Nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp một số ENZYME thủy phân và oxy hóa liên quan đến chuyển hóa LIGNOCELLULOSE bởi nấm AUREOBASIDIUM PULLULANS

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -·-·- -·-·- KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP MỘT SỐ ENZYME THỦY PHÂN VÀ OXY HÓA LIÊN QUAN ĐẾN CHUYỂN HÓA LIGNOCELLULOSE BỞI NẤM AUREOBASIDIUM PULLULANS Giáo viên hướng dẫn : TS ĐỖ HỮU NGHỊ Sinh viên thực : ĐỖ THỊ ĐAN PHƯỢNG Lớp : K18 CNSH 1104 HÀ NỘI, 2015 Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 LỜI CẢM ƠN Formatted: Font: Not Italic Formatted: Centered Trong thời gian làm việc Phòng Sinh học thực nghiệm – Viện hóa học hợp Formatted: Indent: First line: 0.38" chất thiên nhiên, em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới TS Đỗ Hữu Nghị, người thầy dạy dỗ hướng dẫn em hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn cán nhân viên phòng Mọi người yêu quý, tận tình giúp đỡ em, tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực tập Khoảng thời gian em không quên với biết kỉ niệm, bước vào môi trường làm việc khác biệt so với giảng đường Đại học Những người thầy, người cô em vô yêu mến quý trọng, để lại lòng em biết ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô khoa Công nghệ sinh Formatted: Indent: First line: 0.39" học – Viện Đại học Mở Hà Nội tận tình giảng dạy giúp đỡ em thời gian học tập trường Cuối em kính chúc quý thầy cô, cô chú, anh chị phòng Sinh học thực nghiệm dồi sức khỏe, đạt nhiều thành công nghiệp nghiên cứu khoa học truyền đạt tri thức cho hệ sinh viên trẻ Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2015 Sinh viên thực Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, cố gắng nỗ lực thân, em nhận quan tâm giúp đỡ nhiều cá nhân tập thể Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Phòng Sinh học thực nghiệm-Viện hóa học hợp chất thiên nhiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán nhân viên phòng Mọi người yêu quý, tận tình giúp đỡ em, tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực tập Đặc biệt, em cảm ơn TS Đỗ Hữu Nghị người dành nhiều thời gian, tâm huyết, tận tình Đỗ Thị Đan Phượng Formatted: Indent: First line: 0.25", Space After: pt Formatted: Font: Not Bold, Not Italic, Font color: Black, English (United States), Check spelling and grammar Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 giúp đỡ trực tiếp hướng dẫn em suốt trình thực khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Đỗ Thị Đan Phượng Formatted: Indent: Left: 0" Formatted: Centered, Indent: Left: 0", Line spacing: single Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 MỤC LỤC Formatted: Font: Bold Formatted: Font: Bold Formatted: Font: Bold Contents MỞ ĐẦU PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm cấu trúc lignocellulose 1.1.1 Cellulose 1.1.2 Hemicellulose 1.1.3 Lignin 1.1.4 Pectin 1.2 Enzyme tham gia chuyển hóa lignocellulose 10 1.2.1 Các enzyme thủy phân 10 1.2.2 Các enzyme oxy hóa 14 1.3 Giới thiệu loài nấm Aureobasidium pullulans 16 1.3.1 Phân loại 16 1.3.2 Ứng dụng 17 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 2.1 Vật liệu nghiên cứu 19 2.1.1 Chủng giống điều kiện nuôi cấy 19 2.1.2 Hóa chất 19 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm 19 2.1.4 Môi trường 20 Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 2.2 Phương pháp 23 2.2.1 Xác định hoạt độ enzyme 23 2.2.2 Các điều kiện thích ứng cho sinh tổng hợp enzyme 26 2.2.3 Chiết tách enzyme từ môi trường nuôi cấy nấm A pullulans 27 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Động học sinh tổng hợp enzyme nấm Aureobasidium pullulans 28 3.1.1 Động học sinh tổng hợp acetyl (xylan) esterase 28 3.1.2 Động học sinh tổng hợp β-glucosidase 30 3.1.3 Động học sinh tổng hợp laccase nấm Aureobasidium pullulans 32 3.2 Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến sinh tổng hợp enzyme 35 3.2.1 Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến sinh tổng hợp 35 enzyme acetyl (xylan) esterase 35 3.2.2 Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến sinh tổng hợp enzyme β-glucosidase 37 3.2.3 Ảnh hưởng pH nhiệt dộ đến sinh tổng hợp enzyme laccase 39 3.3 Bước đầu chiết tách enzyme acetyl (xylan) esterase 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cấu trúc lignocellulose Hình 2: Cấu trúc celulose Hình 3: Cấu trúc arabinoxylan Hình 4: Các đơn vị lignin Hình 5: Các phần acetyl hóa feruloyl cấu trúc pectin 10 Hình 6: Cấu trúc enzyme cellulase nấm 12 Hình 7: Nấm Aureobasidium pullulans đĩa thạch hình ảnh hiển vi điện tử quét (SEM) khuẩn ty bào tử nấm 17 Hình 8: Thủy phân p-nitrophenol acetate thành p-nitrophenol axit acetic acetyl esterase 23 Hình 9: Thủy phân β-D-glucopyranoside (p-NPGP) thành p-nitrophenol glucose β-glucosidase (β-D-Glu) 24 Hình 10: Quá trình oxy hóa 2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazonline-6-sulphonic acid) (ABTS) đến gốc ion dương [ABTS]+* 26 Hình 11: Dịch enzyme từ môi trường lên men dich thể nấm Aureobasidium pullulans lọc hệ thống siêu lọc 10 kDa cut-off thiết bị amicon Ultra Centrifugal Filters (Millipore, Bedford, USA) 42 Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Thành phần số nguồn sinh khối giàu lignocellulose Bảng 2: Kết chiết tách protein enzyme từ dịch nuôi cấy nấm 41 Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Formatted: Font: Bold, Check spelling and grammar Biểu đồ 1: Động học sinh tổng hợp acetyl (xylan) esterase 29 Biểu đồ 2: Động học sinh tổng hợp enzyme β-glucosidase 31 Biểu đồ 3: Động học sinh tổng hợp enzyme laccase 34 Biểu đồ 4: Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp enzyme acetyl (xylan) esterase 37 Biểu đồ 5: Ảnh hưởng nhiệt độ pH môi trường đến sinh tổng hợp enzyme βglucosidase 38 Biểu đồ 6: Ảnh hưởng nhiệt độ pH môi trường đến sinh tổng enzyme laccase 40 Đỗ Thị Đan Phượng Viện Đại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CMC cacboxymethyl cellulose HEC hydroxyethyl cellulose GH glycoside hydrolase CBD cellulose binding domain EG β-1,4-endo-glucanase Formatted: Font: 13 pt CBH β-1,4-exo-glucanase/cellobiohydrolase Formatted: Font: 13 pt BGL β-glucosidase Formatted: Font: 13 pt Đỗ Thị Đan Phượng Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 Formatted: Centered, Indent: Left: 0" Formatted: Left: 1.38", Right: 0.79", Top: 0.98", Bottom: 0.98", Header distance from edge: 0.39" Formatted: Font: Bold, Kern at 16 pt Formatted: Centered, Space After: pt MỞ ĐẦUMở đầu Formatted: Font: Kern at 16 pt Sinh khối thực vật, nguồn carbohydrat có khả tái tạo lớn trái đất, Formatted: Font: Kern at 16 pt quang tổng hợp khoảng 200 tỷ năm, lignocellulose chiếm 60 % tổng sinh khối (Pérez et al 2002; Zhang et al 2007) Lignocellulose ngày có vai trò quan trọng kinh tế sử dụng vật liệu thô cho ứng dụng công nghệ sinh học công nghiệp Chúng sở cho việc thúc đẩy tận dụng sinh khối mô hình sản xuất tinh chế để thu nhận nhiên liệu sinh học chiến lược phát triển bền vững (Jorgensen et al 2007; Kamm & Kamm., 2004; Đỗ Thị Đan Phượng Page Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 18.17 Lee H, To RJ, Latta RK, Biely P & Schneider H (1987) Some properties of extracellular acetylxylan esterase produced by the yeast Rhodotorula mucilaginosa Appl Environ Microbiol 53: 2831-2834 19.18 Liers, C., Ullrich, R., Steffen, K T., Hatakka, A and Hofrichter, M (2006) Mineralization of 14C-labelled synthetic lignin and extracellular enzyme activities of the wood-colonizing ascomycetes Xylaria hypoxylon and Xylaria polymorpha Appl Microbiol Biotechnol 69, 573-579 20.19 Lilholt, H., Lawther, J.M., 2000 Natural organic fibres Elsevier In: Kelly, A Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt and Zweben, C (Ed.), comprehensive composite materials, vol 1, pp 303-325 A Limayem, S.C Ricke,Tạp chí Phát triển khoa học lượng khí đốt-số 38, p 449467 21.20 Lindberg B, Rosell K & Svensson S (1973) Positions of the O-acetyl groups in pine galactoglucomannan Svensk Papperstidn 76: 383-384 22.21 Linden, J., Samara, M., Decker, S (1994) Purification and characterization of an acetyl esterase from Aspergillus niger Biotechnol Appl Biochem 45:383-393 23.22 Martínez AT, Speranza M, Ruiz-Dueñas FJ, et al (2005) Biodegradation of lignocellulosics: microbial, chemical, and enzymatic aspects of the fungal attack of lignin Int Microbiol 8: 195-204 24.23 Mathew S & Abraham TE (2004) Ferulic acid: an antioxidant found naturally in plant cell walls and feruloyl esterases involved in its release and their applications Crit Rev Biotechnol 24: 59-83 25.24 Michniewicz (2006) - Modulation of Cerrena unicolor laccase and manganese peroxidase production Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Đỗ Thị Đan Phượng Page 47 Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 26.25 Monties B & Fukushima Y (2001) Occurence, function and biosynthesis of lignins Biopolymers, Vol (Hofrichter M & Steinbüchel A, ed.eds.), p.pp 1-64 Formatted: English (United States) Formatted: Normal Formatted: English (United States) Wiley-VCH, Weinheim 27.26 Moore, J.J., Hughen, K.A., Miller, G.H and Overpeck, J.T 2001 Little Ice Age recorded in summer temperature reconstruction from varved sediments of Donard Lake, Baffin Island, Canada Journal of Paleolimnology 25: 503-517 28.27 Naran, R., Black, S., Decker, S.R., Azali, P (2009) Extraction and characterization of native heteroxylans from delignified corn stover and aspen Cellulase 16:661-675 29.28 Nghi, D H., Huong, L M., Giap, V D., Chi, D H (2015) The ascomyceta Xylaria polymorpha produces an acetyl esterase that solubilies beech wood material to release water-soluble lignin fragments Formatted: Font: 13 pt, Do not check spelling or grammar 30.29 Nghi, D.H., Bittner, B., Kellner, H., Jehmlich, N., Ullrich, R., Pecyna, M.J., Nousiainen, P., Sipilä, J., Huong, L.M., Hofrichter, M., Liers, C (2012) The wood-rot ascomycete Xylaria polymorpha produces a novel GH78 glycoside hydrolase that exhibits α-L-rhamnosidase and feruloyl esterase activity and releases hydroxycinnamic acids from lignocelluloses Appl Environ Microbiol 78:4893-4901 31.30 Palmieri (1997) - Manganese Peroxidase Isoenzymes Produced by Pleurotus ostreatus Grown on Wood Sawdust 32.31 Pérez, J., Muñoz-Dorado, J, de la Rubia, T, Martínez, J (2002) Biodegradation and biological treatments of cellulose, hemicellulose and lignin Microbiol 5: 53 - 63 33.32 Polak J, Jarosz‐Wilkolazka A - Biotechnology progress, (2012)- Structure/Redox potential relationship of simple organic compounds as potential precursors of dyes for laccase‐mediated transformation Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Đỗ Thị Đan Phượng Page 48 Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 34.33 Poutanen K, Sundberg M, Korte H, Puls J (1990) "Deacetylation of xylans by acetyl esterases of Trichoderma reesei" Appl Microbiol Biotechnol 35.34 Pouvreaua, L., Jonathana, M.C., Kabel, M.A., Hinzb, S.W.A., Gruppena, H., Scholsa, H.A (2011) Characterization and mode of action of two acetyl xylan esterases from Chrysosporium lucknowense active towards acetylated xylans 36.35 Roy, J J; Abraham T E - Preparation and characterization of cross-linked enzyme crystals of laccase, Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 38 (2006) 31- Formatted: center2, Space After: pt Formatted: English (United States) 36 37.36 Slomczynski D.; Nakas J P and Tanenbaum S W - Production and Formatted: Normal, Indent: Left: 0", First line: 0" Characterization of Laccase from Botrytis cinerea 61-34, Applied and Environmental Microbiology (1995) 907-912 38.37 Sundberg M, Poutanen K (1991) "Purification and properties of two acetylxylan esterases of Trichoderma reesei".Biotechnol Appl Biochem 39.38 Sunna A, Antranikian G Xylanolytic enzyme từ nấm vi khuẩn Critical Reviews in Biotechnology 1997;17: 39–67 Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, English (United States) Formatted: Normal Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, English (United States) 40.39 Time, T E 1967, Recent progress in the chemistry of wood hemicelluloses, Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, English (United States) Wood Sci Technol 1, p 45-70 Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, English (United States) 41.40 Whistler, Roy L., and James N BeMiller: Carbohydrate Chemistry for Food Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, English (United States) Scientists AACC/Eagan Press, 3340 Pilot Knob Road, St Paul MN 55121-2097; 1997 Formatted: Font: Not Bold 42.41 Zhang, Y.H., Ding, S.Y., Mielenz, J.R., Cui, J.B., Elander, R.T., Laser, M., Formatted: English (United States) Himmel, M.E., McMillan, J.R., Lynd, L.R (2007) Fractionating recalcitrant Formatted: Font: 13 pt Formatted: Font: Not Italic, English (United States) Formatted: center2, Indent: Left: 0", First line: 0", Space After: pt lignocellulose at modest reaction conditions Biotechnol Bioeng 97:214-223 Field Code Changed 43.42 http://www.moldlibrary.com Field Code Changed Formatted: Font: Not Italic 44.43 Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) http://www.corbisimages.com Đỗ Thị Đan Phượng Page 49 Viện Ðại học Mở Hà Nội 45.44 CNSH 11-04 http://www.nrel.gov/news/features/feature_detail.cfm/feature_id=2145 46.45 http://tailieu.vn/tag/te-bao-cellulose.html Formatted: Underline, Font color: Blue Formatted: No bullets or numbering Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Đỗ Thị Đan Phượng Page 50 Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 47 PHỤ LỤC Lên men chủng nấm môi trường lên men điều kiện 370C, pH môi trường thay đổi từ pH5 – pH8 Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Đỗ Thị Đan Phượng Page 51 Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 Lên men chủng nấm môi trường lên men điều kiện pH môi trường 6, ủ nhiệt độ khác Formatted: Font: (Default) Times New Roman, 13 pt, Italic, English (United States) Đỗ Thị Đan Phượng Page 52 Page 19: [1] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Page 19: [1] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Page 19: [1] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Page 19: [1] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 19: [1] Formatted Font: 13 pt, English (United States) Page 43: [2] Formatted Page 43: [2] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: 14 pt Page 43: [2] Formatted Font: 14 pt Page 43: [2] Formatted Font: 14 pt Page 43: [2] Formatted Font: 14 pt Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [3] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [4] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [4] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [4] Formatted Page 43: [4] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: Not Bold, Italic Page 43: [5] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [5] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [5] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [5] Formatted Font: Not Bold, Italic Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Font: Not Bold Page 43: [6] Formatted Page 43: [6] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Font: Not Bold Page 43: [7] Formatted Page 43: [7] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [8] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Page 43: [9] Formatted PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM PHUONG OT 5/19/2015 4:34:00 PM Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold Page 43: [9] Formatted Font: Not Bold [...]... Nghiên cứu khả năng sinh Formatted: Font: Bold tổng hợp một số enzyme thủy phân và oxy hóa liên quan đến chuyển hóa Formatted: Font: Bold lignocellulose bởi nấm Aureobasidium pullulans Formatted: Font: Bold Formatted: Font: Bold Formatted: Font: Bold Mục tiêu nghiên cứu của đề tài nhằm đánh giá khả năng sinh một số enzyme thủy phân (acetyl esterase, β-glucosidase) và oxy hóa (laccase) liên quan đến. .. các loại cỏ) và cây thảo Các loài nấm được biết là có hệ enzyme xúc tác hiệu quả giúp chúng phân hủy tốt sinh khối lignocellulose Thật vậy, nấm bao gồm hai hệ enzyme ngoại bào - hệ enzyme thủy phân có vai trò trong phân hủy polysaccharide; và hệ enzyme oxy hóa và enzyme phân giải lignin ngoại bào để phân hủy lignin và xúc tác phản ứng mở vòng phenyl Ngoài các enzyme oxy hóa đã được mô tả khá kỹ (Hatakka.,... trình chuyển hóa lignocellulose còn cần các enzyme thủy phân bao gồm các cellulase, xylanase, carbohydrate esterase… có thể hoạt động phối hợp với các enzyme tấn công cấu trúc polymer (Van Dyk & Pletschke., 2012) A pullulans là nấm có tầm quan trọng trong công nghệ sinh học cho sinh tổng hợp enzyme, siderophore (chất mang Fe3+) và pullulan Pullulan, được sinh tổng hợp Formatted: Superscript ngoại bào bởi. .. Pullulan, được sinh tổng hợp Formatted: Superscript ngoại bào bởi nấm A pullulans, là một biopolymer có giá trị thương mại cao Ngoài ra, Formatted: Font: Italic A pullulans cũng được quan tâm nghiên cứu cho mục đích sản xuất nhiên liệu sinh học Formatted: Font: Italic (Wang et al 2014) và sinh tổng hợp các enzyme liên quan đến quá trình chuyển hóa lignocellulose (carbohydrate esterase, cellulase, laccase…)... cellulose đã bị phân giải một phần Hai enzyme exo và endo-glucanase có tác dụng hiệp đồng cho hiệu quả rõ rệt BGL là enzyme thủy phân có ở nhiều nguồn bao gồm vi khuẩn, nấm, động-thực Formatted: Font: Not Bold vật Enzyme này biểu hiện phổ hoạt tính cơ chất rộng và có khả năng xúc tác thủy phân các liên kết glucosidic của các phối tử glucosit và disaccharit BGL thủy phân celloligosaccharit và cellobiose... Viện Ðại học Mở Hà Nội CNSH 11-04 Đây cũng là một enzyme thủy phân xúc tác giải phóng nhóm acetyl từ polymer sinh học như pectin và xylan của lignocellulose (Biely., 2012) Cùng với hệ enzyme thủy phân cellulose và xylan, acetyl (xylan) esterase được biết là có vai trò quan trọng cho khả năng đồng hóa các vật liệu thành tế bào thực vật Enzyme này từ một số nấm ascomycota đã được miêu tả, bao gồm Trichoderma... ngành may mặc, xử lí môi trường và gần đây là trong sản xuất ethanol sinh học từ phụ phẩm nông nghiệp như đã trình bày ở trên Do khả năng oxy hóa các hợp chất polyphenol, laccase liên quan tới rất nhiều quá trình sinh hóa Trong môi trường, laccase đóng vai trò quan trọng trong việc phân hủy lignin và axit humic hoặc tổng hợp các hợp chất humic mới, và vì thế có vai trò quan trọng trong vòng tuần hoàn... Formatted: Left 1.2 Enzyme tham gia chuyển hóa lignocellulose 1.2.1 Các enzyme thủy phân 1.2.1.1 Enzyme cellulase Cellulase là hệ enzyme xúc tác quá trình chuyển hóa cellulose thành cá sản phẩm hòa tan thông qua sự bẻ gãy các iên kết β-1,4-glucosid Hệ enzyme cellulase khá phức tạp Một mặt chúng như một enzyme cảm ứng, mặt khác chúng lại chịu sự tác động bởi sản phẩm cuối và cơ chế kiềm chế dị hóa ( Lê Ngọc... ứng giàu lignocellulose gồm cà chua, rơm, khoai tây, bã ngô, đậu tương và mùn gỗ Lần lượt bổ sung những cơ chất này vào môi trường lên men cơ bản Nuôi cấy trong 24 ngày sau đó đo hoạt độ của từng enzyme, từ đó xác định cơ chất thích hợp cho sự sinh tổng hợp enzyme 2.2.2.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ và pH đến sinh tổng hợp enzyme Formatted: Left, Space After: 3 pt Formatted: Font: Nấm Aureobasidium pullulanss... 11-04 Hình 77: Nấm Aureobasidium pullulans trên đĩa thạch (ảnh phải) và hình ảnh hiển vi Formatted: Font: Not Italic điện tử quét (SEM) của khuẩn ty và bào tử nấm (ảnh trái) Nguồn: http://www.moldlibrary.com và http://www.corbisimages.com Field Code Changed 1.3.2 Ứng dụng A pullulans là nấm có tầm quan trọng trong công nghệ sinh học cho sinh tổng hợp enzyme, siderophore (chất mang Fe3+) và pullulan Pullulan,