Bai 5 ky thuat dinh nhom mau

KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH NHÓM MÁU Xác định nhóm máu hệ thống xác định có mặt kháng nguyên (KN) hệ nhóm máu màng hồng cầu Tuỳ theo đặc điểm củcác kháng nguyên loại kháng thể mà người ta sử dụng kỹ thuật phương pháp khác XÁC ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO Hệ nhóm máu ABO có hai kháng nguyên kháng nguyên A kháng nguyên B, số người có kháng nguyên A hay B yếu, nhiên tỷ lệ thấp, tên nhóm máu tên kháng nguyên có mặt hồng cầu Điểm đặc biệt hệ nhóm máu ABO có mặt kháng thể tự nhiên cách thường xuyên người kháng nguyên tương ứng màng hồng cầu, xác định có mặt kháng nguyên qua việc xác định vắng mặt kháng thể tương ứng huyết Nguyên lý Hồng cầu mang kháng nguyên A hay kháng nguyên B bị ngưng kết cho tiếp xúc với kháng thể chống A hay kháng thể chống B môi trường nước muối Có hai phương pháp xác định nhóm máu hệ ABO là: (1) phương pháp huyết mẫu dùng kháng thể biết để phát kháng nguyên tương ứng màng hồng cầu (2) phương pháp hồng cầu mẫu dùng hồng cầu mẫu biết trước kháng nguyên để xác định kháng thể tương ứng huyết thanh, từ suy kháng nguyên hồng cầu cần thử Dụng cụ, hoá chất 2.1 Dụng cụ - Máy ly tâm - ống nghiệm tan máu - Kính hiển vi - Phiến kính - Pipette Pasteur - Quả bóp cao su - Phiến đá 12x12 cm - Cốc mỏ thuỷ tinh - Que thủy tinh - Bông thấm - Tủ lạnh đựng sinh phẩm - Tủ ấm 370C - Bình cách thủy 370C - Cặp - Kéo - Đồng hồ bấm giây - Giá đựng ống nghiệm 2.2 Thuốc thử - Huyết mẫu: chống A, chống B, chống AB - Hồng cầu mẫu A 10% 2-5 % - Hồng cầu mẫu B 10% 2-5 % - Nước muối 9%o - Nước cất 2.3 Máu xét nghiệm: lấy ống máu cho bệnh nhân - ml máu có chống đông dung dịch citrate (tỷ lệ máu/ chống đông = 4/1) - ml máu không chống Quy trình kỹ thuật 3.1 Chuẩn bị bệnh phẩm - Ly tâm tách lấy huyết mẫu máu xét nghiệm (ống không chống đông) - Rửa hồng cầu bệnh nhân nước muối 9%o lần, pha thành dung dịch treo hồng cầu 5% 10% nước muối 9%o 3.2 Kỹ thuật định nhóm máu đá men ( phiến kính) 3.2.1 Phương pháp huyết mẫu: - Chọn ba vị trí ngang hàng phiến đá cách khoảng - 6cm - Nhỏ vào vị trí hai giọt huyết mẫu loại theo trình tự: vị trí chống A, vị trí chống B, vị trí chống AB ( sử dụng pipet gắn sẵn lọ huyết mẫu) - Dung pipet Pasteur nhỏ thêm vào bên cạnh ba vị trí vị trí giọt dịch treo hồng cầu cần định nhóm 10% - Dùng que thuỷ tinh trộn huyết mẫu với hồng cầu cần định nhóm để có vòng tròn đường kính từ - 3cm, lắc nhẹ liên tục vòng - phút đọc kết 3.2.2 Phương pháp hồng cầu mẫu: - Chọn hai vị trí đá men cách từ - cm - Nhỏ vào vị trí giọt hồng cầu mẫu 10% theo tứ tự: vị trí hồng cầu mẫu A, vị trí hồng cầu mẫu B - Thêm giọt huyết cần định nhóm vào cạnh giọt hồng cầu - Trộn huyết cần thử với hồng cầu mẫu để có vòng tròn có đường kính 2-3 cm Lắc nhẹ liên tục vòng phút đọc ghi lại kết 3.3 Kỹ thuật định nhóm ống nghiệm: a Phương pháp Huyết mẫu - Chuẩn bị ba ống nghiệm tan máu viết nhãn đặt vào hàng giá ống nghiệm, - Nhỏ vào ống giọt huyết mẫu theo thứ tự ống 1-2-3-là : chống A, chống B, chống AB - Thêm vào ống nghiệm giọt hồng cầu cần định nhóm pha loãng 5% nước muối 9%o - Trộn ly tâm 1000 v/phút phút - Nghiêng nhẹ thành ống, đọc ngưng kết tượng tan máu mắt thường, sau đọc qua kính hiển vi - Ghi lại kết b Phương pháp Hồng cầu mẫu(HCM) - Chuẩn bị hai ống nghiệm tan máu viết nhãn đặt vào hàng giá ống nghiệm, - Nhỏ vào ống giọt HCM 5% theo trình tự: ống 1: HCM A, ống 2: HCM B - Thêm vào ống nghiệm giọt huyết bệnh nhân - Trộn đều, ly tâm 1000v/phút/ trong1 phút - Nghiêng nhẹ thành ống, đọc ngưng kết mắt thường qua kính hiển vi - Ghi lại kết Kết định nhóm máu hệ ABO ( theo bảng 1) Bảng Phân tích kết định nhóm máu hệ ABO PP Phương pháp Huyết mẫu Sinh phẩm Chống A Chống B Chống A, B HC A HC B ( Nhóm) + - + - + A - + + + - B - - - + + O + + + - - AB Kết PƯ Ghi chú: PƯ: Phản ứng; PP Hồng cầu mẫu + : Có ngưng kết; Kết - : Không ngưng kết Những nguyên nhân sai lầm 5.1 Do thiếu kiểm tra: - Không kuiểm tra nên nhầm tên trùng tên bệnh nhân, - Không kiểm tra nên lẫn sinh phẩm, sinh phẩm hỏng - Trình độ chuyên môn kém, thiếu thận trọng, tiến hành không theo quy trình + Tỷ lệ huyết mẫu hồng cầu mẫu không tương ứng + Để lâu đọc kết quả, đọc kết nhanh 5.2 Do nhầm lẫn huyết học: - Ngưng kết không đặc hiệu: + Do hồng cầu mẫu huyết mẫu nhiễm trùng biến chất + Máu tự ngưng kết ( kháng thể tự miễn nóng lạnh) + Mẫu máu bị nhiễm trùng