Bài thuyết trình phân tích nhóm vitamin, kháng sinh bằng phương pháp sắc kí lỏng (HPLC)

Báo cáo Phân tích nhóm Vitamin, kháng sinh phương pháp sắc kí lỏng (HPLC) Báo cáo viên: Vũ Thị Khắc Đơn vị: Phòng phân tích kiểm tra chất lượng sản phẩm Hà Nội, ngày 28/4/2016 Tổng quan vitamin thuốc kháng sinh • Vitamin • Vitamin hay sinh tố, phân tử hữu cần thiết lượng nhỏ cho hoạt động chuyển hóa bình thường thể sinh vật Có nhiều loại vitamin chúng khác chất hóa học lẫn tác dụng sinh lý • Có nhóm vitamin: Vitamin tan Vitamin • Vitamin hợp chất hữu cần thiết cho thể, thể không tự tổng hợp được, phần lớn phải bổ sung đường ăn uống Với liều lượng nhỏ, vitamin đóng vai trò quan trọng sống người: chất xúc tác thiếu cho chuyển hóa chất thể, thiếu vitamin gây số bệnh • Bổ sung vitamin rau củ, thực phẩm ngày thực phẩm chức năng, thuốc 2 Thuốc kháng sinh • Kháng sinh gọi Trụ sinh chất có khả tiêu diệt vi khuẩn hay kìm hãm phát triển vi khuẩn cách đặc hiệu Nó có tác dụng lên vi khuẩn cấp độ phân tử, thường vị trí quan trọng vi khuẩn hay phản ứng trình phát triển vi khuẩn • Kháng nhóm: sinh gồm có Vai trò thuốc kháng sinh • Mục đích tạo sử dụng kháng sinh dùng để kìm hãm ức chế trình phát triển vi khuẩn, chí loại bỏ vi khuẩn hoàn toàn Thông thường, thuốc kháng sinh có tác dụng lên vi khuẩn cấp độ phân tử, thường vị trí quan trọng vi khuẩn hay phản ứng trình phát triển vi khuẩn • Thuốc kháng sinh có tác dụng điều trị bệnh dùng không cách ( liều lượng, lạm dụng, không loại) trở thành nguy hại cho sức khỏe người sử dụng thuốc Nhu cầu phân tích xác định hàm lượng vitamin, kháng sinh Phương pháp phân tích sắc kí lỏng ( HPLC) Khái • Nguyên tắc: HPLC thực dựa việc bơm để đẩy lượng chất lỏng áp suất cao hỗn hợp mẫu cần phân tích qua cột nhồi đầy loại chất hấp phụ từ dẫn tới việc tách thành phần mẫu Chất hấp phụ – nhồi cột, hạt rắn (như silica, polymers) với kích thước từ – 50 µm Các thành phần hỗn hợp mẫu tách khỏi nhờ vào mức độ tương tác khác với hạt chất hấp phụ Dòng chất lỏng áp suất cao thường hỗn hợp dung môi (nước, acetonitrile và/hoặc methanol), gọi “pha động” Thành phần nhiệt độ dung môi đóng vai trò trình tách chất tương tác xảy thành phần mẫu chất hấp phụ Về chất, tương tác tương tác vật lý tương tác kị nước (phân tán), tương tác lưỡng cực tương tác ion, thông thường tổng hợp tất tương tác Các vitamin phân tích xác định HPLC Xác định hàm lượng Vitamin phương pháp HPLC : B1, B2, B3, PP, B5, B6, C, A, D, E, K Phân bón B1 0,3 mg/kg B2 0,3 mg/kg B3 0,3 mg/kg PP 0,3 mg/kg B5 0,3 mg/kg B6 0,3 mg/kg C 0,1 µg/kg A 0,3 mg/kg D 0,3 mg/kg E 1,0 mg/kg K 0,5 mg/kg Xác định hàm lượng Vitamin phương pháp HPLC: B1, B2, B3, PP, B5, B6, C, A, D, E, K Thuốc thú y 115 Xác định hàm B1 0,3 mg/kg B2 0,3 mg/kg B3 0,3 mg/kg PP 0,3 mg/kg B5 0,3 mg/kg B6 0,3 mg/kg C 0,1 mcg/kg A 0,3 mg/kg D 0,3 mg/kg E 1,0 mg/kg K 0,5 mg/kg Xác định hàm lượng Aflatoxin B1,B2,G1,G2 phương pháp HPLC: Thức ăn chăn nuôi Aflatoxin B1 0,13 µg/kg Aflatoxin B2 0,12 µg/kg Aflatoxin G1 0,09 µg/kg Aflatoxin G2 0,15 µg/kg l31ku010 HPLC l31ku010 HPLC Ref.BAKERBOND Application; AOAC 990.33 AOAC 986.16 CASE.SK.0018 HPLC Các loại kháng sinh phân tích HPLC Sulfamethoxazole Sulfaquinoxaline Erythromycine Lincomycine Ormetoprim Spiramycin Josamycin Tiamuline HF Trimethoprim Tylosin Amoxicilline Ampicilline Cloxacilline Penicilline Chloramphenicol Florfenicol Thiamphenicol Thức ăn chăn nuôi Sulfamethoxazole 0,2 mg/kg Sulfaquinoxaline 0,2 mg/kg Erythromycine 2,5 mg/kg Lincomycine 0,5 mg/kg Ormetoprim 0,25 mg/kg Spiramycin 0,5 mg/kg Josamycin 0,5 mg/kg Tiamuline HF 1,0 mg/kg Trimethoprim 0,5 mg/kg Tylosin 0,5 mg/kg Amoxicilline 0,5 mg/kg Ampicilline 0,5 mg/kg Cloxacilline 1,0 mg/kg Penicilline 0,5 mg/kg Chloramphenicol 0,25 mg/kg Florfenicol 1,0 mg/kg Thiamphenicol 1,0 mg/kg Họ Tetracylines : Chlortetracyline, Doxycyline, Oxytetracyline, Tetracyline Họ (Fluoro) Quinolones : Ciprofloxacine, Danofloxacine, Difloxacine, Flumequine, Norfloxacine, Ofloxacine, Oxolinic acid Họ Sulfonamines Sulfadiazine, Sulfadimidine, Sulfaguanidine, Sulfamethoxazole,Sulfaquinoxaline Họ Marcrolides : Erythromycine, Lincomicine, Ormetoprim, Spiramycine, Josamycin Họ Beta-Lactams : Tiamuline HF, Trimethoprim, Tylosin , Amoxicilline, Ampicilline, Cloxacilline, Penicilline Họ Amphenicols : Chloramphenicol,florfenicol,thiamphenicol Thuốc thú y, Thuốc thú y thủy sản Chlortetracycline 0,25 mg/kg Doxycycline 0,25 mg/kg Oxytetracycline 0,25 mg/kg Tetracycline 0,25 mg/kg Ciprofloxacine 0,25 mg/ g Danofloxacine 0,25 mg/kg Difloxacine 0,25 mg/kg Flumequine 0,25 mg/kg Norfloxacine 0,25 mg/kg Ofloxacine 0,25 mg/kg Oxolinic acid 0,25 mg/kg Sulfadiazine 0,2 mg/kg Sulfadimidine 0,2 mg/kg Sulfaguanidine 0,2 mg/kg Sulfamethoxazole 0,2 mg/kg Sulfaquinoxaline 0,2 mg/kg Erythromycine 2,5 mg/kg Lincomycine 0,5 mg/kg Ormetoprim 0,25 mg/kg Spiramycin 0,5 mg/kg Josamycin 0,5 mg/kg Tiamuline 1,0 mg/kg Trimethoprim 0,5 mg/kg Tylosin 0,5 mg/kg Amoxicilline 0,5 mg/kg Ampicilline 0,5 mg/kg Cloxacilline 1,0 mg/kg Penicilline 0,5 mg/kg Chloramphenicol 0,25 mg/kg Florfenicol 1,00 mg/kg Thiamphenicol 1,00 mg/kg l32hu010 HPLC Ref HPLC-USP29 NF24 2006; MN – Reversed phase HPLC Application Guide l32hu010 HPLC Phân tích Vitamin tan nước phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) • Sử dụng sắc ký pha đảo với pha động phân cực, pha tĩnh phân cực • Nguyên tắc: Pha động sau khí bơm đưa vào hệ thống sắc ký Thực nghiệm viên tự bơm mẫu vào Pha động ngang qua mẫu phân tích theo Khi vào cột sắc ký, chất có lực mạnh với pha động theo pha động trước, chất có lực yếu sau Đầu dò phát cấu tử khỏi cột, chuyển tín hiệu cho máy ghi kết • Hệ thống thiết bị Các bước tiến hành Chuẩn Một số lưu ý • Việc thực phân tích Vitamin cần tuân theo yêu cầu bảo đảm không bị thất thoát hay sai số hàm lượng Vitamin số loại Vitamin dễ bay hơi, biến tính tác động ánh sáng, nhiệt độ: Vitamin C dễ bay có ánh sáng,… • Cần thực nghiêm ngặt QA/QC phân tích để đảm bảo số liệu đo đạc xác Phân tích Kháng sinh nước phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) • Dư lượng kháng sinh thực phẩm vấn đề quan ngại hầu hết quan kiểm soát thực phẩm giới Một số kháng sinh thân gây tác động có hại cho sức khỏe người tiêu dùng (chloramphenicol, malachite green…), số loại khác kháng sinh nhóm nitrofurans qua trình trao đổi chất thể động vật sinh hợp chất có đọc tính cao thể sống Chính vậy, kháng sinh bị cấm sử dụng hoàn toàn nuôi trồng vào bảo quản thực phẩm • Phân tích dư lượng thuốc kháng sinh thực phẩm thức ăn chăn nuôi nhằm mục đích quản lý kiểm soát chất lượng sản phẩm an toàn cho người gia súc sử dụng Phương pháp định lượng Sulfonamit sản phẩm thủy sản sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) • Đối tượng: Phương pháp xác định hàm lượng nhóm chất sulfonamit gồm: sulfadiazine, sulfothiazole, sulfamethazine, sulfamethoxypiridazine, sulfacloropyridazine, sulfadoxine, sulfamethoxazoll, sulfadimethoxine, sulfachinoxaline • Nguyên tắc: chất sulfonamit có mẫu sản phẩm chiết tách hỗn hợp axetonitril diclorometan Dịch chiết sau cô cạn cho tác dụng với dung dịch fluorescamine để tạo dẫn suất huỳnh quang Hàm lượng dẫn suất xác định hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang theo phương pháp ngoại chuẩn Phương pháp định lượng Sulfonamit sản phẩm thủy sản sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Thiết Cách tiến hành 654321- Một số lưu ý • Dư lượng thuốc kháng sinh có thức ăn chăn nuôi, thuốc thú ý có hàm lượng nhỏ, cần đảm bảo quy trình phân tích tuân thủ nghiêm ngặt yêu cầu kỹ thuật, QA/QC để đảm bảo số liệu phân tích xác • Công tác bảo hộ lao động cần ý thực để đảm bảo an toàn sức khỏe thử nghiệm viên TRÂN TRỌNG CẢM ƠN!!! [...].. .Phân tích Vitamin tan trong nước bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) • Sử dụng sắc ký pha đảo với pha động phân cực, pha tĩnh kém phân cực • Nguyên tắc: Pha động sau khi được bài khí được bơm đưa vào hệ thống sắc ký Thực nghiệm viên tự bơm mẫu vào Pha động khi đi ngang qua sẽ cuốn mẫu phân tích đi theo Khi vào trong cột sắc ký, chất nào có ái lực mạnh với... những kháng sinh này bị cấm sử dụng hoàn toàn trong nuôi trồng vào bảo quản thực phẩm • Phân tích dư lượng thuốc kháng sinh trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi chính là nhằm mục đích quản lý và kiểm soát chất lượng sản phẩm an toàn cho người và gia súc sử dụng Phương pháp định lượng Sulfonamit trong sản phẩm thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) • Đối tượng: Phương pháp xác định hàm lượng nhóm. .. thực hiện phân tích các Vitamin cần tuân theo các yêu cầu bảo đảm không bị thất thoát hay sai số hàm lượng Vitamin do một số loại Vitamin rất dễ bay hơi, hoặc biến tính do tác động của ánh sáng, nhiệt độ: Vitamin C dễ bay hơi khi có ánh sáng,… • Cần thực hiện nghiêm ngặt QA/QC trong phân tích để đảm bảo số liệu đo đạc được chính xác nhất Phân tích Kháng sinh trong nước bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu... tách bằng hỗn hợp axetonitril và diclorometan Dịch chiết sau khi cô cạn cho tác dụng với dung dịch fluorescamine để tạo dẫn suất huỳnh quang Hàm lượng dẫn suất được xác định trên hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang theo phương pháp ngoại chuẩn Phương pháp định lượng Sulfonamit trong sản phẩm thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) Thiết Cách tiến hành 654321- Một số lưu ý • Dư lượng thuốc kháng. .. lỏng hiệu năng cao (HPLC) • Dư lượng kháng sinh trong thực phẩm hiện là vấn đề quan ngại của hầu hết các cơ quan kiểm soát thực phẩm trên thế giới Một số kháng sinh bản thân nó có thể gây ra tác động có hại cho sức khỏe người tiêu dùng (chloramphenicol, malachite green…), một số loại khác như các kháng sinh nhóm nitrofurans qua quá trình trao đổi chất trong cơ thể động vật có thể sinh ra những hợp chất... phẩm thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) Thiết Cách tiến hành 654321- Một số lưu ý • Dư lượng thuốc kháng sinh có trong thức ăn chăn nuôi, thuốc thú ý có hàm lượng rất nhỏ, vì vậy cần đảm bảo quy trình phân tích tuân thủ nghiêm ngặt yêu cầu kỹ thuật, QA/QC để đảm bảo số liệu phân tích chính xác • Công tác bảo hộ lao động cũng cần chú ý thực hiện để đảm bảo an toàn sức khỏe của thử nghiệm viên