Nghiên cứu xây dựng và ứng dụng quy trình phân tích đồng thời một số chất bảo quản trong da bằng phương pháp LC MS MS

I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN Lấ TH BNG NGHIấN CU XY DNG V NG DNG QUY TRèNH PHN TCH NG THI MT S CHT BO QUN TRONG CC SN PHM DA BNG PHNG PHP LC/MS/MS LUN VN THC S KHOA HC H Ni, nm 2015 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN Lấ TH BNG NGHIấN CU XY DNG V NG DNG QUY TRèNH PHN TCH NG THI MT S CHT BO QUN TRONG CC SN PHM DA BNG PHNG PHP LC/MS/MS CHUYấN NGNH: HểA PHN TCH M S: 60440118 LUN VN THC S KHOA HC Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS NGUYN VN RI H Ni, nm 2015 LI CM N Vi long bit n sõu sc, tụi xin chõn thnh cm one PGS.TS Nguyn Vn Ri ó tn tỡnh hng dn, giỳp v to iu kin cho tụi hon thnh Lun ny Tụi xin gi li cm n chõn thnh ti ban lónh o Vin Nghiờn cu Da Giy v cỏc anh ch ng nghip cụng tỏc ti Trung tõm Phõn tớch v Cụng ngh Mụi trng Vin Nghiờn cu Da giy ó to iu kin tt nht cho tụi c hc v nghiờn cu Tụi cng xin gi li cm n ti cỏc thy cụ ging dy ti Khoa Húa hc Trng i hc Khoa hc T nhiờn i hc Quc gia H Ni cựng th lp cao hc K24 ó giỳp ng viờn tụi sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu ti trng Cui cựng tụi xin gi li cm n n gia ỡnh, bn bố nhng ngi ó luụn ng viờn, khuyn khớch v c v tụi sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu H Ni, thỏng nm 2016 Hc viờn Lờ Th Bng MC LC M U CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Tng quan v ngnh thuc da v cht bo qun s dng ngnh 1.2 Tng quan v cht bo qun 1.2.1 2-(thiocyanomethylthio)-benzothiazole (TCMTB) 1.2.2 4-chloro-3-methylphenol (PCMC) 1.2.3 2-octylisothiazol-3(2H)-one (OIT) 1.2.4 2-phenylphenol (OPP) 1.3 Tng quan v cỏc k thut phõn tớch cỏc cht bo qun TCMTB, PCMC, OIT v OPP sn phm da thuc CHNG 2: THC NGHIM 13 2.1 i tng, mc tiờu v ni dung nghiờn cu 13 2.1.1 i tng v mc tiờu nghiờn cu 13 2.1.2 Ni dung nghiờn cu 13 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 13 2.2.2 Phng phỏp phõn tớch 14 2.2.3 Xỏc nhn giỏ tr s dng ca phng phỏp 14 2.2.4 Phõn tớch mu thc 16 2.3 Húa cht Thit b 16 2.3.1 Hoỏ cht 16 2.3.2 Thit b phõn tớch 16 2.3.3 Thit b ph tr 17 CHNG 3: KT QU V THO LUN 18 3.1 Xõy dng phng phỏp phõn tớch cht bo qun da bng thit b LCMS/MS 18 3.1.1 Kho sỏt iu kin ti u cho thit b sc ký lng ph 18 3.1.2 Kho sỏt cỏc iu kin ti u quỏ trỡnh chun b mu 32 3.1.2.1 Kho sỏt nh hng ca dung mụi chit 33 3.1.2.2 Kho sỏt nh hng ca s ln chit 34 3.1.2.3 Kho sỏt nh hng ca thi gian chit 35 3.2 Xỏc nhn giỏ tr s dng ca phng phỏp phõn tớch 38 3.2.1 chn lc 38 3.2.2 thu hi 39 3.2.3 chm 42 3.2.4 Gii hn phỏt hin (MDL) v gii hn nh lng ca phng phỏp (MQL) 46 3.2.5 Khong tuyn tớnh 47 3.3 ng dng phng phỏp phõn tớch nghiờn cu vo phõn tớch mt s sn phm da ang lu hnh trờn th trng Vit Nam 49 TI LIU THAM KHO 55 PH LC 57 PH LC 1: NG CHUN XC NH 04 CHT BO QUN BNG H THNG HPLC-MS/MS 58 PH LC 2: SC TIấU BIU HPLC-MS/MS CA 04 CHT BO QUN 61 PH LC 3: KT QU PHN TCH MT S MU DA TRấN TH TRNG 68 PH LC 4: QUY TRèNH PHN TCH CHT BO QUN BNG H HPLC MS/MS 75 DANH SCH CC T VIT TT Tờn y TT Tờn vit tt Atomic Absorption Spectrophotometric Association of Official Agricultural Chemists AAS AOAC Bureau Veritas Quality International BVQI Comitộ Europộen de Normalisation CEN Consumer Product Safety Improvement Act Diode Array Detector DAD Deutsches Institut fỹr Normung European Commission DIN EC European Economic Community EEC 10 Electron Spray Ionization ESI 11 Gas Chromatography GC 12 High Performance Capillary Electrophoresis HPCE 13 High Performance Liquid Chromatography HPLC 14 Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry 15 International Standard Organization 16 International Union of Pure and Applied Chemistry 17 Limit of Detector LOD 18 Limit of Quantitation LOQ 19 Method Detector Limit MDL 20 Method Quantification Limit MQL 21 Mass Spectrography 22 Organisation for Economic Co-operation and Development 23 2-octylisothiazol-3(2H)-one OIT 24 2-phenylphenol OPP 25 4-chloro-3-methylphenol 26 Registration Evaluation Authorization Restriction CPSIA ICP-MS ISO IUPAC MS OECD PCMC REACH 27 Recovery Standard Deviation RSD 28 Shoe and Allied Trades Research Association SATRA 29 Tiờu chun Vit Nam TCVN 30 Thin Layer Chromatography 31 2-(thiocyanomethylthio)-benzothiazole 32 Vn phũng Cụng nhn Cht lng TCL TCMTB BoA STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 DANH MC HèNH V Tờn hỡnh Hỡnh 1.1: S tng quỏt quy trỡnh cụng ngh thuc da Hỡnh 1.2: Cụng thc cu to ca TCMTB Hỡnh 1.3: Cụng thc cu to ca PCMC Hỡnh 1.4: Cụng thc cu to ca OIT Hỡnh 1.5: Cụng thc cu to ca OPP Hỡnh 2.1: H thng sc ký lng hiu nng cao kt hp u dũ ph kộp HPLC-MS/MS Hỡnh 3.1: Phõn tớch sc ký cỏc cht bo qun trờn ct Supelco C18 Hỡnh 3.2: Phõn tớch sc ký cỏc cht bo qun trờn ct Hypersil Gold aQ Hỡnh 3.3: Phõn tớch sc ký cỏc cht bo qun trờn ct Hypersil Gold PFP Hỡnh 3.4: Phõn tỏch cỏc chõt bo qun trờn ct Supelco C18 vi pha ng A-H2O (0,1% FA) v B-ACN Hỡnh 3.5: Phõn tỏch cỏc chõt bo qun trờn ct Supelco C18 vi pha ng A-H2O v B-MeOH Hỡnh 3.6: Phõn tỏch cỏc chõt bo qun trờn ct Supelco C18 vi pha ng A-H2O v B-ACN Hỡnh 3.7: Cỏc thụng s cn ti u húa cho u dũ ph kộp Hỡnh 3.8: Cỏc thụng s cn ti u húa cho u dũ ESI Hỡnh 3.9: Ph tiờu biu ca TCMTB quột ch Q1MS Hỡnh 3.10: Ti u húa detector MS-MS cho TCMTB Hỡnh 3.11: Ti u húa detector MS-MS cho OIT Hỡnh 3.12: Ph tiờu biu ca OPP Hỡnh 3.13: Ti u húa detector MS-MS cho PCMC Hỡnh 3.14: Thi gian lu ca tng cht bo qun Hỡnh 3.15: nh hng ca dung mụi chit n thu hi Hỡnh 3.16: nh hng ca s ln chit n thu hi Hỡnh 3.17: nh hng ca thi gian chit n thu hi Hỡnh 3.18: Quy trỡnh x lý mu da phõn tớch cỏc cht bo qun trờn HPLC-MS/MS Hỡnh 3.19: Sc ca mu da trng v mu thờm chun ca cht bo qun Hỡnh 3.20: Khong tuyn tớnh ca phng phỏp phõn tớch Hỡnh 3.21: ng chun ca PCMC khong nng 0,1 10,0 mg/L nn mu da blank Trang 7 8 16 19 19 20 21 22 22 23 24 26 27 29 30 31 32 34 35 36 37 39 48 48 DANH MC BNG, BIU STT Tờn bng Trang Bng 1.1: T l húa cht s dng thuc da truyn thng Bng 3.1: Cỏc thụng s cn thit lp cho ngun ion húa ESI 25 Bng 3.2: Tng hp mnh ph ca cỏc cht bo qun v nng lng bn phỏ ti u 31 Bng 3.3: ỳng khong thp phõn tớch cht bo qun 40 Bng 3.4: ỳng khong gia phõn tớch cht bo qun 41 Bng 3.5: ỳng khong cao phõn tớch cht bo qun 41 Bng 3.6: lp khong thp phõn tớch cht bo qun 43 Bng 3.7: lp khong gia phõn tớch cht bo qun 44 Bng 3.8: lp khong cao phõn tớch cht bo qun 44 10 Bng 3.9: lp li ca phng phỏp phõn tớch cht bo qun 45 11 Bng 3.10: Gii hn phỏt hin ca cỏc cht bo qun trờn thit b 46 12 Bng 3.11: Gii hn nh lng ca cỏc cht bo qun trờn thit b 47 13 Bng 3.12: Gii hn nh lng ca phng phỏp xỏc nh cht bo qun 47 14 Bng 3.13: Mu da thuc c phõn tớch xỏc nh cht bo qun 49 15 Bng 3.14: Kt qu phõn tớch cht bo qun mu da v sn phm da 51 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc M U Trong cuc sng hng ngy, dựng bng da (dõy lng, vớ da, giy, tỳi xỏch) l mt nhng vt khụng th thiu i vi mi ngiVi u im bn, p v phự hp vi mi la tui, mi ng cp, sn phm da ang ngy cng c a chung Mc sng ngy cng tng, nh sn xut cng nh ngi tiờu dựng khụng nhng ch quan tõm ti cht lng da m h cũn ũi hi s an ton mi sn phm ti sc khe ngi cỏc nc phỏt trin (M, EU) cỏc húa cht c hi sn phm da ó b cm hay gii hn di ngng an ton cũn Vit Nam, iu ny cha thc s c quan tõm Nguyờn nhõn ca s vic ny l khụng ch thu nhp ca ngi dõn nc ta cũn thp m cũn s hiu bit tỏc hi ca cỏc c cht (amin thm, PCP, kim loi nng) cũn hn ch Hin nay, ngnh cụng nghip Da Giy l ngnh cụng nghip xut khu th ba ca nc ta Sn phm da ca nc ta c th gii a chung bi cht lng tt v giỏ c thp hn cỏc nc khỏc Tuy nhiờn, hm lng cỏc húa cht c hi da thuc cũn cao, cha ỏp ng c yờu cu ca nhiu th trng trờn th gii, c bit l cỏc th trng ln v khú tớnh nh EU, M, Nht, Canada, õy chớnh l ro cn ln nht vic m rng th trng v nõng cao tớnh cnh tranh ca sn phm da nc ta phỏ v c ro cn ny ng thi xõy dng ngnh cụng nghip Da Giy tr thnh ngnh cụng nghip sch v bn vng, mt gii phỏp c t l xõy dng cỏc quy nh gii hn i vi cỏc cht c da buc cỏc doanh nghip phi ỏp dng Ngoi cỏc cht c hi nh Crom v Formandehyt, cỏc amin amin thm, PCP v cỏc kim loi nng (Cd, Pb, Ni), cht bo qun cng l cỏc cht nguy hi ti sc khe ngi Bờn cnh ú, s lng phũng th nghim ỏp ng c tiờu chun quc t cha nhiu Cỏc doanh nghip mun kim tra cht lng nguyờn liu hoc sn phm thng gi sn phm nc ngoi dn n tng giỏ thnh sn phm, gim sc cnh tranh ca sn phm Nhm mc ớch nõng cao cht lng phũng th nghim lnh vc da giy, nõng cao sc cnh tranh ca cỏc phũng th nghim nc so vi nc ngoi; ng thi nõng cao cht lng ngun nhõn lc cng nh to thờm ngun nhõn lc cho phũng th nghim Lun Thc s Lờ Th Bng Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 1.81E6 TIC F: + c ESI SRM ms2 214.100 [101.600102.600] MS Spike5CBQ_5pp m_5ul RT: 5.20 MA: 76815258 SN: 4113 RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 5, mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 1.46 2.57 3.67 10.81 10 12.26 11 13.65 12 13 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 2.94E6 TIC F: + c ESI SRM ms2 214.100 [101.600102.600] MS Spike5CBQ_8pp m_2,5ul RT: 5.27 MA: 126248330 SN: 2633 RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 8,0 mg/L Relative Abundance 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.14 0.91 1.81 2.64 3.33 11.16 10 12.20 11 13.93 14.34 12 13 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 2.95E6 TIC F: + c ESI SRM ms2 214.100 [101.600-102.600] MS Spike5CBQ_10pp m_2,5ul RT: 5.27 MA: 126322887 SN: 2899 RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 10,0 mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.63 2.08 2.78 3.54 12.26 10 11 14.62 12 13 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.01 SM: 15G NL: 4.05E4 TIC F: + c ESI SRM ms2 238.800 [179.400180.400] MS Spike5CBQ_100p pb_5ul RT: 6.06 MA: 1721704 SN: 174 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 0,1 mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 TCMTB 1.56 2.32 2.74 9.11 3.57 10.01 11.40 10 13.27 12.37 11 12 14.72 13 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 9.75E4 TIC F: + c ESI SRM m s 238.800 [179.400180.400] MS Spike5CBQ_1pp m _5ul RT: 6.06 MA: 4135962 SN: 366 RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 1,0 mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.59 1.98 9.04 4.68 3.71 11.40 10 11 12.23 12 12.99 13.96 13 14 15 Tim e (m in) Lun Thc s Lờ Th Bng 66 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 3.34E5 TIC F: + c ESI SRM ms2 238.800 [179.400180.400] MS Spike5CBQ_2pp m_5ul RT: 6.06 MA: 14387862 SN: 366RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 2,0 mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.39 1.22 2.12 3.57 10.36 4.47 10 11.40 12.37 11 13.20 12 13.75 13 14.65 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 6.31E5 TIC F: + c ESI SRM ms2 238.800 [179.400180.400] MS Spike5CBQ_5pp m_5ul RT: 6.06 MA: 26222637 SN: 382 RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 5,0 mg/L Relative Abundance 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.52 1.84 2.46 11.19 3.78 10 13.20 11 12 14.58 13 14 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 7.12E5 TIC F: + c ESI SRM ms2 238.800 [179.400180.400] MS Spike5CBQ_8pp m_2,5ul RT: 6.07 MA: 30311920 SN: 386RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 8,0 mg/L Relative Abundance 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.87 2.46 11.68 3.85 10 11 12.51 12 14.17 13 14 14.86 15 Time (min) RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 1.07E6 TIC F: + c ESI SRM ms2 238.800 [179.400-180.400] MS Spike5CBQ_10pp m_2,5ul RT: 6.14 MA: 46540454 SN: 298RMS 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 10,0 mg/L 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0.66 1.70 4.54 10 11 11.88 12.85 12 13 13.75 14 14.86 15 Time (min) Lun Thc s Lờ Th Bng 67 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc PH LC 3: KT QU PHN TCH MT S MU DA TRấN TH TRNG Lun Thc s Lờ Th Bng 68 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc Mu da 1: Mau da 1_5ul 04-Aug-15 2:15:00 PM RT: 0.00 - 10.03 SM: 15G NL: 6.55 TIC MS Mau da 1_5ul 100 95 3.16 Relative Abundance 90 85 0.51 2.00 0.73 2.07 2.69 2.72 2.10 3.71 3.50 0.96 80 3.99 5.87 4.45 1.86 4.66 5.25 4.87 0.30 75 6.15 1.48 6.55 7.12 6.60 7.33 7.36 7.87 8.71 8.35 8.02 9.27 9.82 9.34 9.89 70 65 60 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 Tim e (m in) 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 Mau da 1_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 7.87 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 Mu da 2: E:\de tai chat bao quan 2014\thu\thu 04-Aug-15 2:15:00 PM RT: 0.00 - 10.03 100 2.64 90 0.35 0.49 0.77 0.91 80 3.12 1.46 1.81 2.01 NL: 1.02E1 TIC MS thu 3.19 2.91 3.54 0.97 1.25 3.68 2.57 4.23 3.88 4.51 4.92 4.78 5.20 5.89 5.34 5.41 5.75 5.96 6.24 6.52 6.86 7.14 7.55 7.90 8.39 8.59 8.80 9.42 9.29 9.91 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 Tim e (m in) 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 thu #1 RT: 0.00 AV: NL: 7.87 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 Mu da 3: Mau da 3_5ul 12-Aug-15 2:39:27 PM RT: 0.00 - 15.02 100 90 SM: 15G 1.10 0.52 NL: 2.17E1 TIC MS Mau da 3_5ul 1.20 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 2.24 1.62 2.83 3.31 3.80 4.33 4.89 5.70 5.94 6.06 6.27 6.53 7.36 7.73 8.37 9.25 8.61 9.93 10 10.57 10.76 11 11.33 12.52 12.11 12 12.83 13 13.75 14.57 14 14.79 15 Tim e (m in) Mau da 3_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 8.33 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 102.40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 69 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc Mu da 4: MAU DA 4_5ul 20-Aug-15 11:51:44 AM RT: 0.00 - 15.01 SM: 15G 4.76 95 90 10.77 85 2.60 2.84 5.35 4.49 1.58 7.02 5.77 70 13.18 8.42 7.67 75 11.86 5.15 65 0.99 1.30 13.56 10.50 9.60 3.52 2.31 0.54 60 13.06 7.24 4.26 80 Relative Abundance NL: 1.59E1 TIC MS MAU DA 4_5ul 3.09 100 9.02 1.96 3.62 55 10.22 8.25 3.80 50 14.65 6.05 6.27 45 13.98 12.42 8.76 14.15 11.41 40 35 30 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) MAU DA 4_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 9.08 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.81 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 102.49 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 Mu da 5: Mauda5_5ul 04-Oct-15 5:43:26 PM RT: 0.00 - 15.02 0.25 100 SM: 15G NL: 1.15E1 TIC MS Mauda5_5 ul 95 90 1.63 Relative Abundance 85 80 75 4.28 3.57 12.09 6.46 4.59 65 1.27 0.47 2.05 2.53 5.34 2.96 14.31 11.59 7.64 8.00 6.29 3.85 0.94 60 10.22 8.97 5.11 70 6.96 5.93 13.96 12.57 8.57 7.38 9.46 9.67 10.98 55 13.49 12.87 14.79 10.76 50 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) Mauda5_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 7.03 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.69 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 102.45 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 Mu da 6: Mau da 3_5ul 12-Aug-15 2:39:27 PM RT: 0.00 - 15.02 0.52 100 NL: 8.82E1 TIC MS Mau da 3_5ul 1.08 90 80 Relative Abundance 70 1.22 60 50 1.29 0.73 40 0.39 30 1.36 20 2.22 1.60 10 2.36 2.84 3.54 3.81 4.30 4.51 5.61 5.68 6.17 6.51 7.21 7.35 8.38 7.55 9.29 8.59 9.35 9.91 10.46 11.36 12.12 12.54 13.51 13.79 14.20 14.83 0 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) Mau da 3_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 8.33 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 102.40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 70 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc Mu da Mauda6_5ul 04-Oct-15 5:59:24 PM RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 1.38E1 TIC MS Mauda6_5 ul 13.80 100 95 90 Relative Abundance 85 80 75 1.49 1.79 70 5.30 65 5.86 8.26 10.43 6.06 60 0.11 55 0.54 50 11.26 11.54 0.85 2.03 2.41 1.20 9.54 2.88 3.02 45 4.38 3.93 8.54 8.82 7.43 5.01 3.78 9.65 13.27 10.22 14.22 12.21 7.57 6.77 7.15 13.54 12.64 11.86 10.62 14.91 40 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) Mauda6_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 8.27 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.69 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 Mu da 8: RT: 0.00 - 3.72 SM: 15G NL: 6.64 TIC MS thu_15080 4144845 100 99 98 97 96 95 94 93 92 91 90 89 88 87 86 Relative Abundance 85 84 83 82 0.47 81 0.51 80 79 2.39 78 2.96 77 3.00 3.07 2.51 0.89 76 0.92 1.72 1.01 1.23 75 1.27 1.75 1.49 3.34 3.24 2.58 2.65 1.85 2.13 3.59 74 73 72 71 70 69 68 67 66 65 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 Tim e (m in) 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 Mu da 9: Mau da9_5ul RT: 0.00 - 15.02 04-Oct-15 3:38:46 PM SM: 15G NL: 1.17E1 TIC MS Mau da9_5ul 2.19 100 2.60 95 90 Relative Abundance 85 10.51 4.75 80 12.64 10.62 4.61 12.37 9.70 75 11.76 9.34 11.28 70 2.01 1.65 60 5.41 5.67 3.74 3.05 6.20 6.53 3.57 7.14 7.67 8.26 13.75 8.68 14.67 10.01 8.97 6.79 4.40 0.58 1.11 0.23 55 14.31 13.42 1.29 65 4.25 50 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) Mau da9_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 6.95 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.69 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 102.45 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 71 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc 10 Mu da 10 Mauda_10 02-Nov-15 4:47:46 PM RT: 0.00 - 15.01 SM: 15G NL: 7.89 TIC MS Mauda_10 9.80 100 95 Relative Abundance 90 85 80 75 4.80 70 8.23 7.64 1.61 0.61 65 1.30 2.13 2.34 2.86 3.57 5.11 4.25 3.78 6.89 5.73 7.47 8.47 6.20 8.90 8.95 9.32 10.51 10.62 11.14 11.24 11.72 12.52 13.20 13.73 14.17 14.70 60 55 10 11 12 13 14 15 Tim e (m in) Mauda_10 #1 RT: 0.01 AV: NL: 5.96 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.68 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 102.38 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 11 Mu da 11 Mauda11_5ul RT: 0.00 - 15.01 21-Dec-15 12:52:44 PM SM: 15G NL: 1.09E6 TIC MS Mauda11_ 5ul 5.21 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 3.54 0.44 0.78 1.27 1.98 2.31 2.65 7.08 3.08 7.29 7.71 8.12 8.61 8.83 9.30 9.58 10.15 10 10.41 11.03 11 12.07 12.42 12 13.04 13 13.52 13.80 14 14.56 15 Tim e (m in) Mauda11_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 7.22 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 12 Mu da 12 Mauda12_5ul RT: 0.00 - 15.02 21-Dec-15 11:11:18 AM SM: 15G NL: 2.60E5 TIC MS Mauda12_ 5ul 5.22 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 3.52 10 0.30 1.25 0.75 1.87 2.51 4.49 3.07 6.81 7.22 7.50 8.12 8.40 8.96 9.20 9.73 10.20 10 11.03 11 11.38 11.86 12.59 12.90 12 13 13.87 14 14.46 14.88 15 Tim e (m in) Mauda12_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 8.28 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.70 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 72 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc 13 Mu da 13 Mauda13_5ul 21-Dec-15 1:24:29 PM RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 3.21E5 TIC MS Mauda13_ 5ul 5.22 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 3.54 10 0.64 0.85 1.48 2.03 2.39 2.58 4.51 3.07 7.02 7.36 7.78 7.99 8.51 8.90 9.51 10.20 10.62 10 11.31 11.59 11 12.45 12 13.32 13.67 13 14.15 14.43 14 15 Tim e (m in) Mauda13_5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 5.61E3 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 102.00 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 14 Mu da 14 Mauda14_2,5ul 21-Dec-15 2:28:17 PM RT: 0.00 - 15.01 SM: 15G NL: 7.49E3 TIC MS Mauda14_ 2,5ul 5.22 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 3.54 6.08 30 1.23 0.65 20 2.24 1.56 2.38 3.97 3.21 6.39 4.18 6.67 7.29 7.78 8.40 8.89 9.37 9.99 10.20 10 10.83 11.17 11 11.76 13.25 12.42 12.76 12 13 14.10 14.37 14 15 Tim e (m in) Mauda14_2,5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 3.14E3 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 101.99 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 15 Mu da 15 Mauda15_2,5ul 21-Dec-15 2:44:17 PM RT: 0.00 - 15.02 SM: 15G NL: 3.96E4 TIC MS Mauda15_ 2,5ul 5.22 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 3.54 30 20 5.98 10 0.65 0.92 1.68 2.24 2.65 4.51 3.14 6.88 7.50 7.80 8.42 8.89 9.09 10.00 10 10.76 11 11.31 11.86 12.49 12 12.99 13 13.60 14.01 14.50 14 15 Tim e (m in) Mauda15_2,5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 2.20E3 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 102.00 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 73 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc 16 Mu da 16 Mauda16_2,5ul RT: 0.00 - 15.02 21-Dec-15 3:00:07 PM SM: 15G NL: 6.07E4 TIC MS Mauda16_ 2,5ul 5.22 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 6.05 20 3.54 10 1.25 1.61 0.16 0.44 4.59 2.45 2.64 7.09 7.36 7.80 8.49 9.23 9.44 10.06 10.55 10.96 10 11 11.66 11.93 12.28 12.77 12 13 13.60 14.08 14 14.70 15 Tim e (m in) Mauda16_2,5ul #1 RT: 0.00 AV: NL: 1.14E3 T: + c ESI SRM m s 214.100 [101.600-102.600] 102.05 100 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m /z 102.2 102.3 102.4 102.5 QC 5ppm QC_5ppm_5ul_151221151557 21-Dec-15 3:15:57 PM RT: 0.00 - 14.98 SM: 15G NL: 4.89E3 Total Scan PDA QC_5ppm _5ul_1512 21151557 5.97 4500 1.22 4000 3500 3000 2500 uAU 2000 6.87 1500 5.12 1000 1.09 500 0.07 2.46 1.75 1.91 0.88 2.90 4.39 3.39 -500 -1000 -1500 -2000 10 11 12 13 14 Time (min) QC_5ppm_5ul_151221151557 #1 RT: 0.01 AV: NL: 1.08E3 T: + c ESI SRM ms2 214.100 [101.600-102.600] 102.01 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 101.6 101.7 101.8 101.9 102.0 102.1 m/z Lun Thc s 102.2 102.3 102.4 102.5 Lờ Th Bng 74 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc PH LC 4: QUY TRèNH PHN TCH CHT BO QUN BNG H HPLC MS/MS Lun Thc s Lờ Th Bng 75 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc PHM VI NG DNG Hng dn ny quy nh phng phỏp xỏc nh cỏc cht bo qun ó bit mu da Gii hn nh lng ca phng phỏp i vi cỏc cht bo qun khong 1,0 2,0 mg/kg tựy thuc tng cht TI LIU VIN DN - TCVN 9555:2013 (ISO 13365:2011) - Da - Phộp th hoỏ xỏc nh hm lng cht bo qun (TCMTB, PCMC, OPP, OIT) cú da bng sc ký lng - TCVN 7117:2007 (ISO 2418:2002) Da Phộp th húa lý, c lý v bn mu V trớ ly mu - TCVN 7126: 2010 (ISO 4044: 2008) - Da - Chun b mu th húa - ISO 4684:2005, Leather Chemical test Determination of volatile matter (Da Phộp th húa hc Xỏc nh cht bay hi NGUYấN TC PHNG PHP Sau loi du, m v cỏc cht chng thm bng n-hexan, mu da c chit bng dung mụi thớch hp s dng súng siờu õm Dch chit sau lc c phõn tớch bng thit b sc ký lng u dũ ph kộp HPLC/MS-MS Bng Danh sỏch cht chun cht bo qun Tờn vit tt S CAS STT Tờn cht bo qun 2-(thiocyanomethylthio)-benzothiazole TCMTB 21564-17-0 2-octylisothiazol-3(2H)-one OIT 26530-20-1 2-phenylphenol OPP 90-43-7 4-chloro-3-methylphenol PCMC 59-50-7 THIT B V HO CHT 4.1 Thit b, dng c 4.1.1 Thit b phõn tớch: - Sc ký lng hiu nng cao ghộp ni u dũ ph kộp: HPLC/MS-MS Thermo TSQ Quantum Access Max 4.1.2 B siờu õm cú iu chnh nhit: Elmasonic S300H, tn s 37 kHz 4.1.3 Mng lc mu: 0,45àm 4.1.4 Cõn phõn tớch, cõn chớnh xỏc n 0,0001mg 4.1.5 Dng c thy tinh - Pipet 1ml, 2ml, 5ml, 10ml, 25ml Lun Thc s Lờ Th Bng 76 Trng i hc Khoa hc T nhiờn - Bỡnh nh mc vi cỏc th tớch khỏc - Bỡnh phn ng bng thy tinh chu nhit, kớn khớ Khoa Húa hc 4.2 Dung mụi v hoỏ cht 4.2.1 Dung mụi - Metanol HPLC grade - n-hexan HPLC grade - Acetonitrile HPLC grade - Nc ct hai ln deion 4.2.2 Hoỏ cht - Hoỏ cht chun ca cht bo qun (Bng 1) LY MU V CHUN B MU Nu cú th ly mu th phự hp vi TCVN 7117 v nghin da theo TCVN 7126: 2002 Nu khụng ly mu theo TCVN 7117 (vớ d nh da ly t sn phm ó hon thin nh giy ng, qun ỏo) thỡ chi tit ca quỏ trỡnh ly mu phi c ghi bỏo cỏo th nghim i vi quỏ trỡnh phõn tớch, mt mu i din gm 1,0 g ( 0,10 g) da ó nghin c cõn chớnh xỏc cho vo bỡnh phn ng CCH TIN HNH 6.1 Loi cht bộo Cõn 1,0 g mu da (chớnh xỏc n 0,10 g) ó nghin vo bỡnh kớn 50 ml, thờm 20 ml n-hexan v siờu õm 400C 20 phỳt Lp n-hexan sau ú c gn mu da Mu da c x lý nh trờn vi hai ln 20 ml n-hexan Sau gn b dung mụi n-hexan, mu da c loi b hon ton n-hexan bng cỏch bay hi t nhiờn n khụ bỡnh m 6.2 Chun b dung dch phõn tớch Dựng pipet ly 20 ml axetonitril cho vo mu da trờn Chit mu da b siờu õm gi phỳt (80% cụng sut siờu õm) nhit phũng Trong quỏ trỡnh chit, nhit hn hp tng n khong 35C Sau ú, lc mt phn dch chit qua mng lc vo vial thớch hp Lun Thc s Lờ Th Bng 77 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc Dch lc c phõn tớch bng phng phỏp HPLC-MS/MS v nh lng cht bo qun phỏt hin c 6.3 Xõy dng ng chun ng chun c dng khong nng 0,05 -10 mg/L nh sau Cõn 06 mu da trng vi lng 1,0 g ( 0,01 g) vo 06 bỡnh thu tinh 50 ml Tin hnh loi m theo bc 6.1 Dựng pipet ly chớnh xỏc mt lng axetonitril v hn hp chun theo bng 2, cho tng th tớch dung dch chit l 20 ml vo mu da trờn Chit mu da b siờu õm gi phỳt nhit phũng Tin hnh x lý mu theo cỏc bc t 6.2 Phõn tớch dung dch mu cui cựng trờn HPLC/DAD v HPLC-MS/MS Cỏc cht bo qun c xỏc nh da trờn thi gian lu ng chun c xõy dng da trờn tng quan gia din tớch pic v hm lng ca cỏc cht bo qun Bng ng chun xõy dng trờn mu da trng im chun Dung dch chun hn hp 100 mg/L 100 mg/L 100 mg/L Lng thờm chun 100 àL 200 àL 400 àL Lng cõn mu da 1,0 g 1,0 g 1,0 g Nng cht bo qun mu da blank 0,5 mg/L mg/L mg/L 100 mg/L 1000 àL 1,0 g mg/L 100 mg/L 100 mg/L iu kin sc ký 1600 àL 2000 àL 1,0 g 1,0 g mg/L 10 mg/L 6.4 Cỏc thụng s ca thit b phõn tớch c thit lp nh Bng 3: Bng 3: Thụng s thit lp cho thit b phõn tớch Dung mụi gii 1: Axetonitril Dung mụi gii 2: H2 O Ct sc ký: Supelco C18 150mm x 2,1mm, 3àm Nhit lũ ct : 300C Tc dũng: 0,25 ml/phỳt ng dũng 60% dung mụi gii 1, 40% dung mụi gii Th tớch bm mu: àl Lun Thc s Lờ Th Bng 78 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc Ngun ion hoỏ: spray voltage=4500V, sheath Thit lp thụng s cho detector gas=45 psi, auxillary gas=5 psi, capillary hai ln ph MS/MS: temp=2700C, vaporized temp=2500C, skimmer offset=-10V, tube lens offset=90V Ion m Ion Nng TT Tờn cht (m/z) (m/z) lng (V) 4-chloro-3-methylphenol 140,69 2-phenylphenol 168,83 140,9 25 2-octylisothiazol-3(2H)-one 214,02 101,9 14 2-(thiocyanomethylthio)-benzothiazole 238,8 179,9 11 Trong trng hp hm lng cht bo qun mu vt quỏ 10 mg/L, dung dch mu s c pha loóng thớch hp axetonitril phõn tớch TNH TON Tớnh toỏn phn lng, wi, ca tt c cỏc cht bo qun cú da phỏt hin c, tớnh bng miligam trờn kilụgam (mg/kg), theo cụng thc sau: wi V F m Trong ú: wi l phn lng ca cht bo qun cú da, tớnh bng miligam trờn kilụgam (mg/kg); l nng lng ca cht bo qun thu c t ng chun, tớnh bng miligam trờn lớt (mg/l); V l th tớch dch chit, tớnh bng mililớt (ml); F l h s pha loóng; m l lng ca mu c cõn, tớnh bng gam (g); Phn lng ca mi cht bo qun c lm trũn n 0,1 mg, tớnh bng miligam trờn kilụgam (mg/kg) BO CC TH NGHIM Bỏo cỏo kt qu cn cú cỏc thụng tin sau: a) Vin dn tiờu chun TCVN 9555:2013/ISO 13365:2011; Lun Thc s Lờ Th Bng 79 Trng i hc Khoa hc T nhiờn Khoa Húa hc b) Loi, ngun gc v mụ t v mu phõn tớch hoc mt phn ca mu; c) Bt k sai lch no so vi quy trỡnh phõn tớch, cỏc bc tin hnh c bit thờm vo; d) Loi b phỏt hin sc ký lng; Kt qu phõn tớch ca mi phn lng cht bo qun c lm trũn n mt s thp phõn, tớnh bng miligam trờn kilụgam (mg/kg) Lun Thc s Lờ Th Bng 80 [...]... học Tự nhiên Khoa Hóa học Do đó, việc thực hiện đề tài: Nghiên cứu xây dựng và ứng dụng quy trình phân tích đồng thời một số chất bảo quản trong các sản phẩm da bằng phương pháp LC/ MS/ MS”có ý nghĩa quan trọng nhằm cung cấp phƣơng pháp xác định các chất bảo quản trong sản phẩm da giầy và ứng dụng quy trình xác định trên vào phân tích một số mẫu da đang lƣu hành trên thị trƣờng Việt Nam Luận văn Thạc... các chất bảo quản nói trên trong sản phẩm da lƣu hành trên thị trƣờng Việt Nam và bảo vệ sức khỏe ngƣời tiêu dùng Tuy nhiên, cho đến nay chƣa có phƣơng pháp phân tích xác định đồng thời nhiều chất bảo quản hay thực hiện phân tích trên theo kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp đầu dò khối phổ kép (HPLC -MS/ MS) Phƣơng pháp phân tích sử dụng kỹ thuật HPLC – MS/ MS là một phƣơng pháp phân tích hiện... 2.2.4 Phân tích mẫu thực Trên cơ sở đã tối ƣu hóa phƣơng pháp, tiến hành ứng dụng phƣơng pháp phân tích để xác định hàm lƣợng chất bảo quản trên một số mẫu da lƣu thông trên thị trƣờng 2.3 Hóa chất – Thiết bị 2.3.1 Hoá chất - Chất chuẩn: Chất chuẩn 4 chất bảo quản: chuẩn phân tích của hãng Accustandard.Inc, bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 4 0C - Dung môi và hoá chất phụ trợ: - Metanol – HPLC grade... kép (LC- MS/ MS) Ứng dụng quy trình xây dựng để phân tích hàm lƣợng các chất bảo quản nói trên có trong các mẫu da và sản phẩm da lƣu hành trên thị trƣờng Việt Nam 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Để đạt đƣợc những mục tiêu đã đề ra, chúng tôi tiến hành nghiên cứu các vấn đề sau:  Xây dựng phƣơng pháp  Khảo sát, tối ƣu hóa phƣơng pháp gồm có: - Tối ƣu hóa cho thiết bị sắc ký lỏng khối phổ - Tối ƣu hóa quy trình. .. sử dụng của phƣơng pháp: - Độ chọn lọc - Độ chụm - Độ thu hồi - Giới hạn phát hiện - Khoảng tuyến tính, đƣờng chuẩn  Ứng dụng phƣơng pháp Ứng dụng phƣơng pháp xây dựng để xác định hàm lƣợng 4 chất bảo quản (TCMTB, OIT, OPP, PCMC) có trong các da và các sản phẩm da trên thị trƣờng 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp xử lý mẫu 2.2.1.1 Lựa chọn dung môi chiết Theo tính chất của các chất bảo quản. .. ngành thuộc da và chất bảo quản sử dụng trong ngành Thuộc da là quá trình biến đổi protit của da động vật sang dạng bền vững để sử dụng (biến đổi da sống thành da thuộc) Nguyên liệu chính cho quá trình thuộc da là da động vật (da tƣơi hoặc da đã đƣợc bảo quản ), các loại hóa chất nhƣ crôm, vôi, tanin, dầu mỡ khoáng, phẩm nhuộm, axit, kiềm, muối và các chất tẩy rửa, enzym… Quá trình sản xuất da phải thực... các chất bảo quản nói trên trong mẫu thử nghiệm Luận văn Thạc sỹ Lê Thị Băng 12   Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Khoa Hóa học CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tƣợng, mục tiêu và nội dung nghiên cứu 2.1.1 Đối tƣợng và mục tiêu nghiên cứu Trong luận văn này, chúng tôi tập trung vào nghiên cứu quy trình xác định đồng thời 4 chất bảo quản (TCMTB, OIT, OPP, PCMC) có trong sản phẩm da giầy bằng phƣơng pháp. .. các chất bảo quản có thể phát thải từ các sản phẩm da [] Tác giả J.Font, M.Reyes, S.Cuadros, A Bacardit và A.Marsal của Khoa Công nghệ Hóa học và Hoạt chất bề mặt (Tây Ban Nha) đã công bố công trình nghiên cứu: Nghiên cứu các định TCMTB và các chất diệt nấm khác trong da Nghiên cứu này dựa trên tiêu chuẩn ISO 13365, tuy nhiên thiết bị HPLC đƣợc tối ƣu hóa để có thể phân tích đồng thời TCMTB và chất. .. của phƣơng pháp cho thấy đây là một phƣơng pháp nhanh chóng và có độ tin cậy cao [15] Luận văn Thạc sỹ Lê Thị Băng 10   Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Khoa Hóa học Bên cạnh đó, một nghiên cứu của Phòng thí nghiệm vật liệu – Hoa Kỳ dã nghiên cứu quy trình xác định OPP trong da Tuy nhiên, quy trình này mất nhiều thời gian chiết OPP trong da bằng dietyl ete trong 16 giờ và phân tích bằng GC -MS Ngoài... thuộc da sử dụng đến 300 loại hoá chất khác nhau tuỳ theo yêu cầu chất lƣợng của sản phẩm và các quy trình công nghệ thuộc da đƣợc áp dụng[ 12] Hoá chất thông dụng gồm chất vô cơ (natri sunfit, canxi hydroxit, axit, muối cacbonat, sulfit và sulfat…) và các chất hữu cơ (axit, muối…) Ngoài ra, một số hoá chất phụ trợ cũng đƣợc dùng trong quá trình thuộc da [23] Tỷ lệ các loại hoá chất sử dụng trong thuộc da