Bai 01 -11

XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP IN-HOUSE ĐO TẢI LƯỢNG VI RÚT HIV- BẰNG KỸ THUẬT REAL TIME RT-PCR Nguyễn Thùy Linh *, **, Dunford, Linda*, ***, Dean, Jonathan*, ***, Nguyễn Thị Lan Anh *, **, Carr, Michael *, ***, Coughlan, Suzie*, ***, Connell, Jeff *, *** Nguyễn Trần Hiển *, **, Hall, William W 1*, *** * Dự án Nâng cao lực xét nghiệm nghiên cứu dịch tễ học vi rút truyền qua đường máu Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương (IVVI) ** Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, Số 1, Yecsin, Hà Nội, Việt Nam *** Phịng thí nghiệm vi rút chuẩn thức quốc gia, Đại học Tổng hợp Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland TÓM TẮT Xét nghiệm định lượng ARN vi rút HIV-1 trường hợp khẳng định nhiễm HIV-1 phương pháp huyết học cần thiết để quản lý điều trị thuốc kháng vi rút theo dõi tiến triển bệnh Tuy nhiên, giá thành phép đo tải lượng vi rút HIV-1 thương mại hóa thường đắt để áp dụng xét nghiệm thường quy nơi hạn chế nguồn lực Nghiên cứu mô tả việc xây dựng phương pháp in-house đo tải lượng vi rút HIV-1, kỹ thuật real-time RT-PCR bước, sử dụng chuẩn ARN HIV tự tạo, hệ thống ABI 7500 FAST PCR Kết thẩm xét cho thấy giới hạn phát phương pháp 180 copies/ml huyết tương, với dải động học tuyến tính 1,8x102 – 1,0x108 copies/ml Phương pháp In-house có khả phát tất kiểu gen HIV, bao gồm subtype M, N O Kỹ thuật real-time RT-PCR sử dụng chuẩn ARN HIV tự tạo có độ tin cậy cao Qua 14 lần chạy riêng biệt, dãy chuẩn có tải lượng HIV từ 5x101 – 5x106 copies/ml, lặp lại lần nồng độ, đường chuẩn thu có giá trị slope trung bình -3,4, giá trị R2 trung bình 0,999 phản ứng PCR đạt hiệu suất trung bình 95% Khả đo tải lượng vi rút HIV phương pháp in-house tương đương với phương pháp b-DNA Siemens, kết định lượng phương pháp 36 mẫu có hệ số hồi quy 0,947 hệ số tương quan R2 0,95 Với giá thành rẻ hơn, phương pháp in-house trở thành xét nghiệm routine đo tải lượng vi rút HIV hoàn cảnh hạn chế nguồn lực Việt Nam SUMMARY VALIDATION OF THE IVVI IN-HOUSE REAL TIME RT-PCR FOR HIV-1 VIRAL LOAD Nguyen Thuy Linh *, **, Dunford, Linda*, ***, Dean, Jonathan*, ***, Nguyen Thi Lan Anh *, **, Carr, Michael *, ***, Coughlan, Suzie*, ***, Connell, Jeff *, ***, Nguyen Tran Hien *, ** and Hall, William W *, *** * Ireland Vietnam Blood-Borne Virus Initiative (IVVI) Project ** National Institute of Hygiene and Epidemiology, No Yersine Street, Ha Noi, Vietnam *** National Virus Reference Laboratory, University College Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland This study describes the evaluation of a one step, real time reverse transcription polymerase chain reaction (RT- PCR) designed to detect and quantitate a range of subtypes of HIV-1, including the most commonly detected subtype in Vietnam, CRF01_AE The 5’ nuclease “Taqman” assay targets a 133 nucleotide fragment of the conserved 5’ long terminal repeat (LTR) domain of HIV-1 using the ABI 7500 FAST PCR system and incorporates a Brome mosaic virus (BMV) as internal control Quantitative standards were developed in house using RNA runoff plasmid transcripts and were calibrated using the WHO 2nd International Reference Standard for HIV-1 (97/650) The lower limit of detection was 180 copies/ml of HIV-1 RNA in plasma, and the linear dynamic range was from 1.8 X102 – 1.0 X108 copies/ml The in-house assay successfully detected all members of the WHO 1st International Genotype Reference Panel (01/466) including subtypes M, N and O The real-time RT-PCR assay and in-house standards were found to be robust and reproducible with excellent PCR parameters Over 14 independent runs, using the in-house standards in triplicate from X 101 – X 106 copies, the mean slope of the assay was -3.4, mean PCR efficiency was 95% and the mean R2 value was 0.999 Viral loads in the clinical specimen panel (n=36), compared with Siemens Versant HIV-1 viral load assay, demonstrated excellent correlation coefficients, yielding a regression line slope of 0.947 and R2 value of 0.95 The intra-/inter-assay variation of the assay, determined by analysis of serial dilutions of WHO International Standards, Commercial Acrometrix Panel and In House HIV RNA, ranged up to 6.4% of the Log 10 copies/ml at the lower end of quantification of the assay We describe the validation of a robust, sensitive, specific in-house assay for the accurate quantitation of HIV-1 RNA in plasma This assay offers a more cost efficient alternative to commercial assays and detects all relevant genotypes and is directly comparable to existing methodologies I ĐẶT VẤN ĐỀ Ước tính gần cho thấy có 290.000 người nhiễm HIV Việt Nam, với tỉ lệ nhiễm 0,5% nhóm người trưởng thành tuổi từ 15-49 (1) Tình trạng nhiễm HIV Việt Nam tập trung nhiều quần thể có nguy cao, người nghiện chích ma túy phụ nữ bán dâm (1) Một số nghiên cứu dịch tễ học phân tử vi rút HIVcho thấy subtype CRF01_AE lưu hành phổ biến Việt Nam (2, 3) Trong năm gần đây, loại thuốc kháng vi rút (Antiretrovirus- ARV) phổ biến đưa vào điều trị nhiều quốc gia phát triển với giá thành giảm đáng kể Với quan tâm Chính phủ, hỗ trợ nhiều Tổ chức Quốc tế, Việt Nam triển khai chương trình điều trị cho bệnh nhân AIDS, có nhiều bệnh nhân AIDS điều trị bằng phác đồ phối hợp Để điều trị ARV có hiệu cao nhất, đề phịng trường hợp kháng thuốc, việc điều trị cần theo dõi đánh giá qua xét nghiệm đo tế bào CD4, tải lượng vi rút HIV xác định đột biến kháng thuốc Xét nghiệm đo tải lượng vi rút HIV cần thiết để quản lý điều trị theo dõi tiển triển bệnh Trong giá thuốc ARV giảm đáng kể cho nước phát triển Việt Nam, giá thành xét nghiệm đo tải lượng vi rút chưa có mức giảm tương tự Các xét nghiệm thương mại đo tải lượng HIV-1 đắt để áp dụng thường quy hồn cảnh hạn chế nguồn lực, cần phải phát triển phương pháp thay có hiệu kinh tế phục vụ việc kiểm soát điều trị (4) Chúng tập trung phát triển phương pháp đo tải lượng vi rút HIV kỹ thuật real time RTPCR phù hợp, có khả áp dụng cao quản lý bệnh nhân HIV/AIDS Việt Nam II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu: - Sinh phẩm tách chiết: QIAamp Viral RNA mini (Qiagen) (52904-52906) - Sinh phẩm Real-time RT-PCR: Superscript III Platinum One-step Quantitiative RT-PCR system (Invitrogen) (11732-020) - Chuẩn ARN HIV dùng để định lượng chế tạo kỹ thuật chép ngược từ plasmid tổ hợp chứa đoạn gen đích vùng 5’ LTR vi rút HIV-1 ARN tổng hợp tinh gạch gel, định lượng máy nanodrop Dãy chuẩn ARN HIV xác định theo đơn vị copies/µl bảo quản -70ºC - Bộ mẫu kiểm định: o Mẫu chứng HIV – ARN tải lượng 4,56 Log10 IU/ml (NIBSC 99/636-005) mẫu chứng HIV – ARN tải lượng 2,56 Log10 IU/ml (NIBSC 05/158-002) o Bộ mẫu tham chiếu quốc tế kiểu gen HIV-1, hệ Tổ chức YTTG (NIBSC 01/466) o Chuẩn tham chiếu quốc tế HIV-1, hệ Tổ chức YTTG, tải lượng 5,56 Log 10 IU/ml (NIBSC 97/650) o Bộ mẫu kiểm tra tải lượng ARN HIV-1 Optiquant, (Acrometrix, 94-2013) o Tập hợp 36 mẫu bệnh phẩm định kiểu gen xác định tải lượng HIV kỹ thuật bDNA hệ thống Siemens 440, tổng số 36 mẫu 2.2 Phương pháp: 2.2.1 Tách chiết ARN: ARN tách chiết từ 500 µl huyết tương Cụ thể, huyết tương ly tâm với tốc độ 21.000xg, 80 phút, nhiệt độ 4oC Dịch loại bỏ, cặn sử dụng để tách ARN phương pháp ly tâm với sinh phẩm QIAamp Viral RNA mini (Qiagen), theo hướng dẫn nhà sản xuất Thể tích mẫu ARN thu hồi 50 µl, sử dụng µl cho phản ứng real time RT-PCR 2.2.2 Kỹ thuật Real-time RT-PCR: Kỹ thuật tập trung khuếch đại đoạn gen đích dài 133 nucleotit vùng bảo thủ 5’ LTR HIV-1, sử dụng cặp mồi đầu dò có trình tự sau: Mồi xi LTR S4 Mồi ngược LTR AS3 Đoạn dò LTRP1 Đoạn dò LTRP2 5’- AAG CCT CAA TAA AGC TTG CCT TGA -3’ 5’- GTT CGG GCG CCA CTG CTA G – 3’ FAM – 5’-TCT GGT AAC TAG AGA TCC CTC AGA CC -3’- BHQ1 FAM – 5’- CCT GGT GTC TAG AGA TCC CTC AGA CC – 3’- BHQ1 Để kiểm soát chất lượng phép đo, ARN vi rút Brome Mosic (BMV) sử dụng nội chứng, giúp loại bỏ kết âm tính giả sai sót xảy trình tách chiết tạp nhiễm chất ức chế phản ứng PCR 1pg ARN BMV thêm vào mẫu bệnh phẩm từ khâu tách chiết Cặp mồi đầu dò để phát ARN BMV có trình tự sau: Mồi xi MBV Fern F Mồi xi MBV Fern R Đoạn dị BMV 5’- GTT CAC CGA TAG ACC GCT G – 3’ 5’- AAG AGC CCG GAA TGT CAA GA – 3’ TAMRA – 5’- CCT CAA GCT GAA ATG GCA CGG ATG -3’- BHQ2 Phản ứng real-time RT-PCR thực hệ thống ABI 7500 FAST PCR, với chu trình nhiệt: chu trình phiên mã ngược (500C-15 phút, 950C - phút), 45 chu kỳ tổng hợp ADN (95 0C, 15 giây, 600C, 34 giây) III KẾT QUẢ Phương pháp in-house đo tải lượng vi rút HIV-1 xây dựng dựa phương pháp đo tải lượng HIV công bố trước (5), tập trung khuếch đại đoạn gen đích dài 133 nucleotit vùng bảo thủ 5’ LTR HIV-1 sử dụng hệ thống ABI 7500 FAST PCR Phương pháp xây dựng có số thay đổi Để xây dựng đường chuẩn tải lượng vi rút HIV, ARN HIV tự tạo kỹ thuật mã ngược từ plasmid tổ hợp chứa đoạn gen đích HIV-1 sử dụng thay cho việc sử dụng mẫu huyết chứa HIV Chuẩn ARN HIV tự tạo hiệu chuẩn theo chuẩn tham chiếu quốc tế HIV-1, hệ Tổ chức YTTG (97/650) (7), kết phép đo tải lượng tính tốn theo hệ đơn vị copies/ml IU/ml, tạo điều kiện thuận lợi cho việc so sánh kết phòng xét nghiệm Để kiểm soát yếu tố ức chế phản ứng PCR dẫn đến kết âm tính giả, ARN Brome mosaic virus (BMV) sử dụng làm nội chứng Một lượng ARN BMV thêm vào tất mẫu bệnh phẩm cần phân tích, từ khâu tách chiết ARN Khi thực phản ứng realtime RT-PCR, đoạn gen đích BMV nhân lên song song với đoạn gen đích HIV-1 Thông thường sản phẩm khuếch đại nội chứng cần phát thấy từ chu kỳ 35, khơng làm ảnh hưởng đến việc khuếch đại gen đích cần quan tâm Kết thực nghiệm xác định lượng ARN BMV tối ưu cần bổ sung vào mẫu bệnh phẩm 1pg, từ khâu tách chiết đệm ly trích Giới hạn phát phương pháp In-house IVVI 180 copies/ml huyết tương Phương pháp có khả đo tải lượng vi rút HIV-1 dải động học 1,8 x10 – 1x108 copies/ml Các chuẩn In-house có độ tuyến tính cao ngang với chuẩn tham chiếu Hình 1: Đường chuẩn tải lượng vi rút HIV xây dựng dãy chuẩn In-house HIV có tải lượng từ 5x101 tới 5x106 copy/ml ARN HIV, với giá trị lặp lại cho tải lượng chuẩn Kỹ thuật real tiem RT-PCR định lượng HIV sử dụng dẫy chuẩn In-house khoảng từ 5x10 – 5x106 copies/ml đánh giá qua 14 lần chạy riêng biệt, nồng độ chuẩn In-house đo lặp lại lần lần thí nghiệm, đường chuẩn thu có giá trị slope trung bình -3,4 với R2 trung bình 0,999 phản ứng PCR đạt hiệu suất trung bình 95% Độ lặp lại tái lập phương pháp đánh giá loại mẫu chuẩn: chuẩn tham chiếu quốc tế HIV-1 Tổ chức YTTG, mẫu HIV hãng Acrometrix chuẩn In-house chuẩn bị nhiều nồng độ khác nhau; độ dao động lớn thu 6,4% Log 10 nồng độ thấp phát (copies/ml) So sánh kết đo tải lượng vi rút phương pháp in-house mẫu lâm sàng (36 mẫu) với giá trị đo phương pháp b-DNA hệ thống Siemens Versant HIV-1, cho thấy kết đo hai phương pháp tương đương nhau, với độ dốc đường tuyến tính 0,947, hệ số tương quan cao (R2 = 0,95) (Hình 2) Hình 2: Sự sánh tương quan tải lượng vi rút HIV đo phương pháp In-house IVVI phương pháp Siemens b-DNA (Versant HIV) Mồi đoạn dị thiết kế dựa trình tự ngân hàng liệu Los Alamos HIV năm 2007 Kết so sánh trình tự cho thấy mồi đầu dị có khả gắn cao với genotype HIV xác định nay, bao gồm CRF01_AE, genotype lưu hành phổ biến Việt Nam Để phát số chủng không phổ biến, phương pháp in-house sử dụng hai loại đầu dị LTRP1 LTRP2, đầu dị LTRP2 có thay đổi số base Kết thử nghiệm mẫu tham chiếu quốc tế kiểu gen HIV-1, hệ Tổ chức YTTG, bao gồm A, B, C, D, AE, F, G, AA-GH, nhóm N O cho thấy phương pháp In-house phát tất kiểu gen So với phương pháp thương mại, phương pháp in-house co khả phát kiểu gen khơng thuộc nhóm B tốt (8) III BÀN LUẬN Dựa phương pháp đo tải lượng vi rút HIV-1 kỹ thuật real time RT-PCR Drosten cộng xây dựng năm 2006 [5], số nhóm nghiên cứu cải tiến để áp dụng thành công số quốc gia [9] Phương pháp in house, chí, cịn hữu hiệu xét nghiệm đo tải lượng HIV thương mại khả phát phân nhóm HIV-1 khơng thuộc nhóm B (9) So với phương pháp Drosden, phương pháp in house chúng tơi có hai thay đổi i) sử dụng chuẩn ARN HIV-1 tự tạo ii) sử dụng ARN vi rút BMV nội chứng để kiểm soát chất lượng Phương pháp in house áp dụng hệ thống ABI 7500 FAST có độ đặc hiệu cao, phát tất genotype HIV-1 Việc sử dụng hai dầu dò phản ứng, với số thay đổi trình tự đầu dị thứ hai góp phần làm tăng khả phát vi rút mang đột biến Với khoảng phát rộng 1,8x10 – 1,0x108 copy/ml, giới hạn phát 180 copy/ml phương pháp in-house phù hợp để theo dõi thay đổi mặt vi rút học để định theo dõi điều trị ARV cho bệnh nhân HIV Khả tự tổng hợp ARN HIV-1 làm chuẩn cho phương pháp đo tải lượng, giúp chủ động nguồn vật liệu chuẩn, giảm chi phí xét nghiệm,và khơng địi hỏi điều kiện an toàn sinh học ngặt nghèo phải sử dụng mẫu huyết tương có chứa vi rút HIV làm chuẩn Phương pháp định lượng có độ ổn định cao, độ xác tương đương phương pháp bDNA (Siemens) Tổng hợp kết đánh giá kỹ thuật, ưu chi phí so với phương pháp đo tải lượng HIV thương mại, phương pháp in house chúng tơi xây dựng có khả áp dụng cao giúp nâng cao chất lượng công tác quản lý theo dõi điều trị HIV Việt Nam IV KẾT LUẬN Phương pháp in-house đo tải lượng vi rút HIV có nhiều đặc tính kỹ thuật tương đương với phương pháp thương mại có, với ưu chi phí, phương pháp phù hợp để áp dụng hỗ trợ xét nghiệm huyết học, đo tế bào CD4 quản lý bệnh nhân HIV/AIDS Tài liệu tham khảo 10 UNAIDS/WHO Epidemiological Fact Sheets on HIV and AIDS, 2008 Update Nguyen, H.T., et al., HIV drug resistance threshold survey using specimens from voluntary counselling and testing sites in Hanoi, Vietnam Antivir Ther, 2008 13 Suppl 2: p 115-21 Lan, N.T., et al., HIV type isolates from 200 untreated individuals in Ho Chi Minh City (Vietnam): ANRS 1257 Study Large predominance of CRF01_AE and presence of major resistance mutations to antiretroviral drugs AIDS Res Hum Retroviruses, 2003 19(10): p 925-8 Fiscus S.A et al., HIV-1 viral load assays for resource-limited settings 2006 PLoS Med 3: e417.doi:10.1371/journal.pmed.0030417 Drosten, C., et al., Ultrsensitive Monitoring of HIV-1 Viral Load by a Low Cost Real-Time Reverse Transcription-PCR Assay with Internal Control for the 5' Long Terminal Repeat Domain Clinical Chemistry 2006 52(7):1258-1266 Ferns R B and Garson J A Development and evaluation of a real-time RT-PCR assay for quantification of cell-free human immunodeficiency virus type using a Brome Mosaic Virus internal control J Virol Methods, 2006 135:102–108 Holmes H et al.,An international collaborative study to establish the st international standard for HIV-1 RNA for use in nucleic acid-based techniques J Virol Methods, 2001 92: 141–150 Holmes H et al., Development of the 1st International Reference Panel for HIV-1 RNA genotypes for use in nucleic acid-based techniques J Virol Methods 2008 154:86-91 Drexler et al., Rates of and Reasons for Failure of Commercial Human Immunodeficiency Virus Type Viral Load Assays in Brazil J Clin Micro, 2007 45(6): 2061–2063 MÔ TẢ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC NHIỄM HIV/AIDS TỈNH KHÁNH HÒA TỪ NĂM 1993 - 2009 Trương Tấn Minh * Trần Văn Tin, Nguyễn Vũ Quốc Bình ** * Sở Y tế tỉnh Khánh Hịa ** Trung tâm phịng chống HIV/AIDS tỉnh Khánh Hịa TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu khoa học: “Mô tả đặc điểm dịch tễ học nhiễm HIV/AIDS tỉnh Khánh Hoà từ năm 1993 đến 2009” thực tỉnh Khánh Hoà Với mục đích xác định tỷ lệ nhiễm HIV phân bố nhiễm HIV/AIDS nhóm đối tượng, theo dõi chiều hướng tỷ lệ nhiễm HIV theo thời gian, xác định nhóm có nguy nhiễm HIV cao để đề biện pháp can thiệp xác định thay đổi hình thái lây truyền HIV Tiến hành điều tra vòng 06 tháng (từ tháng 01/2010 đến tháng 62010) Tiến hành hồi cứu số liệu quản lý Trung tâm phòng chống HIV/AIDS tỉnh Số liệu phân tích xử lý phần mềm EPI-INF0 2002 Kết thu được: Khánh Hòa giai đoạn dịch tập trung Số nhiễm HIV chững lại không tăng lên nhanh năm trước Chủ yếu nhóm người NCMT, dịch có dấu hiệu lan cộng đồng, nhóm đối tượng có hành vi nguy thấp Tuy nhiên chứa đựng yếu tố nguy làm bùng nổ dịch khơng triển khai biện pháp can thiệp có hiệu SUMMARY The research: “Describe the epidemiology of HIV/AIDS Khanh Hoa province from 1993 to 2009” was conducted in Khanh Hoa In order to determine the rate of HIV and distribution of HIV/AIDS in target groups, monitoring HIV prevalence trends over time, identify groups at risk of HIV infection to intervene and identify the form changes of HIV transmission Cross-section survey has been implemented from January to June 2010 Research again in managing data centers for HIV / AIDS Province The analysis of data was displayed by EPI-INFO 2002 software program This study 11 showed that Khanh Hoa is now in the concentrated epidemic Number of HIV infections are stable and not increase as fast as the last year But still contained elements outbreak risk if not implemented the intervention effectively./ I ĐẶT VẤN ĐỀ Khánh Hòa tỉnh miền duyên hải Nam Trung bộ, cách thủ Hà Nội 1280 km phía bắc, cách thành phố Hồ Chí Minh 448 km phí nam Với bờ biển dài 200 km gần 200 đảo lớn nhỏ khác nhau, Khánh Hòa có nhiều di tích lịch sử văn hóa danh lam thắng cảnh tiếng, Bãi biển Nha Trang nằm Trung tâm Thành phố bãi tắm đẹp hấp dẫn du khách, Vịnh Nha Trang 29 Vịnh đẹp giới Đây yếu tố có ảnh hưởng lớn đến tình hình nhiễm HIV/AIDS tỉnh Trong năm đầu đại dịch HIV/AIDS Việt Nam, Khánh Hòa tỉnh có số người nhiễm HIV/AIDS cao nước Dưới đạo Cục phòng, chống HIV/AIDS trực tiếp UBND tỉnh Khánh Hòa, năm vừa qua Sở Y tế tỉnh triển khai thực tốt chương trình phịng chống HIV/AIDS địa phương, góp phần hạn chế lây truyền HIV/AIDS toàn tỉnh Trường hợp nhiễm HIV Khánh Hoà dược phát vào tháng 04/1993 Trung tâm phòng chống lạm dụng ma tuý tỉnh Đến dịch HIV/AIDS Khánh Hoà chuyển sang giai đoạn II, giai đoạn phát nhiều bệnh nhân AIDS có người tử vong AIDS Theo thống kê Trung tâm phòng chống HIV/AIDS tỉnh Khánh Hịa đến 31/12/2009 tồn tỉnh phát 2383 người nhiễm HIV, 1201 tiến triển đến giai đoạn AIDS có 876 người tử vong Nhằm đánh giá diễn biến dịch HIV/AIDS Khánh Hòa năm qua, Sở Y tế tỉnh tiến hành thực đề tài nghiên cứu “Mô tả đặc điểm dịch tễ học nhiễm HIV/AIDS tỉnh Khánh Hoà từ năm 1993 đến 2009” MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Xác định tỷ lệ nhiễm HIV phân bố nhiễm HIV/AIDS nhóm đối tượng Theo dõi chiều hướng tỷ lệ nhiễm HIV theo thời gian Xác định nhóm có nguy nhiễm HIV cao để đề biện pháp can thiệp Xác định thay đổi hình thái lây truyền HIV Dự báo tình hình nhiễm HIV để lập kế hoạch phòng chống hiệu địa phương II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nghiên cứu hồi cứu kết giám sát phát giám sát trọng điểm HIV/AIDS Khánh Hòa thời gian từ năm 1993 đến năm 2009 Thu thập số liệu quản lý trung tâm phòng chống HIV/AIDS tỉnh Thời gian tiến hành vòng 06 tháng (từ tháng 01-2010 đến tháng 6-2010) Thiết kế nghiên cứu : Đề tài thực theo thiết kế nghiên cứu hồi cứu Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu: Chọn mẫu toàn Số liệu thu thập xử lý theo chương trình phần mềm EPI-INFO 2002 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Báo cáo trường hợp nhiễm HIV/AIDS: Trường hợp nhiễm HIV phát vào tháng 04/1993 Trung tâm phòng chống lạm dụng ma tuý tỉnh Khánh Hoà (Hiện Trung tâm Giáo dục-Lao động-Xã hội) Theo nhận định chun gia phịng chống HIV/AIDS, Khánh Hồ giai 3000 đoạn dịch tập trung, thời gian để tiến hành biện pháp can thiệp phịng 2383 chống có hiệu 2500 1923 2000 2210 1780 1559 1500 2092 1324 1000 500 130 130 278 235 1993 2003 2004 HIV (+) 221 143 169 118 173 12 2006 2007 2008 2009 2005 Céng dån Biểu đồ 1: Trường hợp nhiễm HIV báo cáo theo năm Đến cuối năm 2009 toàn tỉnh phát 2383 trường hợp nhiễm HIV, số có 1201 người tiến triển đến giai đoạn AIDS 876 người tử vong Trong năm 2008 số 15.395 mẫu máu xét nghiệm phát 118 trường hợp nhiễm HIV (0,77%) trường hợp HIV (+), năm 2009 số 17.732 mẫu máu xét nghiệm phát 173 trường hợp nhiễm HIV (0,98%) trường hợp HIV (+), Có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ phần trăm người nhiễm HIV phát trong tổng số mẫu xét nghiệm năm 2008 so với năm 2009 (P value < 0,04) Nhiễm HIV khơng cịn người nghiện chích ma tuý mà dịch lây sang nhóm đối tượng có hành vi nguy thấp Tân binh, vợ/chồng, người nhiễm, đặc biệt số bệnh nhân đến khám điều trị sở y tế ngày phát nhiều trường hợp nhiễm HIV/AIDS Tuy nhiên cần phải nhấn mạnh số liệu báo cáo chưa phản ánh chiều hướng thực trạng tình hình nhiễm HIV tỉnh Khánh Hồ, thực tế số nhiễm cao nhiều 1400 1201 1200 1089 983 886 1000 800 755 655 600 559 400 200 29 29 1993 77 2003 100 131 2005 2006 96 2004 BN AIDS 97 106 112 2007 2008 2009 Céng dån Biểu đồ 2: Số bệnh nhân AIDS qua năm Cũng giống năm trước kia, hàng năm có khoảng 100 người chuyển sang giai đoạn AIDS, năm 2009 có 112 trường hợp nhiễm HIV chuyển sang giai đoạn AIDS Cộng dồn đến cuối năm 2009 toàn tỉnh phát 1201 bệnh nhân AIDS 13 1000 876 900 818 800 746 687 700 600 583 499 500 446 400 300 200 100 29 55 29 104 84 53 59 72 2007 2008 58 1993 2003 2004 2005 2006 Tö vong 2009 Céng dån Biểu đồ 3: Số bệnh nhân AIDS tử vong qua năm Trong năm 2009 có 58 bệnh nhân HIV/AIDS tử vong (năm 2008, có đến 72 trường hợp tử vong) cộng dồn đến cuối năm 2009 toàn tỉnh có 876 người tử vong AIDS Trong số người nhiễm HIV/AIDS, nam giới chiếm tỷ lệ cao nhiều so với nữ Tuy nhiên, năm 1993 nam giới chiếm tỷ lệ 91,54%, đến cuối năm 2009 nam giới chiếm 79,9% Có khác biệt phân bố theo giới năm 1993 đến cuối năm 2009 (P