Năm 2001, A.Basu và cộng sự thuộc Viện Sinh hóa Ấn độ đã cập nhật, tổng hợp, đánh giá tác động gây đột biến, ung thư của arsenic (As) và các hợp chất của nó lên người và động vật. 8Năm 2003, V.M. Rodr´ıguez và cộng sự đã tổng hợp các nghiên cứu về ảnh hưởng As lên hệ thống thần kinh, bao gồm thần kinh ngoại biên, thần kinh trung ương, sự dẫn truyền thần kinh và sự phát triển của thần kinh trung ương ở động vật. 19
1 NỘI DUNG Tổng quan 1.1 Các nghiên cứu giới Năm 2001, A.Basu cộng thuộc Viện Sinh hóa Ấn độ cập nhật, tổng hợp, đánh giá tác động gây đột biến, ung thư arsenic (As) hợp chất lên người động vật [8] Năm 2003, V.M Rodr´ıguez cộng tổng hợp nghiên cứu ảnh hưởng As lên hệ thống thần kinh, bao gồm thần kinh ngoại biên, thần kinh trung ương, dẫn truyền thần kinh phát triển thần kinh trung ương động vật [19] Năm 2007, Akshata cộng tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng As với nồng độ thấp (2 10ppb) lên hệ thống miễn dịch cá Ngựa vằn Đây nồng độ an toàn nước uống Kết cho thấy lượng virus tăng khoảng 50 lần, lượng vi khuẩn tăng 17 lần phôi cá Đối với nhóm nhiễm virus, phôi tiếp xúc với As, biểu interferon mRNA MX giảm tương ứng 13 1,5 lần Đối với nhóm nhiễm khuẩn, phôi nhiễm As có biểu hoạt động interleukin - 1β giảm 2,5 lần, hoạt động yếu tố gây hoại tử khối u (TNF-α) giảm lần Biểu cytokine cần thiết bị hạn chế bị nhiễm As Như vậy, dù phôi cá bị nhiễm As nồng độ thấp làm ức chế khả miễn dịch bẩm sinh Kết minh chứng thêm cá Ngựa vằn xem mô hình cho nghiên cứu độc học miễn dịch [9] Năm 2009, Micheli Rosa de Castro cộng tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng As đến khả học tập (sự hình thành trí nhớ ngắn hạn trí nhớ dài hạn) cá Ngựa vằn Đầu tiên, tập luyện cho cá phản ứng có điều kiện tránh lại tác động có hại việc bơi từ vùng sáng sang vùng tối; sau đó, cho chúng tiếp xúc với arsenic ba nồng độ khác 1, 10 100 µg/l Tiếp theo, nhóm sử dụng thiết bị đặc biệt dùng để đo khả phản ứng cá Đồng thời, tách lấy não cá nhiễm As ba nồng độ thí nghiệm để tiến hành phân tích sinh hóa Kết cho thấy khả ảnh hưởng As lên khả học tập trí nhớ cá Cơ chế gây hại chung As tăng oxy hóa protein não, đồng thời gây hại đến DNA tế bào [16] Năm 2009, Juliane Ventura-Lima cộng gây nhiễm As cho cá Ngựa vằn trưởng thành với ba nồng độ 1, 10, 100µg/l 48 Kết cho thấy As làm xáo trộn khả chống oxy hóa mang cá bao gồm làm tăng glutathione (GSH), ligase glutamate cysteine (GCL) nồng độ 10 100 µg/l, tương ứng; khả tiêu thụ oxy thấp đáng kể cá bị nhiễm As nồng độ 100 µg/l [14] Cùng năm này, Dan Li cộng nghiên cứu phát triển giai đoạn phôi cá Ngừa vằn nhiễm As Phôi cá ngựa vằn cho phơi nhiễm nồng độ sodium arsenite (0-10mM) đến 120 sau thụ tinh (hpf) Sự sống phát triển sớm phôi bị ảnh hưởng không rõ ràng nồng độ arsenite 0,5mM Tuy nhiên, phôi nhiễm nồng độ cao biểu rõ giảm tỉ lệ sống phát triển bất thường bao gồm chậm thoát nang, chậm phát triển thay đổi hình thái Thay đổi phát triển thần kinh bao gồm phản ứng xúc giác với ánh sáng (2 – 5mM, 30hpf), dị dạng cột sống rối loạn vận động sợi trục thần kinh (2mM, 48hpf) Chức tim bất thường giảm nhịp tim (0,5-2mM, 60hpf) bất thường hình dạng tâm thất (2mM, 48hpf) Hơn nữa, bất thường sinh sản tế bào chết theo chương trình (2mM, 24 48hpf) bất thường metyl hóa DNA (2mM, 24 48hpf) phát phôi bị nhiễm arsenite Tất điều cho thấy As ảnh hưởng xấu đến gen phôi động vật có xương sống [11] Năm 2012, Celine de Esch cộng tóm tắt tiềm cá Ngựa vằn việc dùng làm mô hình để sàng lọc ngộ độc thần kinh nghiên cứu chế tác động chất độc hại nhờ xét nghiệm sinh hóa quan sát mức độ cấu trúc chức cá thể [10] Năm 2013, Gabriel O Vachon thuộc đại học Maine phát phơi nhiễm As làm tăng biểu gen p21 - ảnh hưởng đến trình lão hóa tế bào hệ thống miễn dịch [12] Từ số công trình trình bày trên, thấy cá Ngựa vằn ngày trở thành mô hình động vật cho nghiên cứu sinh lí, sinh hóa, tế bào học 3 Thực tế cho thấy nghiên cứu liên quan đến đối tượng liên tục công bố trang Web sách báo, tạp chí uy tín giới Tuy nhiên, chưa có công bố nghiên cứu ảnh hưởng As lên phát triển liên tục giai đoạn cá Ngựa vằn 1.2 Các nghiên cứu nước Năm 2009, Phan Kim Ngọc cộng sự, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp Hồ Chí Minh tạo thành công cá phát sáng cấy ghép gen GFP kĩ thuật bắn gen [6] Năm 2011, Nguyễn Thị Hạnh Tiên thuộc Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản I cộng thuộc Trường Đại học Ghent - Bỉ, tiến hành khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến trình kết nối đốt sống tạo dị tật xương sống cá Ngựa vằn Các mẫu cá nhuộm màu cho sụn xương để xác định dị tật Kết theo dõi cho thấy nhiệt độ 32oC, cá bị dị tật đốt sống phần trước đầu xương cột sống; nhiệt độ 20oC có kết nối đốt sống PU2 với PU3, PU3 với đốt sống đuôi cuối Như vậy, nhiệt độ nguyên nhân ảnh hưởng đến trình nối đốt sống tạo dị tật cá Ngựa vằn [17] Năm 2012, Nguyễn Thị Thương Huyền cộng tiến hành đánh giá tác động cadmium lên trình phát triển thông qua tỉ lệ sống, chết phôi cá Ngựa vằn giai đoạn phát triển Đồng thời, nhóm khảo sát ảnh hưởng cadmium lên nhịp tim quẫy phôi nồng độ 0,1; 1; 5; 10; 20, 50 100µg/L Kết cho thấy chưa nồng độ gây chết, chúng làm tăng nhịp tim giảm số lần quẫy phôi [4] Năm 2013, Nguyễn Thị Thương Huyền cộng tiến hành khảo sát hàm lượng Cadmium tích tụ thể cá Ngựa vằn với các nồng độ: 0µg/l, 1µg/l, 5µg/l, 10µg/l, 20µg/l, 50µg/l tháng Kết quả cho thấy hàm lượng Cd tích tụ toàn thể và từng phần có xu hướng tỉ lệ thuận theo nồng độ Hàm lượng Cd tích tụ mô giảm theo thứ tự sau: nội quan > xương > cơ, cụ thể hàm lượng 10,813 ± 0,263 mg/kg đạt giá trị cao nhất ở nồng độ 50µg/l; 2,053 ± 0,031 mg/kg và 0,607 ± 0,015 mg/kg đạt giá trị cao nhất cá được gây độc ở nồng độ 20µg/l [5] Năm 2014, Trần Thị Phương Dung cộng đánh giá tác động Chì lên trình phát triển phôi cá Ngựa vằn nồng độ 20, 40, 60, 80, 100 µg/l Kết cho thấy tác động chì làm tăng nhịp tim giai đoạn phôi, tăng thời gian thoát nang, giảm tỉ lệ thoát nang, tăng tỉ lệ biến dạng hệ xương Cũng năm này, nhóm nghiên cứu Nguyễn Thị Thương Huyền cộng đánh giá ảnh hưởng Chì lên sống cá Ngựa vằn giai đoạn ấu trùng Kết cho thấy nồng độ chì khảo sát, nồng độ 40µg/l ngưỡng ảnh hưởng đến tỉ lệ sống ấu trùng; nồng độ khảo sát, sau ngày nuôi thứ thứ có ảnh hưởng rõ đến tỉ lệ sống ấu trùng; đặc biệt nhóm lập phương trình tiên đoán tỉ lệ sống ấu trùng cá Ngựa vằn theo ảnh hưởng tương tác nồng độ ion Pb2+ thời gian nuôi [3] Mục đích nghiên cứu 2.1 Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần đây, phát triển ngành công nghiệp, giao thông vận tải, chăn nuôi với gia tăng dân số làm cho môi trường sống ngày bị ô nhiễm chất độc hại đặc biệt kim loại nặng Các kim loại nặng khó loại bỏ biện pháp xử lý nước thải thông thường Nếu nước sinh hoạt bị nhiễm kim loại nặng cao mức cho phép dẫn đến nguy mắc nhiều loại bệnh hiểm nghèo ung thư, tim, mạch, gan… Vì thế, vấn đề nghiên cứu bảo vệ môi trường nói chung môi trường nước nói riêng trở thành mối quan tâm hàng đầu nhiều quốc gia tổ chức giới Arsenic nguyên tố kim loại nặng nguy hiểm người động vật thủy sinh Khi tích tụ thể, arsenic gây tác hại nghiêm trọng đến nhiều hệ quan thần kinh, tuần hoàn, tiêu hóa, sinh sản … ung thư, hay gặp ung thư da Theo thống kê Bộ Y tế, 21% dân số Việt Nam dùng nguồn nước nhiễm arsenic vượt mức cho phép tình trạng nhiễm độc arsenic ngày rõ rệt nặng nề dân cư [19] Việc nghiên cứu tác động arsenic lên sống sinh vật nhiều nhà khoa học giới nghiên cứu Ở Việt Nam, việc đánh giá tác động arsenic chủ yếu phương pháp hóa lí, chưa có đánh giá cách xác lên phát triển động vật thủy sinh, động vật có xương sống Hiện nay, nghiên cứu ảnh hưởng kim loại nặng lên động vật thủy sinh quan tâm Trong đó, cá Ngựa vằn - Danio rerio sử dụng làm đối tượng thí nghiệm phổ biến chúng có nhiều ưu điểm vòng đời ngắn; dễ nuôi; phôi lớn, suốt, phát triển nhanh; kích thước phù hợp cho việc nuôi với số lượng lớn gen có tương đồng với người Đặc biệt, cá Ngựa vằn phù hợp với điều kiện khí hậu Việt Nam nên không cần đến trang thiết bị hỗ trợ nuôi dưỡng máy sưởi, đèn chiếu sáng theo chu kì Vì lý trên, đề tài: “Đánh giá tác động Arsenic lên phát triển mô hình cá Ngựa vằn - Danio rerio (Hamilton, 1822)” tiến hành 2.2 Mục đích nghiên cứu - Đánh giá tác động Arsenic lên trình phát triển cá Ngựa vằn (Danio rerio) giai đoạn phôi, ấu trùng sau ấu trùng đến tháng tuổi nuôi môi trường Hanks; - Xác định hàm lượng nhiễm Arsenic cá trưởng thành nồng độ khảo sát Đối tượng nghiên cứu Cá Ngựa vằn (Danio rerio) độ tuổi sinh sản (từ tháng tuổi), có sức sống tốt, bệnh để làm nguồn cung cấp đối tượng thí nghiệm: - Phôi cá Ngựa vằn giai đoạn phân chia khác (1-72 giờ); - Cá ấu trùng sau 144 giờ; - Cá trưởng thành sau tháng nuôi Các phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp ổn định điều kiện sống cá - Cá Ngựa vằn mua từ cửa hàng bán cá cảnh Thùy Dung, đường Lưu Xuân Tín, phường 10, quận 5, thành phố Hồ Chí Minh - Cá đực cá nuôi riêng ổn định theo chu kỳ sáng – tối: 14h sáng – 10h tối đạt giai đoạn thành thục sinh dục 6 - Cá Ngựa vằn thích nghi với môi trường nước tương đối sạch, cần dọn bể thường xuyên trước cho ăn để tránh nhiễm bệnh cho cá Bể nuôi cần thay nước thường xuyên (khoảng ngày thay lần) Khi thay nước ý không thay toàn số nước, chừa lại khoảng 1/3 số nước Cá cho ăn vừa phải, chia làm nhiều lần ngày (2 đến lần), lượng thức ăn đảm bảo cá ăn hết phút để tránh nhiễm bẩn môi trường nước thức ăn thừa 4.2 Phương pháp phối cá thu phôi Cá ghép theo tỉ lệ đực : 2cái , tách riêng vách ngăn suốt giữ tối 10 tiếng Trước thu phôi, mở đèn tháo vách ngăn để cá giao phối với Khi đực đuổi theo vài phút Sau phối – phút, bắt riêng cá bố mẹ sang bể kiểm tra sơ đáy bể phối để biết chắn có phôi Phôi cá thu ống siphon Lần lượt loại bỏ phôi bị hư rửa phôi cho vào đĩa petri thủy tinh (ɸ35mm), mật độ 20 phôi/đĩa để ấp phôi Phôi tốt ấu trùng nở nuôi điều kiện nhiệt độ trì 28 – 29 oC, pH trì – Thao tác rửa phân loại phôi tiến hành nhanh chóng 4.3 Phương pháp gây nhiễm phôi với nồng độ Arsenic khảo sát - Chuẩn bị cốc thủy tinh thể tích 300ml chứa môi trường Hanks phôi bổ sung Arsenic tương ứng nồng độ khảo sát: 0; 20; 50; 80; 110; 140; 170; 200; 230; 260µg/l - Quan sát kính hiển vi soi nổi, chọn phôi tốt giai đoạn (1 đến 128 tế bào) cho vào bể Mỗi nồng độ cho 30 phôi lặp lại lần - Quan sát hình thái, sức sống theo dõi tỉ lệ sống phôi giai đoạn phân chia 4.4 Phương pháp đánh giá phát triển phôi nồng độ khảo sát Sự phát triển phôi, tỉ lệ sống chết, phôi biến dạng quan sát kính hiển vi soi kính hiển vi đảo ngược Phương pháp đếm nhịp tim số lần quẫy Dùng máy chụp hình (canon) quay phim hoạt động phôi, cài đặt phút kính hiển vi đảo ngược vật kính x10 Nhịp tim tần số quẫy đếm phút, nồng độ thực ngẫu nhiên 5-10 phôi Thí nghiệm lặp lại lần Phương pháp đánh giá trình thoát nang Đếm số phôi thoát nang tổng số phôi sống giai đoạn hầu họng (Pharyngeal), quan sát số biến đổi bất thường phôi làm cho phôi không thoát nang xác định tỉ lệ thoát nang 4.5 Phương pháp gây nhiễm Arsenic cho cá bột chăm sóc - Chuẩn bị môi trường Hanks cho nồng độ khảo sát, bảo quản lọ thủy tinh để dung dịch không bị biến tính dễ sử dụng - Chuẩn bị bể nuôi để chuyển cá bột ngày tuổi sang môi trường Hanks với nồng độ khảo sát: bể thủy tinh chuyên dụng kích thước 17cm x 18cm x 29cm, bể chứa lít môi trường Hanks Trong bể cho thêm rong Đuôi chó (2 nhánh nhỏ, đồng bể) để làm thức ăn cho cá tạo môi trường nuôi Bố trí bể nuôi nơi có ánh sáng vừa phải Trong bể nuôi, có gắn thêm máy sục khí để cung cấp lượng oxy cần thiết Máy hoạt động 24/24 Trên miệng bể nuôi có chắn để tránh động vật khác rơi vào vào bể ăn cá tránh cá nhảy - Chuyển cá bột sang môi trường Phôi nở sau ngày, suốt trình không cần cho cá ăn Sang ngày thứ 4, cho cá ấu trùng ăn phiêu sinh vật (có rong) Cá bột giai đoạn ấu trùng có tính nhạy cảm cao vòng đời cá (Hwang cs, 1995) Do sức sống cá bột từ – ngày tuổi (trước chuyển sang bể nuôi lớn) theo dõi ghi nhận sau 24 để đánh giá độ nhạy cảm mức nồng độ Arsenic gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến cá nhất, kết hợp với quan sát tỉ lệ sống giai đoạn phôi dị dạng quan sát Cá bột ngày tuổi nuôi bể kính nhằm hạn chế chênh lệch nhiệt độ môi trường nước nuôi môi trường bên Cá nuôi theo chu kì sáng tối 14 giờ: 10 Đo pH nhiệt độ nước lần/ngày Thường xuyên theo dõi độ ẩm nhiệt độ phòng nuôi 8 Chín ngày sau cá nở, cá cho ăn kết hợp động vật phiêu sinh ấu trùng có rong Khi ấu trùng lớn, cho cá ăn thức ăn dành cho cá trưởng thành, bể nuôi mật độ thấp (trung bình 20 con/ bể 3lít), cho ăn thường xuyên (2 lần/ngày) thay 1/3 nước bể ngày Đánh giá ảnh hưởng As3+ lên sức sống cá Ngựa vằn giai đoạn ấu trùng Ngày quy ước số cá ban đầu 100%; ngày sau theo dõi số lượng cá chết sau ngày, tính tỉ lệ sống cá ngày dựa số cá lại so với ngày hôm trước Đánh giá ảnh hưởng As3+ lên sức sống cá Ngựa vằn sau giai đoạn ấu trùng Quy ước số cá chuyển vào bể nuôi lớn ban đầu 100%, coi mốc thời gian ngày bắt đầu thí nghiệm Trong hai tuần đầu tiên, kiểm tra số lượng cá sống sau tuần Các lần kiểm tra thực theo chu kì 15 ngày lần ghi nhận lại số cá lại bể 4.6 Đánh giá tích tụ Arsenic thể cá - Sau tháng nuôi, cá nồng độ khảo sát vớt đĩa petri thủy tinh sạch, dùng giấy thấm để thấm nước, đo chiều dài trọng lượng trước tiến hành bước - Phân tích hàm lượng As thể: dùng kẹp gắp nhẹ nhàng cá riêng lẻ vào eppendorf mới, - Phân tích hàm lượng As quan: mổ cá dao mổ y tế, tách riêng phần nội quan, lọc xương riêng Mỗi phần cho vào eppendorf (Kwong cs, 2011) - Tất mẫu giữ -4 oC lúc gửi phân tích Mỗi nồng độ lặp lại lần 4.7 Phương pháp xử lý thống kê Các số liệu xử lí thống kê phần mềm để so sánh khác biệt tất tiêu thực nhóm khảo sát Số liệu trình bày dạng x± SE (P < 0,05) 4.8 Dụng cụ, thiết bị STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Dụng cụ/Thiết bị Kính hiển vi soi Kính hiển vi đảo ngược Máy ảnh Pipetmen Bình định mức Cân phân tích Đĩa petri Máy sục khí Máy đo pH Tủ ấm lạnh Tủ sấy Máy cất nước Ống đong Dây chuyền nước biển Bể pocal Ống bóp, bi, vợt bắt cá Bể kiếng nuôi cá Kéo mổ, dao mổ, kẹp mổ Đũa thủy tinh Eppendorf Thức ăn thương phẩm Bo bo Rong đuôi chó Hãng sản xuất Nikon Nikon Canon Biohit PLC Schott Shimazu Steriplan Kingfisher Thermo Electron Corp Sanyo Nước sản xuất Nhật Nhật Nhật Phần Lan Đức Nhật Đan Mạch Đài Loan Hoa Kỳ Nhật Anh Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Việt Nam Relive Trung quốc - Các dụng cụ thủy tinh rửa hấp, sấy khử trùng trước sử dụng - Bo bo (trứng nước, bọ đỏ, hồng trần, rận nước) chứa hàm lượng protein lớn 50% khối lượng khô thể Ngoài ra, bo bo trưởng thành chứa lượng chất béo chiếm 20-27% khối lượng khô Do đó, chúng nguồn thức ăn bổ dưỡng cho cá thời kì sinh trưởng sinh sản - Rong đuôi chó làm thức ăn cho cá, chúng tiết chất độc loài tảo, giúp ngăn cản cách có hiệu phát triển tảo Chúng có khả tạo oxy nhờ quang hợp 4.9 Hóa chất STT Hóa chất As2O3 NaCl KCl CaCl2 Hãng sản xuất Sigma Scharlab S.L Scharlab S.L Scharlab S.L Nước sản xuất Mỹ Tây Ban Nha Tây Ban Nha Tây Ban Nha 10 KH2PO4 MgSO4.7H2O Na2HPO4.2H2O NaHCO3 Scharlab S.L Scharlab S.L Scharlab S.L Scharlab S.L Tây Ban Nha Tây Ban Nha Tây Ban Nha Tây Ban Nha Nội dung phạm vi vấn đề sâu nghiên cứu 5.1 Nội dung nghiên cứu - Theo Quy chuẩn kĩ thuật Quốc gia chất lượng nước mặt bảo vệ đời sống thủy sinh (QCVN 38: 2011/BTNMT) giá trị As giới hạn thủy vực 0,02mg/l [2] - Theo kết điều tra, phân tích mẫu nước ngầm năm 2010 xã thuộc 57 tỉnh/thành nước Cục Quản lý tài nguyên nước (Bộ Tài nguyên Môi trường), tỉ lệ xã có hàm lượng As nước 0,05mg/l cao, đồng Sông Hồng (43,86%) [23] Chúng khảo sát nồng độ As: 20; 50; 80; 110; 140; 170; 200; 230; 260 µg/l Cụ thể gồm nội dung nghiên cứu sau: Ảnh hưởng Arsenic lên phát triển giai đoạn phôi - Tỷ lệ sống - Nhịp tim - Nhịp quẫy - Tỷ lệ thoát nang - Tỷ lệ dị tật Ảnh hưởng Arsenic lên phát triển giai đoạn cá bột - Tỷ lệ sống - Tỷ lệ dị tật - Kích thước Ảnh hưởng Arsenic lên phát triển giai sau cá bột - Tỷ lệ sống - Tỷ lệ dị tật - Kích thước, trọng lượng Xác định lượng Arsenic tích tụ thể cá trưởng thành - Ở quan cá (cơ, xương, nội tạng) 11 - Trong toàn thể cá 5.2 Phạm vi nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng Arsenic lên giai đoạn phôi, ấu trùng cá Ngựa vằn trưởng thành nồng độ khảo sát (20; 50; 80; 110; 140; 170; 200; 230; 260 µg/l) Nơi thực đề tài nghiên cứu luận văn - Phòng thí nghiệm Giải phẫu – Sinh lý người động vật, Trường Đại học Sư phạm TP.HCM - Mẫu phân tích Công ty Cổ phần Dịch vụ Khoa học công nghệ Sắc ký Hải Đăng, 79 Trương Định, quận 1, TPHCM Thời gian thực Đề tài tiến hành từ tháng 07/2014 đến tháng 06/2015 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Huy Bá (2008), Độc học môi trường bản, NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, TP HCM Bộ Tài nguyên Môi trường (2011), Quy chuẩn kĩ thuật Quốc gia chất lượng nước mặt bảo vệ đời sống thủy sinh, QCVN 38: 2011/BTNMT, Hà Nội Trần Thị Phương Dung, Nguyễn Hiếu, Nguyễn Thị Thương Huyền (2014), “Đánh giá tác động chì lên trình phát triển phôi cá Ngựa vằn – Danio rerio (Hamilton, 1822)” Tạp chí Đại học Sư phạm Tp HCM, ISSN 1859-3100, số 61(95), trang 122-131 Nguyễn Thị Thương Huyền, Phan Thanh Huy, Trần Anh Huy, Nguyễn Thị Thu Giang, Lê Thành Long, Nguyễn Tường Anh (2012), “Đánh giá tác động Cadmium lên trình phát triển phôi cá Ngựa vằn (Danio rerio)”, Tạp chí Đại học Sư phạm Tp HCM, ISSN 1859-3100, số 40 (74), tr 123-131 Nguyễn Thị Thương Huyền, Trần Anh Huy, Nguyễn Thị Thu Giang, Trần Thị Phương Dung (2013), “Khảo sát khả tích tụ Cadmium thể cá Ngựa vằn - Danio rerio (Hamilton, 1822), Tạp chí Đại học Sư phạm Tp HCM, ISSN 18593100, số 51(85), trang 90-99 Lê Thành Long, Nguyễn Trần Phương, Đoàn Chính Chung, Phạm Văn Phúc, Bùi Văn Lệ, Phan Kim Ngọc (2009), “Tạo cá Ngựa vằn biểu gen phát sáng (GFP) phương pháp bắn gene (bombardment)”, Kỉ yếu hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc khu vực miền Nam Việt Nam Hoàng Đắc Lực cộng (1999), “Nghiên cứu ô nhiễm kim loại nặng nước thải công nghiệp sinh hoạt”, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu cấp Bộ 19981999, Viện Khoa học Kỹ thuật hạt nhân, Hà Nội Tiếng Anh A Basu, J Mahata, S Gupta, A.K Giri (2001), “Genetic toxicology of a paradoxical human carcinogen, arsenic: a review”, Mutation Research 488 (2001) 171–194 13 Akshata S Nayak, Christopher R Lage, and Carol H Kim (2007), “Effects of Low Concentrations of Arsenic on the Innate Immune System of the Zebrafish (Danio Rerio)”, Toxicological sciences98(1), 118–124 10 Celine de Esch, Roderick Slieker, André Wolterbeek, Ruud Woutersen, Didima de Groot (2012), “Zebrafish as potential model for developmental neurotoxicity testing”, Neurotoxicology and Teratology 34 (2012) 545–553 11 Dan Lia, Cailing Lu, JuWang, Wei Hu, Zongfu Cao, Daguang Sun, Hongfei Xia, XuMa (2009), “Developmental mechanisms of arsenite toxicity in zebrafish (Danio rerio) embryos”, Aquatic Toxicology 91 (2009) 229–237 12 Gabriel O Vachon (2013), “Effects of Arsenic Responsive P21 on Innate Immunity and Apoptosis in Zebrafish”, The University of Maine 13 Huyen Nguyen Thi Thuong, Vi Le Thi Tuong, Dung Tran Thi Phuong, Quan Ke Thai, Tri Truong Van (2014), Examining the effects of lead on the life of larval zebrafish (1-7 days old), БИОРАЗНООБРАЗИЕ И УСТОЙЧИВОСТЬ ЖИВЫХ СИСТЕМ, Материалы XIII Международной научно-практической, экологической конференции, г Белгород, 6-11 октября 2014 г O-3, P48 14 Juliane Ventura-Lima, Micheli Rosa de Castro, Daiane Acosta, Daniele Fattorini, Francesco Regoli, Leandro Machado de Carvalho, Denise Bohrer, Laura A Geracitano, Daniela Martí Barros, Luis F.F Marins, Rosane Souza da Silva, Carla Denise Bonan, Maurício Reis Bogo, José M Monserrat (2009), “Effects of arsenic (As) exposure on the antioxidant status of gills of the zebrafish Danio rerio (Cyprinidae)”, Comparative Biochemistry and Physiology, Part C 149 (2009) 538– 543 15 K Bhavani, R Karuppasamy (2014), “Acute toxicity bioassay and behavioural changes on zebrafish, Danio rerio (Hamilton) under arsenic trioxide”, International journal of modern research and review Volume 2, Issue 1, pp 40-46 January, 2014 16 Micheli Rosa de Castro, Juliane Ventura Lima, Diana Paula Salomão de Freitas, Roberto de Souza Valente, Natália Seus Dummer, Rosiane Borba de Aguiar, Luciane Cougo dos Santos,Luis Fernando Marins, Laura Alicia Geracitano, José María 14 Monserrat, Daniela Martí Barros (2009), “Behavioral and neurotoxic effects of arsenic exposure in zebrafish (Danio rerio, Teleostei: Cyprinidae)”, Comparative Biochemistry and Physiology, Part C 150 (2009) 337–342 17 Nguyen Thi Hanh Tien, Ann Huyseune, Eckhard Witten (2011), "Influence of temperature on fusion process and malformation in skeleton of zebrafish (Danio rerio)", J Sci Dev, (Eng.Iss.1), Hanoi, pp 47 - 54 18 V.M Rodr´ıguez, M.E Jiménez-Capdeville, M Giordano (2003), “The effects of arsenic exposure on the nervous system”, Toxicology Letters 145 (2003) 1–18 Trang Web 19 Những biểu nhiễm độc asen, http://suckhoedoisong.vn/bac-si-traloi/nhung-bieu-hien-khi-nhiem-doc-asen-20100728040832766.htm (ngày truy cập 20/07/2014) 20 Kim loại nặng ảnh hưởng chúng người, http://www.hoahocngaynay.com/vi/phat-trien-ben-vung/an-toan-hoachat/232-kimloai-nang-va-anh-huong-cua-no-doi-voi-con-nguoi.htmL (ngày truy cập: (ngày truy 20/07/2014) 21 Danio rerio, http://www.fishwise.co.za/Default.aspx? TabID=110&SpecieConfigId=267397&GenusSpecies=Danio_rerio cập: 23/07/2014) 22 Kim loại nặng môi trường tác động động vật thủy sản, http://uv-vietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId= (ngày truy cập: 28/07/2014) 23 Phơi nhiễm kim loại nặng http://www.chongdoc.org.vn/LinkClick.aspx?fileticket=l70jBisjvow %3D&tabid=66&language=vi-VN (ngày truy cập: 01/08/2014) Việt Nam [...]...11 - Trong toàn bộ cơ thể cá 5.2 Phạm vi nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng của Arsenic lên giai đoạn phôi, ấu trùng và cá Ngựa vằn trưởng thành ở 9 nồng độ khảo sát (20; 50; 80; 110; 140; 170; 200; 230; 260 µg/l) 6 Nơi thực hiện đề tài nghiên cứu của luận văn - Phòng thí nghiệm Giải phẫu – Sinh lý người và động vật, Trường Đại học Sư phạm TP.HCM - Mẫu được phân tích tại Công ty... Ngựa vằn biểu hiện gen phát sáng (GFP) bằng phương pháp bắn gene (bombardment)”, Kỉ yếu hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc khu vực miền Nam Việt Nam 7 Hoàng Đắc Lực và cộng sự (1999), Nghiên cứu ô nhiễm kim loại nặng trong nước thải công nghiệp và sinh hoạt”, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu cấp Bộ 19981999, Viện Khoa học và Kỹ thuật hạt nhân, Hà Nội Tiếng Anh 8 A Basu, J Mahata, S Gupta, A.K... truy 20/07/2014) 21 Danio rerio, http://www.fishwise.co.za/Default.aspx? TabID=110&SpecieConfigId=267397&GenusSpecies=Danio_rerio cập: 23/07/2014) 22 Kim loại nặng trong môi trường và những tác động đối với động vật thủy sản, http://uv-vietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId= (ngày truy cập: 28/07/2014) 23 Phơi nhiễm kim loại nặng tại http://www.chongdoc.org.vn/LinkClick.aspx?fileticket=l70jBisjvow %3D&tabid=66&language=vi-VN... Đăng, 79 Trương Định, quận 1, TPHCM 7 Thời gian thực hiện Đề tài tiến hành từ tháng 07/2014 đến tháng 06/2015 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1 Lê Huy Bá (2008), Độc học môi trường cơ bản, NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, TP HCM 2 Bộ Tài nguyên và Môi trường (2011), Quy chuẩn kĩ thuật Quốc gia về chất lượng nước mặt bảo vệ đời sống thủy sinh, QCVN 38: 2011/BTNMT, Hà Nội 3 Trần Thị Phương Dung,... Hiếu, Nguyễn Thị Thương Huyền (2014), “Đánh giá sự tác động của chì lên quá trình phát triển phôi cá Ngựa vằn – Danio rerio (Hamilton, 1822)” Tạp chí Đại học Sư phạm Tp HCM, ISSN 1859-3100, số 61(95), trang 122-131 4 Nguyễn Thị Thương Huyền, Phan Thanh Huy, Trần Anh Huy, Nguyễn Thị Thu Giang, Lê Thành Long, Nguyễn Tường Anh (2012), “Đánh giá tác động của Cadmium lên quá trình phát triển phôi cá Ngựa