BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH………………………………………………………………… CHỮ VIẾT TẮT………………………………………………………………………6 LỜI MỞ ÐẦU…………………………………………………………………………7 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU…………………………………………… 1.1.Giới thiệu khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ………………….8 1.2.Tổng quan phương pháp………………………………………………… 11 1.2.1.Karyotype……………………………………………………………………….11 1.2.2.Sinh học phân tử……………………………………………………………… 14 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP………………………………… 22 2.1 Karyotype.……………………………………………………………………… 22 2.1.1.Vật liệu ………………………………………………………………………….22 2.1.2 Dụng cụ thiết bị…………………………………………………………… 22 2.1.3.Hóa chất…………………………………………………………………………22 2.1.4.Quy trình……………………………………………………………………… 22 2.2.Sinh học phân tử…………………………………………………………………27 2.2.1.QF-PCR……………………………………………………………………… 28 2.2.2.FISH……………………………………………………………………………31 2.2.3.Real time PCR…………………………………………………………………33 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN………………………………………37 3.1 Karyotype……………………………………………………………………… 37 3.2.Sinh học phân tử………………………………………………………………… 38 3.2.1 QF PCR……………………………………………………………………… 38 3.2.2 FISH……………………………………………………………………………41 3.2.3.Realtime PCR chẩn đoán HPV………………………………………………….42 CHƢƠNG KẾT LUẬN………………………………………………………… 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………… 45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ DANH MỤC HÌNH Hình Các giai đoạn phản ứng PCR……………………………………17 Hình Đường cong khuếch đại Tín hiệu huỳnh quang trình bày trừ đường nền…………………………………………………………………………… 20 Hình FISH chẩn đoán nhanh hội chứng Down, Patau, Edward, Turner, Kleinerfelter chẩn đoán trước sinh Thai nhi mắc hội chúng Patau (trisomy 13)…………………………………………………………………………………… 23 Hình Lấy máu ngoại vi người lớn………………………………………….24 Hình Lấy máu ngoại vi trẻ…………………………………………………24 Hình Cấy máu……………………………………………………………… 25 Hình Dung dịch Demecolcine……………………………………………… 26 Hình Ly tâm 1800 rpm phút………………………………………….26 Hình Nhỏ KCl vào mẫu ống ly tâm………………………………… 26 Hình 10 Nhỏ axit acetic vào mẫu ly tâm………………………………27 Hình 11 Sau cho dung dịch carnoy vào lần 2………………………………27 Hình 12 Dung dịch có màu trắng nhỏ dung dịch Carnoy lần 3…………….27 Hình 13 Nhỏ lame (kiểu nhỏ ngang)………………………………………… 28 Hình 14 Nhỏ lame cao (kiểu nhỏ cao)………………………………………….28 Hình 15 Nhuộm lame Giemsa: buffer…………………………………….28 Hình 16 Quan sát NST kính hiển vi………………………………………29 Hình 17 Ống type đánh số theo mã số ống chứa dịch ối…………….31 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 18 Mẫu lắc ủ 990C 800rpm 10 phút………………………….31 Hình 19 Màng lọc cuả ống type có màng lọc………………………………….31 Hình 20 Nhỏ dung dịch wash buffer type 6………………………………… 31 Hình 21 Máy PCR……………………………………………………… …….32 Hình 22 Điện di mao quản sản phẩm………………………………………… 33 Hình 23 Cho vào máy lai PCR…………………………………………………35 Hình 24 Gỡ keo sau lai…………………………………………………………35 Hình 25 Đánh mã số cho mẫu………………………………………………… 36 Hình 26 Bật tia UV tủ cấy an toàn sinh học cấp 2……………………….37 Hình 27 Máy trích ly DNA tự động…………………………………………….38 Hình 28 Nhỏ mẫu vào Plate………………………………………………… 38 Hình 29 Plate đựng mẫu dung dịch AW1………………………………… 38 Hình 30 Kết NST hình vi tính chưa xếp…………………….39 Hình 31 Kết NST hình vi tính sau xếp………………….39 Hình 32 Kết NST in giấy…………………………………………… 40 Hình 33 Kết Trisomy XXX……………………………………………… 41 Hình 34 Kết bị hội chứng Turner………………………………………… 41 Hình 35 Kết bị hội chứng Klinefelte…………………………………… 41 Hình 36 Kết Trisomy 21( hội chứng down)…………………… ……….42 Hình 37 Kết Trisomy 13 (hội chứng Patau)…………………………… 42 Hình 38 Kết Trisomy 18 (hội chứng Edward)………………………… 42 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 39 Kết FISH NST 21 NST 13 bình thường……………….………43 Hình 40 Kết FISH NST 21 hội chứng down….………………………….43 Hình 41 Kết FISH NST XX NST 18 bình thường…….……………… 43 Hình 42 Kết FISH NST XY NST 18 bình thường………….………… 43 Hình 43 Kết âm tính………………………………………………….…….45 Hình 44 Kết dương tính………………………………………… 45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT NỘI DUNG NST Nhiễm sắc thể GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ LỜI MỞ ÐẦU Trong phát triển quốc gia nay, ngành Y nắm vai trò vô quan trọng Không đóng góp to lớn cho kinh tế mà ngành Y góp phần củng cố mặt đời sống nhân sinh cho quốc gia Với quốc gia khỏe mạnh thể chất người lao động, quốc gia có chỗ dựa vững để phát triển mạnh mẽ kinh tế Cùng với tiến triển khoa học, bệnh di truyền ngày người ý Theo thống kê nhi khoa, gần 20 năm nay, tỉ lệ trẻ em chết bệnh di truyền giảm mạnh, cò tỉ lệ trẻ phát bệnh tỷ lệ tử vong dị tật bẩm sinh bệnh di truyền tăng cao Trong trình phát triển tự nhiên nhân loại, ảnh hưởng nhân tố, làm cho chất di truyền thể biến đổi Trong biến đổi có loại biến đổi số kết cấu nhiễm sắc thể nhân tế bào gọi dị dạng nhiễm sắc thể, loại khác đột biến gen Vì tất bệnh nhiễm sắc thể gen nhân tế bào biến dạng gây cản trở cho thay thế, gây thiếu hụt dung môi có liên quan dẫn đến thể di truyền sang đời sau, tạo nên hỗn hợp sinh lý nhân thể, sinh hóa, gây cản trở trình thay thế, loại bệnh uy hiếp sức khỏe người Vì việc xét nghiệm sớm trước sinh việc quan trọng nhằm ngăn chặn việc sinh bị tật gây nên gánh nặng cho gia đình xã hội Với nội dụng thực tập tốt nghiệp: “một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán bệnh” khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM Chúng em hiểu rõ kỹ thuật xét nghiệm số bệnh quan trọng trải nghiệm thực tế nâng cao tay nghề biết khác lý thuyết thực tế GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ Bệnh viện Từ Dũ bệnh viện đầu ngành sản phụ khoa nước, đồng thời trung tâm sản phụ khoa lớn khu vực phía Nam tọa lạc 284 Cống Quỳnh, phường Phạm Ngũ Lão, quận 1, Tp.HCM Trong khoa xét nghiệm di truyền y học tự hào đơn vị đầu nước di truyền người chẩn đoán trước sinh Di truyền sinh học phân tử chuyên khoa mũi nhọn bệnh viện Từ Dũ, lĩnh vực tiên phong xu hướng phát triển y học giới Khoa có đội ngũ cán y tế trẻ giỏi, có đầy đủ thiết bị xét nghiệm sàng lọc chẩn đoán gen đại Khoa xét nghiệm di truyền y học thành lập ngày 8/10/2010 từ tiền thân buồng di truyền thuộc khoa giải phẫu bệnh - tế bào - di truyền, gồm phận chính: -Xét nghiệm sàng lọc: sàng lọc trước sinh (double test combined test, triple test) sàng lọc sơ sinh (thiếu G6PD, suy giáp bẩm sinh, tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh) -Xét nghiệm gen nhiễm sắc thể: karryotube, QF-PCR, FISH, đột biến gen Thalassemia, loạn dưỡng Duchenne, Digeorge, AZF, SRY, Hemophilia, nhận dạng gen người, đột biến gen sẩy thai, HPV, Rubella PCR, CMV PCR, Toxoplasma PCR nhiều bệnh khác (nguồn: http://tudu.com.vn/vn/gioi-thieu/cac-chuyen-khoa/khoa-canlam-sang/khoa-xet-nghiem-di-truyen-y-hoc/) Sơ đồ quy trình xét nghiệm khoa - Sơ đồ quy trình xét nghiệm karyotube +Lấy mẫu: Tiếp nhận bệnh nhân, ghi thông tin, lấy mẫu nhận mẫu lừ nơi gửi đến, ký nhận +Kiểm tra: Kiểm tra mẫu máu lấy có đạt yêu cầu thực xét nghiệm không GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP +Nhập liệu: Nhập thông tin bệnh nhân bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu +Thực xét nghiệm: Thực xét nghiệm theo quy trình kỹ thuật xét nghiệm nhiễm sắc thể đồ máu gồm bước nuôi cấy 72 giờ, thu hoạch chuẩn bị lam ngày, đọc phân tích Lấy mẫu Không đạt Kiểm tra Đạt Nhập liệu Thực xét nghiệm Ra kết Không đạt Kiểm tra kết Đạt Nhập kết Tư vấn Trả nơi giới thiệu điều trị chuyên khoa Lưu hồ sơ Kết thúc +Ra kết xét nghiệm +Kiểm tra kết quả, không đạt lấy mẫu lại GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ +Nhập kết xét nghiệm in phiếu trả kết qua phần mềm nhiễm sắc thể đồ máu cho bệnh nhân +Tư vấn mặt di truyền cho bệnh nhân: Tranh ảnh, tài liệu tư vấn +Chuyển bệnh nhân lại nơi định xét nghiệm nơi có điều trị chuyên khoa phù hợp +Lưu hồ sơ -Sơ đồ quy trình xét nghiệm sinh học phân tử Nhận mẫu Kiểm tra thông tin Nhập liệu Ly trích DNA PCR Chạy điện di Ra kết phân tích Trả kết bệnh nhân +Nhận mẫu: Nhận mẫu dịch ối, mẫu máu, gai từ khoa khác bệnh viện +Kiểm tra thông tin: Thông tin ống chứa mẫu với thông tin giấy, không khớp báo lại GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 10