KỸ THUẬT CHỨNG NGHIỆM PHÙ hợp

Phản ứng thuận hợp phản ứng chéo chỉ là 1 trong các xét nghiệm để tìm được túi máu phù hợp cho bệnh nhân.. Sàng lọc kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân và túi máu.. Phản ứng chéo tro

KỸ THUẬT CHỨNG NGHIỆM PHÙ HỢP Nguyên tắc căn bản

Lựa chọn được túi máu phù hợp

Bảo đảm an toàn truyền máu

Nền tảng là phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể

Phản ứng thuận hợp ( phản ứng chéo ) chỉ là 1 trong các xét nghiệm để tìm được túi máu phù hợp cho bệnh nhân

Các kỹ thuật trước truyền máu

Kiểm tra tiền sử truyền máu của bệnh nhân

Xác định nhĩm máu ABO, Rh của bệnh nhân và túi máu

Sàng lọc kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân và túi máu

Định danh kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân ( nếu cĩ )

Phản ứng chéo.

Các loại phản ứng chéo

Phản ứng chéo điện tử:

+ Sử dụng máy vi tính để phân tích các dữ liệu của túi máu và bệnh nhân:

Nhĩm máu ABO, Rh của túi máu và bệnh nhân

Sàng lọc kháng thể bệnh nhân

+ Chỉ cĩ thể sử dụng trong trường hợp sàng lọc kháng thể ở bệnh nhân (-) + Khi các dữ liệu đều phù hợp thì máy vi tính sẽ in ra nhãn dán để dán lên túi máu

Phản ứng chéo trong huyết thanh học:

+ Trước truyền máu, hồng cầu túi máu được kiểm tra với huyết thanh bệnh nhân

+ Nếu trong huyết thanh bệnh nhân cĩ kháng thể chống lại các kháng nguyên tương ứng trên hồng cầu túi máu thì sự ngưng kết sẽ xuất hiện

+ Điều đĩ thể hiện sự khơng thuận hợp ở bệnh nhân này đối với túi máu

+ Nếu khơng cĩ sự ngưng kết xảy ra, túi máu được xem như thuận hợp hay an tịan để truyền cho bệnh nhân

Mục đích phản ứng chéo

Đây là bước kiểm tra cuối cùng sự thuận hợp của nhĩm máu ABO Cĩ thể phát hiện được sự hiện diện của kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân trong 1 số trường hợp

Quy trình phản ứng chéo

Gồm các bước:

Kiểm tra thơng tin bệnh nhân:

+ Họ tên bệnh nhân phải đầy đủ, rõ ràng

+ Cần cĩ mã số hồ sơ bệnh án, hay số nhập viện

+ Tiền sử truyền máu và các phản ứng truyền máu trước đĩ ( nếu cĩ )

2) Kiểm tra mẫu máu bệnh nhân:

+ Phải đầy đủ họ tên, mã số bệnh nhân trên mẫu máu và khớp với phiếu yêu cầu

+ Mẫu máu được lấy tối đa trong vịng 3 ngày

+ Kiểm tra hiện tượng tán huyết, các cục fibrin trong mẫu máu

3) Xác định lại nhĩm máu ABO, Rh:

+ Định lại nhĩm máu ABO bằng cả 2 phương pháp

+ Định lại nhĩm máu Rh bằng huyết thanh mẫu D

+ Để xác định nhĩm máu cĩ thể dùng lam kính hoặc ống nghiệm

4) Tiến hành phản ứng chéo

Trang thiết bị

+ Nước muối sinh lý 0,9%

+ Lam kính thủy tinh

+ Ống nghiệm thủy tinh 10x75mm

+ Ống nghiệm nhựa 12x75mm

+ Chai nhựa đựng nước muối dùng để rửa

+ Pipette cĩ chia độ

+ Thuốc thử: hồng cầu mẫu, AHG, LISS, hồng cầu cảm ứng

+ Card gel, dung dịch đệm ( có LISS )

+ Máy quay ly tâm ống nghiệm, máy quay ly tâm Card gel

+ Máy rửa tự động ( nếu cĩ )

+ Máy ủ Card gel, ống nghiệm

+ Kính hiển vi

Kỹ thuật

Phản ứng chéo sử dụng kỹ thuật trong ống nghiệm

Phản ứng chéo sử dụng kỹ thuật Card gel

Phản ứng chéo gồm 2 phần:

+ Phần chính: phản ứng giữa huyết thanh bệnh nhân và hồng cầu túi máu.

+ Phần phụ: phản ứng giữa huyết thanh túi máu và hồng cầu bệnh nhân

Kỹ thuật trong ống nghiệm

Pha lỗng hồng cầu túi máu từ 2 – 4% bằng nước muối sinh lý 0,9% ( thường là 3% )

Cho 50µL hồng cầu đã pha lỗng vào ống nghiệm

Cho thêm 100µL huyết thanh bệnh nhân vào cùng ống nghiệm trên

Trộn kỹ, quay ly tâm dung dịch ở tốc độ 3000 vịng/phút trong 15 giây

Lắc nhẹ nhàng và đọc kết quả dưới kính hiển vi ( giai đoạn 1 )

Thêm 100µL LISS vào trong cùng ống nghiệm

Trộn kỹ, ủ dung dịch ở 370C trong 15 phút

Sau ủ, quay ly tâm dung dịch ở tốc độ 3000 vòng/phút trong 15 giây, lắc nhẹ nhàng và đọc kết quả ( nếu cần thiết )

Rửa dung dịch 03 - 04 lần bằng nước muối sinh lý 0,9% và đổ bỏ hoàn toàn nước rửa cuối cùng

Thêm 100µL AHG, trộn kỹ và quay ly tâm dung dịch ở tốc độ 3000 vịng/phút trong 15 giây

Lắc nhẹ nhàng và đọc kết quả dưới kính hiển vi ( giai đoạn 2 )

Nếu kết quả (-) cho thêm 50µL hồng cầu cảm ứng, trộn kỹ và quay ly tâm dung dịch ở tốc độ 3000 vịng/phút trong 15 giây

Lắc nhẹ nhàng và kiểm tra kết quả lại dưới kính hiển vi

Kỹ thuật Card gel

Pha lỗng hồng cầu túi máu 1% bằng dung dịch đệm

Cho 50µL hồng cầu 1% vào lỗ Card gel

Thêm 25µL huyết thanh bệnh nhân vào cùng lỗ Card gel trên

Ủ Card gel ở 370C trong 15 phút

Sau ủ, quay ly tâm Card gel trong 10 phút

Đọc và ghi nhận kết quả

Lưu ý: các bước kỹ thuật cần được tiến hành theo hướng dẫn của nhà sản xuất

Kỹ thuật tự chứng

Cần tiến hành khi phản ứng chéo (+)

Pha lỗng hồng cầu bệnh nhân bằng nước muối sinh lý 0,9%

Tiến hành các bước kỹ thuật giống như phản ứng chéo

Đọc và so sánh kết quả của ống tự chứng với phản ứng chéo.

Lưu ý: nồng độ, tỷ lệ của hồng cầu và huyết thanh cần tuân theo kỹ thuật sử dụng Các nguyên nhân (+) trong phản ứng chéo

Khơng đúng nhĩm máu ABO

Kháng thể miễn dịch trong huyết thanh bệnh nhân

Kháng thể tự sinh trong huyết thanh bệnh nhân

Hồng cầu túi máu tự ngưng kết

Các bất thường trong huyết thanh bệnh nhân

Nhiễm trùng

Sàng lọc kháng thể (-), phản ứng chéo giai đoạn 1 (+):

Khơng đúng nhĩm máu ABO của túi máu và bệnh nhân

Hồng cầu túi máu tự ngưng kết

Kháng thể chống A1 ở bệnh nhân A2 hoặc A2B

Các kháng thể miễn dịch hoạt động ở nhiệt độ phịng

Các kháng thể tự sinh loại lạnh

2) Sàng lọc kháng thể (-), phản ứng chéo giai đoạn 2 (+):

Hồng cầu túi máu ngưng kết

Kháng thể trong huyết thanh phản ứng với các kháng nguyên trong túi máu Các kháng thể do truyền tiểu cầu khơng phù hợp nhĩm máu ABO ( thường là kháng thể chống A hoặc B )

3) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (-):

Kháng thể tự sinh -I

Các kháng thể phụ thuộc vào số lượng kháng nguyên

4) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (+), tự chứng (-):

Kháng thể miễn dịch

Hồng cầu túi máu ngưng kết

5) Sàng lọc kháng thể (+), phản ứng chéo (+), tự chứng (+):

Kháng thể miễn dịch

Kháng thể tự sinh loại lạnh

Kháng thể tự sinh loại nĩng

Các vấn đề liên quan đến thuốc thử

Các bước giải quyết trường hợp (+)

Kiểm tra nhóm máu ABO, Rh túi máu và bệnh nhân.

Làm tự chứng và Coombs trực tiếp

Kiểm tra lại sàng lọc kháng thể ở bệnh nhân, định danh kháng thể ( nếu có và cần thiết )

Tiến hành thêm các kỹ thuật khác

Kỹ thuật trong trường hợp khẩn cấp,Cố gắng xác định nhóm máu ABO, Rh của bệnh nhân

Nếu không xác định được, sử dụng túi máu O-

Ngay khi bệnh nhân đã được truyền máu, vẫn phải tiếp tục tiến hành kỹ thuật phản ứng chéo

Tài liệu tham khảo

Technical manual, 15th edition

Modern blood Banking and Transfusion Practices, 4th edition

HealthAtoZ.com

Redcross.org

Nobelprize.org