Xây dựng phương pháp xác định ketamin trong nước tiểu bằng phương pháp sắc kí khí khối phổ (GC MS)

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ LIỄU Mã sinh viên : 1101291 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KETAMIN TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ KHỐI PHỔ (GC-MS) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2016 i BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ LIỄU Mã sinh viên : 1101291 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KETAMIN TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ KHỐI PHỔ (GC-MS) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Phạm Lê Minh ThS Phạm Quốc Chinh Nơi thực hiện: Khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia HÀ NỘI – 2016 ii LỜI CẢM ƠN Trong thời gian làm khóa luận tốt nghiệp, với giúp đỡ tận tình thầy cô giáo, em hoàn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới ThS Phạm Lê Minh tạo điểu kiện cho em tham gia làm khóa luận Viện Pháp y Quốc gia Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc em xin bày tỏ lòng biết ơn tới ThS Phạm Quốc Chinh, cán khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia, người trực tiếp hướng dẫn, bảo nhiệt tình cho em suốt thời gian làm nghiên cứu Viện Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám đốc Viện Pháp y Quốc gia Khoa Hóa pháp tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn cô chú, anh chị thời gian qua nhiệt tình bảo cho em thao tác tiến hành thí nghiệm, thao tác kỹ thuật máy Cuối cùng, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, người thân bên em, chia sẻ khó khăn, động viên, giúp đỡ học tập sống Do thời gian thực đề tài có hạn nên tránh thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy cô giáo bạn sinh viên Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2016 Sinh viên Lê Thị Liễu iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ketamin 1.1.1 Công thức cấu tạo tính chất lý hóa 1.1.2 Dược động học 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.2 Tổng quan chiết ketamin nước tiểu 1.2.1 Phương pháp chiết ma túy từ dịch sinh học 1.2.2 Phương pháp chiết SPE 1.2.3 Phương pháp chiết pha rắn ketamin nước tiểu 12 1.3 Tổng quan sắc kí khí khối phổ (GC-MS) 13 1.3.1 Khái niệm 13 1.3.2 Hệ thống GC – MS 13 1.4 Các phương pháp xác định ketamin nước tiểu……………… ….17 1.4.1 Phương pháp miễn dịch 17 1.4.2 Sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) 18 1.4.3 Sắc ký khí khối phổ (GC-MS) 18 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên liệu thiết bị 19 iv 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 19 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng ketamin nước tiểu 20 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng ketamin nước tiểu 20 2.2.3 Ứng dụng phân tích ketamin nước tiểu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Chuẩn bị mẫu 21 2.3.2 Xử lý mẫu 21 2.3.3 Định tính, định lượng ketamin mẫu nước tiểu 22 2.4 Áp dụng quy trình để phân tích mẫu thực tế 26 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 26 Chương 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 28 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng ketamin GC-MS 28 3.1.1 Thiết lập chương trình GC-MS xác định ketamin 28 3.1.2 Khảo sát khối phổ ketamin-HFBA ketamin-4-HFBA 28 3.2 Thẩm định phương pháp 31 3.2.1 Tính phù hợp hệ thống sắc kí 31 3.2.2 Tính chọn lọc 31 3.3 Đánh giá phương pháp 33 3.3.1 Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính 33 3.3.2 Độ độ xác 35 v 3.3.3 Đánh giá hiệu suất chiết 36 3.3.4 Khảo sát giới hạn phát giới hạn định lượng 36 3.4 Áp dụng quy trình phân tích mẫu nước tiểu thực tế 38 BÀN LUẬN 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CTPT Công thức phân tử KLPT Khối lượng phân tử ELISA Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) GC-FID Sắc kí khí với detector ion hóa lửa (Gas Chromatograph – Flame Ionization Detector) GC-MS Sắc kí khí khối phổ (Gas Chromatography – Mass Spectrometry) HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) LC-MS Sắc kí lỏng khối phổ (Liquid Chromatography – Mass Spectrometry) LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation) MeOH Methanol HFBA Heptafloro butyric anhydrid DHNK Dehydronorketamin NMDA N-methyl-D-aspartic acid CNS Hệ thống thần kinh trung ương (Central Nervous System) SPE Chiết pha rắn (Solid Phase Extraction) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) TIC Total Ion Current SIM Single-ion Monitoring MIM Multiple-ion Monitoring vii DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 3.1 Kết khảo sát độ lặp lại ketamin 31 Bảng 3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính ketamin 34 nước tiểu Bảng 3.3 Kết khảo sát độ phương pháp 35 Bảng 3.4 Kết khảo hiệu suất chiết phương pháp 36 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ ổn định phương pháp 38 Bảng 3.6 Kết định lượng số mẫu thực 39 viii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Hình 1.1 Một số hình ảnh ketamin Trang Hình 1.2 Công thức cấu tạo ketamin Hình 1.3 Con đường chuyển hóa ketamin Hình 2.1 Máy sắc kí khí khối phổ 19 Hình 3.1 Sắc kí đồ ketamin-HFBA 28 Hình 3.2 Sắc kí đồ ketamin-d4-HFBA 29 Hình 3.3 Khối phổ ketamin-HFBA 29 Hình 3.4 Khối phổ ketamin-d4-HFBA 30 Hình 3.5 Sắc kí đồ mẫu nước tiểu trắng 32 Hình 3.6 Thời gian lưu mẫu nước tiểu chứa ketamin-HFBA 32 ketamin-d4-HFBA Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính tín hiệu đáp ứng (Sketamin-HFBA/Sketamin-d4-HFBA) với nồng độ mẫu nhiễm nước tiểu 34 ĐẶT VẤN ĐỀ Ma túy từ lâu trở thành vấn đề nhức nhối xã hội Trong thời gian gần đây, phương tiện thông tin đại chúng thường xuyên nhắc đến loại ma túy tống hợp có tên gọi “ke” Đó loại ma túy có tên gọi ketamin Với mức độ gây hại gấp nhiều lần so với loại ma túy truyền thống trước như: heroin, tài mà, thuốc phiện…, "ke" trở thành "cơn lốc ảo" tương lai phận dân chơi [6] Sử dụng ketamin không ảnh hưởng đến cá nhân người sử dụng mà kéo theo nhiều hệ lụy, vấn đề nguy hiểm xã hội Vì vậy, việc phát sử dụng, sản xuất, tàng trữ ketamin nhiệm vụ nhiều phận chức cộng đồng Trên giới, người ta xác định ketamin nước tiểu, máu, tóc, móng phương pháp phân tích khác sắc ký khí khối phổ (GC-MS), sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS), sắc kí khí với detector ion hóa lửa (GC-FID), miễn dịch huỳnh quang (ELISA) [17] Trong đó, Việt Nam, số quan giám định sử dụng test thử nhanh, nghiên cứu phương pháp GC-FID [8] mà chưa thấy có nghiên cứu phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) mẫu nước tiểu GCMS phương pháp có độ nhạy, độ chọn lọc đặc hiệu cao với ketamin, ketamin lại chất thải trừ phần qua nước tiểu, mẫu nước tiểu mẫu vật tiện lợi để xác định nhanh ketamin Để phục vụ cho nhu cầu phát bắt giữ tội phạm nhanh chóng xác hơn, đặt vấn đề xác định ketamin nước tiểu phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp xác định ketamin nước tiểu phương pháp sắc ký khí khối phổ Thẩm định phương pháp xây dựng áp dụng vào mẫu thực tế 36 3.3.3 Đánh giá hiệu suất chiết Khảo sát hiệu suất chiết ketamin hai hàm lượng 100 ng 200 ng Tiến hành chuẩn bị mẫu quy trình xây dựng: chiết pha rắn, tạo dẫn xuất, chạy sắc kí đo diện tích pic Hiệu suất chiết tính tỷ lệ phần trăm diện tích pic dung dịch chuẩn nồng độ mẫu chuẩn chạy qua cột chuẩn không chạy qua cột Kết khảo sát hiệu suất chiết trình bày Bảng sau: Bảng 3.4 Kết khảo sát hiệu suất chiết ketamin Lần Lượng ketamin thêm vào 100 ng 200 ng 89,37 178,82 93,58 185,33 88,65 175,72 90,32 176,28 94,76 182,59 Trung bình (ng) 91,34 179,75 Trung bình (%) 91,34 89,88 RSD(%) 2,98 2,30 - Nhận xét: Hiệu suất chiết với phương pháp chiết pha rắn nước tiểu nằm khoảng 89,88 - 91,34% chấp nhận với độ lặp lại tốt 3.3.4 Khảo sát giới hạn phát giới hạn định lượng Tiến hành pha dãy mẫu nước tiểu nhiễm ketamin với nồng độ giảm dần, xử lý mẫu chạy sắc kí theo quy trình xây dựng, ghi tỷ số chiều cao pic đường nhiễu Tại nồng độ cho tín hiệu thỏa mãn giới hạn phát 37 - Kết quả: Tại hàm lượng ketamin 10ng cho tín hiệu S/N = Vậy giới hạn phát ketamin 10 ng/2ml =5 ng/ml, giới hạn định lượng ketamin × = 15 ng/ml 3.3.5 Độ ổn định Độ ổn định thuốc dịch sinh học bị ảnh hưởng yếu tố khác nhiệt độ, thời gian bảo quản, nồng độ thuốc, mẫu, pH, loại dịch sinh học, sử dụng chất bảo quản phương pháp bảo quản Tất điều dẫn tới thay đổi đáng kể nồng độ chất phân tích mẫu dẫn tới kết định lượng sai Do đó, nhà phân tích độc chất cần phải cân nhắc đến ổn định mẫu để đưa cách giải thích hợp lý cho kết Ví dụ phân hủy hóa học, chuyển hóa tiếp diễn enzym tái phân bố xảy mẫu Các báo cáo khoa học chứng minh tất nồng độ thuốc bị thay đổi mẫu xét nghiệm biến đổi khác thuốc Kết sau: 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ ổn định Lượng ketamin thêm vào Mẫu 100 ng 200 ng Ban Sau Sau Ban Sau Sau đầu1 ngày2 ngày3 đầu4 ngày5 ngày6 101,58 101,03 100,01 203,24 202,97 201,87 100,95 100,33 99,78 199,76 199,09 198,76 100,08 100,04 98,32 206,29 205,88 205,13 108,76 106,78 102,34 208,04 207,74 207,65 99,45 98,54 97,23 197,89 197,02 196,99 98,98 97,64 95,03 210,79 208,09 207,57 Trung bình 101,63 100,73 98,79 204,34 203,47 202,99 RSD (%) 3,56 3,19 2,56 2,42 2,27 2,23 Độ tin cậy P2-1= 0,990 P5-4= 0,991 P3-1= 0,886 P6-4= 0,989 Kết cho thấy lô xét với lượng ketamin thêm vào tương ứng 100 ng 200 ng sau ngày so với ban đầu khác biệt ý nghĩa thống kê với P > 0,05 Do kết luận ketamin ổn định mẫu nước tiểu sau thời gian ngày điều kiện bảo quản 2-8oC 3.4 Áp dụng quy trình phân tích mẫu nước tiểu thực tế Sau khảo sát thu kết phân tích ketamin khả quan mẫu tự tạo, dựa quy trình xây dựng để áp dụng số mẫu thực Mỗi mẫu tiến hành lặp lại lần, tính kết công thức xây dựng 39 trên, tính kết trung bình Các mẫu gửi đế xét nghiệm khoa Hóa Pháp-Viện Pháp y quốc gia Bảng 3.6 Kết định lượng số mẫu thực STT Họ tên Năm sinh Địa Nồng độ ketamin (ng/ml) Nguyễn Đại N 1986 Hà Nội (-) Trần C 1961 Hà Nội 76 Nguyễn Hoàng G 1971 Hà Nội 93 Nguyễn Công C 1996 Hà Nội (-) Trần Phương N 1986 Hà Nội (-) Với mẫu tiến hành xác định ketamin, có mẫu âm tính, mẫu dương tính định lượng ketamin 40 BÀN LUẬN Về quy trình chiết Quy trình chiết sử dụng chiết pha rắn Quy trình tiện lợi phương pháp chiết sử dụng hóa chất, độ tinh khiết cao Về quy trình định lượng thẩm định Phương pháp GC-MS phương pháp phân tích độc chất Phương pháp có độ nhạy độ xác cao Quy trình định lượng chủ yếu tham khảo theo tài liệu Viện Pháp y, bên cạnh có số lưu ý điều chỉnh tạo dẫn xuất Chất chuẩn nội lựa chọn có thời gian lưu gần với chất phân tích, kết cho thấy, với phương pháp này, lựa chọn ketamin-d4 cho kết khả quan Về thẩm định quy trình cho thấy rằng, quy trình có tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng, độ xác đạt yêu cầu Giới hạn phát ng/ml, giới hạn định lượng 15 ng/ml Vì quy trình hoàn toàn thích hợp để định tính, định lượng ketamin nước tiểu Về phân tích mẫu nước tiểu thực tế Mẫu nước tiểu mẫu tiện lợi, quy trình chiết đơn giản Ketamin phát nước tiểu tương ứng 5-6 ngày sau dùng Lượng thải trừ qua thận chủ yếu nên với việc xác định ketamin, lựa chọn mẫu để phân tích nước tiểu hoàn toàn hợp lý GC-MS lại phương pháp có độ nhạy tốt với ketamin Trên thực nghiệm tiến hành xác định ketamin mẫu, cho kết mẫu âm tính, hai mẫu dương tính định lượng ketamin hai mẫu dương tính 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau hoàn thành đề tài này, thực mục tiêu đề với kết cụ thể sau: 1.1 Xây dưng hoàn chỉnh phương pháp định tính định lượng ketamin nước tiểu Quy trình sau: Xử lý mẫu - Cho ml nước tiểu vào ống nghiệm Sau tạo mẫu nhiễm để xây dựng đường chuẩn - Thêm 100, 200, 400, 800 µl dung dịch chuẩn µg/ml để tạo mẫu nhiễm với nồng độ tương ứng 50, 100, 200, 400 ng/ml ketamin - Thêm 400 µl dung dịch chuẩn 0,1 µg/ml để tạo mẫu nhiễm 20 ng/ml ketamin - Thêm xác 100 µl dung dịch nội chuẩn keatmin-d4 µg/ml tương ứng với 100 ng chất nội chuẩn vào mẫu Tiến hành chiết pha rắn - Bước 1: hoạt hóa cột dung môi hữu MeOH dung môi đệm phosphat 0,1M; pH 6, đưa mẫu lên cột, rửa cột nước loại ion - Bước 2: khóa cột acid HCl 0,1M, acid giúp tạo liên kết ion nitơ ketamin nhóm sulfonic chất hấp phụ - Bước 3: cắt rửa trôi liên kết Vanderwaals MeOH, chất gây nhiễu bị loại bỏ, chất phân tích nằm lại cột - Bước 4: rửa giải dung môi rửa giải ethyl acetat:methanol:amoniac = 80:18:2 để cắt liên kết ion chất phân tích chất hấp phụ.Thổi khô khí N2 , sau tạo dẫn xuất với HFBA 42 Thêm 100 µl ethyl acetat, 100 µl HFBA Ủ tủ sấy nhiệt độ 70oC 30 phút Để nguội, thổi khô khí N2, hòa cắn ethyl acetat để tiến hành sắc kí Sắc kí khí khối phổ Điều kiện sắc kí - Cột HP5 MS (30 m x 250 µm x 0,25 µm) - Nhiệt độ đầu cột: 270 0C - Detector: MS - Khí mang Heli, tốc độ dòng ml/phút - Chương trình nhiệt độ: Bắt đầu 800C giữ phút, tăng nhiệt 400C/phút đến 2000C giữ phút, tăng nhiệt 100C/phút đến 2900C giữ 10 phút - Các mảnh phổ ketamin-HFBA, ketamin-d4-HFBA tương ứng m/z = 370, 374 - Định tính: chọn chế độ FULL SCAN, định tính dựa vào thời gian lưu mảnh phổ đặc trưng - Định lượng: chọn chế độ SIM cho mảnh m/z=370 để đo tín hiệu ketaminHFBA m/z=374 để đo tín hiệu ketamin-d4-HFBA 1.2 Thẩm định quy trình áp dụng mẫu thực - Đã áp dụng để phân tích mẫu pháp y cho kết mẫu âm tính, mẫu dương tính Kiến nghị - Áp dụng phương pháp xây dựng để xác định ketamin nước tiểu giám định pháp y - Ngoài ketamin, mẫu ma túy đa dạng phức tạp, nhiều dẫn chất mới, cần tiếp tục nghiên cứu phương pháp để xây dựng phương pháp khác hiệu Hoặc xây dựng quy trình phân tích đồng 43 thời nhiều loại ma túy khác để thuận tiện cho công tác giám định ma túy TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Nghị định bổ sung số chất vào danh mục chất ma tuý tiền chất ban hành kèm theo Nghị định số 67/2001/NĐ-CP ngày 01 tháng 10 năm 2001 Chính phủ ( 6/ 11/ 2003), chủ biên, Chính phủ Bộ Y Tế (2007), Hóa dược tập II, Nhà xuất Y học Bộ Y Tế (2007), Hóa Phân Tích, tập II - Phân tích dụng cụ, Nhà xuất Y học Bộ Y Tế (2014), Quy trình giám định pháp y Nhà xuất Y học Cơ quan Phòng chống Ma tuý Tội phạm Liên hợp quốc, Văn phòng Việt Nam (2012), “Các chất kích thích dạng amphetamin Việt Nam – Một đánh giá mức độ có sẵn, sử dụng tác động sức khỏe an toàn xã hội Việt Nam” Trần Huy (16/06/2014), "Vén “cơn lốc áo” ketamine", Báo An Ninh Thế Giới Online Ngô Thị Liên (2014), Nghiên cứu xác định amphetamin metamphetamin nước tiểu phương pháp sắc ký khí khối phổ, Khóa luận tốt nghiệp Đại học Quốc Gia Hà Nội - Trường ĐHKHTN Nguyễn Xuân Trường, Hoàng Thế Thắng (2014), "Xây dựng phương pháp giám định ketamin nước tiểu sắc kí khí GC-FID", Tạp chí Dược học 54(2), tr 56-60 II Tiếng Anh M Roberts, S Jagdish (2016), "A History of Intravenous Anesthesia in War (1656-1988)", J Anesth Hist 2(1), pp 13-21 10 Rayan K Al Jurdi, Sanjay J Mathew (2014), "Ketamine for treatmentresistant unipolar depression: current evidence", Psychiatric Times 31(9), pp 23-23 11 Stewart A Bergman (1999), "Ketamine: review of its pharmacology and its use in pediatric anesthesia", Anesthesia progress 46(1), pp 10 12 Pai-Sheng Cheng, SO (2007), "GC–MS quantification of ketamine, norketamine, and dehydronorketamine in urine specimens and comparative study using ELISA as the preliminary test methodology", Journal of Chromatography B 852(1), pp 443-449 13 Kaitlin E DeWilde, SO (2015), "The promise of ketamine for treatment‐resistant depression: current evidence and future directions", Annals of the New York Academy of Sciences 1345(1), pp 47-58 14 James S Fritz (1999), Analytical solid-phase extraction, Wiley-Vch 15 Mei Gao, Damoon Rejaei, Hong Liu (2016), "Ketamine use in current clinical practice", Acta Pharmacologica Sinica 16 PJ Hancock, JA Stamford (1999), "Stereospecific effects of ketamine on dopamine efflux and uptake in the rat nucleus accumbens", British journal of anaesthesia 82(4), pp 603-608 17 Norlida Harun (2010), Application of molecularly imprinted solid phase extraction, enzyme-linked immunosorbent assay and liquid chromatography tandem mass spectrometry to forensic toxicology, University of Glasgow 18 Youssef Hijazi, Roselyne Boulieu (2002), "Contribution of CYP3A4, CYP2B6, and CYP2C9 Isoforms toN-Demethylation of Ketamine in Human Liver Microsomes", Drug Metabolism and Disposition 30(7), pp 853-858 19 Eun-mi Kim, SO (2008), "Analysis of ketamine and norketamine in urine by automatic solid-phase extraction (SPE) and positive ion chemical ionization–gas chromatography–mass spectrometry (PCI– GC–MS)", Forensic science international 174(2), pp 197-202 20 S Köhler, F Betzler (2015), "Ketamine-a new treatment option for therapy-resistant depression", Fortschritte der Neurologie-Psychiatrie 83(2), pp 91-97 21 Hei Hwa Lee, SO (2011), "Simultaneous Determination of HFBADerivatized Amphetamines and Ketamines in Urine by Gas Chromatography-Mass Spectrometry", Journal of analytical toxicology 35(3), pp 162-169 22 Huei R Lin, Ahai C Lua (2004), "Detection of acid-labile conjugates of ketamine and its metabolites in urine samples collected from pub participants", Journal of analytical toxicology 28(3), pp 181-186 23 N Lindefors, S Barati, WT O'Connor (1997), "Differential effects of single and repeated ketamine administration on dopamine, serotonin and GABA transmission in rat medial prefrontal cortex", Brain research 759(2), pp 205-212 24 JM Malinovsky, SO (1996), "Ketamine and norketamine plasma concentrations after iv, nasal and rectal administration in children", British Journal of Anaesthesia 77(2), pp 203-207 25 Hans H Maurer (1998), "Liquid chromatography–mass spectrometry in forensic and clinical toxicology", Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications 713(1), pp 3-25 26 Karla A Moor, SO (1997), "Tissue distribution of ketamine in a mixed drug fatality", Journal of forensic sciences 42, pp 1183-1185 27 James W Murrough (2012), "Ketamine as a novel antidepressant: from synapse to behavior", Clinical Pharmacology & Therapeutics 91(2), pp 303-309 28 Adam Negrusz, SO (2005), "Detection of ketamine and norketamine in urine of nonhuman primates after a single dose of ketamine using microplate enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and NCIGC-MS", Journal of analytical toxicology 29(3), pp 163-168 29 Mark C Parkin, SO (2008), "Detection of ketamine and its metabolites in urine by ultra high pressure liquid chromatography–tandem mass spectrometry", Journal of Chromatography B 876(1), pp 137-142 30 David L Reich, George Silvay (1989), "Ketamine: an update on the first twenty-five years of clinical experience", Canadian Journal of Anaesthesia 36(2), pp 186-197 31 Gwenn S Smith, SO (1998), "Glutamate modulation of dopamine measured in vivo with positron emission tomography (PET) and 11Craclopride in normal human subjects", Neuropsychopharmacology 18(1), pp 18-25 32 Sean C Sweetman (2009), Martindane 36th, 1779-1780 33 Franz X Vollenweider, SO (2000), "Effects of (S)-ketamine on striatal dopamine: a [11 C] raclopride PET study of a model psychosis in humans", Journal of psychiatric research 34(1), pp 35-43 34 Alan L Weiner, SO (2000), "Ketamine abusers presenting to the emergency department: a case series", The Journal of emergency medicine 18(4), pp 447-451 35 Hiệp hội thuốc http://www.medicines.org.uk/emc/ Anh, tra ngày 10/5/2016, PHỤ LỤC Sắc kí đồ mẫu thực sau xử lý tách ion với mảnh 370 Abundance Ion 370.00 (369.70 to 370.70): 00301011.D\ data.ms 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 9.50 10.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5014.0014.5015.0015.50 Time > Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Nguyễn Đại N sau xử lý tách ion với mảnh 370 Abundance Ion 370.00 (369.70 to 370.70): 00201010.D\ data.ms 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 9.20 9.40 9.60 9.80 10.0010.2010.4010.6010.8011.0011.2011.4011.6011.80 Time > Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Nguyễn Công C sau xử lý tách ion với mảnh 370 Abundance Ion 370.00 (369.70 to 370.70): 00301011.D\ data.ms 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 9.50 10.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5014.0014.5015.0015.50 Time > Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Trần Phương N sau xử lý tách ion với mảnh 370 Abundance Ion 370.00 (369.70 to 370.70): 00201002.D\ data.ms 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00 12.50 Time > Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Nguyễn Hoàng G sau xử lý tách ion với mảnh 370 Abundance Ion 370.00 (369.70 to 370.70): 00401004.D\ data.ms 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 9.40 9.60 9.80 10.00 10.20 10.40 10.60 10.80 11.00 11.20 11.40 11.60 Time > Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Nguyễn Mạnh H sau xử lý tách ion với mảnh 370