Khảo sát thành phần hóa học của loài nấm cordyceps neovolkia

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC BỘ MÔN HÓA HỌC HỮU CƠ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LOÀI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA GVHD: Th.S Lê Thị Thu Hương Th.S Dương Thúc Huy SVTH : Huỳnh Thị Thuận Vy MSSV : K38.106.161 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC BỘ MÔN HÓA HỌC HỮU CƠ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LOÀI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA GVHD: Th.S Lê Thị Thu Hương Th.S Dương Thúc Huy SVTH: Huỳnh Thị Thuận Vy MSSV: K38.106.161 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 NHẬN XÉT CỦA HỘI ĐỒNG ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… LỜI CẢM ƠN  Với tất trân trọng lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến với: • Cô Lê Thị Thu Hương Thầy Dương Thúc Huy theo sát, nhiệt tình giảng dạy, hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ động viên trình làm khóa luận tốt nghiệp • Tất quý thầy cô Khoa Hóa, đặc biệt quý thầy cô Bộ môn Hóa Hữu tận tình truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian qua hoàn thành khóa luận • Các anh chị học viên cao học bạn sinh viên môn Hóa hữu cơ, khoa Hóa học Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh động viên, giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài • Và cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, đặc biệt ba mẹ tạo điều kiện tốt suốt thời gian theo học thực đề tài Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT iii DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC v LỜI MỞ ĐẦU vi CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.KHÁI QUÁT VỀ CHI CORDYCEPS 1.2 HOẠT TÍNH CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG CHI CORDYCEPS 1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA CHI CORDYCEPS CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT, THIẾT BỊ 2.1.1 Hóa chất 2.1.2 Thiết bị 2.2 NGUYÊN LIỆU 2.3 QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM 2.3.1 Cô lập hợp chất phân đoạn A3 10 2.4.2 Cô lập hợp chất phân đoạn A6 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 12 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT SO1 12 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT L1 14 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 17 4.1 KẾT LUẬN 17 4.2 ĐỀ XUẤT 17 TÀI LIỆU THAM KHẢO 18 PHỤ LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT AcOH Acetic acid Ac Acetone C Chloroform 13 C-NMR Carbon Nuclear Magnetic Resonance d Doublet (mũi đôi) dd Doublet of doublet (mũi đôi đôi) DMSO Dimethyl sulfoxide EA Ethyl acetate Et Ethanol J Coupling constant (hằng số ghép spin) g gam H Hexane H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Hz Hertz kg kilogam ppm Part per million Me Methanol mg miligam s Singlet (mũi đơn) SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng t Triplet (mũi ba) UV Ultra violet (Tia cực tím) W Water δ Chemical shift (độ dịch chuyển hóa học) iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU  HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Đông trùng hạ thảo Hình 1.2 Polysaccharide xác định Yu cộng 2009 Hình 1.3 Các hợp chất cô lập từ Cordyceps sinensis 5,6,7 Hình 3.1 Công thức cộng hưởng SO1 12 Hình 3.2 Công thức cấu tạo SO1 13 Hình 3.3 Cấu trúc đường vòng năm L1 15 Hình 3.4 Công thức cấu tạo L1 15 Hình 4.1 Hai hợp chất cô lập từ cao ethanol mẫu nấm Cordyceps 17  SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quá trình ly trích cô lập từ cao ethanol mẫu nấm Cordyceps sinensis 11  BẢNG BIỂU Bảng 2.2 Các phân đoạn cao methanol thô Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất SO1 Uracil 13 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất L1 Adenosine 16 iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PHỔ Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR SO1 dung môi DMSO-d Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR SO1 dung môi DMSO-d Phụ lục 3: Phổ 1H-NMR L1 dung môi DMSO-d Phụ lục 4: Phổ 13C-NMR L1 dung môi DMSO-d v LỜI MỞ ĐẦU  Từ xa xưa, người biết sử dụng cỏ để làm thuốc chữa bệnh, từ tìm nhiều phương thuốc chữa số bệnh nan y ung thư, sốt rét, Ngày nay, ngành hóa học hợp chất tự nhiên kết hợp với ngành y dược học, sinh học không ngừng nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học dược thảo có phương thuốc cổ truyền để ứng dụng vào việc chữa bệnh Thành phần hóa học chi Cordyceps tìm thấy gồm có cordycepin (30deoxyadenosin) dẫn xuất, ergosterol, polysaccharide, glycoprotein peptide có chứa thành phần aminoisobutyric acid Các hợp chất có hoạt tính sinh học kháng ung thư, kháng đột biến (anti-metastatic), ức chế miễn dịch (immunomodulatory), kháng oxy hóa, kháng viêm, diệt sâu bọ (insecticidal), kháng khuẩn, hạ lipit máu, hạ đường huyết, chống lão hóa, bảo vệ hệ thần kinh thận Những nghiên cứu gần cho biết polysaccharide diện Cordyceps thể đa dạng hoạt tính sinh học : chống oxy hóa, miễn dịch, chống xơ vữa động mạch, nucleoside mang đa tác dụng macrophage cordycepin có hoạt tính ức chế phát triển khối u miễn dịch Vì thế, loài nấm thu hút nhiều nhà nghiên cứu năm gần dựa giá trị dinh dưỡng dược học Trong đề tài này, tiến hành khảo sát thành phần hóa học Cordyceps neovolkiana với mong muốn đóng góp vào việc nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tìm hợp chất có hoạt tính sinh học góp phần nâng cao giá trị dược thảo Việt Nam vi Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 KHÁI QUÁT VỀ CHI CORDYCEPS Các loài nấm thuộc chi Cordyceps gồm có C sinensis, C militaris, C pruinosa C ophioglossoides nguồn nguyên liệu quý dược học Thành phần dược liệu loài nấm khô thuộc chi Cordyceps phát triển ấu trùng Trong đó, phổ biến loài nấm Cordyceps sinensis, gọi với tên Đông trùng hạ thảo (Tiếng Trung Quốc, Dong-Chong-Xia-Cao Tochukaso, tiếng Hình 1.1 Đông trùng hạ thảo hay Nhật) Đông trùng hạ thảo dạng cộng sinh loài nấm túi có tên khoa học “Cordyceps sinensis” (Berk.) Sacc với sâu non (ấu trùng) loài côn trùng thuộc chi Hepialus Thường gặp sâu non loài Hepialus armoricanus Ngoài 40 loài khác thuộc chi Hepialus bị Cordyceps sinensis ký sinh Tên gọi bắt nguồn từ thay đổi theo mùa Vào mùa đông nấm bắt đầu ký sinh vào sâu non làm chết sâu non ăn hết chất dinh dưỡng chúng nên gọi đông trùng Mùa hè vươn lên khỏi mặt đất Đầu nấm thể đệm (stroma) hình trụ thuôn nhọn nên gọi hạ thảo Chỉ phát Đông trùng hạ thảo vào mùa hè số cao nguyên cao mặt biển từ 3500 đến 5000 m Đó vùng Tây Tạng, Tứ Xuyên, Thanh Hi, Cam Túc, Vân Nam Ở Trung Quốc, vị thuốc có nguồn gốc hàng ngàn năm.[23] Trong y học cổ truyền Trung Hoa Tây Tạng, Đông trùng hạ thảo xem có cân tuyệt vời âm dương, vừa thực vật vừa động vật, hình thành vào mùa đông trưởng thành vào mùa hạ Cho nên Đông trùng hạ thảo xem vị thuốc quý, chữa “bách hư bách tổn” Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT SO1 Hợp chất SO1 thu từ phân đoạn A3.5 cao ethanol với đặc điểm sau:  Trạng thái: Chất lỏng không màu  Bắt UV, vết không màu hình vanillin/H SO  Phổ 1H-NMR (DMSO-d ): Phụ lục  Phổ 13C-NMR (DMSO-d ): Phụ lục Biện luận cấu trúc SO1 Phổ 1H-NMR cho thấy diện bốn tín hiệu δ H 10.93 (1H, s), δ H 10.78 (1H, s), δ H 7.36 (2H, dd, J = 9.0 Hz, J = 6.0 Hz), δ H 5.43 (2H, d, J = 7.5 Hz) Hai tín hiệu proton nhân thơm cộng hưởng δ H 7.36, δ H 5.43 ghép cặp với Proton H-6 (δ H 7.36) chuyển dịch vùng từ trường thấp nên chịu ảnh hưởng nhóm âm điện hay liên kết trực tiếp với nitrogen Mặc khác, phổ 13C-NMR cho thấy xuất bốn tín hiệu carbon sp2, có hai tín hiệu carbon tứ cấp C-2 (δ C 152.0), C-4 (δ C 164.8) hai tín hiệu carbon methine C-5 (δ C 100.7), C-6 (δ C 142.7) Tín hiệu C-6 (δ C 142.7) dịch vùng từ trường thấp giúp xác định vị trí cấu trúc SO1 Từ liệu phổ so sánh với liệu liệu phổ Uracil.[6] Hợp chất SO1 dự đoán Uracil có hai công thức cộng hưởng sau: O H O N3 N OH H N3 H HO H N H H (B) (A) Hình 3.1 Hai công thức cộng hưởng SO1 12 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp Theo Hurd R E., Reid B R.,[24] hai proton cộng hưởng: NH-1A (δ H 10.78), NH-3A (δ H 10.93) ứng với hai proton nhóm –NH cấu trúc A Mặc khác, phân tích chẻ mũi H-5 H-6, chứng tỏ hợp chất SO1 tồn hai cấu trúc A B với tỷ lệ 1:1 Dựa vào phân tích kiện phổ trên, so sánh kiện phổ hợp chất SO1 với kiện phổ hợp chất Uracil công bố thấy có tương đồng, SO1 đề nghị có công thức sau: O H OH H H N N N O H HO N H H B A Hình 3.2 Công thức cấu tạo SO1 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất SO1 Uracil Vị trí δ H (ppm) δ C (ppm) 10.78 Uracil (DMSO-d )[6] SO1 (DMSO-d ) δ H (ppm) 10.82 152.0 10.93 δ C (ppm) 152.3 10.02 164.8 165.1 5.43 (d, 7.5) 100.7 5.47 101.0 7.36 (dd, 9.0, 6.0) 142.7 7.41 142.9 13 Huỳnh Thị Thuận Vy 3.2 Khóa luận tốt nghiệp KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT L1 Hợp chất L1 thu từ phân đoạn A6.3 cao ethanol với đặc điểm sau:  Trạng thái: Chất lỏng không màu  Bắt UV, hình màu vàng nâu  Phổ 1H-NMR (DMSO): Phụ lục  Phổ 13C-NMR (DMSO): Phụ lục Biện luận cấu trúc: Trên phổ 1H-NMR cho thấy diện hai proton thơm mũi đơn δ H 8.33 (1H, s) H-2, δ H 8.11 (1H, s) H-8 Hai proton nhóm –NH δ H 7.32 (2H, s) Dựa vào độ dịch chuyển hóa học nhóm methine H-2, H-8 chứng tỏ chúng phải liên kết trực tiếp với dị tố nitrogen Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu vùng từ trường từ δ H 3.53 đến 5.85 tương ứng với phân tử đường Mặc khác, phổ 13C-NMR có năm tín hiệu carbon sp2, có ba tín hiệu carbon tứ cấp δ C 156.6, δ C 149.6, δ C 119.8, hai tín hiệu carbon methine δ C 152.8, δ C 140.4 Ngoài ra, phổ 13C-NMR cho thấy carbon sp3 liên kết với dị tố oxygen nitrogen δ C 88.4, δ C 86.4, δ C 74.0, δ C 70.3, δ C 63.3 tương ứng với phân tử đường năm carbon Ngoài ra, phổ 1H-NMR có bảy tín hiệu H-1' δ H 5.85 (1H, d, J = 6.5 Hz), H-2' δ H 4.56 (1H, t, J = 5.5 Hz), H-3' δ H 4.13 (1H, dd, J = 5.0 Hz, J = 3.5 Hz), H-4' δ H 3.93 (1H, q, J = 3.5 Hz), H-5 a ' δ H 3.64 (1H, dd, J = 12.0 Hz, J = 3.5 Hz), H5 b ' δ H 3.53 (1H, dd, J = 14.0 Hz, J = 3.5 Hz) Vì H-2' H-3' ghép cặp với với số ghép J = 5.0 Hz, theo Ernö Pretsch, Philippe Bühlmann, Martin Badertscher[6] nên H-2' H-3' ghép cis với 14 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp H HO H 5' H H O H 4' 1' 2' 3' H OH HO Hình 3.3 Cấu trúc đường vòng năm L1 Dựa vào phân tích kiện phổ so sánh kiện phổ chất L1 với adenosine công bố thấy có tương đồng, hợp chất L1 đề nghị có công thức sau: NH2 N1 N N N 1' HO 2' HO O 3' 4' OH 5' Hình 3.4 Công thức cấu tạo L1 15 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất L1 adenosine Vị trí Adenosine (DMSO-d )[6] L1 (DMSO-d ) δ H (ppm) δ C (ppm) δ H (ppm) δ C (ppm) 8.33 152.8 8.38 153.2 149.6 149.8 119.8 120.1 156.6 156.9 8.11 140.4 8.17 140.7 1' 5.85 (d, 6.5) 88.4 5.91 88.8 2' 4.56 (t, 5.5) 74.0 4.64 74.3 3' 4.13 (dd, 5.0, 3.5) 71.1 4.17 71.4 4' 3.93 (q, 3.5) 86.4 3.99 86.6 5' 3.64 (dd, 12.0, 3.5) 3.53 (dd, 14.0, 3.5) 62.3 3.70 3.58 2'-OH 5.51 3'-OH 5.24 4'-OH 5.48 -OH 5.43 (br) 6-NH 7.31 7.41 16 62.4 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN – ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Trong khóa luận này, bước đầu tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao ethanol mẫu nấm Cordyceps neovolkiana cung cấp từ TS Đinh Minh Hiệp – Ban quản lý khu Nông nghiệp chất lượng cao Thành phố Hồ Chí Minh Thực phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp với sắc ký cột silicagel pha thường, cô lập hai hợp chất là: Uracil (SO1) adenosine (L1) O OH H H H N N N O H HO N H H B A L1 SO1 Hình 4.1 Hai hợp chất cô lập từ cao ethanol loài nấm Cordyceps neovolkiana 4.2 ĐỀ XUẤT Vì điều kiện thời gian vật chất không cho phép, nên phạm vi đề tài này, khảo sát phân đoạn A3 A6 Trong thời gian tới, có điều kiện tiến hành khảo sát phân đoạn lại Đồng thời tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học phân đoạn hợp chất cô lập 17 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Boros C., Hamilton S M., Katz B., Kulanthaivel P., “Comparison of balanol from Verticillium balanoides and ophiocordin from Cordyceps ophioglossoides”, J Antibiot (Tokyo), 47, 1010–1016, 1994 [2] Chatterjee R., Srinivasan K S., Maiti P C., “Cordyceps sinesis (Berkeley) Saccardo: structure of cordycepic acid”, J Am Pharm Assoc Am Pharm Assoc (Baltimore), 46, 114–118, 1957 [3] Cheung J K, Li J., Cheung A W., Zhu Y., Zheng K Y., Bi C W., Duan R., Choi R C., Lau D T., Dong T T., Lau B W., Tsim K W., “Cordysinocan, a polysaccharide isolated from cultured Cordyceps, activates immune responses in cultured T-lymphocytes and macrophages: signaling cascade and induction of cytokines”, J Ethnopharmacol., 124(1), 61-8, 2009 [4] Chun K Lob, Jerry K H Cheungb, Shang Q Zhub, Karl W K Tsimb, “A polysaccharide isolated from Cordyceps sinensis, a traditional Chinese medicine, protects PC12 cells against hydrogen peroxide-induced injury”, Life Sciences, 73, 2503–2513, 2003 [5] Cunningham K G., Manson W., Spring F S., Hutchinson S A., “Cordycepin, a metabolic product isolated from cultures of Cordyceps militaris (Linn.) Link”, Nature, 166, 949, 1950 [6] Ernö Pretsch Philippe Bühlmann Martin Badertscher, “Structure Determination of Organic Compounds”, Springer, 6, 150-151, 236-238, 2009 [7] Guarino A J., Kredich N M., “Isolation and identification of 3’-amino-3’deoxyadenosine from Cordyceps militaris”, Biochim, Biophys, Acta, 68, 317-319, 1963 [8] Isaka M., Kongsaeree P., Thebtaranonth Y., “Bioxanthracenes from the insect pathogenic fungus Cordyceps pseudomilitaris BCC 1620 II Structure elucidation” , J Antibiot (Tokyo), 54, 36–43, 2001 [9] Isaka M., Tanticharoen M., Kongsaeree P., Thebtaranonth Y., “Structures of cordypyridones A-D, antimalarial N-hydroxy- and N-methoxy-2-pyridones from the insect pathogenic fungus Cordyceps nipponica”, J Org Chem., 66, 4803–4808, 2001 18 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp [10] Kaczka E A., Trenner N R., Arison B., Walker R W., Folkers K., “Identification of cordycepin, a metabolite of Cordyceps militaris, as 3’deoxyadenosine”, Biochem Biophys Res Commun., 14, 456–457, 1964 [11] Kawaguchi N., Ohmori T., Takeshita Y., Kawanishi G., Katayama S., Yamada H., “Occurrence of Gal beta (1—3) GalNAc-Ser/Thr in the linkage region of polygalactosamine containing fungal glycoprotein from Cordyceps ophioglossoides”, Biochem Biophys Res Commun., 140, 350–356, 1986 [12] Kim K M., Kwon Y G., Chung H T., Yun Y G., Pae H O., Han J A., Ha K S., Kim T W., Kim Y M., “Methanol extract of Cordyceps pruinosa inhibits in vitro and in vivo inflammatory mediators by suppressing NF-kappaB activation”, Toxicol Appl Pharmacol., 190, 1–8, 2003 [13] Kim S W., Hwang H J., Xu C P., Sung J M., Choi J W., Yun J W., “Optimization of submerged culture process for the production of mycelial biomass and exo-polysaccharides by Cordyceps militaris C738”, J Appl Microbiol., 94, 120– 126, 2003 [14] Kim S W., Xu C P., Hwang H J., Choi J W., Kim C W., Yun J W., “Production and characterization of exopolysaccharides from an enthomopathogenic fungus Cordyceps militaris”, NG3 Biotechnol Progr., 19, 428–435, 2003 [15] Kneifel H., Konig W A., Loeffler W., Muller R., “Ophiocordin, an antifungal antibiotic of Cordyceps ophioglossoides Arch.”, Microbiol., 113, 121–130, 1977 [16] Krasnoff, S B., Reategui, R F., Wagenaar, M M., Gloer, J B., Gibson, D M., “Cicadapeptins I and II: new Aib-containing peptides from the entomopathogenic fungus Cordyceps heteropoda”, J Nat Prod., 68, 50–55, 2005 [17] Kredich N M., GuarinoA J., “Homocitrullyl amino adenosine, a nucleoside isolated from Cordyceps militaris”, J Biol Chem., 236, 3300–3302, 1961 [18] Li S P., Li P., Dong T T., Tsim K W., “Anti-oxidationactivity of different types of natural Cordyceps sinensis and cultured Cordycepos mycelia”, Phytomedicine, 8, 207–212, 2001 [19] Li S P., Li P., Dong T T., Tsim K W., “Determination of nucleosides in natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia by capillary electrophoresis”, Electrophoresis, 22, 144–150, 2001 19 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp [20] Li S P., Li P., Lai C M., Gong Y X., Kan K K., Dong T T., Tsim K W., Wang Y T., “Simultaneous determination of ergosterol, nucleosides and their bases from natural and cultured Cordyceps by pressurised liquid extraction and high-performance liquid chromatography”, J Chromatogr A, 1036, 239–243, 2004 [21] Liu J M., Zhong, Y R., Yang Z., Cui S L., Wang F H., “Chemical constituents of Cordyceps militaris (L.) Link.”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 14, 608–609, 1989 [22] Methacanon P., Madla S., Kirtikara K., Prasitsil M., “Structural elucidation of bioactive fungi-derived polymers”, Carbohydrate Polymers, 60, 199–203, 2005 [23] Ng T B., Wang H X., “Pharmacological actions of Cordyceps, a prized folk medicine”, Journal of Pharmacy and pharmacology, 57, 1509–1519, 2005 [24] R E Hurd and B R Reid, “NMR spectroscopy of the ring nitrogen protons of uracil and substituted uracil; relevance to Aψ base pairing in the solution structure of transfer RNA”, Nucleic Acids Reserch, 4, 2747-2755, 1977 [25] Rongmin Yu, Yin Yin, Wei Yang, Weili Ma, Lin Yang, Xiujuan Chen, Zhang Zhang, Bin Ye, Liyan Song, “Structural elucidation and biological activity of a novel polysaccharide by alkaline extraction from cultured Cordyceps militaris”, Carbohydrate Polymers 75, 166–171, 2009 [26] Rukachaisirikul V., Pramjit S., Pakawatchai C., Isaka M., Supothina S “10membered macrolides from the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris BCC 2816”, J Nat Prod., 67, 1953–1955, 2004 [27] Wang J., Kan L., Nie S., Chen H., Cui S W., Phillips A O., Phillips G O., Li Y., Xie M., “Comparison of chemical composition, bioactive components and antioxidant activity of natural and cultured Cordyceps sinensis”, LWT - Food Science and Technology, 63, 2-7, 2015 [28] Wu Y L., Sun C R., Pan Y J., “Studies on isolation and structural features of a polysaccharide from the mycelium of a Chinese edible fungus (Cordycepsm sinensis)”, Carbohydrate Polymers, 63, 251–256, 2006 [29] Xiao J H., Chen D X., Wan W H., Hu X J., Qi Y., Liang Z Q., “Enhanced simultaneous production of mycelia and intracellular polysaccharide in submerged cultivation of Cordyceps jiangxiensis using desirability functions”, Process Biochemistry, 41, 1887–1893, 2006 20 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp [30] Yang M L., Kuo P C., Hwang T L., Wu T S., “Anti-inflammatory Principles from Cordyceps sinensis”, J Nat Prod., 74, 1996–2000, 2011 [31] Yu R M., Song L Y., Zhao Y., Bin W., Wang L., Zhang H., et al., “Isolation and biological properties of polysaccharide CPS-1 from cultured Cordyceps militaris”, Fitoterapia., 75, 465–472, 2004 [32] Yu R M., Wang L., Zhang H., Zhou C X., Zhao Y., “Isolation, purification and identification of polysaccharides from cultured Cordyceps militaris”, Fitoterapia., 75, 662–666, 2004 [33] Yu R M., Yang W., Song L Y., Yan C Y., Zhang Z., Zhao Y., “Structural characterization and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of cultured Cordyceps militaris”, Carbohydrate Polymers, 70, 430–436, 2007 21 PHỤ LỤC O OH H H H N N H N O 5.434 5.419 7.379 7.367 7.364 7.352 10.973 10.779 S01 - DMSO 1H HO H N H B A 3A 11.5 11.0 10.5 10.0 9.5 9.0 8.5 8.0 f1 (ppm) 7.5 1.97 1.85 2.00 1A 7.0 6.5 6.0 Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR SO1 dung môi DMSO-d 5.5 5.0 4.5 4.0 100.80 142.88 152.18 165.13 S01 - DMSO 13C O OH H H H N N H N O H N HO H B A 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 f1 (ppm) 125 120 115 110 105 Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR SO1 dung môi DMSO-d 100 95 90 85 80 NH2 N N N1 N 4.132 4.125 4.122 3.938 3.931 3.489 4.566 4.555 4.544 5.431 5.858 5.845 7.308 8.110 8.329 L1-DMSO-1H 1' HO 2' O 4' 3' HO 5' 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 f1 (ppm) 5.0 3' 4.5 Phụ lục 3: Phổ 1H-MNR L1 dung môi DMSO-d 4' 4.0 5' 1.64 4.16 2' 1.30 1.21 1.21 1.91 0.96 1.00 OH-2' 1.30 1' 1.52 OH 5' 3.5 3.0 2.5 NH2 N N N1 N 74.03 71.14 66.89 63.61 62.20 88.68 86.53 119.87 140.35 156.44 152.93 149.48 175.50 L1-DMSO-13C 1' HO O 4' 3' 2' HO OH 5' 3' 1' 4' 2' 5' 190 180 170 160 150 140 130 120 110 f1 (ppm) 100 90 80 Phụ lục 4: Phổ 13C-NMR L1 dung môi DMSO-d 70 60 50 40 [...]... Vì thế, loài nấm này thu hút rất nhiều nhà nghiên cứu những năm gần đây dựa trên giá trị dinh dưỡng và dược học của nó Tuy nhiên, nguồn cung cấp tự nhiên của các loài nấm này giảm dần bởi vì môi trường sống khắc nghiệt và sự khai thác quá mức nguồn nguyên liệu Gần đây, một vài loài nấm thuộc chi Cordyceps được chiết tách và nuôi cấy trong phòng thí nghiệm.[27] 1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA CHI CORDYCEPS. .. 4'-OH 5.48 -OH 5.43 (br) 6-NH 7.31 7.41 16 62.4 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN – ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Trong khóa luận này, chúng tôi đã bước đầu tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao ethanol của mẫu nấm Cordyceps neovolkiana được cung cấp từ TS Đinh Minh Hiệp – Ban quản lý khu Nông nghiệp chất lượng cao Thành phố Hồ Chí Minh Thực hiện các phương pháp sắc ký lớp mỏng kết... từ các loài nấm thuộc chi Cordyceps từ những năm 1950 [Cunningham và cộng sự (1950);[5] Chatterjee và cộng sự (1957);[2] Kredich và Guarino (1961);[16] Guarino và Kredich (1963);[7] Kaczka và cộng sự (1964);[10] Liu và cộng sự (1989).[21]] Một nguyên cứu gần đây chứng tỏ có sự khác nhau về thành phần và hàm lượng các hợp chất hóa học giữa nấm tự nhiên và nấm nuôi cấy Nấm nuôi cấy chứa hàm lượng của polysaccharide,...Huỳnh Thị Thuận Vy 1.2 Khóa luận tốt nghiệp HOẠT TÍNH CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG CHI CORDYCEPS Thành phần hóa học của chi Cordyceps được tìm thấy gồm có cordycepin (30deoxyadenosin) và dẫn xuất, ergosterol, polysaccharide, glycoprotein và peptide có chứa thành phần aminoisobutyric acid Các hợp chất này có các hoạt tính sinh học như kháng ung thư, kháng đột biến (anti-metastatic),... cô lập được từ cao ethanol của loài nấm Cordyceps neovolkiana 4.2 ĐỀ XUẤT Vì điều kiện về thời gian và vật chất không cho phép, nên trong phạm vi của đề tài này, chúng tôi chỉ khảo sát trên phân đoạn A3 và A6 Trong thời gian sắp tới, nếu có điều kiện chúng tôi sẽ tiến hành khảo sát trên các phân đoạn còn lại Đồng thời chúng tôi sẽ tiến hành thử nghiệm một số hoạt tính sinh học ở các phân đoạn và hợp... phòng Phân Tích Trung Tâm trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên thành phố Hồ Chí Minh, số 227, Nguyễn Văn Cừ, Quận 5, Thành phố Hồ Chí Minh 2.2 NGUYÊN LIỆU Mẫu nấm Cordyceps neovolkiana được cung cấp từ TS Đinh Minh Hiệp – Ban quản lý khu Nông nghiệp công nghệ cao Thành phố Hồ Chí Minh 8 Huỳnh Thị Thuận Vy 2.3 Khóa luận tốt nghiệp QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM Từ sinh khối nấm tươi 3.5 kg được làm sạch, để khô,... Q:AcOH 5.0:0.1 L1 7 mg Với hệ Q là C:Me:W 82.0:11.8:0.2 Sơ đồ 2.1 Quá trình ly trích và cô lập từ cao ethanol của mẫu nấm Cordyceps sinensis 11 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT SO1 Hợp chất SO1 thu được từ phân đoạn A3.5 của cao ethanol với các đặc điểm như sau:  Trạng thái: Chất lỏng không màu  Bắt UV, vết không màu khi hiện hình... so với các loài nấm tự nhiên Li và cộng sự[18,19] cũng tìm thấy nấm C sinensis nuôi cấy có hàm lượng nucleoside cao hơn loài tự nhiên Ergosterol hiện diện trong C sinensis được xác định bởi sắc kí lớp mỏng điều chế [Li và Li (1991); Li và cộng sự (2004)].[20] Boros và cộng sự (1994)[1] công bố ophiocordin (54), một hợp chất kháng nấm và kháng khuẩn được cô lập từ C 2 Huỳnh Thị Thuận Vy Khóa luận tốt... được cô lập từ C militaris bởi Rukachaisirikul và cộng sự (2004).[26] Krasnoff và cộng sự (2005)[16] công bố cicadapeptins I và II (các peptide chứa thành phần aminoisobutyric acid) và myriocin (kháng nấm) (51-53) từ C heteropoda Một glycoprotein với thành phần N-acetylgalactosamine [Gal-β(1→3)-Gal-NAcol galactosyl-β(1→3)-N-acetyl-galactosaminitol] được cô lập từ C ophioglossoides [Kawaguchi và cộng sự... nhiều công bố khác nghiên cứu về polysaccharide từ nấm Cordyceps như Chun và cộng sự (2003), Methacanon và cộng sự (2005),[22] Wu, Sun, và Pan (2006),[27] Xiao và cộng sự (2006),[29] Yu và cộng sự (2007),[33] Cheung và cộng sự (2009).[3] Các nghiên cứu chỉ dừng ở xác định thành phần các monosaccharide và khối lượng phân tử cũng như hoạt tính sinh học Một nghiên cứu gần đây được thực hiện bởi Yu và