Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây na (annona squamosa l ) và cây dủ dẻ trâu (melodorum fruticosum lour) thuộc họ na (annonaceae) ở việt nam

hướng dẫn đọc toàn văn báo cáo KQNC ! ! Bạn muốn đọc nhanh thông tin cần thiết ? Hy đọc qua Mục lục bên tay trái bạn trước đọc báo cáo ( với Acrobat 4.0 trở lên, cho trỏ chuột vào đề mục để đọc toàn dòng bị che khuất ) ! Chọn đề mục muốn đọc nháy chuột vào ! ! Bạn muốn phóng to hay thu nhỏ trang báo cáo hình ? Chọn, nháy chuột vào kích th thưước có sẵn Menu , ! Mở View Menu, Chọn Zoom to ! Chọn tỷ lệ có sẵn hộp kích th thưước muốn,, Nhấn OK tự điền tỷ lệ theo ý muốn Chúc bạn hài lòng với thông tin đđưược cung cấp B GIO DC V O TO TRNG I HC VINH BI TH MINH NGUYT NGHIấN CU THNH PHN HểA HC V HOT TNH SINH HC CY NA (ANNONA SQUAMOSA L.) V CY D D TRU (MELODORUM FRUTICOSUM LOUR ) THUC H NA (ANNONACEAE) VIT NAM CHUYấN NGNH: HểA HU C M S CHUYấN NGNH: 62 44 01 14 TểM TT LUN N TIN S HểA HC NGH AN - 2014 Cụng trỡnh c hon thnh ti: Phũng thớ nghim Chuyờn Hu c, khoa Húa hc, Trng i hc Vinh Ngi hng dn khoa hc: PGS TS Trn ỡnh Thng PGS TS Ping Chung Kuo Phn bin 1: Phn bin 2: Phn bin 3: Lun ỏn c bo v ti Hi ng ỏnh giỏ lun ỏn cp Trng hp ti: vo hi gi phỳt, ngy thỏng nm 20 Cú th tỡm hiu lun ỏn ti th vin: Th vin Quc gia Vit Nam Trung tõm Thụng tin & Th vin Nguyn Thỳc Ho Trng i hc Vinh M U Lý chn ti Thc vt nc ta rt a dng v phong phỳ, s liu thng kờ gn õy v thc vt bc cao nc ta cho bit cú hn 13.000 loi, n nm 2002 ó bit c cú 2.270 chi v 305 h ú cú khong 4.000 loi cõy c s dng lm thuc [9], v 600 loi cõy cho tinh du [6] õy l ngun ti nguyờn thiờn nhiờn rt quý bỏu ca t nc Hin nay, cú nhiu nghiờn cu v thc vt m ch yu l nghiờn cu v húa thc vt Theo thng kờ cho thy, cú khong 80% dõn s th gii tin vo y hc c truyn chm súc sc kho Trong thp k qua, cú gn 121 sn phm thuc c to nờn da trờn kin thc v y hc truyn thng t cỏc ngun khỏc [106] Cú nhiu sn phm thuc c to trc tip hoc dn xut hoc tng hp bt chc theo b khung t sn phm thiờn nhiờn [9] Nhiu bnh nhõn mc bnh nan y c bit l ung th ó c cha nh s dng cỏc sn phm thuc cú ngun gc t thiờn nhiờn [41] c bit 20 nm tr li õy, cỏc hp cht thiờn nhiờn cũn c s dng rng rói v cú hiu qu sn xut cỏc thc phm chc nng, b sung dinh dng hay thc phm thuc l cỏc sn phm nõng cao sinh lc, phũng v h tr iu tr bnh tt, nõng cao tui th [8] Chớnh vỡ th, vic nghiờn cu cỏc hp cht thiờn nhiờn lm thuc cha bnh vụ cựng quan trng bi vỡ s dng cỏc loi thuc cú ngun gc t hoỏ tng hp gõy tỏc dng ph v lm cho mụi trng ngy cng ụ nhim hn, cỏc loi thuc cú ngun gc t thiờn nhiờn hn ch c nhng nhc im ú Trong ú vic xỏc nh cu trỳc ca chỳng l khõu then cht vic gii mó c ch tng tỏc gia thuc vi tỏc nhõn gõy bnh Vit Nam, cỏc cõy thuc c s dng ch yu theo kinh nghim, ch cú khong 20-30% s loi c xỏc minh khoa hc v giỏ tr, c ch cha bnh v ch dựng cha cỏc bnh thụng thng: cm st, cm lnh, cm mỏu, lm lnh vt thng, n ung khú tiờu, bong gõn, hoc mt s bnh nan y nh: tim mch, gan, thn, thn kinh, d ng,Trong mt s cụng b gn õy v 920 loi cõy thuc cú kh nng iu tr 64 loi bnh chng theo cỏch c truyn [4] Cỏc cõy h Na núi chung v cỏc cõy thuc chi Na v chi D d núi riờng, cú giỏ tr kinh t cao, khụng ch dựng lm cnh, qu mt s loi n rt ngon m nú cũn c s dng nhiu thuc y hc dõn tc bi nhng hot tớnh sinh hc ỏng quý ca chỳng Ngoi ra, mt s cõy cú mựi thm c bit nờn c dựng cỏc ngnh hng liu Trờn th gii ó cú nhiu cụng trỡnh nghiờn cu v cõy na, nhng Vit Nam cha c nghiờn cu nhiu Cũn i vi d d trõu, cỏc bỏo cỏo v nú cũn khiờm tn, Vit Nam cha tỡm thy mt cụng trỡnh nghiờn cu no v loi cõy ny Vỡ vy, vic nghiờn cu thnh phn húa hc ca loi cõy ny giỳp ỏnh giỏ c giỏ tr ca ngun ti nguyờn thiờn nhiờn ca nc ta Kt qu nghiờn cu v loi cõy ny s mang li ý ngha to ln i vi ngnh dc liu Chớnh bi nhng u im nh th, chỳng tụi nhn thy s cn thit nghiờn cu v thnh phn húa hc ca cỏc cõy ny Vi nhng lớ quan trng nờu trờn chỳng tụi thc hin lun ỏn vi tờn Nghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc cõy na (Annona squamosa L.) v cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) thuc h Na (Annonaceae) Vit Nam Mc tiờu nghiờn cu Vi nhng lớ nờu trờn, chỳng tụi xỏc nh mc tiờu nghiờn cu ca lun ỏn gm nhng ni dung nh sau: - Xỏc nh c thnh phn húa hc v cu trỳc cỏc hp cht c phõn lp t cõy na v cõy d d trõu - Th hot tớnh sinh hc ca mt s hp cht phõn lp c i tng nghiờn cu i tng nghiờn cu ca lun ỏn l lỏ cõy na (Annona squamosa L.) thuc chi Na (Annona) v lỏ cõy d d trõu (Melodrum fruticosum Lour.) thuc chi D d (Melodorum), hai loi ny cựng thuc h Na (Annonaceae) Nhim v nghiờn cu Vi mc tiờu nghiờn cu ó t ra, chỳng tụi xỏc nh cỏc nhim v cn thc hin gm: - La chn cỏc dung mụi thớch hp chit c hn hp cỏc hp cht t lỏ ca cõy na v lỏ cõy d d trõu - Phõn lp v xỏc nh cu trỳc mt s hp cht t cỏc cao thu c t lỏ cõy na v lỏ cõy d d trõu - Th hot tớnh sinh hc ca mt s hp cht phõn lp c Nhng úng gúp mi ca lun ỏn õy l cụng trỡnh khoa hc bỏo cỏo v thnh phn húa hc v c v hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp t lỏ cõy na (Annona squamosa L.) v lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) ln u tiờn Vit Nam - ó phõn lp v xỏc nh cu trỳc ca 05 hp cht ent-kauran v 02 hp cht steroit Trong ú, cú mt hp cht ent-kauran ditecpenoit ln u tiờn c phõn lp t loi na - T dch chit ca lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) ó phõn lp v xỏc nh c 01 hp cht amit thm mi, 08 hp cht flavonoit, 01 hp cht ancaloit, 01 hp cht tannin, 02 hp cht steroit Ngoi tr 02 hp cht steroit, cỏc hp cht cũn li u l cỏc hp cht ln u tiờn phõn lp t loi d d - Xỏc nh c cỏc thụng s cu trỳc tinh th ca hp cht amit thm mi Cỏc s liu v tinh th hc ca hp cht ny (CCDC 872 187) hin c lu tr ti Trung tõm d liu Cambridge - Trong s cỏc hp cht ent-kauran ditecpenoit phõn lp t lỏ na cú mt hp cht ln u tiờn bỏo cỏo v hot tớnh gõy c dũng t bo ung th vỳ (MCF-7) Cú ba hp cht phõn lp t lỏ d d trõu ln u tiờn c nghiờn cu hot tớnh khỏng viờm da trờn kh nng c ch s to thnh O2- cho bch cu trung tớnh phn ng vi formyl-Lmethionyl-L-leucyl-L-phenylalanin/cytochalasin B (FMLP/CB) B cc ca lun ỏn Lun ỏn gm 124 trang vi 24 bng s liu, 23 hỡnh v s vi 144 ti liu tham kho Kt cu ca lun ỏn gm: m u (4 trang), tng quan (27 trang), phng phỏp v thc nghim (14 trang), kt qu v tho lun (60 trang), kt lun (2 trang), danh mc cụng trỡnh cụng b (1 trang) v ti liu tham kho (16 trang) Ngoi cũn cú phn ph lc gm 114 ph ca cỏc hp cht (62 trrang) v cỏc d liu tinh th hc ca melodamit A (6 trang) CHNG 1: TNG QUAN Tng quan v cõy na (Annona squamosa L.) v cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) c trỡnh by vi cỏc mc gm: - c im thc vt - Thnh phn hoỏ hc - S dng v hot tớnh CHNG 2: PHNG PHP V THC NGHIM 2.1 Húa cht, thit b 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 2.2.1 Phng phỏp chit tỏch S dng cỏc dung mụi thớch hp chit hn hp cỏc cht t cao metanol trớch t lỏ na v lỏ d d trõu 2.2.2 Sc kớ lp mng Thc hin trờn bn mng ó c sn silica gel Merck 60 F254, dy 0,2 mm Phỏt hin cht bng ốn t ngoi bc súng 254 nm v hin mu vi hi iot 2.2.3 Sc kớ ct S dng phng phỏp sc kớ trờn ct thụng thng vi pha tnh l silica gel 70-230/mesh v sc kớ ct pha o RP-18 2.2.4 Kt tinh phõn on Phng phỏp kt tinh phõn on dựng lm sch cỏc hp cht thu c cỏc phõn on sc kớ 2.2.5 Phng phỏp xỏc nh cu trỳc S dng cỏc phng phỏp ph hin i chng minh cu trỳc gm ph t ngoi (UV), hng ngoi (IR), ph (ESI-MS, HR-ESIMS), ph cng hng t ht nhõn mt chiu (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) v hai chiu (HSQC, HMBC, 1H-1H-COSY), X-ray v o quay cc riờng 2.2.6 Phng phỏp th hot tớnh sinh hc - Hot tớnh gõy c t bo c tin hnh ti phũng Cụng ngh Sinh hc, Vin húa hc cỏc Hp cht Thiờn nhiờn, Vin Cụng ngh sinh hc, Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam - Hot tớnh khỏng viờm c tin hnh ti trng i hc Cheng Kung, i Loan 2.3 Thu hỏi mu thc vt Mu lỏ cõy na (Annona squamosa L.) c thu hỏi ng Thỏp vo thỏng 8/2010 v lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) thu hỏi Hu vo thỏng 5/2009, c hai mu thc vt u c PGS TS Trn Huy Thỏi (Vin Sinh thỏi v Ti nguyờn Sinh vt-Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam) xỏc nh tờn khoa hc v cỏc tiờu bn c lu gi ti khoa Sinh-Trng i hc Vinh 2.4 Kt qu nghiờn cu chit tỏch v xỏc nh cu trỳc cỏc thnh phn húa hc lỏ na 2.4.1 Chit tỏch cao Lỏ na (10 kg) - Ngõm vi metanol - Ct thu hi metanol Cao metanol (786 g) - Phõn b nc - Chit ln lt vi hexan, etyl axetat, butanol Cao hexan (287 g) Cao etyl axetat (358 g) Dch nc Cao butanol (145 g) S 1: Quy trỡnh chit tỏch cao t lỏ na 2.4.2 Phõn lp cỏc cht Cao etyl axetat (358g) CC, silica gel CHCl3:CH3OH (50:1; 30:1; 20:1; 10:1; 4:1) F-1 (44 g) (*) ASE3 (349 mg) ASE5 (294 mg) ASE6 (125 mg) F-2 (95 g) F-3, -4 (**) ASE1 (1027 mg) F-5 ASE2 (246 mg) F-6 F- ASE7 (342 mg) ASE4 (328 mg) (*): CC, silica gel; CHCl3: CH3OH (30:1, 20:1; 10:1; 4:1; 2:1) (**): CC, silica gel; CHCl3: CH3OH (25:1, 15:1; 10:1; 4:1; 2:1) S 2: Quy trỡnh phõn lp cỏc cht t cao etyl axetat ca lỏ na 2.5 Kt qu nghiờn cu chit tỏch v xỏc nh cu trỳc cỏc thnh phn húa hc lỏ d d trõu 2.5.1 Chit tỏch cao Lỏ cõy d d (9,8 kg) - Ngõm vi metanol - Ct thu hi metanol Cao metanol (716 g) Cao hexan (38 g) Cao etyl axetat (267 g) Cao butanol (192 g) S 3: Quy trỡnh chit tỏch cao t lỏ d d trõu 2.5.2 Phõn lp cỏc cht 2.5.2.1 Cao hexan Cao hexan (38 g) CC, silica gel hexan : axeton (9:1, 5:1, 3:1, 1:1) F-1 F-2 (3 g) F-3 F-4 F-5 F6 CC, silica gel hexan: axeton (9:1) MFH2 (321mg) S 4: Quy trỡnh phõn lp cỏc cht t cao hexan ca lỏ d d trõu 2.5.2.2 Cao etyl axetat 10 12 12 13 11 10 14 15 COOH 19 18 13 10 18 14 COOH 16 12 (ASE3) axit 16hydro-ent-kauran17,19-dioic 19 OH 14 21 17 18 19 20 24 23 13 19 17 11 14 10 (ASE5) 16,17-Dihydroxyent-kauran-19-al 27 22 12 15 CHO 18 (ASE4) Axit 16hydro-19-al-entkauran-17-oic 10 CHO 16 29 28 20 15 OH 13 11 15 19 COOH H COOH 14 COOH 18 17 17 16 20 10 15 19 20 OCCH3 O 16 14 (ASE2) axit 16hydro-17-axetoxy-entkauran-19-oic 12 11 18 (ASE1) axit entkaur-16-en-19-oic 10 13 11 20 16 12 H 17 13 11 17 20 25 26 16 15 HO (ASE6) -Sitosterol 29 28 21 12 19 HOH 2C HO HO 17 O 5' 3' 2' O 25 26 16 14 15 10 6' 4' 24 23 13 27 20 18 11 22 1' OH (ASE7) -Sitosterol-3-O--D-glucopyranozit 3.1.3.2 Nhng úng gúp t kt qu thu c Nhng hp cht ent-kauran ditecpenoit phõn lp c ó tng tỡm thy nhiu loi thuc chi Na (Annona) cựng vi hai hp cht steroit -sitosterol (ASE6) v -Sitosterol-3-O--D-glucopyranozit (ASE7) thng bt gp hu ht cỏc loi thc vt Theo thng kờ cỏc t liu tham kho cho thy hu ht cỏc hp cht ó phõn lp c ca lun ỏn u ó tng c phõn lp v cụng b trờn i tng cõy na ngoi tr hp cht axit 16-hydro-17-axetoxy-ent-kauran-19-oic (ASE2) ch tỡm thy cỏc loi khỏc thuc chi ny Cu trỳc cỏc hp cht ó c xỏc nh nhng õy l ln u tiờn cỏc hp cht ny c phõn lp v xỏc nh cu trỳc t lỏ na phõn b Vit Nam v cng l ln u tiờn kt qu nghiờn cu t i tng lỏ na Vit Nam c cụng b 3.2 Lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) 11 3.2.1 Cỏc hp cht c phõn lp Cỏc cao chit ng vi dung mụi khỏc gm: hexan ó phõn lp c hp cht, cao etyl axetat phõn lp c hp cht v cao butanol phõn lp c hp cht, cỏc cht vi tờn c th c nờu bng 3.9 Bng 3.9: Danh mc cỏc cht phõn lp t cõy d d trõu ST T Kớ hiu hp cht MFE1 MFH2 MFE3 MFE4 MFE5 MFE6 MFE7 MFB8 MFB9 10 11 MFB10 MFB11 12 MFB12 13 MFB13 Tờn hp cht Melodamit A -Sitosterol Flavokawain A 2',6'-Dihydroxy-4'metoxychalcon 2',4'-Dihydroxy-4,6'dimetoxydihydrochalcon 4',5-Dimetoxy-7hydroxyflavanon (Tsugafolin) 5-O-Metylnaringenin (7,4-dihydroxy-5metoxyflavanon) Naringenin - 4',7dimetylete Kaempferol 3-O{-D-apiofuranozyl(12)[-L-rhamnopyranozyl(16)]-D-glucopyranozit} Rutin Oxoanolobin Axit 3, 3', 4'-trimetoxy ellagic -sitosterol-3-O--Dglucopyranozit Cụng thc Khi lng Phõn t hp cht (mg) C17H17NO3 99 C29H50O 321 C18H18O5 52 C16H 14O4 70 C17H18O5 71 C17H16O5 58 C16H14O5 35 C17H16O5 39 C32H38O19 12 C27H30O16 C17H10NO4 87 14 C17H12O8 45 C35H60O6 97 12 3.2.2 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 3.2.2.1 Hp cht MFE1 Hp cht MFE1 ó c phõn lp cú dng cht bt khụng mu, 28 ,8 .n.c 183185C quay cc D = 0,001 (CH3OH, c 1,53) cho thy hp cht ny khụng quang hot Ph ESI-MS (positive) cho pic ion gi phõn t [M+H]+ m/z 284, cũn ph ESI-MS (negative) cho pic ion gii phõn t [M-H]- m/z 282, t ú xỏc nh c lng phõn t ca MFE1 l 283, kt hp vi d liu ph 1H-, 13-NMR, DEPT giỳp d oỏn c cụng thc phõn t ca MFE1 l C17H17NO3 (xem hỡnh 3.1 v hỡnh 3.2) Ph HR-ESI-MS cho cho pic ion gi phõn t m/z 284,1289 + [M+H] giỳp khng nh cụng thc phõn t ca MFE1 l C17H17NO3N (hỡnh 3.3) Trờn ph IR cng cho thy s xut hin cỏc pic hp th mnh c trng cho dao ng hoỏ tr ca nhúm OH (3.441 cm-1), NH (3.257 cm-1), nhúm cacbonyl liờn hp (1.662,3 cm-1), C=Colefin (1.609,6 cm-1) v C=Cvũng thm (1.573,2 cm-1) (hỡnh 3.4) Trờn ph 1H-NMR, quan sỏt thy cú tớn hiu ti 8,09 (1H, t, J=5,5 Hz) c nhn nh l tớn hiu c trng ca proton nhúm amit v tớn hiu ti 5,83 (1H, s) l tớn hiu ca proton nhúm -OH Mt b gm proton thm cho cỏc tớn hiu doublet ti vựng 7,55 ppm vi J=8,5 Hz (cú tng tỏc octo) c gỏn cho hai proton H-5, H-9 v cm tớn hiu ca proton cũn li ti 7,39 (3H, m) c xỏc nhn l ca H6, H-7, H-8, cỏc tớn hiu ny c trng cho vũng benzen mt ln th Tớn hiu ca hai proton thuc trans-olefin cng c quan sỏt, ú, tớn hiu ca mt proton b chng lp vi cỏc proton thm ti 7,39 (1H, d, J=15,5 Hz) c quy kt cho H-3 v tớn hiu doublet ca H-2 ti 6,56 vi J=15,5 Hz (c trng cho kiu liờn kt trans-olefin) Thờm vo ú, s xut hin cỏc tớn hiu doublet ca proton olefin ti 6,94 (2H, d, J=8,5 Hz); 6,09 (2H, d, J=8,5 Hz) c quy kt ln lt 13 cho H-4' v H-8'; H-5' v H-7' Ngoi cũn nhn thy s xut hin ca cỏc tớn hiu multilet vựng trng cao ca proton thuc nhúm metylen cho thy cú tng tỏc bc cao ti 3,18 (2H, m) v 1,86 (2H, m) c cho l ca H-1' v H-2' (xem hỡnh 3.5 hỡnh 3.7 v bng 3.10) Ph 13C-NMR, DEPT v kt hp vi ph HSQC cho thy tớn hiu ca 17 cacbon gm mt nhúm xeton liờn hp ( 185,2 ppm), mt amit liờn hp ( 164,8 ppm), hai tớn hiu cacbon olefin ( 138,6 v 122,1 ppm), hai cacbon olefin liờn hp i xng ( 152,8, 126,8 ppm), tớn hiu ca sỏu cacbon thm ( 134,9, 129,4, 129,4, 128,9, 127,5, 127,5 ppm) mt cacbon bc bn cú gn oxi ( 67,8 ppm), hai nhúm metylen ( 39,0 v 34,2 ppm) Xỏc nh v trớ cỏc nhúm th da vo ph HMBC, mi tng quan gia H-2 ( 6,56 ppm) vi C-1 ( 164,8 ppm)/ C-3 ( 138,6 ppm)/ C-4 ( 134,9 ppm) t ú xỏc nh c th t amit cinnamic ca hp cht MFE1 Tng quan ca proton nhúm amit ( 8,09 ppm) vi C-1 ( 164,8 ppm)/C-1' (34,2 ppm), proton nhúm hydroxyl 5,83 ppm vi C-2' ( 39,0 ppm)/C-3' ( 67,8 ppm)/C-4' ( 152,8 ppm)/C-8' (152,8 ppm) Ngoi ra, vũng B cú cu trỳc ca mt cyclohexadienon xut hin ti tớn hiu H-5'/H-7' ( 6,09 ppm) v H-4'/H-8' ( 6,94 ppm) u cú tng quan vi C-3' ( 67,8 ppm) v C-6' ( 185,2 ppm) Thờm vo ú, cỏc pic giao ca H-1' ( 3,18 ppm) tng quan vi C-1 ( 164,8 ppm)/C-2 ( 39,0 ppm)/C-3 ( 67,8 ppm) v ca H-2 ( 1,83 ppm) vi C-1 ( 34,2 ppm)/ C-3 ( 67,8 ppm)/C-4 ( 152,8 ppm)/C-8 ( 152,8 ppm), ph HMBC cho thy amit liờn hp v vũng B liờn kt vi C-1' v C-2' (hỡnh 3.8 hỡnh 3.17 v bng 3.10) Bng 3.10: S liu ph DEPT v HMBC ca hp cht MFE1 C (ppm) V trớ H (ppm) HMBC 164,8 6,56 (1H, d, J = 15,5 Hz) 122,1 C-1, C-3, C-4 14 7,39 (1H, d, J = 15,5 Hz) 138,6 C-1, C-2, C-4, C-5, C-9 134,9 7,55 (1H, d, J = 8,5 Hz) 127,5 C-3, C-7, C-9 7,39 (1H, m) 128,9 C-4, C-8 7,39 (1H, m) 129,4 C-5, C-6, C-8, C-9 7,39 (1H, m) 128,9 C-4, C-6 7,55 (1H, d, J = 8,5 Hz) 127,5 C-3, C-5, C-7 1' 3,18 (2H, dd, J = 14,0, 7,0 Hz) 34,2 C-1, C-2', C-3' 2' 1,86 (2H, t, J = 7,0Hz) 39,0 C-1', C-3', C-4', C-8' 3' 67,8 4' 6,94 (1H, d, J = 8,5 Hz) 152,8 C-3', C-6' 5' 6,09 (1H, d, J = 8,5 Hz) 126,8 C-3', C-6' 6' 185,2 7' 6,09 (1H, d, J = 8,5 Hz) 126,8 C-3', C-6' 8' 6,94 (1H, d, J = 8,5 Hz) 152,8 C-3', C-6' CONH 8,09 (1H, br s) C-1, C-1' 3'-OH 5,83 (1H, s) C-2', C-3', C-4', C-8' C (o 125 MHz DMSO-d6) Qua cỏc s liu phõn tớch t ph ca hp cht MFE1 cho phộp khng nh õy l hp cht ln u tiờn c phõn lp t thiờn nhiờn v c t tờn l melodamit A O HO 8' 7' 4' 5' 1' 6' 3' N 2' O H HMBC Hỡnh 3.18: Tng tỏc HMBC v cu trỳc ca Melodamit A (MFE1) Bờn cnh ú, cu trỳc ca hp cht melodamit A cũn c khng nh qua kt qu v tinh th hc c xỏc nh bng nhiu x tia X Sau õy l cỏc thụng tin v tinh th ca MFE1 Bng 3.11: Mt s thụng s v hỡnh hc ca tinh th MFE1 D liu tinh th H tinh th: monoclinic Dc = 1,283 mg/m3 Nhúm im khụng gian: Z = P 21/n 15 a = 8,6116 T = 100 K b = 10,3693 F000 = 640 c = 17,8352 Dng bc x CuK\a = 90,0o = 1,54178 o = 101,716 (100) = 4,96 66,38o o = 90,0 = 0,751 mm-1 V = 1559,44 Kớch thc tinh th: 0,18 x 0,15 x 0,12 mm3 Ghi nhn d liu Mỏy nhiu x Bruker Rint = 0,0199 APEX DUO Ngun bc x: fine-focus R1 = 0,032 vi I > (I) sealed tube Phn x ó dựng 8662 max = 66,38o Phn x t 2619 = 4,96o Mỏy n sc: graphite h = -9 10 Dng hiu chnh hp th: k = -12 12 multi-scan T = 100 K l = -21 24 Cu trỳc tinh t wR (F2) = 0,0857 w = 1/[2(Fo2) + (0,0495P)2 + 0,4542P] S = 1,036 ú: P = (Fo2 + Fo2)/3 S thụng s: 200 Cỏc thụng s v di liờn kt v gúc liờn kt (xem ph lc trang PL-64-67) Hỡnh 3.19: Cu trỳc n tinh th nhiu x tia X ca melodamit A 3.2.3 im ni bt t kt qu phõn lp cỏc hp cht trờn lỏ d d trõu 3.2.3.1 Cu trỳc cỏc hp cht phõn lp 16 O HO 2' 28 6' 3' 1' NH 29 7' 8' 21 O 5' 4' 8 14 10 (MFE1) Melodamit A (cht mi) 6' 4' OCH3 5' H3CO 1' 2' O 3' 3' OCH3 OH O OH HO O 3' OH 4' 1' O OCH3O 3' 2' 6' 3' 2' O 10 OH O 1''' OH O (MFB8) Naringenin 4',7dimetylete OH 6' O 6'' 6' O 5'' 4'' HO HO O 3'''' 10 OH CH2OH 1'''' (MFB9) Kaempferol 3-O{-D-apiofuranozyl-1 [-L-rhamnopyranozyl (16)]- -D-glucopyranozit} 4' OH 3' OH O O 6'' 4'' 2'''' OH OH O 1' 2' 1'' O 5'''' HO 2'' 3'' 4'''' 5' 5' O OCH3 6' 5' 2''' HO 4' 5''' 10 1' O 4' 1' OCH3O 1 H3CO (MFE7) 5-O-Metylnaringenin (7,4-dihydroxy-5-metoxyflavanon) (MFE6) Tsugafolin hay 4',5-dimetoxy-7-hydroxyflavanon) HO 5 3''' 5' 6' 5' O 4' 1' O 10 2' 6''' OCH3 2' (MFE5) 2',4'-Dihydroxy-4,6'dimetoxydihydrochalcon HO (MFE4) 2,6'-Dihydroxy-4'-metoxychalcon 1' 2' 4''' 3' 6' CH3 HO 1' 2' OCH3 5' 4' 6' 4' (MFE3) Flavokawain A HO OH OH 3' HO 15 HO 5' H3CO 26 16 (MFH2) -Sitosterol OCH3 25 17 13 24 23 11 19 20 18 12 27 22 5'' O 6''' 5''' H3C HO 4''' O HO 3''' HO 1''' HO 3'' 2'' O 1'' OH 2''' HO (MFB10) Rutin 17 O CH3 O 3' 4' 1' 5' O 3a N6 O 6' 7a 10 OH (MFB11) Oxoanolobin 29 28 21 12 19 O 4' 5' 3' 2' O 27 24 23 17 13 25 26 16 14 10 6' 22 20 18 11 HO HO O (MFB12) 3, 3', 4'trimethoxy ellagic acid HOH2C 11a 11 CH3 O CH3 6a 1a O 7' O O OH 1b 2' O 1' OH (MFB13) -Sitosterol-3-O--Dglucopyranozit 3.2.3.2 Nhng úng gúp t kt qu thu c T cỏc t liu thu thp v húa thc vt ca loi d d trõu cho bit, cỏc kt qu v phõn lp v xỏc nh cu trỳc cũn hn ch, s cỏc t liu tỡm thy, tỏc gi cha cha tỡm thy cụng trỡnh no cụng b v loi d d trõu phõn b Vit Nam Chớnh vỡ vy kt qu vic xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht t loi ny chớnh l im ni bt ca lun ỏn Theo phn tng quan t liu cho thy cỏc hp cht phõn lp c t cỏc loi thuc chi D d núi riờng v loi d d trõu núi chung phn nhiu l cỏc hp cht heptene v mt s ớt hp cht khỏc Qua ú cho thy, cỏc hp cht phõn phõn lp c ca lun ỏn gm melodamit A (MFE1), flavokawain A (MFE3), 2,6-dihydroxy-4-metoxychalcon (MFE4), 2,4-dihydroxy-4,6-dimetoxydihydrochalcon (MFE5), tsugafolin (MFE6), 5-O-metylnaringenin (MFE7), naringenin - 4',7dimetylete (MFB8), kaempferol 3-O-{-D-apiofuranozyl-(12)-[-Lrhamnopyranozyl-(16)]--D-glucopyranozit} (MFB9), rutin (MFB10), oxoanolobin (MFB11), axit 3,3,4- trimetoxy ellagic (MFB12) 18 l ln u tiờn c phõn lp t cỏc loi thuc chi D d, c bit hp cht MFE1 l hp cht ln u tiờn c phõn lp v xỏc nh cu trỳc t sn phm thiờn nhiờn Hai hp cht l -sitosterol (MFH2) v sitosterol-3-O--D-glucopyranozit (MFB13) cú cu trỳc ging vi hai hp cht ASE6 v ASE7 c phõn lp t lỏ na v cng ó tng c phõn lp t loi d d trõu 3.3 Kt qu th hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp c 3.3.1 Hot tớnh gõy c t bo Bn hp cht ent-kauran tinh khit phõn lp t lỏ na (Annona squamos L.) gm: axit ent-kaur-16-en-19-oic (ASE1), axit 16-hydro17-axetoxy-ent-kauran-19-oic (ASE2), axit 16-hydro-19-al-ent-kauran17-oic (ASE4), 16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-al (ASE5) c tin hnh th hot tớnh in vitro vi ba dũng t bo ung th trờn ngi: ung th gan (Hep-G2- Human hepatoma), ung th phi (Lu- Human lung carcinoma) v ung th vỳ (MCF-7- Human breast adenocarcinoma) Cỏc giỏ tr bng 3.22 cho thy cỏc hp cht ASE4 v ASE2 th hin hot tớnh vi cỏc dũng t bo th nghim u cú cỏc giỏ tr % CS > 50%, iu ú cú ngha l kh nng gõy c t bo ca chỳng rt yu nờn xem nh khụng th hin hot tớnh vi th nghim ny Cỏc hp cht vi giỏ tr % CS < 50% s c chn tip tc th nghim Bng 3.22: Kt qu th hot tớnh gõy c t bo theo cụng thc Ducan Nng Dũng t bo KH T Cell survival (%) Kt lun mu T Lu MCF-7 (g/ml) Hep-G2 DMSO Chng (+) ASE1 100,0 0,0 100,0 0,0 100,0 0,0 5 0,0 0,0 16,5 0,08 1,3 0,1 61,1 0,7 1,5 0,06 Dng tớnh 1,6 0,2 Dng tớnh vi HepG2 v MCF-7 19 ASE2 70,6 0,4 88,20,6 68,5 1,0 m tớnh ASE4 85,6 1,2 92,5 1,2 95,1 0,6 m tớnh ASE5 69,3 0,4 90,8 1,1 38,7 0,5 Dng tớnh vi MCF-7 Bng 3.23: Kt qu IC50 theo chng trỡnh Table curve TT KH mu Chng (+) Dũng t bo Cell survival (%) Hep-G2 Lu MCF-7 0,256 0,305 0,287 ASE1 3,140 >5 1,799 ASE5 >5 >5 2,594 Kt lun Dng tớnh Dng tớnh vi dũng Hep-G2 v MCF-7 Dng tớnh vi dũng MCF-7 Hp cht ASE5 c ch mnh dũng t bo ung th vỳ (MCF-7) vi IC50 l 2,594, cũn hp cht ASE1 c ch mnh dũng t bo ung th gan (Hep-G2) v ung th vỳ (MCF-7) vi giỏ tr IC50 tng ng l 3,14 v 1,799 Nh vy, hai hp cht ny u cú kh nng c ch mnh cỏc dũng t bo ung th, ú, c hai hp cht ASE1 v ASE5 u c ch c t bo ung th vỳ, nhng hp cht ASE1 cú kh nng c ch mnh hn hp cht ASE5 vỡ IC50 (ASE1) < IC50 (ASE5) 3.3.2 Hot tớnh to cỏc anion peroxit v gii phúng elastase Trong cỏc hp cht sch c phõn lp t lỏ d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) cú hp cht gm: MFE1, MFE3, MFE7, MFE4, MFE6, MFB8, MFB10, MFB12 c tin hnh th nghim ỏnh giỏ kh nng khỏng viờm da trờn kh nng c ch s gii phúng elastase, s to thnh cỏc anion peroxit (O2-) trờn cỏc bch 20 cu trung tớnh cho chỳng phn ng vi formyl-L-methionyl-Lleucyl-L-phenylalanin/cytochalasin B (FMLP/CB), t ú ỏnh giỏ hot tớnh khỏng viờm ca cỏc hp cht ny Kt qu th nghim c trỡnh by c th qua cỏc giỏ tr bng 3.24 Bng 3.24: Hiu qu ca cỏc hp cht quỏ trỡnh to anion peroxit v gii phúng elastase Anion peroxit Gii phúng elastase Hp cht a IC50 (àM) hoc (Inh %) (Inh %) MFE1 5,25 0,48 (39,17 6,87)** MFE3 8,65 1,93 (40,22 6,72)** MFE4 8,40 2,19 (25,14 5,22)** MFB6 (2,50 1,43) (10,14 6,49) MFE7 (2,20 1,68) (2,11 7,91) MFE8 (7,69 5,72) (-4,54 1,44)* MFB10 (39,46 2,29)*** (10,06 4,75) * MFB12 (3,08 0,88) (14,91 5,97) b Sorafenib 3,44 0,29 1,00 0,60 b SB202190 6,73 0,65 (5,53 3,50) Percentage of inhibition (Inh %) nng 10 àM Cỏc kt qu c biu th bng giỏ tr trung bỡnh SEM (n =3) * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 so sỏnh vi giỏ tr i chng a Nng cn thit c ch 50% (IC50) b Sorafenib tosylate v SB202190 c s dng lm cht i chng dng T cỏc s liu thu c bng 3.23 cho ta bit ch cú ba hp cht MFE1, MFE3, MFE4 th hin kh nng c ch s to thnh anion peoxit v khụng cú hp cht no th hin kh nng c ch quỏ trỡnh gii phúng elastase C th, hp cht MFE1 vi IC50 = 5,25 0,48 àM, hp cht MFE3 vi IC50 = 8,65 1,93 àM v MFE4 l IC50 = 8,40 2,19 àM Nh vy, hp cht MFE1 th hin hot tớnh cao hn vỡ cú giỏ tr IC50 nh nht 21 3.3.3 im ni bt t kt qu th hot tớnh sinh hc 3.3.3.1 Hot tớnh sinh hc ca cỏc hp cht phõn lp t lỏ na Trong s hp cht c c phõn lp, cú hp cht c th hot tớnh gõy c t bo nhng ch cú hp cht th hin hot tớnh l axit ent-kaur-16-en-19-oic (ASE1) v 16,17-dihydroxy-ent-kauran19-al (ASE5) Vi kt qu hot tớnh sinh hc v so sỏnh vi cỏc t liu cú liờn quan cho thy hp cht ASE1 vi kh nng gõy c hai dũng t bo ung th gan (Hep-G2) v ung th vỳ (MCF-7) cng ó c bit n cỏc cụng trỡnh ó cụng b, nhng vi hp cht ASE5 ch gõy c dũng t bo ung th vỳ (MCF-7) v õy l ln u tiờn hp cht ny c bỏo cỏo v hot tớnh sinh hc 3.3.3.2 Hot tớnh sinh hc ca cỏc hp cht phõn lp t lỏ d d trõu õy l ln u tiờn cỏc hp cht ny c tin hnh th hot tớnh khỏng viờm da trờn kh nng c ch s to thnh O2- cho bch cu trung tớnh phn ng vi formyl-L-methionyl-L-leucyl-Lphenylalanin/cytochalasin B (FMLP/CB), s hp cht c th hot tớnh, cú hp cht gm melodamit A (MFE1), flavokawain A (MFE3), 2,6-dihydroxy-4-metoxychalcon (MFE4) th hin hot tớnh khỏng viờm c bit nht l hp cht MFE1 ln u tiờn c phõn lp t thiờn nhiờn nờn hot tớnh khỏng viờm ca MFE1 cng l ln u tiờn c cụng b Kh nng khỏng viờm ca hp cht MFE3 ó c bit n da trờn kh nng c ch s gii phúng iNOS, COX-2, NO v PGE2 c kớch thớch bi lipopolysaccharides (LPS) qua th nghim trờn i thc bo chut [59], nhng l ln u tiờn c tin hnh kho khỏt kh nng khỏng viờm theo phng phỏp ny 22 KT LUN Ln u tiờn Vit Nam, cú cụng trỡnh khoa hc bỏo cỏo v thnh phn húa hc v c v hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp t lỏ cõy na (Annona squamosa L.) v lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) Nghiờn cu thnh phn hoỏ hc lỏ cõy na v lỏ cõy d d trõu ca Vit Nam chỳng tụi ó thu c mt s kt qu nh sau: T dch chit lỏ cõy na (Annona squamosa L.) ó phõn lp v xỏc nh cu trỳc hp cht ent-kauran diterpenoit: axit ent-kaur16-en-19-oic (ASE1), axit 16-hydro-17-axetoxy-ent-kauran-19-oic (ASE2), axit 16- hydro-ent-kauran-17,19-dioic (ASE3), axit 16hydro-19-al-ent-kauran-17-oic (ASE4), 16,17-dihydroxy-ent-kauran19-al (ASE5) v 02 hp cht steroit l: -sitosterol (ASE6) v sitosterol-3-O--D-glucopyranozit (ASE7) T dch chit ca lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum Lour.) ó chit xut, phõn lp v xỏc nh cu trỳc c 13 hp cht bao gm: - 01 hp cht amit thm mi l melodamit A (MFE1), - 08 hp cht flavonoit l: flavokawain A (MFE3), 2,6dihydroxy-4-metoxychalcon (MFE4), 2,4-dihydroxy-4,6dimetoxydihydrochalcon (MFE5), tsugafolin (MFE6), 5-Ometylnaringenin (MFE7), naringenin - 4',7- dimetylete (MFB8), kaempferol 3-O-{-D-apiofuranozyl-(12)-[-L-rhamnopyranozyl(16)]--D-glucopyranozit} (MFB9), rutin (MFB10), - 01 hp cht ankaloit l oxoanolobin (MFB11), - 01 hp cht tannin l axit 3,3,4- trimetoxy ellagic (MFB12), - 02 hp cht steroit l -sitosterol (MFH2) v -sitosterol3-O--D-glucopyranozit (MFB13) 23 - Xỏc nh c cỏc thụng s v cu trỳc tinh th ca hp cht melodamit A (MFE1) Cỏc s liu v tinh th hc ca hp cht melodamit A (CCDC 872 187) hin c lu tr ti Trung tõm d liu Cambridge Hp cht axit ent-kaur-16-en-19-oic (ASE1) cú kh nng gõy c dũng t bo ung th gan (Hep-G2) v ung th vỳ (MCF-7), cũn hp cht 16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-al (ASE5) ch gõy c dũng t bo ung th vỳ (MCF-7), ú, hp cht ASE1 gõy c t bo ung th vỳ mnh hn ASE5 Hp cht melodamit A (MFE1), flavokawain A (MFE3) v 2,6-dihydroxy-4-metoxychalcon (MFE4) cú kh nng c ch s to thnh cỏc anion peroxit trờn bch cu trung tớnh ca ngi c hot húa bi FMLP/CB cựng vi kh nng c ch bng ng c ch ỏnh du bi p38 MAPK t ú cho thy chỳng cú hot tớnh chng viờm nhim 24 DANH MC CễNG TRèNH CễNG B Bựi Th Minh Nguyt, Nguyn Th Lng Thin, Nguyn Phan Chung, Trn ỡnh Thng (2011), cỏc hp cht Flavonoit t lỏ cõy D d trõu (Melodorum fruticosum L.) Vit Nam, Tp Khoa hc v Cụng ngh, 49 (3A) tr 7-11 Bựi Th Minh Nguyt, Nguyn Th Bớch Ngc, Nguyn Th Hng, Trn ỡnh Thng (2011), Cỏc hp cht diterpenoit lỏ cõy na (Annona squamosa L.) Vit Nam Tp Khoa hc v Cụng ngh, 49 (3A) tr 106-111 Bựi Th Minh Nguyt, Trng Th Ngc Hin, Trn ỡnh Thng (2012), Mt s hp cht c phõn lp t lỏ cõy d d trõu (Melodorum fruticosum L.) Vit Nam Tp Khoa hc v Cụng ngh, 50 (3A) tr.120-125 Hsiu-Hui Chan, Tsong-Long Hwang, Tran Dinh Thang, YannLii Leu, Ping-Chung Kuo, Bui Thi Minh Nguyet, Do Ngoc Dai, Tian-Shung Wu (2013,) Isolation and synthesis of melodamide A, a new anti-inflammatory phenolic amide from the leaves of Melodorum fruticosum Planta Medica, 79 (3-4), pp 288-294 [...]... KẾT LUẬN L n đầu tiên ở Việt Nam, có công trình khoa học báo cáo về thành phần hóa học và cả về hoạt tính sinh học của các chất phân l p từ l cây na (Annona squamosa L. ) và l cây dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour .) Nghiên cứu thành phần hoá học l cây na và l cây dủ dẻ trâu của Việt Nam chúng tôi đã thu được một số kết quả như sau:  Từ dịch chiết l cây na (Annona squamosa L. ) đã phân l p và. .. nghệ, 49 (3A) tr 7-11 2 Bùi Thị Minh Nguyệt, Nguyễn Thị Bích Ngọc, Nguyễn Thị Hồng, Trần Đình Thắng (201 1), Các hợp chất diterpenoit l cây na (Annona squamosa L. ) ở Việt Nam Tạp chí Khoa học và Công nghệ, 49 (3A) tr 106-111 3 Bùi Thị Minh Nguyệt, Trương Thị Ngọc Hiền, Trần Đình Thắng (201 2), Một số hợp chất được phân l p từ l cây dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum L. ) ở Việt Nam Tạp chí Khoa học và Công... của l dủ dẻ trâu 2.5.2.3 Cao butanol Cao butanol (192 g) CC, silica gel CHCl3:MeOH ( 0 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 50 %, 70 %, 90 %, và 100 %) F-1 F-2 F-3 (5,0 g) F-4 (18,6 g) F-5 F -6 F-7 (30,6 (10,4 g) F-8, F-9, F -10 g) CC, silica gel CC, silica gel CHCl3:CH3OH CC, silica gel CHCl3:CH3OH CC, silica gel CHCl3:CH3OH:H2O CHCl3:CH3OH:H2O (9:1:0,0 5) (4:1:0,0 5) (19: 1) (15: 1) MFB8 (39 mg) MFB10 (87 mg) MFB11... 16-hydro-17-axetoxy-ent-kauran-19-oic (ASE 2) chỉ tìm thấy trong các loài khác thuộc chi này Cấu trúc các hợp chất tuy đã được xác định nhưng đây l l n đầu tiên các hợp chất này được phân l p và xác định cấu trúc từ l na phân bố ở Việt Nam và cũng l l n đầu tiên kết quả nghiên cứu từ đối tượng l na Việt Nam được công bố 3.2 L cây dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour .) 11 3.2.1 Các hợp chất được phân l p Các cao chiết... phân l p từ l dủ dẻ trâu Đây l l n đầu tiên các hợp chất này được tiến hành thử hoạt tính kháng viêm dựa trên khả năng ức chế sự tạo thành O2- khi cho bạch cầu trung tính phản ứng với formyl -L- methionyl -L- leucyl-Lphenylalanin/cytochalasin B (FMLP/CB), trong số 8 hợp chất được thử hoạt tính, có 3 hợp chất gồm melodamit A (MFE 1), flavokawain A (MFE 3), 2,6’-dihydroxy-4’-metoxychalcon (MFE 4) thể hiện hoạt. .. thơm mới l melodamit A (MFE 1), - 08 hợp chất flavonoit l : flavokawain A (MFE 3), 2,6’dihydroxy-4’-metoxychalcon (MFE 4), 2’,4’-dihydroxy-4,6’dimetoxydihydrochalcon (MFE 5), tsugafolin (MFE 6), 5-Ometylnaringenin (MFE 7), naringenin - 4',7- dimetylete (MFB 8), kaempferol 3-O-{-D-apiofuranozyl-(1 2)- [ -L- rhamnopyranozyl(1 6)] --D-glucopyranozit} (MFB 9), rutin (MFB1 0), - 01 hợp chất ankaloit l oxoanolobin... (MFB 8), kaempferol 3-O-{-D-apiofuranozyl-(1 2)- [-Lrhamnopyranozyl-(1 6)] --D-glucopyranozit} (MFB 9), rutin (MFB1 0), oxoanolobin (MFB1 1), axit 3,3’,4’- trimetoxy ellagic (MFB1 2) 18 l l n đầu tiên được phân l p từ các loài thuộc chi Dủ dẻ, đặc biệt hợp chất MFE1 l hợp chất l n đầu tiên được phân l p và xác định cấu trúc từ sản phẩm thiên nhiên Hai hợp chất l β-sitosterol (MFH 2) và sitosterol-3-O--D-glucopyranozit... mg) MFB11 (14 mg) MFB12 (45 mg) MFB13 (97 mg) MFB9 (12 mg) Sơ đồ 6: Quy trình phân l p các chất từ cao butanol của l dủ dẻ trâu 9 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 L cây na (Annona squamosa L. ) 3.1.1 Các hợp chất được phân l p Cặn chiết etyl axetat từ l na đã phân l p và xác định được cấu trúc của 7 hợp chất được kí hiệu từ ASE1 đến ASE7 Bảng 3.1: Các hợp chất phân l p từ l cây na STT Kí hiệu hợp... từ các loài thuộc chi Dủ dẻ nói riêng và loài dủ dẻ trâu nói chung phần nhiều l các hợp chất heptene và một số ít hợp chất khác Qua đó cho thấy, các hợp chất phân phân l p được của luận án gồm melodamit A (MFE 1), flavokawain A (MFE 3), 2,6’-dihydroxy-4’-metoxychalcon (MFE 4), 2’,4’-dihydroxy-4,6’-dimetoxydihydrochalcon (MFE 5), tsugafolin (MFE 6), 5-O-metylnaringenin (MFE 7), naringenin - 4',7dimetylete... sitosterol-3-O--D-glucopyranozit (MFB1 3) có cấu trúc giống với hai hợp chất ASE6 và ASE7 được phân l p từ l na và cũng đã từng được phân l p từ loài dủ dẻ trâu 3.3 Kết quả thử hoạt tính sinh học của các chất phân l p được 3.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào Bốn hợp chất ent-kauran tinh khiết phân l p từ l na (Annona squamos L. ) gồm: axit ent-kaur-16-en-19-oic (ASE 1), axit 16-hydro17-axetoxy-ent-kauran-19-oic (ASE 2),