KỸ THUẬT ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO NHỮNG KHÓ KHĂN VÀ CÁCH GIẢÛI QUYẾT I.Đặt vấn đề: Hệ ABO hệ thống nhóm máu phát sớm Landsteiner (1900) Đây nhóm máu quan trọng nguyên nhân yếu tai biến truyền máu Do việc xác đònh xác nhóm máu hệ ABO cần thiết II.Kháng nguyên – kháng thể hệ ABO: 1.Kháng nguyên ABO Bắt đầu xuất bào thai 37 ngày tuổi Phát triển hoàn toàn lúc tuổi Kháng nguyên có cấu trúc gồm phần: + Một phần có chất Protein có khả sinh kháng thể + Một phần có chất Gluxit Lipit ( gọi Hapten ),có khả kết hợp kháng thể Tồn hầu hết tế bào thể ( ngoại trừ tế bào thần kinh, tế bào gan, tế bào Malpighi mô liên kết ) Kháng nguyên thường tồn suốt sống suy giảm, yếu già số trường hợp bệnh lý Kháng nguyên hệ ABO tuân theo đònh luật di truyền Mendel 2) Kháng thể ABO: - Bản chất kháng thể tự nhiên - Thông thường IgM, số trường hợp IgM + IgA hay IgM + IgG - Hoạt động tốt nhiệt độ từ 40C đến 200C môi trường NaCl 0,9% - Nồng độ thay đổi từ người sang người khác 3) Các hệ thống nhóm máu ABO: Dựa vào kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết ta có nhóm máu: Ngoài ta có nhóm máu phụ khác A1, A2, Ax, B3, Bm, A1B, A2B…… III.Kỹ thuật đònh nhóm máu hệ ABO 1.Nguyên lý: Dựa nguyên lý phản ứng ngưng kết Được xác đònh nhờ kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết Có phương pháp : hồng cầu mẫu huyết mẫu 2.Dụng cụ thuốc thử: Máy ly tâm ống thẳng Pipette loại Ống nghiệm thuỷ tinh Lam kiếng Bút quang hay bút chì kính Tủ lạnh bảo quản thuốc Bình đựng nước muối Giá đựng ống nghiệm Kính hiển vi Que thủy tinh Bông thấm Huyết mẫu: chống A, chống B, chống AB Hồng cầu mẫu: A, B, O Nước muối 0,9% Huyết máu AB 3.Tiến hành kỹ thuật 3.1) Đònh nhóm lam kính: 3.1.1) Phương pháp huyết mẫu: Trên lam kính: nhỏ giọt huyết mẫu chống A, chống B, chống AB vào vò trí khác Thêm giọt hồng cầu cần đònh nhóm 10 – 20% (được pha với NaCl 0,9%) Trộn que thủy tinh thành vòng tròn có đường kính – 3cm Lắc nhẹ liên tục vòng phút đọc kết 3.1.2) Phương pháp hồng cầu mẫu: Trên lam kính: nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào vò trí khác Thêm giọt hồng cầu mẫu A, giọt hồng cầu mẫu B vào vò trí (hồng cầu mẫu pha 10 – 20% NaCl 0,9% ) Trộn lắc nhẹ liên tục vòng phút đọc kết 3.2) Đònh nhóm ống nghiệm 3.2.1) Phương pháp huyết mẫu: - Nhỏ vào ống nghiệm ống giọt huyết mẫu chống A, chống B, chống AB - Thêm giọt hồng cầu cần đònh nhóm – 5% ( pha NaCl 0,9% ) vào ống nghiệm - Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút - Nghiêng nhẹ thành ống nghiệm, đọc kết mắt thường kính hiển vi 3.2.2) Phương pháp hồng cầu mẫu: - Nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào ống nghiệm - Thêm giọt hồng cầu mẫu A, giọt hồng cầu mẫu B – 5% vào ống nghiệm - Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút - Nghiêng nhẹ thành ống nghiệm, đọc kết mắt thường kính hiển vi - Nhỏ giọt hồng cầu cần đònh nhóm ( pha loãng thành 1% dung dòch Diluent có LISS ) vào giếng Anti A, Anti B, Anti AB, Ctl - Nhỏ giọt huyết cần đònh nhóm vào giếng Ctl, HC A, HC B - Quay ly tâm Card 10 phút - Đọc kết mắt thường máy đọc 3.3) Những nguyên nhân gây sai lầm đònh nhóm máu hệ ABO: - Tỷ lệ huyết mẫu hồng cầu mẫu không tương ứng - Đọc kết nhanh để lâu đọc kết - Mẫu máu đònh nhóm lấy không quy cách, bò nhiễm trùng - Thuốc thử bò hư, nhiễm trùng hay hạn - Tay nghề trình độ người làm kỹ thuật IV.Cách giải khó khăn - Việc xác đònh nhóm máu hệ ABO dựa vào kháng nguyên màng hồng cầu kháng thể huyết - Hai phương pháp huyết mẫu hồng cầu mẫu phải tiến hành đồng thời phải cho kết phù hợp - Tất khó khăn xảy phù hợp phương pháp Để giải ta tiến hành bước sau: + Rửa hồng cầu cần đònh nhóm hồng cầu O ( có đầy đủ kháng nguyên hệ hồng cầu ) NaCl 0,9% lần Pha thành hồng cầu 5% Chứng tự thân: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết giọt hồng cầu cần đònh nhóm Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi + Chứng AB: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết máu AB giọt hồng cầu cần đònh nhóm Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi Lưu ý: phản ứng âm tính phương pháp đònh nhóm huyết mẫu bảo đảm + Chứng đồng loài: Nhỏ vào ống nghiệm giọt huyết cần đònh nhóm giọt hồng cầu O Lắc đều, quay ly tâm 1000 vòng/ phút/ phút Đọc kết mắt thường kính hiển vi Lưu ý: phản ứng âm tính phương pháp đònh nhóm hồng cầu mẫu bảo đảm Dựa vào kết chứng, ta chia trường hợp khó khăn thành nhóm sau: 1/Khi chứng nói âm tính 2/Khi hay chứng nói dương tính Khi chứng nói âm tính 1.1) Trường hợp có kháng – kháng thể: Nhận xét: - Có thể có kháng – kháng thể chống A - Kháng – kháng thể xảy có bổ thể - Giải cách khử bổ thể huyết cần đònh nhóm 56 C/ 30 phút - Đònh nhóm lại, có kháng – kháng thể sau khử bổ thể phản ứng trở bình thường sau: 1.2)Trường hợp chia thành quần thể hồng cầu: Nhận xét: - Nhóm máu A - Nhưng hồng cầu cần đònh nhóm ngưng kết với huyết mẫu chống A, chống AB không hoàn toàn, nhiều hồng cầu tự - Gặp trường hợp truyền máu, có nhóm máu yếu, hay có bệnh lý Leucemie, Đa u tuỷ xương… - Giải cách hỏi lại triệu chứng lâm sàng tiền sử truyền máu 1.3)Trường hợp kháng thể yếu Nhận xét: - Nhóm máu A - Gặp trẻ nhỏ kháng thể chưa hình thành đủ, người già > 70 tuổi - Các trường hợp thiếu hụt miễn dòch bẩm sinh hay mắc phải - Giải cách đònh lại nhóm máu sau thời gian, hay điều trò nguyên nhân gây thiếu hụt miễn dòch 2.Khi hay chứng nói dương tính 2.1) Trường hợp có kháng thể lạnh Nhận xét: - Có thể có kháng thể lạnh - Khi để hồng cầu cần đònh nhóm ủ 370C tượng ngưng kết dần - Giải cách rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9% ấm 37 C đònh nhóm ống nghiệm 370C 2.2) Trường hợp có kháng thể tự miễn: Nhận xét: - Có thể có kháng thể tự miễn - Các kháng thể thường cố đònh bề mặt hồng cầu - Giải cách xem lại chẩn đoán lâm sàng, rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9% ấm 370Cvà đònh lại - Nếu cần thiết phải tiến hành kỹ thuật sâu 2.3) Trường hợp hồng cầu chuỗi tiền Nhận xét: - Có tăng bất thường Protein huyết - Có ngưng kết tầng nhanh phân tán nhanh ta nhỏ vào hồng cầu cần đònh nhóm giọt NaCl 0,9% - Giải cách rửa hồng cầu cần đònh nhóm NaCl 0,9%; đònh lại phương pháp huyết mẫu - Phương pháp hồng cầu mẫu pha loãng huyết cần đònh nhóm NaCl 0,9% nồng độ Protein huyết không đủ để kết tầng thành hình chuỗi tiền đònh lại V.Kết luận - Xác đònh nhóm máu hệ ABO khâu quan trọng - Phải kiểm tra đầy đủ thủ tục hành chánh - Đònh nhóm lần phương pháp - Đối chiếu kết quả: + Nếu kết phù hợp trả kết nhóm máu + Nếu kết không phù hợp, kiểm tra lại toàn bước, giải khó khăn ( có ) làm lại