Kỹ thuật ELISA trong chẩn đoán nhanh bệnh virus hại cây có múi

Cây có múi là cây ăn quả có giá trị kinh tế cao, chiếm diện tích ưu thế ở các tình thành Nam Bộ, đặc biệt một số vùng đã hình thành nên những thương hiệu nổi tiếng như cam sành Tam Bình, Trà Nông. Gần đây vùng Cầu Kè (Trà Vinh), Châu Thành (Hậu Giang) nổi lên là vùng trồng mới rất có hiệu quả. Nhìn chung cây ăn trái ở Nam Bộ phát triển rất nhanh về diện tích lẫn cơ cấu cây trồng và sản lượng, trong đó có phần đóng góp quan trọng của cây có múi. Hiện nay nhà nông đang đứng trước nhiều thách thức ảnh hưởng đến giá trị thương phẩm của cam quýt, trong đó đáng kể đến nhất là bệnh hại do virus như Greening và tristera. Đây là bệnh nguy hiểm nhất đối với cây có múi. Nó ảnh hưởng rất nghiêm trọng tới năng suất và chất lượng. Bệnh này gây ra từ nhiều dòng khác nhau, việc hiểu rõ dòng gây hại giúp cho việc quản lý bệnh dễ dàng hơn, ta có thể sử dụng dòng nhẹ để chủng lên cây trước và cây sẽ chống chịu tốt khi có dòng khác độc hơn tấn công. Trong các nghiên cứu thí nghiệm, thực nghiệm cũng như thực tế phát hiện và điều trị các bệnh lý trên người, động vật và thực vật, lĩnh vực chẩn đoán luôn đóng một vai trò thiết yếu. Trong số những kỹ thuật quan trọng trong chẩn đoán, không thể không kể đến ELISA. ELISA là kỹ thuật được sử dụng rất rộng rãi trong y dược, thú y và bệnh lý thực vật, và cho đến nay vẫn là một trong những phương pháp chẩn đoán quan trọng nhất trong miễn dịch học cũng như một số lĩnh vực khác.

I- GIỚI THIỆU BỆNH VÀNG LÁ GREENING (VLG) VÀ MỘT SỐ BỆNH VIRUS HẠI CÂY CÓ MÚI

1- Bệnh vàng lá greening (VLG)

Triệu chứng bệnh:

Khi bị nhiễm bệnh lá bắt đầu chuyển sang màu vàng ở gân lá và vùng lân cậnrồi cả phiến lá có màu vàng hoặc khảm vàng, đôi khi gân lá bị biến hoá, lá bệnh trởnên ròn, mép lá uốn cong ra ngoài và thường bị rụng sớm Các lá non ra sau nhỏ vàbiến vàng tương tự như hiện tượng thiếu kẽm Các cành nhánh bị khô, rễ tơ và rễnhánh bị huỷ hoại khiến cây bị suy thoái và chết Cây bệnh thường ra hoa trái vụ và

có thể vẫn cho quả Quả sinh ra từ cây bệnh thường bị biến dạng, tâm quả bị vẹo và cónhiều hạt lép, phẩm chất kém Bị bệnh sớm cây thường bị tàn lụi ngay trong 1 - 2 nămsau khi trồng

Nguồn bệnh:

Là vi khuẩn Closterovirus dạng sợi thẳng hoặc cong, kích thước 12 x 2000 nm

Bệnh lây lan qua mắt ghép và cành chiết và côn trùng môi giới là rệp cam, rệp bông(Toxoptera citricida, Aphis gossypii, Aphis aurantii)

Ngoài hai bệnh trên, trên cây có múi ở nước ta còn gặp ở mức độ chưa phổ biến một

số bệnh virus và tương tự virus Exocortis, Cristacortis

Biện pháp chính phòng bệnh vàng lá greening, tristeza các bệnh virus khác:

1- Vệ sinh môi trường: trước khi trồng mới, những cây cam quýt trong vùng phảiđược kiểm tra và chặt bỏ hết các cây bị bệnh

- Đặc điểm nông học: Phải là cây đại diện

* Dạng quả, màu sắc vỏ, màu sắc ruột, khối lượng quả, số hạt, độ chua, độ đường

- Khả năng chống chịu sâu bệnh:

* Kháng được những sâu bệnh gì ?

* Chống chịu được những sâu bệnh gì ?

* Dễ nhiễm những sâu bệnh gì ?

* Chịu được úng ngập, khô hạn, mặn, chua phèn ?

Những cây có đầy đủ các đặc điểm của giống và được Hội đồng tuyển chọn cho điểmcao sẽ được chọn là cây đầu dòng ưu tú Những cây này được cấp chứng chỉ và được

cơ quan chuyên môn hướng dẫn kỹ thuật chăm sóc để lưu giữ nguồn gen Từ nhữngcây này, các cành chiết hoặc cành ghép sẽ được đưa về Viện nghiên cứu để lấy đỉnhsinh trưởng sử dụng kỹ thuật vi ghép tạo cây đầu dòng sạch bệnh (ký hiệu So) phục vụcho công tác nhân giống sạch bệnh sau này

Một số giống cây có múi đặc sản ở miền Bắc Việt Nam:

1- Cam Sành: là giống quýt (King mandarin), dân ta quen gọi là cam, tuỳ vùng trồnglâu đời mà có các tên gọi sau:

- Cam Sành Bố Hạ: trồng ở Bố Hạ, huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang Cam Sành Bố

Hạ ưa đất phù sa cổ, khí hậu mát ẩm Hiện nay vùng cam này đã bị xoá sổ do bệnhvàng lá greening

- Cam Sành Hà Giang - Tuyên Quang - Yên Bái: là vùng cam chủ yếu của các tỉnhphía Bắc Cây cao trung bình, thích nghi rộng, năng suất cao Cam Sành thu quả vàodịp Tết, khối lượng quả trung bình 150 - 250 g, ngon thơm ngọt đậm

2- Cam Xã Đoài: nguồn gốc từ vùng Xã Đoài, huyện Nghi Lộc, Nghệ An Đưa lênvùng núi cao, mã quả đẹp hơn Cây cao trung bình, tán lá hơi xoè, thích nghi rộng.Năng suất cao, khối lượng quả trung bình 200 - 250 g/quả, có 18 - 22 hạt/quả, ngonthơm, thu hoạch vào tháng 12-1

3- Cam Valencia: nhập vào Việt Nam từ năm 1971 Quả to hơn cam Hamlin, trungbình 250 g/quả Khi chín vỏ quả có màu vàng, ruột màu vàng da cam Hạt 0 - 3hạt/quả Chín muộn vào dịp Tết âm lịch

4- Cam Ham Lin: là giống của Mỹ, (Hamlin là tên ông chủ vườn ở Mỹ), được đưa vàoViệt Nam từ năm 1971 thông qua Cu Ba Hamlin là giống chín sớm vào tháng 9 - 10,

vỏ quả mỏng, khối lượng quả trung bình 200 g/quả, ngọt đậm, 0 - 5 hạt/quả

5- Cam Sông Con: nguồn gốc chọn từ cây gieo hạt ở Nông trường Sông Con, Nghệ

An Cây cao trung bình, tán gọn, không có gai trên cành, thích nghi rộng Năng suấttrung bình, khối lượng quả trung bình 200 - 250 g/quả, có 3 - 5 hạt/quả, ngon thơm,thu hoạch vào tháng 10 - 11

6- Cam Vân Du: được chọn lọc từ những cây gieo hạt của giống cam Sunkist ở Trạinghiên cứu cam Vân Du (Thanh Hoá), trồng nhiều ở các nông trường vùng Thanh -Nghệ - Tĩnh trong những năm 70 - 80 Cây cao trung bình, tán gọn có gai trên cành,thích nghi rộng Năng suất cao, khối lượng quả trung bình 180 - 200 g/quả, có 10 - 15hạt/quả, ngon thơm, thu hoạch vào tháng 10 - 11

7- Cam Bù Hà Tĩnh: là giống quýt được trồng nhiều ở Nghệ An - Hà Tĩnh Cây caotrung bình, khối lượng quả 180 - 220 g, có 3 - 12 hạt/quả, ngọt đậm Quả chín vàotháng 12 - 1

8- Quýt chum: được trồng nhiều ở Bắc Quang - Hà Giang Cây cao trung bình, quảchín màu vàng đỏ, nặng 100 - 150 g/quả, có 3 - 5 hạt/quả, chín muộn vào tháng 12 - 1,ngọt mát, năng suất cao

9- Cam Canh: là giống quýt đường (Citrus Reticulata Blanco), được trồng nhiều ởvùng Từ Liêm - Hà Nội và Hoài Đức - Hà Tây Hiện nay đã được trồng ở nhiều nơinhư Châu Giang - Hưng Yên, vẫn cho phẩm chất tốt

Cây cao trung bình 3 - 3,5 m; đường kính tán 3 - 4 m; phân cành thấp, lá không có eo,màu xanh đậm, tán cây có hình dù rộng Ra hoa tháng 2 - 3 Thu hoạch vào tháng 11 -

12 Quả có hình cầu dẹt, khối lượng trung bình 100 - 140 g/quả Quả khi chín có màu

đỏ, vỏ mỏng, ruột vàng, ngọt đậm

10- Bưởi Đoan Hùng: là giống bưởi ngọt được trồng lâu đời ở Đoan Hùng - Phú Thọ.Cây sinh trưởng khoẻ, cao trung bình 4 - 5 m; đường kính tán trung bình 4 - 6m; láxanh vàng Ra hoa tháng 2 - 3, quả chín vào tháng 10 - 11 Quả tròn, khối lượng trungbình 0,8 - 1,2 kg/quả Vỏ quả mỏng khi chín có màu vàng; tép quả màu hung vàng, ăn

có vị ngọt, thơm mát

11- Bưởi Diễn: có nguồn gốc từ giống bưởi ngọt Đoan Hùng, được trồng lâu đời ở xãPhú Diễn - Từ Liêm - Hà Nội song chín muộn hơn, mã quả đẹp hơn và trở thànhgiống đặc sản của địa phương

Cây sinh trưởng khoẻ, cao trung bình 3 - 5m; đường kính tán trung bình 4 - 6 m; láxanh vàng, eo lá hình tim bầu, đỉnh lá chia thuỳ rõ Ra hoa tháng 2 - 3, quả chín vàotháng 11 - 12 Quả tròn hơi dẹt, khối lượng trung bình 0,8 - 1,2 kg/quả Vỏ quả mỏngkhi chín có màu vàng, tép quả màu hung vàng, khô, ăn có vị ngọt, thơm mát

12- Bưởi Phúc Trạch: trồng lâu đời ở huyện Hương Khê - Hà Tĩnh Cây sinh trườngkhoẻ, cao trung bình 3 - 5 m; đường kính tán trung bình 4 - 6 m Ra hoa tháng 2 - 3,quả chín vào tháng 9 - 10 Quả tròn, khối lượng trung bình 1,0 - 1,5 kg/quả Vỏ quảmỏng khi chín có màu vàng, tép quả màu hung vàng, khô, ăn có vị ngọt, thơm mát

Cây có múi là một trong những cây ăn quả có giá trị kinh tế cao Hiện nay,nhiều diện tích trồng cây có múi đạt giá trị trên 50 triệu đồng /năm Cá biệt có nơi đạtdoanh thu trên 200 triệu đồng /ha như ở nông trường Cao Phong - Hoà Bình, Nôngtrường 19 - 5 tại Nghệ An Tuy nhiên ở một số địa phương do nhân giống bằng cànhchiết hoặc mắt ghép trồng và quản lý vườn cây chưa khoa học nên năng suất, chấtlượng tuổi thọ vườn cây thấp, thậm chí trồng sau một vài năm lại phải chặt bỏ

Từ năm 1997, Viện Bảo vệ thực vật đã ứng dụng kỹ thuật vi ghép đỉnh sinhtrưởng, kỹ thuật PCR, ELISA để chẩn đoán bệnh Greening và Tristeza đã làm sạchbệnh và lưu giữ trong nhà lưới chống côn trùng nhiều giống cây có múi phổ biến ởcác tỉnh phía Bắc như: Bưởi Phúc Trạch, Bưởi Diễn, Bưởi Đoan Hùng, Cam Xã Đoài,Cam Sông Con, Cam Vân Du, Cam Valencia, Cam Bù, Cam Canh, Cam Sành, QuýtBắc Sơn Đồng thời đã đề xuất và triển khai hệ thống nhà lưới 3 cấp sản xuất giốngcây có múi sạch bệnh Hệ thống này đang phát huy hiệu quả tại Hà Giang, TuyênQuang và Nghệ An với công suất 135.000 cây /năm

Các kết quả nghiên cứu sản xuất giống sạch bệnh và phát triển các giống cây

có múi đặc sản ở các địa phương của Viện bảo vệ thực vật trong những năm vừa quadựa trên 5 tiến bộ kỹ thuật, bao gồm:

1 Qui trình kỹ thuật vi ghép đỉnh sinh trưởng để làm sạch bệnh Greening vàcác bệnh vi rút khác

2 Qui trình ứng dụng kỹ thuật PCR để chẩn đoán bệnh Greeng và ELISA đểchuẩn đoán bệnh Tristeza trên cây có múi

2.2 Quy trình chẩn đoán nhanh bệnh Tristeza bằng phương pháp ELISA Quy trình này gồm 6 bước:

Bước 1: Chuẩn bị đĩa phản ứng

Bước 2: Chuẩn bị dịch chiết

Bước 3: Cho kháng thể

Bước 4: Cho chất tổng hợp

Bước 5: Pha viên phản ứng

Bước 6: Đọc kết quả bằng máy đọc ELISA

(Giữa các bước đều phải rửa đĩa bằng dung dịch PBS)

Kỹ thuật Elisa (Enzyme-linked Immunosorbent assay)

(Còn gọi là kỹ thuật hấp phụ miễn dịch gắn enzym)

ĐN: Elisa là một kỹ thuật sinh hóa để xác định KN VSV hoặc KT đặc hiệuchống VSV trong mẫu xét nghiệm

Ứng dụng: Là kỹ thuật có độ chính xác cao, nhanh, nhạy, dễ thực hiện nênđược sủ dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu ứng dụng CNSH trong: y học,nông nghiệp, đặc biệt là trong các qui trình kiểm tra an toàn chất lượng các sản phẩmsinh học

Nguyên tắc: Dựa vào tính đặc hiệu của phản ứng KN-KT Để phát hiện, KTthường được gắn với 1 enzyme nhất định (phosphataza kiềm, peroxidaza…)

Nếu muốn định tính và định lƣợng KT đặc hiệu chống VSV trong các mẫunghiên cứu

1 Nhỏ KN VSV đã biết cho gắn lên thành giếng, rửa nhẹ để loại bỏ

KN không bám

2 Nhỏ tiếp huyết thanh bệnh nhân chứa KT cần xét nghiệm rồi Ủ 5

phút Nếu huyết thanh chứa KT đặc hiệu sẽ tạo phức KN-KT Rửanhẹ để loại bỏ những KT không đặc hiệu nên không bám

3 Nhỏ tiếp huyết thanh bệnh nhân chứa KT cần xét nghiệm rồi Ủ 5

phút Nếu huyết thanh chứa KT đặc hiệu sẽ tạo phức KN-KT Rửanhẹ để loại bỏ những KT không đặc hiệu nên không bám

4 Thêm cơ chất thích hợp với enzym Enzym gắn với antiglobulin sẽ

phân hủy cơ chất từ không có màu biến thành sản phẩm có màu Đocường độ màu ở bước sóng hấp thụ thích hợp (cường độ màu sẽ tỉ lệthuận với lượng KT trong huyết thanh)

1

TIỂU LUẬN

CÁC KỸ THUẬT ELISA

tính có lợi cho thực nghiệm của nó: dễ thực hiện, tốc độ nhanh, chi phí thấp,

dễ sản xuất, an toàn với

độ nhạy và độ đặc hiệu chấp nhận được

Tiền thân của ELISA là kỹ thuật miễn dịch học phóng xạ (radioimmunoassay– RIA), được phát

triển bởi Rosalyn Sussman Yalow và Solomon Aaron Berson (xuất bản lầnđầu tiên năm 1960;

Nobel y học cho Rosalyn S Yalow năm 1977) Mặc dù phương pháp này có

độ nhạy và độ đặc hiệu

rất cao, tuy nhiên việc đánh đấu bằng phóng xạ yêu cầu kỹ thuật cao, phức tạp,tốn kém, cũng như

việc sử dụng phải vô cùng cẩn thận vì khả năng gây nguy hiểm của phóng xạ

đã đưa đến nhu cầu tìm

kiếm các phương pháp cải tiến thay thế

Để thay cho việc sử dụng chất đánh dấu phóng xạ, người ta đã sử dụng kỹthuật liên kết kháng

nguyên hoặc kháng thể với một enzyme (enzyme-linked) có khả năng thựchiện một phản ứng nhận

biết (ví dụ như gây đổi màu một chất) Quy trình liên kết enzyme được pháttriển độc lập bởi Stratis

Avrameas và G.B Pierce Bên cạnh đó, việc cần phải loại bỏ các khángnguyên/kháng thể thứ cấp

không gắn dẫn tới kỹ thuật cố định các kháng nguyên/kháng thể sơ cấp(immunosorbent) được công

bố bởi Wide và Jerker Porath năm 1966 Năm 1971, hai nhóm nghiên cứuPeter Perlmann và Eva

Engvall cùng với Anton Schuurs và Bauke van Weemen đã độc lập công bốcác bài báo tổng hợp

các kỹ thuật trên thành ELISA

3 ELISA – nguyên lý cơ bản và các biến thể:

xác định kháng nguyên trong cơ thể 3

Dựa trên cơ sở đó, kỹ thuật ELISA được thiết lập nhằm chẩn đoán sự hiệndiện của một kháng

nguyên hay kháng thể Để xác định một yếu tố cần chẩn đoán (khángnguyên/kháng thể) người ta sử

dụng một hoặc nhiều yếu tố phát hiện (kháng thể/kháng nguyên/bổ thể) cóphản ứng miễn dịch đặc

hiệu với yếu tố cần chẩn đoán Các yếu tố phát hiện này được đánh dấu bằngenzyme sao cho phản

ứng miễn dịch với yếu tố cần chẩn đoán sẽ tạo nên sự thay đổi có thể nhận biếtđược bằng mắt

thường hay thậm chí định lượng được bằng các công cụ so màu khác khi cho

cơ chất của enzyme

đánh dấu vào

3.2 Các biến thể của ELISA:

Mặc dù nguyên tắc của ELISA khá đơn giản, nhưng qua quá trình thựcnghiệm sử dụng đã vấp

phải khá nhiều vấn đề, từ các vấn đề về hiệu quả của phương pháp như độnhạy, độ đặc hiệu, giới

hạn phát hiện cho đến những vấn đề về thực nghiệm như thời gian thực hiện,

nhiên nhìn chung, tất cả các biến thể này có thể được phân loại như sau:

• ELISA dị pha (heterogeneous), hay còn gọi là ELISA pha rắn (solid phase),gồm các phương

pháp:

- ELISA trực tiếp (direct ELISA)

- ELISA gián tiếp (indirect ELISA)

- ELISA sandwich

- ELISA cạnh tranh (competitive ELISA)

• ELISA đồng pha (homogeneous), gồm các phương pháp ELISA đồng phacạnh tranh

(competitive) và không cạnh tranh (non-competitive)

Trong giới hạn bài viết này, chỉ có thể khái quát về phương pháp chung chotừng loại biến thể

trên Trong thực nghiệm chẩn đoán, cần có những điều chỉnh thích hợp đối vớitừng quy trình cụ thể

cho từng đối tượng khác nhau

Các ký hiệu quy ước trong các phần sau:

cách cố định lên một bề mặt rắn (có thể là nhựa, thủy tinh, giấy, màngnitrocellulose, agarose,

polyacrylamide gel hay thậm chí vi khuẩn được cố định) tạo thành hai pha cốđịnh và tự do, theo sau

là môt bước loại bỏ pha tự do Yếu tố phát hiện được thêm vào sau đó để pháthiện sự hiện diện của

yếu tố cần chẩn đoán còn lại trên pha cố định thông qua hoạt tính của enzyme.Các phương pháp cố

định các yếu tố lên bề mặt rắn và loại bỏ pha tự do sẽ được đề cập đến trongphần 4.1 4

3.2.1.2 ELISA gián tiếp:

Phương pháp ELISA gián tiếp tương tự như ELISA trực tiếp, nhưng ở đâyngười ta sử dụng tới

hai lớp yếu tố phát hiện, và chỉ có lớp yếu tố phát hiện cuối cùng mới mangenzyme Sơ đồ phương

pháp gồm những bước như sau:

] = Ag + Ab + AAb E → ] = Ag – Ab – AAb E

Ưu điểm của phương pháp này là chỉ cần tạo một loại kháng kháng thể mangenzyme để nhận

biết cho nhiều kháng nguyên khác nhau Kháng thể sơ cấp cũng là nhữngprotein, và cũng mang

những epitope của riêng nó Nếu nhiều loại kháng thể khác nhau được sảnxuất từ cùng một loài sinh

vật, tất cả các loại kháng thể này đều mang những epitope chung đặc trưngcho loài đó Việc sản

xuất một kháng kháng thể có khả năng liên kết với epitope đó là hoàn toàn cóthể, thông qua việc

tiêm các kháng thể trên vào một loài sinh vật khác Phương pháp này cũng chogiới hạn phát hiện

thấp hơn khoảng 10 lần so với ELISA trực tiếp, do khả năng liên kết nhiềukháng kháng thể lên một

phân tử kháng thể sơ cấp, làm tăng số lượng enzyme được cố định Tuy nhiênnhược điểm của nó là

tăng số bước thực hiện do đó làm tăng việc kiểm soát các điều kiện quá trình

và kéo dài thời gian

bề mặt rắn Sơ đồ tổng quát như sau:

] = Ab1 + Ag + Ab2 E → ] = Ab1 – Ag – Ab2 E

Sau khi bắt giữ yếu tố cần chẩn đoán, lúc này phương pháp quay lại tương tựnhư ELISA trực

tiếp và gián tiếp sau khi đã cố định yếu tố cần chẩn đoán Người ta có thể sửdụng một kháng thể liên

kết enzyme để xác định trực tiếp yếu tố trên (như ELISA trực tiếp), hoặc cũng

Phương pháp này có khá nhiều ưu điểm vượt trội, thứ nhất là giảm đượcnhuộm màu nền và

các phản ứng không đặc hiệu do đã loại bỏ được hầu hết các thành phần tạp,phản ứng được thực

hiện dễ dàng hơn, Ab1 có thể được gắn sẵn trên bề mặt rắn tạo thành các bộKIT và có thể thực hiện

các chẩn đoán mà trong đó kháng nguyên không thể gắn được lên mặt rắn.Bên cạnh đó nó cũng có

những nhược điểm riêng, quan trọng nhất là làm tăng phản ứng chéo do liênkết không đặc hiệu giữa

các lớp yếu tố phát hiện thứ cấp với Ab1 Nhược điểm này đã được nghiêncứu khắc phục bằng cách

chỉ cố định phần đoạn nhánh (Fab) của kháng thể Tuy nhiên việc làm này cóthể làm giảm độ đặc

hiệu của kháng thể trong xét nghiệm kháng thể đối với các loại virus có quan

- Phương pháp bão hòa cân bằng tương đối (quasi-equilibrium saturarion):

Trong phương pháp này kháng nguyên mẫu (Ag) và kháng nguyên cạnh tranh(Agc) được cho

phản ứng cùng lúc với một kháng thể được cố định Hai loại kháng nguyên sẽphản ứng miễn dịch

với Ab theo một tỉ lệ tương ứng với tỉ lệ nồng độ giữa hai loại kháng nguyên,

- Phương pháp bão hòa thứ tự (sequential saturation):

phải dư để bão hòa lượng kháng thể còn lại

Một biến thể của phương pháp này đó là kháng thể Ab không được cố địnhtrước, mà sau khi

phản ứng lần lượt với kháng nguyên mẫu Ag và kháng nguyên cạnh tranh Agc

sẽ được cố định lại

bằng cách phản ứng với kháng kháng nguyên AAb được cố định trên mặt rắn

- Phương pháp ức chế kháng thể (antibodies inhibition):

Thay vì cố định kháng thể lên mặt rắn, người ta cũng có thể cố định khángnguyên cạnh tranh

Đầu tiên, người ta sẽ cho kháng nguyên mẫu phản ứng với một lượng khángthể biết trước Sau đó,

lượng kháng thể còn lại chưa phản ứng sẽ được phản ứng với kháng nguyêncạnh tranh, và được cố

định lại Sau bước rửa ta có thể đo lượng kháng thể còn cố định lại và suy ralượng kháng thể đã

phản ứng với kháng nguyên mẫu

Bên cạnh việc định lượng kháng nguyên, phương pháp này còn có thể sửdụng để so sánh các

kháng nguyên với nhau, như Altschuh và van Regenmortel (1982) đã dùng đểnghiên cứu các

epitope khác nhau trên protein vỏ virus khảm thuốc lá

3.2.2 ELISA đồng pha:

Phương pháp này thường được sử dụng để định lượng các phân tử nhỏ Khácvới RIA và ELISA

dị pha, phương pháp này không cần bước tách biệt các yếu tố gắn kết và tự do,

vì nó dựa trên sự thay

đổi hoạt tính của enzyme thông qua phản ứng liên kết miễn dịch

Ưu điểm lớn của phương pháp này là giảm được mức độ phức tạp của phảnứng trong việc cố

định các yếu tố lên bề mặt rắn, thời gian thực hiện rất nhanh cũng như giảmđược lượng kháng thể

cần dùng vì không phải tráng một bề mặt rắn lớn Tuy nhiên nó có nhược điểm

3.2.2.1 ELISA đồng pha không cạnh tranh:

Phương pháp này đơn giản sử dụng enzyme liên kết với kháng thể sao chophản ứng miễn dịch