Nghiên Cứu Phương Pháp Nhân Nhanh Giống Xoan Đào Bằng Phương Pháp In Vitro Phục Vụ Chuyển Gen

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG MÃ SỐ: T2012 - 01 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NHÂN NHANH GIỐNG XOAN ĐÀO BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Chủ trì đề tài : ThS Nguyễn Thị Tình Thời gian thực : 02/2012 - 02/2013 Thái Nguyên, năm 2013 MỤC LỤC Trang Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Xoan Đào 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Phân bố địa lý 2.1.3 Giá trị kinh tế 2.2 Phương pháp nhân giống xoan đào 2.2.1 Phương pháp nhân giống hữu tính 2.2.2 Phương pháp nhân giống vô tính (phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật) 2.3 Tình hình nghiên cứu Xoan đào Thế Giới Trong nước 14 2.3.1 Tình hình nghiên cứu Xoan Đào Thế giới 14 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 16 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 16 3.3 Điều kiện nuôi cấy 16 3.4 Hóa chất thiết bị 16 3.4.1 Hóa chất 16 3.4.2 Thiết bị 16 3.5 Nội dung nghiên cứu 17 3.6 Phương pháp nghiên cứu 17 3.6.1 Chuẩn bị yếu tố thí nghiệm 17 3.6.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung tạo vật liệu vô trùng 18 3.6.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung – Nghiên cứu tạo hoàn chỉnh 21 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Nội dung 1: 23 4.2 Nội dung 2: 25 4.2.1 Ảnh hưởng số loại môi trường (MS, B5, WPM ) tới khả tái sinh chồi Xoan Đào (sau 60 ngày nuôi cấy) 25 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Xoan Đào 26 4.3 Nội dung 3: 30 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 31 5.1 Kết luận 31 5.2 Đề nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 PHỤ LỤC DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT CT : Công thức Đc : Đối chứng cs : Cộng TN : Thí nghiệm KTST : Kích thích sinh trưởng 2,4-D : 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid NAA : α-Naphlene axetic acid BAP : 6-Benzylaminopurine Kinetin : 6-Furfurylaminopurine DANH MỤC CÁC BẢNG BIÊU, HÌNH Trang Bảng 4.1 Ảnh hưởng chất khử trùng đến hiệu khử trùng mẫu cấy (sau 10 ngày nuôi cấy) 24 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường tới khả tái sinh chồi nách Xoan Đào (sau 50 ngày nuôi cấy) 25 Bảng 4.3 Ảnh hưởng hàm lượng Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Xoan Đào (sau 60 ngày nuôi cấy) 27 Bảng 4.4 Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Xoan Đào (sau 60 ngày nuôi cấy) 28 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetine kết hợp với NAA tới khả nhân nhanh chồi Xoan Đào tái sinh từ chồi (sau 60 ngày nuôi cấy) 29 Bảng 4.6 Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ Chồi Xoan Đào (sau 30 ngày nuôi cấy) 30 TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ - Tên đề tài: “Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh giống xoan đào phương pháp in vitro phục vụ chuyển gen” - Mã số: T2012 – 01 - Chủ nhiệm đề tài: ThS Nguyễn Thị Tình - Tel 0985782815 E-mail: nguyentinhdhnl@yahoo.com.vn - Cơ quan chủ trì đề tài: Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - Cơ quan cá nhân phối hợp thực hiện: Khoa CNSH & CNTP – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - Thời gian thực : Từ 2/2012 – 2/2013 1.Mục tiêu Xác định môi trường tái sinh, môi trường nhân nhanh, rễ tạo hoàn chỉnh Xoan đào phục vụ nghiên cứu chuyển gen tăng trưởng GA20 cho thí nghiệm Nội dung - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng, thành phần chất khử trùng đến tỷ lệ mẫu bệnh nấm vi khuẩn - Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả tái sinh Xoan Đào - Ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetine, đến khả nhân nhanh Xoan Đào - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ auxin đến khả rễ, tạo hoàn chỉnh Xoan Đào Kết đạt (Khoa học, ứng dụng, đào tạo, kinh tế - xã hội,…) - Sản phẩm khoa học: báo cáo đề tài nghiên cứu khoa học - Sản phẩm ứng dụng: quy trình tái sinh chồi Xoan Đào phương pháp in vitro SUMMARY OF RESULTS TOPICS SCIENCE AND TECHNOLOGY BASE - Title:“Micropropagation of Melia azedarach Linn for gene transformation” - Codes: T2012 – 01 - Producer: Nguyen Thi Tinh - Tel 0985782815 E-mail: nguyentinhdhnl@yahoo.com.vn - Implementing Institution: Thai Nguyen University of Agriculture and Forestry (TUAF) - Institutional and personalcoordinated Execution: Biotechnology anh food technologyfaculty - Thai nguyen University of agriculture and and Forestry (TUAF) - Duration: from 2/2012 to 2/2013 Objectives Ascertainregenerationmedium, micropripagation medium, rooting product Melia azedarach Linn plants for GA20 auxesis gene transformation Main content - Research effect of sterilization’sconcentrations, sterilization’s composition onrateasepticspecimens - Research effect of media culture onregenerateMelia azedarach Linn - Effect of BA, Kinetine on micropropagation of Melia azedarach Linn - Research effect of Auxin on rooting, product completeMelia azedarach Linn plants Results obtained - Scientific outcomes: scientific research report - Applied outcomes: The process of shoot regeneration of Melia azedarach Linn by in vitro method Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Xoan Đào có tên khoa học Melia azedarach Linn loài thực vật thuộc họ Xoan (Meliaceae) phân bố chủ yếu Việt Nam, Lào, Campuchia Riêng Việt Nam dọc theo từ Bắc vào Nam tỉnh có phân bố Xoan Đào, chúng mọc tự nhiên trồng Đây loài thân gỗ có kích thước lớn cao đến 30m đường kính gần 100cm Gỗ Xoan Đào có lõi màu hồng hay nâu nhạt, dác xám trắng; gỗ nhẹ mềm tỷ trọng 0.565, lực kéo ngang thớ 22kg/cm2, nén dọc thớ 339kg/cm2 Gỗ xoan sau ngâm bền khó bị mối mọt, gỗ xoan thường dùng làm xây dựng, trang trí nội thất điêu khắc Ngoài lá, rễ xoan dùng làm phân xanh, thuốc sát trùng, hạt ép dầu chữa số bệnh, ta trồng xoan để che bóng phòng hộ Xoan ta loài ưa sáng, ưa khí hậu nóng ẩm, sinh trưởng phát triển mạnh nhiều vùng đất khác từ đất chua đến đất kiềm mặn, trồng sau khoảng 5-6 năm thu hoạch trồng lấy gỗ lớn kéo dài từ 8-10 năm Đặc biệt Xoan có khả tái sinh (mọc lại từ gốc cũ thu hoạch cây) từ 3-4 lần Với đặc điểm sinh học giá trị sử dụng nhiều mặt nên xoan loài trồng lâm nghiệp có nhiều tiềm phát triển rộng rãi Do đặc điểm khí hậu, thổ nhưỡng nước ta phù hợp cho trình sinh trưởng phát triển xoan, điều thể qua diện tích trồng xoan hàng năm ngày tăng Mặt khác nhu cầu thị trường gỗ xoan lớn, giá trị kinh tế cao nhiều so với gỗ bạch đàn Chính mà xoan có nhiều tiềm phát triển rộng khắp nước Khi diện tích trồng xoan tăng đồng nghĩa với việc tăng nguồn giống ban đầu Do nhu cầu giống Xoan Đào lớn nguồn cung cấp giống chủ yếu phương pháp truyền thống gieo hạt, hom, rễ nên khả cung cấp giống với số lượng lớn mùa vụ trồng rừng gặp nhiều khó khăn Mặt khác phương pháp nhân giống hạt có nhiều nhược điểm khác như: - Cây sinh trưởng phát triển không đồng có phân ly di truyền - Khả kháng bệnh thấp Để khắc phục hạn chế trên, thời gian qua nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro xoan phương pháp nuôi cấy mô tế bào nhằm giải khó khăn đồng thời tiền đề cho nghiên cứu chuyển gen tăng trưởng GA20 vào Xoan Đào nhằm bảo đảm đặc tính di truyền, thoái hóa, sinh trưởng phát triển nhanh, có độ đồng cao, đảm bảo lượng lớn giống trồng thời vụ Có thể nói bước đột phá quan trọng nhằm giải khó khăn giống, đồng thời sản xuất, cung ứng nguồn giống cho đơn vị trồng rừng kinh tế, phát triển rừng nguyên liệu, đảm bảo tiêu chuẩn chất lượng, nâng cao suất trồng địa bàn tỉnh ta tỉnh lân cận Chính lí mà nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh giống xoan đào phương pháp in vitro phục vụ chuyển gen” 1.2 Mục tiêu Xác định môi trường tái sinh, môi trường nhân nhanh, rễ tạo hoàn chỉnh Xoan đào phục vụ nghiên cứu chuyển gen tăng trưởng GA20 cho thí nghiệm 1.3 Nội dung - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng, thành phần chất khử trùng đến tỷ lệ mẫu bệnh nấm vi khuẩn - Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả tái sinh Xoan Đào - Ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetine, đến khả nhân nhanh Xoan Đào - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ auxin đến khả rễ, tạo hoàn chỉnh Xoan Đào Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Xoan Đào 2.1.1 Đặc điểm hình thái Cây Xoan đào hay gọi sầu đâu tên khoa học Azadirachta indica A.Juss, Melia azedarach Linn, thuộc họ xoan Meliaceae Là Cây gỗ cao 20 - 25 m, thân thẳng, tán thưa Vỏ màu nâu xám, trơn Cành non có lông - Lá kép lông chim lẻ – lần, mọc cách Lá nhỏ hình trứng hay hình mũi mác Cuống có lông - Cụm hoa hình chùy mọc nách lá, hoa đều, lưỡng tính - Quả hạch, vỏ nạc, vỏ hóa gỗ, có – ô, ô chứa hạt [8] 2.1.2 Phân bố địa lý - Cây phân bố Việt Nam, Trung Quốc, Lào, … Ở Việt Nam mọc hầu hết địa phương từ Bắc đến Nam, từ đồng đến miền núi - Xoan ta ưa sáng, tái sinh mạnh nương rẫy Ưa khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng ẩm 2.1.3 Giá trị kinh tế - Gỗ có lõi màu hồng nâu xám, dác màu hồng nâu nhạt, vàng có sọc nâu, vòng năm dễ nhận nhờ gỗ mạch vòng - Gỗ nhẹ mềm bền, bị mối mọt mục Dùng làm nhà, đóng đồ gia dụng Hạt ép dầu Vỏ thân làm thuốc 2.2 Phương pháp nhân giống xoan đào 2.2.1 Phương pháp nhân giống hữu tính 2.2.1.1 Làm đất gieo - Chọn đất cát pha nhẹ, mịn, kích thước hạt mm, mặt luống rộng 1m, gờ luống cao 15 – 20 cm, chân luống rộng 1,2m Sau san phẳng mặt luống, tưới nước cho đất đủ ẩm để gieo hạt Khử trùng đất trước gieo hạt ngày Benlat (6g Benlat hòa tan 10 lít nước phun cho 100 m2 để phun lên đất [8] 31 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau thời gian nghiên cứu thử nghiệm nuôi cấy chồi Xoan Đào môi trường MS hàm lượng chất kích thích sinh trưởng như: BA, kinetin, NAA với hàm lượng khác đưa số kết luận sau: - Hóa chất khử trùng : HgCl2 cho tỷ lệ tạo mẫu nấm, vi khuẩn đạt 100% - Môi trường thích hợp cho tái sinh chồi nách : MS + agar g/l + đường 30 g/l + Inositol 100mg/l + BA 2mg/l; pH 5.8 - 6.0 - Môi trường thích hợp cho nhân nhanh chồi Xoan Đào bổ sung chất kích thích sinh trưởng: MS + agar 7g/l + đường 30g/l + BA 0,3mg/l + kinetine 1mg/l + NAA 0,5mg/l - Môi trường thích hợp cho rễ Xoan Đào bổ sung NAA là: MS + agar 7g/l + đường 30g/l + NAA 1,5mg/l 5.2 Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu sinh trưởng, phát triển chồi Xoan Đào đưa môi trường tự nhiên - Ảnh hưởng điều kiện chăm sóc - Ảnh hưởng loại giá thể 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Lê Hoài Thanh (2009), “Nhân giống lan Vũ Nữ Oncidium sweet sugar phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật”, kỷ yếu hội nghị khoa học công nghệ tuổi trẻ trường Đại học Cao đẳng khối Nông – Lâm – Ngư - Thủy toàn quốc, trang 36-39 Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thị Thuý Hà (2003), Giáo trình công nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005), “Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp, nxb Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2008), Công nghệ sinh học tập hai CNSH tế bào, Nxb Giáo dục II Tiếng Anh Goh D.K.S, Y.S Chang 2007 Ttissue culture propagation and Dispatch of Quality Teak clones Bois et Forets des Tropiques 263 : 17- 29 Monteuui, O.,Bon,M.-C.and Goh, D.1998 Teak propagation by in vitro culture Boiset Forets des Tropiques 256: 43- 53 Goh, D.K.S and Monteuui, O 2001 Production of tissue culture teak: the plant biotechnology laboratory experience Proc Of the Third Regional Seminar on teak, Yogyakarta, Indonesia: 237 – 247 PHỤ LỤC Phụ luc 1: Một số ảnh kết thí nghiệm Hình 1: Kết ảnh hưởng môi trường nuôi cấy Hình 2: Kết ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng Hình 3: Kết ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng Hình 4: Kết ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ Phụ luc 2: Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến hiệu vô trùng mẫu cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE TYLE FILE TN1 1/ 6/** 4:29 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao mau vo trung VARIATE V003 TYLE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 266.667 133.333 * RESIDUAL 333.333 55.5556 2.40 0.171 * TOTAL (CORRECTED) 600.000 75.0000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1 1/ 6/** 4:29 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao mau vo trung MEANS FOR EFFECT CTHUC$ - CTHUC$ NOS TYLE 83.3333 90.0000 3 96.6667 SE(N= 3) 4.30331 5%LSD 6DF 14.8859 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1 1/ 6/** 4:29 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao mau vo trung F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 9) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CTHUC$ % | | | | | | TYLE 90.000 8.6603 7.4536 8.3 0.1710 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1HT 4/ 6/** 1:35 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLNM GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 30.105 1.1255 15 28.800 C OF V |CTHUC$ % | | | | | | 3.9 0.0000 Bảng 4.2 Ảnh hưởng số loại môi trường (MS B5, WPM) tới khả nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSO FILE TN3 1/ 6/** 3:32 PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang nhan nhanh chồi VARIATE V003 HSO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 2.93769 1.46884 300.45 0.000 * RESIDUAL 293333E-01 488888E-02 * TOTAL (CORRECTED) 2.96702 370878 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TCHOI FILE TN3 1/ 6/** 3:32 PAGE anh huong cua moi truong MS den kha nang nhan choi VARIATE V004 TCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CTHUC$ 7344.22 3672.11 * RESIDUAL 73.3341 12.2223 300.44 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 7417.56 927.194 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 1/ 6/** 3:32 PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang nhan nhanh choi MEANS FOR EFFECT CTHUC$ - CTHUC$ NOS HSO TCHOI 1.05333 52.6667 2.17333 108.667 3 2.34000 117.000 SE(N= 3) 0.403686E-01 2.01844 5%LSD 6DF 0.139642 6.98212 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 1/ 6/** 3:32 PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang nhan nhanh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 9) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS HSO 1.8556 0.60900 TCHOI 92.778 30.450 C OF V |CTHUC$ 0.69921E-01 3.4960 % | | | | | | 3.8 0.0000 3.8 0.0000 Bảng 4.4 Ảnh hưởng kinetine đến khả nhân nhanh Xoan Đào BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSO FILE TN4 1/ 6/** 3:24 PAGE anh huong cua Kinetine den kha nang nhan nhanh choi Xoan Dao VARIATE V003 HSO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 3.32523 * RESIDUAL 831307 394.60 0.000 10 210670E-01 210670E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.34629 239021 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TCHOI FILE TN4 1/ 6/** 3:24 PAGE anh huong cua Kinetine den kha nang nhan nhanh choi Xoan Dao VARIATE V004 TCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CTHUC$ * RESIDUAL 8313.07 2078.27 10 52.6670 5.26670 394.61 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 14 8365.73 597.552 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 1/ 6/** 3:24 PAGE anh huong cua Kinetine den kha nang nhan nhanh choi Xoan Dao MEANS FOR EFFECT CTHUC$ - CTHUC$ NOS HSO TCHOI 1.06667 53.3333 1.48667 74.3333 3 1.84000 92.0000 2.26667 113.333 1.02667 51.3333 SE(N= 3) 0.264997E-01 1.32498 5%LSD 10DF 0.835014E-01 4.17505 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 1/ 6/** 3:24 PAGE anh huong cua Kinetine den kha nang nhan nhanh choi Xoan Dao F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS HSO 15 1.5373 0.48890 TCHOI 15 76.867 24.445 C OF V |CTHUC$ 0.45899E-01 2.2949 % | | | | | | 3.0 0.0000 3.0 0.0000 Bảng 4.5 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Xoan Đào BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSO FILE TN5 1/ 6/** 3:14 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh chồi Xoan Đào VARIATE V003 HSO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 3.10891 * RESIDUAL 777227 310.06 0.000 10 250672E-01 250672E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.13397 223855 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TCHOI FILE TN5 1/ 6/** 3:14 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh chồi Xoan Đào VARIATE V004 TCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CTHUC$ * RESIDUAL 7772.27 1943.07 10 62.6677 6.26677 310.06 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 14 7834.93 559.638 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 1/ 6/** 3:14 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh Chồi Xoan Đào MEANS FOR EFFECT CTHUC$ - CTHUC$ NOS HSO TCHOI 1.07333 53.6667 2.16667 108.333 3 1.23333 61.6667 1.03333 51.6667 0.900000 45.0000 SE(N= 3) 0.289063E-01 1.44531 5%LSD 10DF 0.910848E-01 4.55423 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 1/ 6/** 3:14 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh chồi Xoan Đào F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS HSO 15 1.2813 0.47313 TCHOI 15 64.067 23.657 C OF V |CTHUC$ 0.50067E-01 2.5034 % | | | | | | 3.9 0.0000 3.9 0.0000 Bảng 4.6 Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ Xoan Đào BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN8 4/ 6/** 3:29 PAGE VARIATE V003 SORE RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 15.1733 * RESIDUAL 10 126669 3.79333 299.47 0.000 126669E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 15.3000 1.09286 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDAI FILE TN8 4/ 6/** 3:29 PAGE VARIATE V004 CDAI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CTHUC$ 14.1707 * RESIDUAL 10 173334 3.54267 204.38 0.000 173334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 14.3440 1.02457 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN8 4/ 6/** 3:29 PAGE MEANS FOR EFFECT CTHUC$ - CTHUC$ NOS SORE CDAI 2.30000 6.30000 3.63333 6.66667 3 4.26667 8.13333 4.63333 5.60000 2.16667 5.40000 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.649792E-01 0.760118E-01 0.204752 0.239516 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN8 4/ 6/** 3:29 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON C OF V |CTHUC$ % | | | | | | TOTAL SS RESID SS SORE 15 3.4000 1.0454 0.11255 3.3 0.0000 CDAI 15 6.4200 1.0122 0.13166 2.1 0.0000 Phụ lục Môi trường nuôi cấy Preparation of modified Murashige DNA Skoog’s MS medium Stock Bottle Component Solution (g/l) I II III NH4NO3 KNO3 95 preparation (ml) 20 Final concentratic (mg/ l) 1.650,0 1.900,0 37,0 MgSO4 4H2O 2,23 ZnSO4 7H2O 1,058 CuSO4 5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44,0 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 370,0 10 10 0,62 H3BO3 0,025 FeSO4 7H2O 2,784 Na2EDTA 2H2O 3,724 22,3 10,6 0,83 0,025 17,0 Na2MoO4.2H2O V take MgSO4 7H2O KH2PO4 IV 82,5 Amount to 170,0 10 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 ThiamineHCl 100 0,1 0,1 PyridoxineHCl 100 0,5 0,5 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 PH 5,8 [...]... nghiên cứu nhân giống cây Xoan đào đến nay vẫn chưa được tiến hành, tìm ra môi trường thích hợp phục vụ công tác chuyển gen 16 Phần 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng, vật liệu và phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Cây Xoan Đào - Vật liệu nghiên cứu: Đỉnh Sinh trưởng, đoạn cành bánh tẻ - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu khả năng tái sinh chồi từ đỉnh sinh trưởng, nhân. .. Nodal tiến hành nhân giống từ tám dòng xoan bằng phương pháp vô tính đã thu được hàng loạt cây con bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật [8] 2.3.2 Tình hình nghiên cứu trong nước Ở Việt Nam việc nhân giống cây Xoan bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật được thực hiện tại phòng công nghệ tế bào thực vật – Viện Công nghệ Sinh học phục vụ công tác chuyển gen GA20 vào cây Xoan phục vụ tăng trưởng... thích sinh trưởng nâng cao hệ số nhân nhanh cây Xoan Đào bằng kỹ thuật in vitro 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi cây Xoan Đào Trên thế giới cũng như ở Việt Nam, hệ thống tái sinh cây bằng phương pháp in vitro đã được tiến hành thành công trên nhiều bộ phận nuôi cấy khác nhau như vảy củ, chồi nách, đoạn thân, bầu hoa, đế hoa, lá… và đỉnh sinh trưởng... 3,33 90 6,67 Tốt 0 100 0 Tốt CV (%) LSD (5 %) 4,2 5,43 Nhân giống in vitro Xoan đào có thể sử dụng nhiều loại mẫu nuôi cấy như: đỉnh sinh trưởng, chồi, hạt, trong đó nhân giống cây xoan đào chỉ được áp dụng ở đỉnh sinh trưởng và đoạn thân non Do nhân giống bằng đỉnh sinh trưởng và đoạn thân non giữ được đặc tính của cây mẹ Trong nhân giống in vitro, tạo được nguồn vật liêu sạch ban đầu rất quan trọng,... khả năng nhân nhanh Xoan Đào tái sinh từ hạt (sau 60 ngày nuôi cấy) Ảnh hưởng của nồng độ BA, Kinetine kết hợp với NAA tới khả năng nhân nhanh Xoan Đào tái sinh chồi được thể hiện trên bảng 4.5 Bảng 4.5 Ảnh hưởng của nồng độ BA, Kinetine kết hợp với NAA tới khả năng nhân nhanh chồi Xoan Đào tái sinh từ chồi (sau 60 ngày nuôi cấy) Chỉ tiêu theo dõi Công thức Nồng độ (mg/l) Tổng chồi (chồi) Hệ số nhân Chất... Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BA đến khả năng nhân nhanh Xoan Đào (sau 60 ngày nuôi cấy) Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BA đến khả năng nhân nhanh chồi Xoan Đào được thể hiện ở bảng 4.4 Bảng 4.4 Ảnh hưởng của hàm lượng BA đến khả năng nhân nhanh chồi Xoan Đào (sau 60 ngày nuôi cấy) Chỉ tiêu theo dõi Công thức Nồng độ Tổng (mg/l) (chồi) chồi Hệ số Chất lượng nhân (lần) chồi... Nghiên cứu ảnh hưởng của một số loại môi trường, chất kích thích sinh trưởng đến khả năng tái sinh, nhân nhanh, của cây Xoan Đào - Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ chất kích thích sinh trưởng đến khả năng ra rễ ở cây Xoan Đào 3.6 Phương pháp nghiên cứu 3.6.1 Chuẩn bị các yếu tố thí nghiệm - Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro - Sử dụng môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) bổ sung agar... sau đó được vận chuyển đi khắp nơi trong cây và có nhiều trong phloem và xylem [3] 2.3 Tình hình nghiên cứu cây Xoan đào trên Thế Giới và Trong nước 2.3.1 Tình hình nghiên cứu cây Xoan đào trên Thế giới Xoan Đào là một loại gỗ được đánh giá cao do gỗ có đường kính khá to, độ cứng cao hơn Xoan thường Gỗ Xoan đào thường được sử dụng đóng sàn gỗ, đóng tàu, làm đồ nội thất và xây dựng Xoan đào được trồng... nucleic Trong cây auxin được tổng hợp ở các mô non đặc biệt là lá đang phát triển và vùng đỉnh chồi Từ những vùng này auxin được chuyển xuống các phần phía dưới của cây [5] - Cytokinin Cytokinin là chất điều hoà sinh trưởng có tác dụng làm tăng sự phân chia tế bào Các cytokinin thường gặp là kinetine, BAP Kinetine được Skoog phát hiện ngẫu nhiên trong chiết xuất acid nucleic Kinetine thực chất là một... trình điều khiển tỷ lệ Auxin/Cytokinine Nếu nồng độ Auxin/Cytokine lớn hơn 1 thì xu hướng phát triển của mô trong môi trường nuôi cấy là tạo mô sẹo, tạo rễ còn ngược lại tạo chồi Trong thí nghiệm chúng tôi tiến hành thử nghiệm ảnh hưởng của nồng độ BA và Kinetine đến khả năng nhân nhanh cây Xoan Đào sau 60 ngày nuôi cấy và kết hợp BA và Kinetine với NAA 0,5mg/l Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng