác dụng kháng khuẩn hoặc các tác dụng gây nên khả năng kháng thuốc

Những kháng sinh có tác dụng với O rhinotracheale

Doxycycline : kháng sinh bán tổng hợp mới thuộc nhóm tetracycline Nó là

kháng sinh có hoạt phổ rộng dùng ựiều trị cả vi khuẩn gram (-) và gram (+) nhiễm trùng ựường hô hấp và ựường tiết niệu Doxycycline thải ra ngoài qua phân dưới dạng không còn hoạt lực Tốc ựộ thải trừ phụ thuộc và tình trạng của gan, thận Ưu ựiểm của thuốc là hấp thu ở ựường tiêu hoa, có tác dụng kéo dài.Thuốc tan trong lipid nên dễ dàng vào trong tổ chức Doxycycline có tác dụng ựịnh khuẩn khi ở nồng ựộ thấp còn ở nồng ựộ cao có tác dụng diệt khuẩn

Tiamulin là kháng sinh có phạm vi tác dụng rộng, ứng dụng rất tốt, hiệu quả

rất cao trong phòng và trị bệnh của lợn và gia cầm, ựã ựược nghiên cứu sâu sắc

và tỉ mỉ và ựã khẳng ựịnh rất nhiều mặt lợi

Có tác dụng cao chống lại các Mycoplasma gây bệnh ở gia cầm

Có lợi cho việc làm chậm kháng thuốc

Với liều rất nhỏ cũng có lợi cho việc hạn chế tác hại stress

Hiệu quả kinh tế cao

Cơ chế tác dụng: Tiamulin ức chế sự sinh trưởng của vi trùng và các mycoplasma, cản trở sự sinh tổng hợp protein của sinh vật gây bệnh, thông qua

cơ chế làm ngừng hoạt ựộng của enzym peptidyltransferase là enzym tác dụng quan trọng ựến quá trình gắn của các ribosom

Nồng ựộ trong máu: Sau khi cho thuốc Tiamulin ựược hấp thu tốt và nhanh chóng ựạt ựược nồng ựộ ựiều trị trong máu và nồng ựộ ựó kéo dài ựến 24 giờ, tùy thuộc vào liều lượng cho thuốc Cơ chế thải trừ Tiamulin chủ yếu qua ựường gan, mật ở dạng ựã phá hủy

Tiamulin không ảnh hưởng ựến phôi thai đã thử nghiệm liều 30mg/kg thể trọng chuột và 10mg/kg thể trọng chó, kéo dài 26 tuần liền không thấy có biểu hiện ựộc

Phổ tác dụng: Tiamulin có tác dụng rất tốt ñối với các chủng mycoplasma có

tác dụng cực mạnh với các vi trùng gram dương (Staphyloccocus, Streptoccocus…) Với các vi trùng gram âm có tác dụng rất hạn chế, ít Chẳng hạn tác dụng yếu với E.coli, Klebsiella

Tiamulin ñược sử dụng phòng và trị có hiệu quả cao các bệnh do Mycoplasma và nhiều loại vi khuẩn gây nên, ñặc biệt là ở lợn và gà

CHƯƠNG 2 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ðỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 ðộng vật nghiên cứu

- Gà bị bệnh do ORT- O Rhinotrachale lấy tại các ổ dịch tại các trại chăn nuôi

gà thả vườn tại Ba Vì- Hà Nội và các trại nuôi gà ñẻ tại Quốc Oai- Hà Nội

2.1.2 Mẫu bệnh phẩm nghiên cứu

Mẫu bệnh phẩm ñược sử dụng trong nghiên cứu là: Máu, khí quản,

phổi, gan, lách, máu của nhóm gà mắc bệnh do O.rhinotrachale gây ra tại các

trại chăn nuôi

2.1.3 Hóa chất

Hóa chất thông thường trong phòng thí nghiêm: Nước cất, formalin 10% dùng ñể bảo quản mẫu, cồn nguyên chất, xylen, parafin, thuốc nhuộm Haematoxylin – Eosin (HE)…

2.1.5 ðịa ñiểm nghiên cứu

- ðịa ñiểm nghiên cứu: Phòng Thí Nghiệm Bệnh Lý- Bộ môn Bệnh Lý Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam

- ðịa ñiểm theo dõi gà bệnh và lấy mẫu: Huyện Ba Vì- Hà Nội, Huyện Quốc Oai- Hà Nội

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

2.2.1 Nghiên cứu tỷ lệ mắc và chết do ORT- Ornithobacterium rhinotracheale

2.2.1.1 Tỷ lệ mắc và chết do ORT trên gà tại một số ñịa ñiểm ở Huyện Ba Vì-

Hà nội và Huyện Quốc Oai- Hà Nội

2.2.1.2 Phân lập vi khuẩn O.rhinotracheale từ những gà mắc bệnh

2.2.1.3 Tỷ lệ mắc và chết do ORT trên ñịa bàn huyện Ba Vì- Hà Nội theo giống gà 2.2.1.4 Tỷ lệ mắc và chết do ORT trên gà thả vườn và gà ISA Brown theo tuổi 2.2.1.5 Tỷ lệ mắc và chết do ORT trên gà tại một số ñịa ñiểm theo dõi theo mùa vụ 2.2.1.6 Tỷ lệ mắc và chết do ORT trên gà thả vườn và gà ISA Brown theo phương thức chăn nuôi

2.2.2 Xác ñịnh ñặc ñiểm triệu chứng lâm sàng chủ yếu của bệnh ORT ở gà

Xác ñịnh các biểu hiện triệu chứng lâm sàng ñiển hình do mắc ORT trên

gà thả vườn và gà ISA Brown tại các ñịa ñiểm theo dõi

2.2.3 Xác ñịnh ñặc ñiểm biến ñổi bệnh lý ñại thể chủ yếu của gà mắc bệnh ORT 2.2.4 Xác ñịnh ñặc ñiểm biến ñổi bệnh lý vi thể chủ yếu của gà mắc ORT 2.2.5 Xác ñịnh chỉ tiêu huyết học ở gà ISA Brown mắc bệnh ORT

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Quan sát và theo dõi triệu chứng lâm sàng ñiển hình của gà mắc bệnh

ðể xác ñịnh các triệu chứng lâm sàng chủ yếu của gà mắc

O.Rhinotrachale chúng tôi tiến hành quan sát, ghi chép, thống kê các biểu hiện

của gà khi xuất hiện những dấu hiệu bệnh lý ðồng thời dựa vào các ñặc ñiểm dịch tễ học, những can thiệp trong quá trình bệnh xảy ra cũng như thu thập các thông tin liên quan Tiến hành phân tích, thống kê ñể ñưa ra những kết quả chính xác Xác ñịnh những triệu chứng lâm sàng chủ yếu có ý nghĩa vô cùng quan trọng trong việc lựa chọn phương pháp ñiều trị hợp lý

Theo dõi tình trạng chung của ñàn gà, phát hiện những biểu hiện khác

thường ðặc biệt là những triệu chứng ñiển hình Gà có kết quả dương tính ñược quan sát và khám lâm sàng như:

- Tình trạng ăn, uống (nhiều hay ít hoặc bỏ ăn)

- Dáng ñứng, hoạt ñộng của ñàn gà

- Biểu hiện trạng thái của lông, màu sắc của mào, tích

- Trạng thái, màu sắc của phân

- Trạng thái hô hấp của gà

2.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn O.rhinotracheale

Từ những ñàn gà mắc bệnh, tiến hành lấy mẫu ñể phân lập vi khuẩn Kết luận với những con dương tính với ORT làm cơ sở theo dõi các chỉ tiêu bệnh lý khác

trên bề mặt thạch xuất hiện khuẩn lạc nhỏ, tròn có ñường kính từ 1mm ñến 2 mm,

rìa gọn hơi lồi, không dung huyết (dung huyết alpha), có màu trắng ñục ñến xám

Môi trường thạch MacConkey: Vi khuẩn không mọc

Môi trường TSA: Vi khuẩn mọc kém, khuẩn lạc nhỏ như ñầu ñinh ghim Dùng que cấy lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào môi trường thạch máu, nuôi ở tủ

ấm có chứa 5% CO2từ 24 h ñến 48 hñể kiểm tra ñặc tính sinh hóa

Quan sát hình thái vi khuẩn

− Dùng que cấy lấy khuẩn lạc hòa ñều vào giọt nước sinh lý trên phiến kính hoặc lấy một vòng que cấycanh trùng ñã nuôi cấy vi khuẩn dàn mỏng lên trên phiến kính, ñể khô và cố ñịnh tiêu bản trên ngọn lửa ñèn cồn

− Tiêu bản sau khi ñã ñược cố ñịnh, nhuộm bằng phương pháp Gram.Vi khuẩn bắt màu hồng (màu gram âm), hình que, kích thước dài ngắn khác nhau dao ñộng từ 1 µm ñến 8 µm

2.3.3 Xác ñịnh sự biến ñổi các chỉ tiêu huyết học ở gà bệnh

Máy ño các chỉ tiêu huyết học

Tên máy: Cell – dyn 3700

Các chỉ tiêu sinh lý máu cần xác ñịnh:

- Số lượng bạch cầu tổng số, số lượng bạch cầu trung tính, số lượng bạch cầu lympho, số lượng bạch cầu ñơn nhân % bạch cầu trung tính, % bạch cầu lympho, % bạch cầu ñơn nhân

- Số lượng hồng cầu, thể tích khối hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, nồng ñộ Hb trung bình của hồng cầu, ñộ phân bố hồng cầu

- Số lượng tiểu cầu, thể tích trung bình tiểu cầu, thể tích khối tiểu cầu, ñộ phân bố tiểu cầu

Các chỉ tiêu sinh hóa máu: Protein máu, albumin, các loại globulin và

tỷ lệ A/G

2.3.4 Mổ khám và quan sát các tổn thương ñại thể

Một số gà có kết quả dương tính quá yếu và gà chết ñược mổ khám ñể kiểm

tra bệnh tích Quan sát tổn thương ñại thể sau khi mổ khám

Phương pháp mổ khám ( tài liệu tiêu chuẩn ngành- Cục Thú Y, 2006)

ðể xác ñịnh các biến ñổi ñại thể của các cơ quan, tổ chức của gà nghi mắc

bệnh do ORT- O.rhinotrachale gây ra cần tiến hành mổ khám những gà có biểu

hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh ñể kiểm tra bệnh tích ñại thể của tất cả các cơ quan theo ñúng kỹ thuật

Chúng tôi tiến hành mổ khám gia cầm theo các bước sau

- Chuẩn bị mổ khám: Chuẩn bị ñây ñủ các dụng cụ mổ khám ñã ñược vô

trùng, hóa chất và trang thiết bị bị bảo hộ cho người mổ khám

- Tiến hành mổ khám

+ ðối với gia cầm còn sống quan sát từ ngoài vào trong, kiểm tra từng cơ quan riêng biệt, ghi lại những biến ñổi từ ngòai vào trong vào biên bản mổ khám

+ Với gia cầm chết tiến hành mổ khám theo trình tự sau:

- ðặt gia cầm nằm ngửa trên bàn mổ, dùng kéo cắt da giữa vùng bụng và vùng bẹn hai bên chân, rồi lật chân sang hai bên

- Cắt da vùng giữa lỗ huyệt và xương lưỡi hái lên tới tận diều bộc lộ vùng

cơ ngực

- Kiểm tra tình trạng khô cơ, xuất huyết cơ ñùi, cơ ngực và xương lưỡi hái

- Dùng kéo rọc da từ phần diều lên tới tận mỏ bộc lộ diều, khí quản, tuyến

ức ñể kiểm tra bên ngoài

- Dùng kéo cắt ngang phần cơ giữa lỗ huyệt và xương lưỡi hái, cắt tiếp lên phía trên hai bên sụn qua sương ñòn, xương quạ, loại những tổ chức dính nhấc bỏ xương lưỡi hái ra ngoài bộc lộ xoang ngực, xoang bụng

- Quan sát các túi khí và phía ngoài cơ quan nội tạng

- Lấy máu tim và các cơ quan nội tạng dùng cho xét nghiệm

- Lấy các cơ quan, bộ phận nội tạng dùng cho xét nghiệm

- Loại bỏ màng treo ruột, cắt ñứt phía trên dạ dày tuyến lật toàn bộ cơ quan tiêu hóa phía sau ñể kiểm tra sau cùng

- Kiểm tra toàn bộ cơ quan sinh dục, thận ống dẫn niệu

- Kiểm tra túi Fabricius về hình dạng, màu sắc, kích thước, dịch bên trong

- Dùng kéo cắt mở một bên cạnh mỏ quan sát xoang miệng Cắt ngang mỏ trên kiểm tra xoang

- Dọc thực quản tới diều kiểm tra chất chứa bên trong, dịch và mùi

- Dọc khí quản kiểm tra dịch khí quản và xuất huyết

- Tách phổi khỏi các xương sườn kiểm tra màu sắc, ñộ xốp

- Rạch khớp gối kiểm tra dịch, bẻ xương ñùi kiểm tra ñộ cứng mềm, chẻ xương ñùi kiểm tra tủy

- Dùng kéo rạch ruột từ dạ dày tuyến xuống tận hậu môn kiểm tra các tổn thương, xuất huyết, hoại tử

Tiến hành lấy mẫu máu ở cánh, tim Lột da và bộc lộ xoang ngực, xoang bụng, tách các cơ quan nội tạng khỏi cơ thể quan sát và chụp ảnh

Tiến hành thu mẫu ở các cơ quan như: Gan, ruột, manh tràng, tim, thận, lách…ngâm trong Focmol 10% ñể làm tiêu bản vi thể

Với máu ta phết lam kính rồi cố ñịnh bằng cồn Metylic

2.3.5 Xử lý số liệu

Số liệu thu ñược trong quá trình nghiên cứu ñược xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học theo chương trình Excel 2007 và Minitab 16

2.3.6 Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý

Biến ựổi vi thể ựược xác ựịnh bằng phương pháp làm tiêu bản tổ chức học theo quy trình tẩm ựúc parafin, nhuộm Hematoxilin Ờ Eosin, ựọc kết quả dưới kắnh hiển vi quang học và chụp ảnh bằng máy ảnh gắn trên kắnh hiển vi

Phương pháp này ựược thực hiện theo trình tự các bước sau

+ Lấy bệnh phẩm: gan, lách, phổi, thậnẦ

+ Cố ựịnh bệnh phẩm: (Mục ựắch ựể giết chết tổ chức)

Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10% ựể sau 7 Ờ 10 ngày là có thể sử dụng

+ Vùi bệnh phẩm: (Tạo ra chất nền cho tổ chức dễ cắt)

Tiến hành lần lượt các bước sau:

- Rửa formol: Lấy tổ chức ra khỏi bình ngâm mẫu, cắt thành miếng theo chiều dài có ựộ dài 4 Ờ 5 mm Cho vào khuôn ựúc bằng nhựa, ựem rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong vòng 24 giờ ựể rửa sạch formol

- Khử nước (Mục ựắch rửa sạch formol) Cho qua hệ thống 4 lọ cồn

Cồn I (900I) : 3 giờ Cồn III (1000I) : 4 giờ

Cồn II (900II): 3 giờ Cồn IV (1000II): 12 giờ

- Khử cồn: Cho qua hệ thống 3 lọ xylen

Xylen I: 4 giờ → Xylen II: 4 giờ → Xylen III: 12 giờ

Paraffin I : 6 giờ (560C)

Paraffin II : 6 giờ (560C)

Paraffin III: 12 giờ (560C)

Mục ựắch: để khử hết xylen trong tổ chức, trong tổ chức chỉ còn paraffin thấm ựều trong các kẽ mô bào

+ đúc block: (để vùi miếng tổ chức trong môi trường paraffin thuần nhất

tạo thành một thể thống nhất)

- Tháo bệnh phẩm ra khỏi dây xâu, ñặt vào ngăn chứa paraffin lỏng

- ðổ paraffin lỏng vào khuôn, dùng kẹp hơ nóng nhúng nhanh vào ngăn chứa bệnh phẩm, gắn miếng bệnh phẩm ñặt vào chính giữa khuôn, ñể miếng bệnh phẩm nằm theo ý muốn

- ðặt khuôn ñã ñúc sang bàn lạnh của máy làm nguội block ðể nguội từ

từ ñến khi ñông cứng, ñặc chắc là ñược

- Bóc khuôn, chỉnh sửa block cho vuông vắn rồi gắn nhãn, tránh nhầm lẫn

+ Nhuộm tiêu bản:

Nhuộm tiêu bản theo phương pháp nhuộm kép bằng thuốc nhuộm Hematoxylin – Eosin Các bước nhuộm như sau:

→ Bước 1: Khử paraffin: Cho qua hệ thống 3 lọ xylen

Xylen I: 30 phút → Xylen II: 30 phút → Xylen III: 30 phút

Sau ñó phải lau hết phần xylen quanh tiêu bản rồi chuyển sang cồn

→ Bước 2: Khử Xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống 3 lọ cồn

Cồn I (1000I): 10 phút → Cồn II (1000I): 10 phút → Cồn III (1000I): 10 phút

→ Bước 3: Khử cồn: ðể tiêu bản dưới vòi nước chảy trong 15 phút

→ Bước 4: Nhuộm Hematoxylin (nhuộm nhân)

Sau khi ựã rửa tiêu bản qua nước chảy trong vòng 10 phút ta ựem lau khô nước xung quanh tiêu bản, ựặt tiêu bản lên trên giá ựể rồi nhỏ Hematoxylin ngập tiêu bản, ựể trong vòng 20 giây Sau ựó ựổ thuốc nhuộm ựi, cho rửa nước chảy trong vòng 10 phút cho hết Hematoxylin thừa đem lau sạch nước xung quanh tiêu bản và vảy khô ựi Kiểm tra màu sắc, tiêu bản có màu xanh tắm là ựược

Nếu nhạt màu thì nhúng tiêu bản qua NaHCO3 1% (30 giây)

Nếu màu ựậm quá thì nhúng tiêu bản vào lọ cồn axit (cồn 900 + HCl,

tỷ lệ HCl là 1%) trong 30 giây Sau khi ựiều chỉnh màu ta rửa sạch tiêu bản bằng nước cất

→ Bước 5: Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương)

Nhỏ Eosin ngập tiêu bản 20 giây tùy theo thực tế màu Eosin Sau ựó rửa nước chảy 10 phút cho hết Eosin thừa Sau khi rửa nước ta lau sạch phần nước xung quanh bệnh phẩm

→ Bước 6: Tẩy nước: Ta cho tiêu bản qua hệ thống 3 lọ cồn

Cồn 900I: 15 giây → Cồn 1000I: 15 giây → Cồn 1000I: 15 giây

→ Bước 7: Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản qua xylen I Rồi

sang xylen II, ta lau sạch cồn ở xung quanh lam kắnh rối chuyển sang xylen III, sau ựó cho vào xylen IV rồi cho vào tủ ấm 370C trong vòng 2 phút

+ Bước 8: Gắn Baume canada

- Tiến hành: Nhỏ một giọt Baume canada, xylen ấm lên trên lamen rồi gắn

nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn xylen ấm lên trên tiêu bản Ấn nhẹ ựể dồn hết bọt

khắ ra ngoài

- đánh giá: đem soi kắnh hiển vi quang học ở vật kắnh 10 Nếu thấy nhân

bắt màu xanh tắm, bào tương bắt màu ựỏ tươi, tiêu bản trong sáng, không có nước, không có bọt khắ là ựược

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH TỶ LỆ MẮC VÀ CHẾT Ở GÀ MẮC ORT TRÊN ðỊA BÀN HUYỆN BA VÌ – HÀ NỘI

3.1.1 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ mắc và chết do bệnh ORT- O.Rhinotracheale gây

ra trên ñịa bàn huyện Ba Vì- Hà Nội

Trong quá trình theo dõi, chúng tôi lựa chọn ngẫu nhiên 15 ñàn gà ở 4 xã khác nhau, ở các lứa tuổi khác nhau và ở 4 giống gà khác nhau ñang mắc bệnh ñể tiến hành quan sát Chúng tôi ñã thu ñược kết quả như sau:

Kết quả cho thấy ña số các trại chăn nuôi gà thả vườn tại 5 xã ở Ba Vì ñều nuôi gà Ri lai, gà Lương Phượng và gà ISA Brown

- Gà Ri lai gồm Ri lai mía và gà Ri lai chọi

- Gà Lai mía là con của gà bố Mía và gà mẹ Lương Phượng

Trong 15 ñàn gà mắc bệnh ñược chọn ngẫu nhiên ñể theo dõi có 5 ñàn gà

Ri lai chọi, 3 ñàn gà Ri lai mía, 4 ñàn gà Lương Phượng và 3 ñàn gà ISA Brown

Trong ñó:

- Gà theo dõi ở trong lứa tuổi từ 4-8 tuần tuổi có 3 ñàn

- Gà theo dõi ở trong lứa từ 9- 16 tuần tuổi có 4 ñàn

- Gà theo dõi ở trong lứa tuổi từ 17- 25 tuần tuổi có 5 ñàn

- Gà theo dõi ở trong lứa tuổi từ 25 tuần tuổi trở lên có 3 ñàn

Kết quả theo dõi ñược chúng tôi tổng hợp lại và thể hiện ở bảng sau

Bảng 3.1 Tình hình bệnh do ORT gây ra trên ựịa bàn huyện Ba Vì- Hà Nội

Giống gà

Tuổi gà mắc bệnh (tuần tuổi)

Tỷ lệ gà mắc bệnh tại thời ựiểm theo dõi

Số con Tỷ lệ(%) Yên

Khoá

i

Cẩm

Lĩnh

đào Thị Thơm 1400 ISA Brown >25 248 17,71

Nguyễn Khắc Hưng 1238 Lương

Qua bảng 3.1 chúng tôi thấy:

- Xã Yên Khoái có 3 ựàn gà bệnh trong ựó có 2 ựàn Lai Chọi, 1 ựàn Lai Mắa, Trong tổng số 2508 gà bệnh theo dõi có 470 con mắc bệnh chiếm 18,74%

Trong tổng số 684 con gà ở 2 ñàn gà Lai Chọi bị bệnh có 142 con mắc bệnh chiếm 20,76% Hầu hết số gà Lai Chọi theo dõi ở trong lứa từ 4 - 8 tuần tuổi

- Ở xã Cẩm Lĩnh có 3 ñàn gà bệnh trong ñó có 1 ñàn Lai Mía (9 – 16 tuần tuổi), 1 ñàn Lai Chọi( 9- 16 tuần tuổi) và 1 ñàn gà ISA Brown theo dõi ở trên 25 tuân tuổi Hầu hết số gà mắc bẹnh nằm trong lứa tuổi từ 9 - 16 tuân tuổi

Trong tổng số 3134 gà theo dõi thi có 795 con mắc bệnh chiếm 25,36% Trong ñó, gà theo dõi ở ở 9 - 16 tuần tuổi có 547 con gà có biểu hiện chiếm 17,45%

- Trong 4 ñàn gà bệnh theo dõi ở xã Tản Lĩnh có 2 ñàn Lương Phượng, 1 Lai Mía, 1 Lai Chọi Trong số 806 con gà Lương Phượng theo dõi ở 4 – 8 tuần tuổi có 386 con mắc chiếm tới 47,89%

Trong số 2311 con gà theo dõi ở 9 – 16 tuần tuổi có tới 392 con mắc bệnh, chiếm 16,96%

Trong 1463 con gà Lương Phượng ở 17 – 25 tuần tuổi có 586 con bị bệnh Chiếm tỷ lệ rất cao tới 40,05%

- Trong tổng số 6292 gà theo dõi ở xã Tòng Bạt có 1710 con gà bị bệnh chiếm 27,17%

Trong tổng số 2370 con gà ISA Brown theo dõi ở 9 – 25 tuần tuổi có 442 con mắc bệnh chiếm 18,65%

Khi theo dõi ñàn gà ở 9 – 16 tuần tuổi thấy có 719 con mắc bệnh trong tổng số 2244 con theo dõi chiếm tới 32,04%

Từ bảng số liệu trên có thể nhận thấy: Tỷ lệ gà bệnh ở 4 xã theo dõi khác nhau là khác nhau Trong ñó xã Tản Lĩnh có tỷ lệ mắc ORT cao nhất chiếm tới 29,78%

Tỷ lệ này phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố như: ðiều kiện chăn nuôi, con giống, vệ sinh chuồng trại…

3.1.2 Kết quả kiểm tra, phân lập vi khuẩn O rhinotracheale từ những gà mắc bệnh

Từ việc quan sát những ñàn gà có triệu chứng mắc bệnh do

O.rhinotracheale gây ra, chúng tôi tiến hành lấy mẫu máu ở cánh và phân

lập vi khuẩn

Mầm bệnh từ bệnh phẩm ñược lấy và cấy vào môi trường thạch máu, sau

ñó tiến hành nhận dạng vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram Soi dưới kính hiển vi sẽ thấy vi khuẩn là trực khuẩn nhỏ bắt màu gram (- ) Từ những mẫu ñem phân lập chúng tôi thu ñược kết quả những mẫu dương tính Kết quả thể hiện ở bảng 3.2

Bảng 3.2 Kết quả phân lập vi khuẩn ORT từ những gà mắc bệnh

Chỉ tiêu phân lập

Tuổi gà (tuần tuổi)

Kết quả phân lập vi khuẩn SMKT

( SMKT: Số mẫu kiểm tra, SMDT: Số mẫu dương tính)

Qua bảng số liệu chúng tôi thấy trong tổng số 191mẫu kiểm tra thì có 108 mẫu

là dương tính chiếm tới 56,54%

- Trong ñó những con có hiện tượng thở ngáp có số mẫu dương tính chiếm tới 82,5%

- Hầu hết những con gà dương tính với O.rhinotrachale mà chúng tôi theo

dõi ñều có hiện tượng ủ rũ, bỏ ăn Trong số 95 con gà theo dõi ở 4-8 tuần tuổi có tới 60 con có hiện tượng và khi phân lập cho kết quả dương tính chiếm 63,16%

- Tiếp sau ñó là gà có hiện tượng vảy mỏ, chảy nước mắt, nước mũi Tỷ lệ này chiếm tới 61,90%