Bài thuyết trình phân tích nhóm vitamin, kháng sinh bằng phương pháp sắc kí lỏng (HPLC)

Báo cáo Phân tích nhóm Vitamin, kháng sinh bằng phương pháp sắc kí lỏng HPLC Báo cáo viên: Vũ Thị Khắc Đơn vị: Phòng phân tích và kiểm tra chất lượng sản phẩm Hà Nội, ngày 28/4/2016...

Báo cáo Phân tích nhóm Vitamin, kháng sinh

bằng phương pháp sắc kí lỏng

(HPLC)

Báo cáo viên: Vũ Thị Khắc Đơn vị: Phòng phân tích và kiểm tra chất lượng sản phẩm

Hà Nội, ngày 28/4/2016

Tổng quan về vitamin và thuốc kháng sinh

• 1 Vitamin

• Vitamin hay sinh tố, là phân tử hữu cơ cần thiết ở lượng rất nhỏ cho hoạt động

chuyển hóa bình thường của cơ thể sinh vật Có nhiều loại vitamin và chúng khác nhau về bản chất hóa học lẫn tác dụng sinh lý.

• Có 2 nhóm vitamin:

Vitamin tan

Vitamin tan

1 Vitamin

• Vitamin là những hợp chất hữu cơ rất

cần thiết cho cơ thể, nhưng cơ thể

không tự tổng hợp được, phần lớn phải

bổ sung bằng đường ăn uống Với liều

lượng rất nhỏ, nhưng vitamin đóng vai

trò quan trọng đối với sự sống của con

người: đó là những chất xúc tác không

thể thiếu cho sự chuyển hóa các chất

trong cơ thể, thiếu vitamin có thể gây ra

một số bệnh.

• Bổ sung vitamin bằng rau củ, thực

phẩm hằng ngày và bằng thực phẩm

chức năng, thuốc.

2 Thuốc kháng sinh

• Kháng sinh còn được gọi

là Trụ sinh là những chất

có khả năng tiêu diệt vi

khuẩn hay kìm hãm sự

phát triển của vi khuẩn một

cách đặc hiệu Nó có tác

dụng lên vi khuẩn ở cấp

độ phân tử, thường là một

vị trí quan trọng của vi

khuẩn hay một phản ứng

trong quá trình phát triển

của vi khuẩn

• Kháng sinh gồm có 7

nhóm:

Các

Các

Các

Các

Các

Các

Các

Vai trò của thuốc kháng sinh

• Mục đích tạo ra và sử dụng

các kháng sinh chính là dùng

để kìm hãm và ức chế quá

trình phát triển của các vi

khuẩn, thậm chí là loại bỏ các

vi khuẩn này hoàn toàn Thông

thường, thì thuốc kháng

sinh có tác dụng lên vi khuẩn

ở cấp độ phân tử, thường là

một vị trí quan trọng của vi

khuẩn hay một phản ứng trong

quá trình phát triển của vi

• Thuốc kháng sinh có tác dụng điều trị bệnh nhưng nếu dùng không đúng cách ( quá liều lượng, lạm dụng, không đúng loại) sẽ trở thành nguy hại cho sức khỏe của chính người sử dụng thuốc

Nhu cầu phân tích xác định hàm lượng vitamin, kháng sinh

Quản

Phân

Nhà

Người

Quan

Xử Quản Bảo Cấp

2 Phương pháp phân tích sắc kí lỏng ( HPLC)

• Nguyên tắc: HPLC được thực hiện dựa trên việc

bơm để đẩy một lượng chất lỏng dưới áp suất

cao và hỗn hợp mẫu cần phân tích đi qua một

cột được nhồi đầy một loại chất hấp phụ và từ

đó dẫn tới việc tách các thành phần của mẫu

Chất hấp phụ – được nhồi trong cột, là các hạt

rắn (như silica, polymers) với kích thước từ 2 –

50 µm Các thành phần trong hỗn hợp mẫu được

tách ra khỏi nhau nhờ vào mức độ tương tác

khác nhau với các hạt chất hấp phụ Dòng chất

lỏng dưới áp suất cao thường là hỗn hợp của các

dung môi (nước, acetonitrile và/hoặc methanol),

được gọi là “pha động” Thành phần và nhiệt độ

dung môi đóng vai trò chính trong quá trình tách

chất do tương tác xảy ra giữa các thành phần của

mẫu và chất hấp phụ Về bản chất, các tương tác

này là tương tác vật lý như tương tác kị nước

(phân tán), tương tác lưỡng cực và tương tác

ion, thông thường nhất là tổng hợp của tất cả

các tương tác trên.

Các vitamin được phân tích xác định bằng HPLC

Xác định hàm lượng

Vitamin bằng phương

pháp HPLC :

B1, B2, B3, PP, B5, B6,

C, A, D, E, K

Phân bón B1 0,3 mg/kg

B2 0,3 mg/kg B3 0,3 mg/kg

PP 0,3 mg/kg B5 0,3 mg/kg B6 0,3 mg/kg

C 0,1 µg/kg

A 0,3 mg/kg

D 0,3 mg/kg

E 1,0 mg/kg

K 0,5 mg/kg

l31ku010 HPLC

Xác định hàm lượng

Vitamin bằng phương

pháp HPLC:

B1, B2, B3, PP, B5, B6,

C, A, D, E, K

Thuốc thú y 115 Xác định hàm

B1 0,3 mg/kg B2 0,3 mg/kg B3 0,3 mg/kg

PP 0,3 mg/kg B5 0,3 mg/kg B6 0,3 mg/kg

C 0,1 mcg/kg

A 0,3 mg/kg

D 0,3 mg/kg

E 1,0 mg/kg

K 0,5 mg/kg

l31ku010 HPLC

Xác định hàm lượng

Aflatoxin B1,B2,G1,G2

bằng phương pháp

HPLC:

Thức ăn chăn nuôi

Aflatoxin B1 0,13 µg/kg Aflatoxin B2 0,12 µg/kg Aflatoxin G1 0,09 µg/kg Aflatoxin G2 0,15 µg/kg

Ref.BAKERBOND Application; AOAC 990.33 AOAC 986.16 CASE.SK.0018 HPLC

Các loại kháng sinh được phân tích bằng HPLC

Sulfamethoxazole

Sulfaquinoxaline

Erythromycine

Lincomycine

Ormetoprim

Spiramycin

Josamycin

Tiamuline HF

Trimethoprim

Tylosin

Amoxicilline

Ampicilline

Cloxacilline

Penicilline

Chloramphenicol

Florfenicol

Thiamphenicol

Thức ăn chăn nuôi Sulfamethoxazole 0,2 mg/kgSulfaquinoxaline 0,2 mg/kg

Erythromycine 2,5 mg/kg Lincomycine 0,5 mg/kg Ormetoprim 0,25 mg/kg Spiramycin 0,5 mg/kg Josamycin 0,5 mg/kg Tiamuline HF 1,0 mg/kg Trimethoprim 0,5 mg/kg Tylosin 0,5 mg/kg Amoxicilline 0,5 mg/kg Ampicilline 0,5 mg/kg Cloxacilline 1,0 mg/kg Penicilline 0,5 mg/kg Chloramphenicol 0,25 mg/kg Florfenicol 1,0 mg/kg

Thiamphenicol 1,0 mg/kg

l32hu010 HPLC

Họ Tetracylines :

Chlortetracyline,

Doxycyline,

Oxytetracyline,

Tetracyline

Họ (Fluoro)

Quinolones :

Ciprofloxacine,

Danofloxacine,

Difloxacine,

Flumequine,

Norfloxacine,

Ofloxacine, Oxolinic acid.

Họ Sulfonamines Sulfadiazine,

Sulfadimidine,

Sulfaguanidine,

Sulfamethoxazole,Sulfaquinoxaline

Họ Marcrolides :

Erythromycine,

Lincomicine,

Ormetoprim,

Spiramycine, Josamycin

Họ Beta-Lactams :

Tiamuline HF,

Trimethoprim, Tylosin ,

Amoxicilline,

Thuốc thú y, Thuốc thú y thủy sản

Chlortetracycline 0,25 mg/kg Doxycycline 0,25 mg/kg Oxytetracycline 0,25 mg/kg Tetracycline 0,25 mg/kg Ciprofloxacine 0,25 mg/ g Danofloxacine 0,25 mg/kg Difloxacine 0,25 mg/kg Flumequine 0,25 mg/kg Norfloxacine 0,25 mg/kg Ofloxacine 0,25 mg/kg Oxolinic acid 0,25 mg/kg Sulfadiazine 0,2 mg/kg Sulfadimidine 0,2 mg/kg Sulfaguanidine 0,2 mg/kg Sulfamethoxazole 0,2 mg/kg Sulfaquinoxaline 0,2 mg/kg Erythromycine 2,5 mg/kg Lincomycine 0,5 mg/kg Ormetoprim 0,25 mg/kg Spiramycin 0,5 mg/kg Josamycin 0,5 mg/kg Tiamuline 1,0 mg/kg Trimethoprim 0,5 mg/kg Tylosin 0,5 mg/kg Amoxicilline 0,5 mg/kg Ampicilline 0,5 mg/kg

Ref HPLC-USP29 NF24 2006; MN – Reversed phase HPLC Application Guide l32hu010 HPLC

Phân tích Vitamin tan trong nước bằng phương

pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)

• Sử dụng sắc ký pha đảo với

pha động phân cực, pha tĩnh

kém phân cực.

• Nguyên tắc: Pha động sau khi

được bài khí được bơm đưa

vào hệ thống sắc ký Thực

nghiệm viên tự bơm mẫu vào

Pha động khi đi ngang qua sẽ

cuốn mẫu phân tích đi theo

Khi vào trong cột sắc ký, chất

nào có ái lực mạnh với pha

động sẽ theo pha động đi ra

trước, chất nào có ái lực yếu

hơn sẽ đi ra sau Đầu dò phát

hiện các cấu tử đi ra khỏi cột,

chuyển tín hiệu cho máy ghi

• Hệ thống thiết bị

Hệ

Dụng

Các bước tiến hành

Chuẩn

Chuẩn

Phân

Xử

Một số lưu ý

• Việc thực hiện phân tích các Vitamin cần tuân theo các yêu cầu bảo đảm không bị thất thoát hay sai số hàm lượng Vitamin do một số loại Vitamin rất dễ bay hơi, hoặc biến tính do tác động của ánh sáng, nhiệt độ: Vitamin C dễ bay hơi khi có ánh sáng,…

• Cần thực hiện nghiêm ngặt QA/QC trong phân tích để đảm bảo số liệu đo đạc được chính xác nhất.

Phân tích Kháng sinh trong nước bằng phương pháp sắc

kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)

• Dư lượng kháng sinh trong thực phẩm hiện là vấn đề quan ngại của hầu hết các cơ quan kiểm soát thực phẩm trên thế giới Một số kháng sinh bản thân nó có thể gây ra tác động có hại cho sức khỏe người tiêu dùng (chloramphenicol, malachite green…), một số loại khác như các kháng sinh nhóm nitrofurans qua quá trình trao đổi chất trong cơ thể động vật có thể sinh ra những hợp chất

có đọc tính cao đối với cơ thể sống Chính vì vậy, những kháng sinh này bị cấm sử dụng hoàn toàn trong nuôi trồng vào bảo quản thực phẩm.

• Phân tích dư lượng thuốc kháng sinh trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi chính là nhằm mục đích quản lý và kiểm soát chất lượng sản phẩm an toàn cho người và gia súc

sử dụng.

Phương pháp định lượng Sulfonamit trong sản phẩm thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)

• Đối tượng: Phương pháp xác định hàm lượng nhóm chất

sulfonamit gồm: sulfadiazine, sulfothiazole, sulfamethazine,

sulfamethoxypiridazine, sulfacloropyridazine, sulfadoxine,

sulfamethoxazoll, sulfadimethoxine, sulfachinoxaline

• Nguyên tắc: các chất sulfonamit có trong mẫu sản phẩm được

chiết tách bằng hỗn hợp axetonitril và diclorometan Dịch chiết sau khi cô cạn cho tác dụng với dung dịch fluorescamine để tạo dẫn suất huỳnh quang Hàm lượng dẫn suất được xác định trên hệ

thống HPLC với đầu dò huỳnh quang theo phương pháp ngoại

chuẩn

Phương pháp định lượng Sulfonamit trong sản phẩm thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao

(HPLC)

Thiết

Máy

Hệ

Máy

Cột

Hóa

Dung Các Dung Dung Pha Các Các Dung

Cách tiến hành

Một số lưu ý

• Dư lượng thuốc kháng sinh có

trong thức ăn chăn nuôi, thuốc

thú ý có hàm lượng rất nhỏ, vì

vậy cần đảm bảo quy trình

phân tích tuân thủ nghiêm ngặt

yêu cầu kỹ thuật, QA/QC để

đảm bảo số liệu phân tích

chính xác

• Công tác bảo hộ lao động

cũng cần chú ý thực hiện để

đảm bảo an toàn sức khỏe của

thử nghiệm viên

TRÂN TRỌNG CẢM ƠN!!!