Slide thuyết trình các phương pháp chiết xuất dược liệu

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNG     SEMINAR CÁC PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU   Tháng 11/2016 CHIẾT XUẤT VÀ PHÂN LẬP CURCUMIN TỪ CỦ NGHỆ VÀNG (Rhizoma Curcumae longae) Giáo viên hướng dẫn:TS NGUYỄN VIẾT KÌNH Lớp: ĐH Dược 7B – Nhóm – Tiểu Nhóm Sinh viên thực hiện: Đào Khánh Linh Võ Ngọc Nhân Huỳnh Đệ Nhất Lê Hà My Nguyễn Hồng Thư Lã Ngọc Thùy Trang Lê Nguyễn Thùy Uyên ĐẶT VẤN ĐỀ  Từ lâu, người biết dùng nghệ để làm thuốc, làm gia vị, làm phẩm màu  Y học cổ truyền, nghệ dùng chữa: loét dày; loét da; bệnh gan, mật, u nhọt Nghệ vàng Curcuma longa L ĐẶT VẤN ĐỀ  Y học đại, nghiên cứu thành phần hóa học, chiết tách phát hoạt chất curcumin củ nghệ có nhiều tác dụng tốt sức khỏe kháng nấm, diệt khuẩn, diệt ký sinh trùng, chống viêm nhiễm bảo vệ da  Do đó, chúng em chọn đối tượng nghiên cứu củ Nghệ vàng, với đề tài “Nghiên cứu chiết xuất phân lập curcumin từ củ Nghệ vàng (Curcuma longa L )” TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC NGHỆ VÀNG Tên khoa học : Curcuma longa Linnaeus Tên khác : khương hoàng, uất kim Thuộc họ : Gừng ( Zingiberaceae) Nghệ vàng Curcuma longa L TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC NGHỆ VÀNG  Mô tả :  Nghệ thân thảo  Lá hình trái xoan, thon nhọn hai đầu, hai mặt nhẵn màu lục nhạt Nghệ vàng Curcuma longa L TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC NGHỆ VÀNG  Mô tả :  Cụm hoa màu vàng mọc từ lên, thành hình nón thưa  Quả nang, hình cầu, hạt có áo hạt  Củ nghệ có vị đắng, cay, mùi thơm hắc, tính ấm  Mùa hoa từ tháng đến tháng Nghệ vàng Curcuma longa L TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC NGHỆ VÀNG  Phân bố, sinh thái :  Ở nước ta, nghệ có trữ lượng dồi  Nghệ ưa ẩm, ưa sáng thích nghi với nhiều khí hậu  Cây mọc vào mùa xuân, có hoa  Hoa mọc thân chồi năm trước, thân hoa năm sau không mọc lại phần thân rễ thành củ già.  TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Thành phần hóa học :  Chất màu curcumin 0,3%- 1%, tinh thể nâu đỏ ánh tím, không tan nước, tan rượu, ete Curcumin TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Thành phần hóa học :  Tinh dầu – 5%, màu vàng nhạt, thơm  Trong tinh dầu có curcumen C15H24 cacbon không no  Ngoài tinh bột, canxi oxalat, chất béo  Củ nghệ chứa – 10% nước, – 8% chất vô cơ, 40 – 50% tinh bột nhựa Demethoxycurcumin Curcumin Phân lập hợp chất curcumin : HPLC Sắc ký đồ HPLC curcumin & demethoxycurcumin Phân lập hợp chất curcumin : HPLC Kết luận:  HPLC cột pha đảo RP 18 cho hàm lượng curcumin 96,38% ± 0,136 so chuẩn curcumin USP  đạt yêu cầu chất lượng nguyên liệu đối chiếu Nhận định : chiết xuất curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) 8.1 Phương pháp đun hồi lưu :  Thực 20 mẫu (5g/ mẫu) ứng 100g bột nghệ để khảo sát  Sau chiết  dịch chiết màu nâu đỏ, dịch chiết lần cuối (lần 9) màu, bột nghệ gói giấy lọc bị màu  Sau đó, dịch chiết đem cô quay chân không để đuổi dung môi cồn khỏi dung dịch  curcumin thô Nhận định : chiết xuất curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) 8.2 Phương pháp siêu âm:  Khảo sát thông số ảnh hưởng đến trích ly siêu âm curcumin thời gian, tần số dạng nguyên liệu đầu  Kết : hiệu suất trích ly tăng tần số, thời gian thích hợp khoảng 15 phút Nhận định : chiết xuất curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) Nhận định chung : Bằng PP siêu âm thiết bị phương pháp tương đối đơn giản, phù hợp để triển khai chuyển sang qui mô Pilot công nghiệp so với phương pháp hồi lưu Nhận định : phân lập curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) Phân lập curcumin sắc ký cột:  Từ điều kiện SKLM (TLC) với hệ dung môi diclometan:etyl acetat (96:4):  Nhận danh dẫn xuất 3,5- Difluorophenylhydrazinocurcumin & 4- Fluorophenylhidrazinocurcumin Nhận định : phân lập curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) Phân lập curcumin sắc ký cột: Tuy nhiên sau nhiều theo quan sát TLC  sản phẩm không đậm thêm mà bắt đầu  sản phẩm phụ đầu sản phẩm phía curcumin Mặc dù vết curcumin đậm nhạt so với curcumin ban đầu nhiều Nhận định : phân lập curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae ) 9.2 Phân lập curcumin HPLC :  Phân lập : SKC silicalgel + HPLC điều chế pha đảo RP 18  curcumin độ tinh khiết cao  Kết hàm lượng curcumin : HPLC cột pha đảo RP 18 so chất chuẩn curcumin USP  đạt yêu cầu chất lượng nguyên liệu đối chiếu Nhận định : phân lập curcumin từ Nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae )  Nhận định chung: Kết : Phân lập HPLC có độ tin cậy cao so với phân lập sắc ký cột 10 Kết luận   10.1 Phần chiết xuất curcumin từ Nghệ vàng: Phương pháp đun hồi lưu : 0,1 kg bột nghệ  hiệu suất 5% Phương pháp siêu âm : kg bột nghệ  hiệu suất 2,2% Vậy kết cho curcuminoid : PP siêu âm có hiệu suất thấp so PP đun hồi lưu 10 Kết luận 10.2 Phần phân lập curcumin từ Nghệ vàng: Phân lập curcumin sắc ký cột : • Hiệu suất tách cột : 61,08 % • Kết kiểm tra định tính curcumin : TLC hệ diclometan- etylacetat(96:4) cho vết tròn, rõ  độ tinh khiết sản phẩm tách cao 10 Kết luận 10.2 Phần phân lập curcumin từ Nghệ vàng:  Dẫn xuất 3,5-Difluorophenylhydrazinocurcumin: Từ 300mg (Curcumin 3,5-DFPH) qua SKC :  125mg dẫn xuất thô  hiệu suất 46,3%  25mg khối lượng tinh  hiệu suất 20%  Hiệu suất toàn : 9,65% 10 Kết luận 10.2 Phần phân lập curcumin từ Nghệ vàng:  Tổng hợp dẫn xuất 4-Fluorophenylhidrazinocurcumin Từ 299mg ( Curcumin 4-FPH) qua :  SKC thô : 115mg 4-FPHC  hiệu suất 42,14%  SKC tinh : 39mg 4-FPHC  hiệu suất 34%  SK toàn : 18mg tinh khiết  hiệu suất 9,62% 10 Kết luận 10.2 Phần phân lập curcumin từ Nghệ vàng : Phân lập hợp chất curcumin HPLC:  Phân lập SKC silicalgel + HPLC điều chế pha đảo RP 18  curcumin có độ tinh khiết cao ( > 99%)  Phân lập curcumin HPLC cột pha đảo RP 18 cho hàm lượng 96,38% ± 0,136 so chất chuẩn curcumin USP  đạt yêu cầu chất lượng nguyên liệu đối chiếu Tài liệu tham khảo: Sách thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập 2- Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Sách thuốc vị thuốc Việt Nam- Đỗ Tất Lợi- Nhà xuất Y Học (2004) Báo cáo nghiên cứu khoa học Tách, tổng hợp khảo sát hoạt tính sinh học dẫn xuất Curcumin từ bột Curcuminoid thương phẩm- Cao Thị Kim Anh, Lưu Thị Ngọc Vĩnh (2010) Chiết xuất Curcumin từ củ nghệ vàng ( Rhizoma Curcumae longae) xây dựng liệu chuẩn chiết từ dược liệu- Trịnh Hoàng Dương Hà Diệu Ly- Viện kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí MinhTạp chí Dược Học- 8/2011 ( Số 424 Năm 51) Nghiên cứu tách Curcumin từ củ nghệ vàng phương pháp trích ly siêu âm- Trần Trung Kiên, Nghiêm Xuân Sơn, Phùng Lan Hương, Phạm Văn Thiêm- Bộ môn trình thiết bị Công nghệ Hóa- Thực phẩm, trường ĐH Bách Khoa Hà Nội (2007) [...]... methanol 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP ĐUN HỒI LƯU Kết quả chiết curcuminoid Điều kiện một mẫu chiết: • Lượng mẫu : 5g • Dung môi sử dụng : 350ml • Thời gian chiết : 8h • Số lần chiết : 9 lần (khoảng 60 phút/ lần) 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP ĐUN HỒI LƯU Kết quả chiết curcuminoid Kết tinh lại curcumin: • Hệ dung môi : methanol- nước • Nhiệt độ : 600C • Thời gian làm lạnh tủ đông : 5h Đem lọc  Các tinh... gian làm lạnh tủ đông : 5h Đem lọc  Các tinh thể Curcumin  Làm khô  Curcumin tinh Lặp lại 2 lần  Curcumin tinh khiết hơn 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP SIÊU ÂM 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP SIÊU ÂM Kết quả chiết curcuminoid 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP SIÊU ÂM Kết quả chiết curcuminoid  Khảo sát thời gian trích ly thích hợp là 15 phút  So trích ly không khuấy trộn cùng nhiệt độ giảm 192 lần... vữa động mạch  Chất curcumin trong củ nghệ được các nhà khoa học chứng minh là một chất chống oxy hóa cực mạnh có lợi cho sức khỏe, có lợi cho tim mạch, chống cholesterol và ung thư 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP ĐUN HỒI LƯU Củ nghệ tươi Bột nghệ Chiết Curcuminoid thô Kết tinh lại Curcumin đã kết tinh •Dung môi kết tinh •Methanol(99,9%): nước 6 CHIẾT XUẤT CURCUMIONOID : PP ĐUN HỒI LƯU Kết tinh lại... LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN : PP SẮC KÝ CỘT Mục đích : loại bỏ nhựa, giảm hàm lượng DMC, BDMC và làm giàu hàm lượng curcumin 7 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN : PP SẮC KÝ CỘT Mục đích: Phân lập các thành phần trong hỗn hợp ban đầu Pha động : Khảo sát & chọn hệ dung môi diclometan-eter dầu hỏa (90:10) Pha tĩnh : Silica gel 60G, 0.063-0.200mm, Merck Cột thủy tinh Φ =30mm Mẫu nạp vào cột theo phương pháp. .. vanillin  Curcumin + hydroxylamin  dẫn xuất isoxozol 3 TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Cấu trúc hóa học Curcumin : Năm 1913, Lampe xác định CTHH qua các phản ứng:  Hydro hóa dẫn xuất diacetyl của curcumin  hỗn hợp dẫn xuất hexahydro và tetrahydro Từ các pứ trên, Cấu trúc curcumin xác định : diferuloylmethane 3 TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Tính lý hóa curcumin : Tính chất vật lý :  Dạng thù hình:... dùng sắc kí trên giấy sẽ thấy các chất curcumin khác nữa nhưng với lượng rất nhỏ 3 TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Cấu trúc hóa học curcumin : Năm 1913, Lampe xác định CTHH qua các phản ứng:  Khi đun: Curcumin + kiềm  vanilic acid + ferulic acid  Curcumin (nóng chảy) + kiềm  protocatechuic acid  Oxy hóa: Curcumin + permanganat  vanillin  Curcumin + hydroxylamin  dẫn xuất isoxozol 3 TỔNG QUAN HÓA... học cao là do trong CTCT curcumin có các nhóm hoạt tính sau: • Nhóm parahydroxyl: hoạt tính chống oxi hoá • Nhóm ceton: kháng viêm, kháng ung thư, chống đột biến tế bào • Nhóm liên kết đôi : kháng viêm, kháng ung thư, chống đột biến tế bào 5 TỔNG QUAN CÔNG DỤNG NGHỆ VÀNG  Nghệ giảm đau dạ dày và các bệnh ngoài da  Nghệ giúp liền sẹo, giảm cân, giúp cơ thể chống các vi khuẩn sống ký sinh trong ruột,... Triển khai cột - Bước 5 : Thu và kiểm tra các phân đoạn để thu curcumin tinh 7 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN : PP SẮC KÝ CỘT Kết quả : - Khối lượng mẫu nạp cột : m0 = 1g - Dung môi rửa giải diclometan-eter dầu hỏa (90:10) - Lượng silica gel nạp vào cột : m = 50g, chiều cao tương ứng của silica gel trong cột là 19cm - Đường kính trong cột : 3cm 7 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN : PP SẮC KÝ CỘT Kết... ướt 7 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN : PP SẮC KÝ CỘT Tiến hành : - Bước 1: Chuẩn bị  Sấy silicagel 1100C/ 4 giờ, để trong bình hút ẩm 30 phút Ngâm qua đêm với dung môi chạy cột  Cột rửa sạch, sấy khô, kẹp thẳng góc trên giá, cho bông gòn vào đáy cột - Bước 2: Nhồi cột  Cho từ từ lượng silica gel vào becher chứa sẵn dung môi chạy cột  Tiến hành cân bằng cột trong 2-4 giờ 7 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT CURCUMIN...3 TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Thành phần hoạt chất chính :  Tinh dầu 3- 5%, chủ yếu là zingiberen và 65% xeton sespuitecpenic, các chất tumeron  Các chất màu vàng gọi chung là curcumin 3 TỔNG QUAN HÓA HỌC NGHỆ VÀNG  Thành phần hoạt chất chính : Năm 1953 Srinivasan K R chứng minh bằng sắc kí cột silic :  Curcumin chính thức (còn gọi