NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT MA TÚY TỔNG HỢP NHÓM ATS TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --- LÊ THỊ THANH XUÂN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT MA TÚY TỔNG HỢP NHÓM ATS TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

LÊ THỊ THANH XUÂN

NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT MA TÚY TỔNG HỢP NHÓM ATS TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI

MAO QUẢN

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Hà Nội - 2014

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

LÊ THỊ THANH XUÂN

NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT MA TÚY TỔNG HỢP NHÓM ATS TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và chân thành nhất đến với TS Nguyễn Xuân Trường và TS Nguyễn Thị Ánh Hường Thầy, cô đã giao đề tài, nhiệt tình

hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất giúp tôi thực hiện luận văn này

Tôi xin chân thành cảm ơn GS Peter C Hauser, TS Mai Thanh Đức và ThS Bùi Duy Anh đã hỗ trợ trang thiết bị cho nghiên cứu này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy, cô trong bộ môn Hóa Phân tích nói riêng

và trong khoa Hóa học nói chung đã dạy dỗ, chỉ bảo và động viên tôi trong thời gian tôi học tập tại trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội

Tôi chân thành cảm ơn các cán bộ giám định ma túy của Trung tâm Giám định ma túy, Viện Khoa học Hình sự, Bộ Công an đã tạo mọi điều kiện và giúp đỡ tôi trong quá trình xử lý mẫu và thực hiện phân tích đối chứng

Qua đây, tôi xin cảm ơn gia đình, các bạn học viên và sinh viên của Bộ môn Hóa phân tích đã luôn động viên, tận tình giúp đỡ tôi trong thời gian học tập và thực hiện luận văn này

Hà Nội, ngày 21 tháng 12 năm 2014

Học viên

Lê Thị Thanh Xuân

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Tên viết tắt Tên đầy đủ

C4D Detector đo độ dẫn kết nối kiểu tụ điện

CE Phương pháp điện di mao quản

EOF Dòng điện di thẩm thấu

GC

GC/MS

Sắc ký khí Sắc ký khí khối phổ

HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Leff Chiều dài hiệu dụng của mao quản

Ltot Tổng chiều dài mao quản

LOD Giới hạn phát hiện

%RSD % độ lệch chuẩn tương đối

UPLC Sắc ký lỏng siêu hiệu năng

ATS Amphetamin type stimulants

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3

1.1 Giới thiệu chung về chất ma túy 3

1.1.1 Một số khái niệm về chất ma túy 3

1.1.2 Phân loại các chất ma túy 4

1.1.3 Các chất ma túy tổng hợp nhóm ATS 4

1.1.3.1 Thông tin chung về ma túy tổng hợp nhóm ATS 4

1.1.3.2 Thông tin chung về bốn chất ma túy tổng hợp được phân tích 5

1.1.3.3 Nguồn gốc, tổng hợp của MA, MDA, MDMA, MDEA 7

1.1.3.4 Tác dụng đối với cơ thể và cơ chế tác dụng của nhóm ATS 8

1.1.3.5 Hấp thu, phân bố, chuyển hóa và thải trừ 9

1.2 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS trên thế giới và ở Việt Nam 9

1.2.1 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS trên thế giới 9

1.2.2 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS ở Việt Nam 10

1.3 Các phương pháp xử lý mẫu phẩm sinh học chứa ma túy tổng hợp nhóm ATS 12 1.3.1 Chiết lỏng - lỏng 12

1.3.2 Chiết pha rắn 13

1.4 Các phương pháp xác định ma túy tổng hợp nhóm ATS 13

1.4.1 Phương pháp phân tích miễn dịch học (immunoassay) 13

1.4.2 Các phương pháp sắc kí 14

1.4.2.1 Phương pháp sắc ký lỏng 14

1.4.2.2 Phương pháp sắc ký khí - khối phổ (GC/MS) 16

1.4.2.3 Phương pháp điện di mao quản 17

1.5 Giới thiệu chung về phương pháp điện di mao quản (CE) 19

1.5.1 Mao quản 19

1.5.2 Dung dịch đệm, pH và pha động trong phương pháp điện di mao quản 20

1.5.3 Nguồn điện thế cao 21

1.5.4 Các kỹ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản 21

1.5.5 Detector trong phương pháp điện di mao quản 22

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 25

2.1 Mục tiêu và nội dung nghiên cứu 25

2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 25

2.1.2 Nội dung nghiên cứu 25

2.2 Phương pháp nghiên cứu 26

2.2.1 Phương pháp phân tích 26

2.2.2 Phương pháp xử lý mẫu 26

2.2.2.1 Xử lý mẫu viên thuốc 26

2.2.2.2 Xử lý mẫu nước tiểu 27

2.3 Các thông số đánh giá độ tin cậy của phương pháp phân tích 27

2.3.1 Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) 27

2.3.2 Độ chụm ( độ lặp lại) của phương pháp 27

2.3.3 Độ đúng (độ thu hồi) của thiết bị, của phương pháp 28

2.4 Thực nghiệm 29

2.4.1 Hóa chất 29

2.4.1.1 Chất chuẩn 29

2.4.1.2 Hóa chất dung môi 29

2.4.1.3 Chuẩn bị các dung dịch hóa chất 29

2.4.2 Thiết bị dụng cụ 30

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31

3.1 Nghiên cứu khảo sát để tối ưu điều kiện tách MA, MDA, MDMA, MDEA bằng phương pháp điện di mao quản CE-C4D 31

3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng của hệ đệm 31

3.1.1.1 Khảo sát thành phần của hệ đệm điện di 31

3.1.1.2 Khảo sát pH của dung dịch đệm điện di 33

3.1.1.3 Khảo sát nồng độ dung dịch đệm điện di 36

3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng của thời gian bơm mẫu 37

3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng của thế đặt vào hai đầu mao quản 39

3.2 Khảo sát các chất gây ảnh hưởng 41

3.3 Đánh giá phương pháp phân tích (Thẩm định phương pháp) 42

3.3.1 Lập đường chuẩn 42

3.3.2 Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của thiết bị 48

3.3.2.1 Giới hạn phát hiện (LOD) 48

3.3.2.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 49

3.3.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) và độ đúng (độ thu hồi) 50

3.3.3.1 Độ chụm của thiết bị 50

3.3.3.2 Độ đúng của phương pháp 53

3.4 Phân tích mẫu thực tế và đo đối chứng với phương pháp tiêu chuẩn GC/MS 56

3.4.1 Phân tích mẫu ma túy bị bắt giữ 56

3.4.1.1 Mẫu MA dạng viên 56

3.4.1.2 Mẫu ma túy đá chứa MA 58

3.4.1.3 Mẫu ma túy chứa MDMA dạng viên nén 60

3.4.1.4 Kết quả phân tích mẫu nước tiểu 61

3.4.2 Phân tích đối chứng phương pháp CE-C4 D với phương pháp GC/MS 65

KẾT LUẬN 67

TÀI LIỆU THAM KHẢO 69

PHỤ LỤC 73

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Thông tin chung về 4 chất ma túy tổng hợp nhóm ATS: MA, MDA,

MDMA, MDEA [2] 6Bảng 1.2 Các chất thường dùng làm pha động trong CE 21Bảng 3.1 Sự phụ thuộc diện tích pic của MA, MDA, MDMA và MDEA vào thành

phần hệ đệm điện di 32Bảng 3.2 Kết quả khảo sát ảnh hưởng của pH đến diện tích pic (Spic) và thời gian di

chuyển (tdc) của MA, MDA, MDMA, MDEA 34Bảng 3.3 Kết quả khảo sát sự phụ thuộc của diện tích pic (Spic) và thời gian di

chuyển (tdc) của MA, MDA, MDMA, MDEA vào nồng độ dung dịch đệm điện di 36Bảng 3.4 Kết quả sự phụ thuộc diện tích pic (Spic) và thời gian di chuyển (tdc) của

MA, MDA, MDMA, MDEA vào thời gian bơm mẫu 38Bảng 3.5 Ảnh hưởng của điện thế tách (E) đến thời gian di chuyển của các chất phân

tích 39Bảng 3.6 Điều kiện tối ưu cho phân tích hỗn hợp MA, MDA, MDMA, MDEA bằng

phương pháp CE-C4D 40Bảng 3.7 Sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ MA, MDA, MDMA, MDEA

khi t=15 s 43Bảng 3.8 Phương trình đường chuẩn của MA, MDA, MDMA, MDEA khi t=15 s 44Bảng 3.9 Kết quả so sánh giữa giá trị a với giá trị 0 của phương trình đường chuẩn

MA, MDA, MDMA, MDEA khi t = 15 s 45Bảng 3.10 Sự phụ thuộc của diện tích pic trung bình vào nồng độ của MA, MDA,

MDMA và MDEA khi t = 45 s 46Bảng 3.11 Phương trình đường chuẩn của MA, MDA, MDMA, MDEA khi t=45 s 47Bảng 3.12 Kết quả so sánh giữa giá trị a với giá trị 0 của phương trình đường chuẩn

MA, MDMA, MDMA, MDEA khi t= 45 s 47Bảng 3.13 Tính giới hạn phát hiện của MA, MDA, MDMA, MDEA khi t =15 s 48

Bảng 3.14 Tính giới hạn phát hiện của MA, MDA, MDMA, MDEA khi t=45 s 49Bảng 3.15 Giá trị khoảng tuyến tính và LOD, LOQ của MA, MDA, MDMA, MDEA

khi t =15 s 50Bảng 3.16 Giá trị khoảng tuyến tính và LOD, LOQ của MA, MDA, MDMA,

MDEA khi t = 45 s 50Bảng 3.17 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp CE - C4D trong định lượng

MA 51Bảng 3.18 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp CE - C4D trong định lượng

MDA 51Bảng 3.19 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp CE - C4 D trong định lượng

MDMA 52Bảng 3.20 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp CE-C4D trong định lượng

MDEA 52Bảng 3.21 Kết quả tính giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) của

phương pháp đối với MA, MDA, MDMA, MDEA 53Bảng 3.22 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp dựa trên thêm chuẩn MA 54Bảng 3.23 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp dựa trên thêm chuẩn MDA55Bảng 3.24 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp dựa trên thêm chuẩn

MDMA 55Bảng 3.25 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp dựa trên thêm chuẩn MDEA

55Bảng 3.26 Thông tin và đặc điểm của từng loại mẫu ma túy bị bắt giữ 56Bảng 3.27 Kết quả xác định hàm lượng MA trong mẫu viên nén chứa MA 57Bảng 3.28 Kết quả xác định nồng độ MA trong mẫu MA đá bằng phương pháp thêm

chuẩn 59Bảng 3.29 Kết quả xác định nồng độ MA trong mẫu 66 62Bảng 3.30 Kết quả phân tích 12 mẫu nước tiểu dương tính bằng CE 63Bảng 3.31 Kết quả phân tích đối chứng 12 mẫu nước tiểu với phương pháp tiêu

chuẩn GC/MS 65

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Qui trình chiết xuất ma túy tổng hợp nhóm ATS trong nước tiểu 12

Hình 1.2 Mô hình cấu tạo của một hệ phân tích điện di mao quản 19

Hình 1.3 Mặt cắt ngang của mao quản 19

Hình 1.4 Lớp điện tích kép trên bề mặt mao quản 20

Hình 1.5 Ảnh hưởng của dòng EOF đến tốc độ các ion trong quá trình điện di 20

Hình 1.6 Các kĩ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản 22

Hình 1.7 Nguyên lý hoạt động của cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc 23

Hình 1.8 Quá trình chuyển đổi tín hiệu của C4D 24

Hình 2.1 Hệ điện di sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc 26

Hình 3.1 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của thành phần hệ đệm đến sự phân tách của MA, MDA, MDMA, MDEA 32

Hình 3.2 Sự phụ thuộc diện tích pic của MA, MDA, MDMA, MDEA vào thành phần hệ đệm điện di 33

Hình 3.3 Điện di đồ khảo sát ảnh hưởng của pH đến sự phân tách của MA, MDA, MDMA, MDEA 34

Hình 3.4 Đồ thị thể hiện mối tương quan giữa tín hiệu diện tích pic của MDA và độ phân giải R của 2 pic MDA và MDMA phụ thuộc vào pH của dung dịch đệm điện di 35

Hình 3.5 Điện di đồ khảo sát ảnh hưởng của nồng độ dung dịch đệm điện di đến quá trình phân tách các chất MA, MDA, MDMA, MDEA 37

Hình 3.6 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của thời gian bơm mẫu 38

Hình 3.7 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của điện thế tách đến thời gian di chuyển và sự phân tách các pic 40

Hình 3.8 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của các cation đến sự phân tách của MA, MDA, MDMA, MDEA trên nền MA đá 41

Hình 3.9 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của các cation đến sự phân tách của MA, MDA, MDMA, MDEA trên nền MA viên 42

Hình 3.10 Điện di đồ khảo sát sự ảnh hưởng của các cation đến sự phân tách của

MA, MDA, MDMA, MDEA trên nền mẫu nước tiểu số 17 42

Hình 3.11 Đường chuẩn của MA theo diện tích pic khi t = 15 s 44

Hình 3.12 Đường chuẩn của MDA theo diện tích pic khi t = 15 s 44

Hình 3.13 Đường chuẩn của MDMA theo diện tích pic khi t = 15 s 44

Hình 3.14 Đường chuẩn của MDEA theo diện tích pic khi t = 15 s 44

Hình 3.15 Đường chuẩn của MA theo diện tích pic khi t = 45 s 46

Hình 3.16 Đường chuẩn của MDMA theo diện tích pic khi t = 45 s 46

Hình 3.17 Đường chuẩn của MDA theo diện tích pic khi t = 45 s 46

Hình 3.18 Đường chuẩn của MDEA theo diện tích pic khi t = 45 s 46

Hình 3.19 Điện di đồ xác định MA trong viên nén sau khi thêm chuẩn MA ở các nồng độ khác nhau 57

Hình 3.20 Điện di đồ xác định đồng thời MA, MDA, MDMA, MDEA trong nền mẫu viên nén chứa MA 58

Hình 3.21 Điện di đồ xác định MA trong mẫu ma túy đá chứa MA sau khi thêm chuẩn MA ở 3 nồng độ khác nhau 59

Hình 3.22 Điện di đồ xác định sự có mặt đồng thời của MA, MDA, MDMA, MDEA trong nền mẫu MA đá 60

Hình 3.23 Điện di đồ xác định MDMA trong viên nén 60

Hình 3.24 Điện di đồ xác định sự có mặt của MA trong mẫu 66 bằng cách thêm chuẩn MA ở 3 nồng độ khác nhau 61

Hình 3.25 Điện di đồ xác định sự có mặt của MDMA trong mẫu nước tiểu số 2 bằng cách thêm chuẩn MDMA ở 1 nồng độ khác 64

Hình 3.26 Điện di đồ xác định sự có mặt của MDMA trong mẫu nước tiểu số 5 bằng cách thêm chuẩn MDMA ở 1 nồng độ khác 64

Hình 3.27 Điện di đồ xác định sự có mặt của MDMA trong mẫu nước tiểu số 6 bằng cách thêm chuẩn MDMA ở 1 nồng độ khác 64

MỞ ĐẦU

Ma túy là một trong những đại họa mà toàn nhân loại đang phải đối mặt và là vấn đề nhức nhối, ám ảnh không chỉ ở Việt Nam mà trên toàn thế giới Ma túy là yếu tố phá hoại hạnh phúc gia đình, làm sa sút kinh tế, suy giảm sức lao động xã hội, làm suy thoái giống nòi, là khởi nguồn và thúc đẩy các tệ nạn xã hội khác như: trộm cắp, cướp của, giết người, đặc biệt là lây lan đại dịch HIV/AIDS và ảnh hưởng xấu đến truyền thống văn hóa dân tộc [11]

Hiện nay, quá trình toàn cầu hóa đã mang lại nhiều cơ hội cho sự hội nhập kinh tế, phát triển xã hội nhưng cũng đặt ra nhiều thách thức trong công tác phòng chống ma túy Bởi vì việc sản xuất, vận chuyển, buôn bán và sử dụng ma tuý ngày càng tinh vi, phức tạp khó kiểm soát Đặc biệt là Việt Nam lại nằm trên tuyến đường vận chuyển, sản xuất, buôn bán ma túy lớn của thế giới Vì thế Việt Nam đã coi việc đấu tranh phòng, chống ma túy là nhiệm vụ của toàn xã hội Chính phủ Việt Nam đã sớm thành lập Ủy ban Quốc gia về phòng, chống ma túy Luật phòng, chống ma túy được Quốc hội nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam khóa X, kỳ họp thứ 8 thông qua ngày 09 tháng 12 năm 2000 Luật sửa đổi, bổ sung một số điều của Luật phòng, chống ma túy năm 2008,… và chỉ đạo việc thực hiện các luật thông qua văn bản hướng dẫn thi hành pháp luật

Để thực thi luật pháp có hiệu quả thì việc nâng cao năng lực giám định ma túy là cần thiết Kết quả giám định sẽ là nguồn chứng pháp lý rất quan trọng để luận tội, hoặc là cơ sở khoa học để giải quyết các vấn đề như điều trị ngộ độc, cai nghiện,… Mặt khác, muốn kết luận giám định có sức thuyết phục cao để định tội trước tòa thì cần ít nhất 2-3 phương pháp giám định cho một loại mẫu ma túy Cùng với chứng cứ là mẫu vật bắt được thì việc xác định đối tượng có sử dụng ma túy thông qua giám định mẫu phẩm sinh học (nước tiểu) của chính đối tượng đó cũng rất cần thiết Ở Việt nam, việc giám định ma túy trong các mẫu phẩm sinh học thường được thực hiện bằng các phương pháp: phân tích miễn dịch, sắc ký khí- khối

phổ, sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC), sắc kí khí (GC),… Các phương pháp này đòi hỏi sự đầu tư lớn về trang thiết bị và dung môi, dẫn đến chi phí phân tích cao, thường chỉ triển khai được ở các phòng thí nghiệm chuyên ngành tuyến Trung ương Trong khi đó, nhu cầu phân tích giám định các chất ma túy ngay tại các phòng thí nghiệm điều tra hình sự tuyến địa phương là rất lớn Hiện nay, hầu hết các mẫu này đều phải gửi trưng cầu giám định tại Viện Khoa học Hình sự, Bộ Công An

Do đó, việc nghiên cứu phát triển các phương pháp phân tích đơn giản, chi phí thấp nhằm hỗ trợ điều tra tại các phòng thí nghiệm phân tích ma túy tuyến địa phương là rất cần thiết

Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) là phương pháp phân tích mới có nhiều ưu điểm như: trang thiết bị nhỏ gọn, hoạt động đơn giản, có thể tự động hóa và triển khai phân tích ngay tại hiện trường với một lượng nhỏ mẫu và hóa chất Vì thế phương pháp này cho chi phí thấp và phục vụ kịp thời nhất cho quá trình điều tra, cho thấy tiềm năng sử dụng là rất lớn

Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu quy trình

giám định một số chất ma túy tổng hợp nhóm ATS trong nước tiểu bằng phương pháp điện di mao quản” với hy vọng góp phần nhỏ bé trong việc phát triển phương

pháp giám định ma túy ở Việt Nam

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 Giới thiệu chung về chất ma túy

1.1.1 Một số khái niệm về chất ma túy

Theo tiến sĩ Trần Minh Hương, từ thế kỉ thứ 3 trước công nguyên đã có các tài liệu ghi nhận về việc sử dụng thuốc phiện như một loại thần dược chữa bách bệnh Điều đó dẫn tới việc lạm dụng thuốc phiện trong lịch sử loài người Năm

1806, Serturner đã phân lập được một chất tinh khiết đặc trưng cho tác dụng chính của thuốc phiện và gọi tên là Morphin Cái tên đó bắt nguồn từ tên một vị thần của các giấc mơ thời Hy Lạp cổ đại là Morpheus (hoặc là Narcotic) nghĩa là mê mẩn, túy lúy Ban đầu người Việt Nam dùng thuật ngữ “ma túy” để chỉ thuốc phiện Tuy nhiên cho tới ngày nay, thuật ngữ đó được mở rộng hơn gồm thuốc phiện, các sản phẩm thiên nhiên khác như cần sa, cô ca… và hàng loạt các sản phẩm bán tổng hợp, tổng hợp khác Người sử dụng sẽ bị lệ thuộc về thể chất và tinh thần vào các chất

đó Vì thế người ta đã thống nhất định nghĩa: “các chất ma túy là những chất có tác dụng làm thay đổi trạng thái tâm lý và sinh lý người sử dụng, có khả năng bị lạm dụng và gây ra sự phụ thuộc về tâm, sinh lý vào việc sử dụng các chất đó” [2]

Tại Việt Nam, Điều 2 luật phòng chống ma túy được Quốc hội khóa X, kỳ họp thứ 8 thông qua ngày 9 tháng 12 năm 2000, được sửa đổi, bổ sung bởi luật số 16/2008/QH 12 ngày 03 tháng 6 năm 2008 (có hiệu lực kể từ ngày 01 tháng 1 năm 2009) quy định:

“1 Chất ma túy là các chất gây nghiện, chất hướng thần được quy định trong các danh mục do Chính phủ ban hành

2 Chất gây nghiện là chất kích thích hoặc ức chế thần kinh, dễ gây tình trạng nghiện đối với người sử dụng

3 Chất hướng thần là chất kích thích, ức chế thần kinh hoặc gây ảo giác, nếu

sử dụng nhiều lần có thể dẫn tới tình trạng nghiện đối với người sử dụng”

Theo Nghị định số 82/2013/NĐ-CP của Chính phủ ngày 19 tháng 7 năm 2013

ban hành danh mục các chất ma túy và tiền chất, hiện nay các chất ma túy gồm 235 chất chia làm 3 danh mục và 41 tiền chất [11]

1.1.2 Phân loại các chất ma túy

Có nhiều cách phân loại các chất ma túy [2]:

* Phân loại theo nguồn gốc:

- Ma túy tự nhiên: thuốc phiện, Morphin, Cocain, Cần sa

- Ma túy bán tổng hợp: Heroin đƣợc bán tổng hợp từ Morphin

- Ma túy tổng hợp: Methamphetamin, amphetamin đƣợc tổng hợp từ “tiền

chất” có trong danh mục chất cần kiểm soát

* Phân loại theo tính chất hóa học gồm

- Nhóm alcaloit : Mocphin, Codein, Cocain, Heroin…

- Nhóm amin thơm: Amphetamin, Methamphetamin…

Cách phân loại này phức tạp, không thông dụng

* Phân loại theo trạng thái vật lý: rắn, lỏng…

Cách phân loại này ít có giá trị vì đa số các chất ma túy ở trạng thái rắn

* Phân loại theo tác dụng tâm, sinh lý

Cách này đƣợc dùng phổ biến nhất trên thế giới gồm:

- Các chất ức chế thần kinh trung ƣơng, có tác dụng giảm đau, gây ngủ (chất ma

túy chính gốc) gồm Thuốc phiện, các chất Opiat và các chất tác dụng kiểu Morphin

- Các chất có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ƣơng nhƣ Amphetamin,

Methamphetamin, các dẫn chất mạch vòng của Amphetamin, Cocain, cây Khat

- Các chất gây ảo giác nhƣ Cần sa, LSD, nấm Peyote, Mescalin…

- Các chất an thần, gây hậu quả mất ngủ nhƣ các chất nhóm Benzodiazepin,

nhóm Barbiturat

- Một số các chất dung môi bay hơi nhƣ: Ete, Etyl axetat…

1.1.3 Các chất ma túy tổng hợp nhóm ATS

1.1.3.1 Thông tin chung về ma túy tổng hợp nhóm ATS

Ma túy tổng hợp nhóm ATS là các chất ma túy có tác hại rất lớn đến toàn nhân loại nên chúng đƣợc liên hợp quốc liệt vào danh sách các chất cần kiểm soát

Chúng được phân vào nhóm các chất kích thích thần kinh dạng Amphetamin

((Amphetamin type stimulants-ATS) Tuy nhiên một số chất trong nhóm này có tác

dụng gây ảo giác nên một số nước xếp chúng vào nhóm gây ảo giác

Các chất nhóm ATS thường có cấu tạo là dẫn chất thay thế vòng của Amphetamin Chúng có cấu tạo như sau:

1.1.3.2 Thông tin chung về bốn chất ma túy tổng hợp được phân tích

Các thông tin về bốn chất ma túy tổng hợp được phân tích gồm: MA, MDA, MDMA, MDEA trình bày trong bảng 1.1

Bảng 1.1 Thông tin chung về 4 chất ma túy tổng hợp nhóm ATS: MA, MDA, MDMA, MDEA [2]

Tên gọi

hóa học

d-Methamphetamin (phenylmethylaminopro

pan)

3,4-methylendioxy amphetamin

3,4-methylendioxy methamphetamin

ethylamphetamin

1.1.3.3 Nguồn gốc, tổng hợp của MA, MDA, MDMA, MDEA

Năm 1888, lần đầu tiên tiến sỹ Nagayoshi Nagai người Nhật đã phát hiện và tổng hợp được Methamphetamin (MA) Đây là chất có tác dụng kích thích thần kinh trung ương mạnh Ngày nay, do lợi nhuận khổng lồ nên người ta đã sản xuất hàng loạt các chất có tác dụng tương tự hoặc mạnh hơn rất nhiều MA, đồng thời buôn bán và tổ chức sử dụng chúng

Methamphetamin được tổng hợp bằng cách khử nhóm hydroxyl của ephedrin (phenylmethylaminopropanol) hoặc pseudoephedrin Nếu nguyên liệu là ephedrin

có từ cây Ma hoàng thì sản phẩm là d-methamphetamin có hoạt tính mạnh Nếu nguyên liệu từ ephedrin tổng hợp thì sản phẩm của chúng là d,l- methamphetamin

có hoạt tính kém hơn Ở châu Âu, người ta tổng hợp MA từ phenylaxeton (benylmethylketon) [2, 31]

3,4-methylenedioxyamphetamin (MDA) là chất ma túy tổng hợp dòng amphetamin rất giống MDMA Lần đầu tiên được tổng hợp vào năm 1910 để làm thuốc giảm ngon miệng Tuy nhiên do có tác dụng nguy hại đối với tâm thần, MDA

đã không được tung ra thị trường như một loại thuốc hợp pháp Tác hại của nó đối với hành vi nhân cách đã được nghiên cứu vào thập niên 1960, và bắt đầu từ đó xuất hiện trên thị trường bất hợp pháp đầu tiên ở Mỹ rồi lan ra toàn thế giới Nó gây ảo giác mãnh liệt hơn MDMA và có thời gian tác dụng gấp đôi (từ 8 – 12 tiếng so với MDMA chỉ có 3 – 5 tiếng) MDA thường được chế tạo tại những địa điểm bí mật để thay thế cho MDMA và tung ra thị trường dưới dạng độc lập hay kết hợp với các loại ma túy khác

3,4-methylendioxymethamphetamin, còn gọi là “ecstasy” (MDMA) lần đầu tiên được tổng hợp năm 1914 để dùng làm thuốc giảm ngon miệng, nhưng chưa bao giờ được công nhận là thuốc đã đăng k ý MDMA được dùng thử nghiệm trong điều trị bệnh tâm thần Ecstasy là loại ma túy ăn chơi phổ biến đầu tiên ở Mỹ, sau đó là Châu Âu và ngày càng lan rộng ra những nơi khác trên thế giới MDMA được chế tạo tại những địa điểm bí mật dưới dạng bột hay viên nén có nhiều màu sắc và hình

ảnh khác nhau

1.1.3.4 Tác dụng đối với cơ thể và cơ chế tác dụng của nhóm ATS

Các chất ma túy nhóm ATS có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương (tác dụng hướng thần), chủ yếu trên vỏ não và hệ thống lưới hoạt hóa của hệ thần kinh trung ương Nó gây ra những thay đổi trạng thái tinh thần như cảm giác sảng khoái, tỉnh táo, phấn chấn, tinh thần nhanh nhẹn, tăng tính năng động, tự tin, tăng vận động, nói năng, giảm mệt mỏi, dịu đau … Nếu dùng lần đầu hoặc dùng ít làm người ta ảo tưởng tăng năng lực phán đoán, năng lực thần kinh, tăng hiệu quả làm với các công việc đơn giản Nhưng lại giảm hiệu quả đối với công việc phức tạp do thiếu tập trung Nếu dùng thường xuyên hoặc liều lượng lớn sẽ có tác dụng ngược lại, như chán chường, mệt mỏi, ảo giác, hoang tưởng, hoảng loạn, đau đầu, tim đập nhanh, rối loạn vận mạch, kích động, lẫn lộn, suy nhược tinh thần [2, 16, 23]

Các chất ma túy này còn kích thích hệ thần kinh giao cảm ngoại vi: gây co mạch, làm tăng huyết áp tối đa, tăng và có thể gây rối loạn nhịp tim, co thắt dạ dày, giảm chuyển dịch thức ăn, tác dụng trên cơ bọng đái Chúng được sử dụng để điều trị chứng đái dầm, có tác dụng giảm đau nhẹ, kích thích trung tâm hô hấp, tác dụng chán ăn,… làm suy giảm trí nhớ và độ cảm nhận trong thời gian dài

Các tác dụng kích thích này xảy ra rất nhanh thậm chí ngay trong khi tiêm Hiệu quả kéo dài 4 - 8 giờ đối với người chưa nghiện và 2 - 3 giờ đối với người nghiện, không có sự khác biệt nhiều giữa các lứa tuổi và giới tính

Khi dùng quá liều (ở người bình thường là 200 mg đối với amphetamin và 1g đối với methamphetamin) sẽ gây hôn mê, co giật, chảy máu não dẫn đến tử vong

Cơ chế tác dụng là do chúng giải phóng các amin nội sinh từ các vị trí ở đầu dây thần kinh, chủ yếu là norepinephrin (noradrenalin) Một vài tác dụng khác là do việc giải phóng dopamin

1.1.3.5 Hấp thu, phân bố, chuyển hóa và thải trừ

Các chất nhóm ATS dễ hấp thu qua đường dạ dày- ruột, dễ dàng đi qua hàng rào máu - não để gây tác dụng Thời gian bán hủy trong máu 8 - 12 giờ, chúng bắt đầu đào thải vào nước tiểu 20 phút sau khi được đưa vào cơ thể Thông thường amphetamin bài tiết vào nước tiểu dạng tự do khoảng 20 - 30% liều dùng, còn các dạng chuyển hóa khác khoảng 25% Tốc độ bài tiết phụ thuộc vào pH của nước tiểu Nếu pH kiềm thì sau 24 giờ lượng bài tiết là 45% liều và 2% ở dạng tự do Nếu pH axit thì lượng bài tiết là 78% và lượng tự do 68% Ở điều kiện bình thường sau 24 giờ khoảng 30% liều được bài tiết vào nước tiểu dưới dạng chưa chuyển hóa, 90% liều được đào thải trong 3 - 4 ngày Đây là vấn đề quan trọng cần biết khi nghiên cứu việc giám định ma túy

1.2 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS trên thế giới và ở Việt Nam

1.2.1 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS trên thế giới

Cuộc chiến toàn cầu chống ma túy sau 50 năm ngày Công ước Quốc tế của Liên hợp Quốc về phòng chống Ma túy đã thất bại với những hậu quả nặng nề đối với con người và xã hội trên toàn thế giới Tại khu vực Đông Nam Á, chiến lược xóa bỏ hoàn toàn Ma túy vào năm 2015 mà chính phủ các nước này đã ký cam kết đến nay có thể thấy rằng không thể thực hiện được Cuộc chiến chống lại ma túy cho thấy sự cam go trên phạm vi toàn cầu cũng như trong khu vực của chúng ta

Hội nghị Báo cáo về tình hình ma túy trên toàn thế giới do Ủy ban Quốc tế

về phòng chống ma túy của Liên Hợp Quốc (UNODC) phối hợp với Văn phòng Thường trực phòng chống ma túy (SODC) tổ chức, đánh giá: Trong suốt 100 năm, các quốc gia trên thế giới đã kiên trì đấu tranh với các loại tội phạm liên quan đến

ma tuý Kết quả đạt được tuy có nhiều ấn tượng, song ma tuý vẫn chưa bị nhổ tận gốc khỏi đời sống con người [5]

Lượng sản xuất ma tuý tổng hợp (thuốc lắc) lại ngày càng gia tăng UNODC cảnh báo lượng sản xuất và tiêu thụ ma tuý tổng hợp có dấu hiệu tăng mạnh ở các nước đang phát triển, đặc biệt là khu vực Đông Nam Á Hiện công việc sản xuất các loại ma túy đã phát triển thành một ngành công nghiệp lớn, với những xưởng chế

xuất có quy mô lớn ở Đông Nam Á Tội phạm liên quan đến ma túy đang gây ra một mối đe dọa nghiêm trọng về an ninh ở nhiều khu vực trên thế giới ATS được giới trẻ sử dụng nhiều nhất tại các thành phố lớn, các vùng biên giới và các khu công nghiệp và các vùng nông thôn UNODC khẳng định: "Chúng tôi cũng nhận thức được mối nguy hiểm từ việc lạm dụng các chất kích thích dạng amphetamin và các chất hướng thần mới đang tăng lên trong thanh niên”

Về số người sử dụng ma tuý, Theo báo cáo của UNDOC cho hay toàn cầu có

từ 172 đến 250 triệu người từng sử dụng ma tuý trái phép ít nhất một lần trong năm

16 đến 51 triệu người sử dụng dược chất ma tuý thuộc nhóm amphetamin; 12 đến

24 triệu người sử dụng ma tuý tổng hợp estasy Những con số trên đây là tính cả những người từng một lần thử qua ma tuý (có thể chưa nghiện) Còn về số người nghiện ma tuý kinh niên, UNODC ước tính vào khoảng 18 đến 38 triệu người Hằng năm có khoảng 200.000 người chết vì ma túy Thực tế này cho thấy ma túy có ảnh hưởng xấu đến kinh tế, văn hóa của toàn thế giới Vì vấn đề nghiêm trọng nên ngày 26/6 hàng năm được Liên Hợp Quốc chọn làm “Ngày quốc tế phòng, chống lạm dụng ma túy” [12]

1.2.2 Vấn đề sử dụng ma túy tổng hợp nhóm ATS ở Việt Nam

Tại Việt Nam, tình hình buôn bán, vận chuyển ma túy ngày càng phức tạp Cuộc chiến chống buôn lậu ma túy đã diễn ra trên 30 năm qua, ngày càng trở nên khốc liệt Bọn tội phạm ma túy tự trang bị vũ khí quân dụng, ngày càng hung hăng, dùng mọi phương tiện để vận chuyển ma túy vào Việt Nam hay quá cảnh từ Việt nam đi các nước khác Trong vài năm gần đây, trên hai tuyến biên giới Việt nam - Lào và Việt - Trung các lực lượng chức năng đã phát hiện, bắt giữ gần 5.340 vụ (chiếm 30% tổng số vụ bị bắt giữ trên toàn quốc) Điều đáng lưu ý là số vụ và lượng

ma túy tổng hợp (chủ yếu là ma túy đá) bị phát hiện, bắt giữ gia tăng nhanh chóng Các hình thức vận chuyển, cất giấu tinh vi, xảo quyệt như cất giấu trong hàng hóa, trong cơ thể, hành lý để vận chuyển qua đường hàng không, Theo thống kê của

Bộ Công an, 6 tháng đầu năm 2013, trong nhiều loại ma túy bị bắt giữ, có tới 46 kg

và 140 nghìn viên ma túy tổng hợp [12]

Tình trạng sử dụng ma túy tổng hợp ATS, đặc biệt là ma túy đá đang ngày càng gia tăng và trở thành mối đe dọa mới đối với sức khỏe cộng đồng, nhất là trong giới trẻ Trào lưu “đập đá” - tiếng lóng chỉ việc sử dụng loại ma túy tổng hợp cực mạnh - đang là cơn lốc ngầm khủng khiếp tàn phá một bộ phận giới trẻ ở các đô thị Qua thực tế và số liệu nghiên cứu cho thấy có tới 72% người sử dụng ma túy tổng hợp ở độ tuổi 18 - 30 tuổi, độ tuổi trên 30 chiếm 26%, riêng độ tuổi dưới 18 ở mức 2% nhưng có xu hướng gia tăng Ma túy “Đá” đã tràn vào các vũ trường và quán ba ở các đô thị như Thành phố Hồ chí Minh, Hà Nội v v

Về tình trạng nghiện ma túy, tính đến tháng 12/2013 toàn quốc quản lý gần 181.400 người nghiện ma túy có hồ sơ, tăng 9.396 người (5,4%) so với năm 2012 Tại một số trung tâm cai nghiện, tỷ lệ người sử dụng ma túy tổng hợp trong

số người được tiếp nhận vào cai nghiện cao hơn 61%, Trà Vinh 49% Đại từ (Thái nguyên 80%)

Sự xuất hiện của ma túy đá đồng nghĩa với việc số ca nhập viện điều trị rối loạn hệ thần kinh do ảo giác gây ra tại các bệnh viện chuyên khoa tăng lên một cách đáng kể trong khoảng thời gian ngắn Sử dụng ma túy đá có độ tàn phá hệ thống thần kinh, huỷ hoại não bộ gấp nhiều lần so với thuốc lắc

Vì mối đe dọa của ma túy nên theo Quyết định số 93/2001/QĐ-TTg ngày 13/6/2001 của Thủ tướng Chính phủ, hàng năm lấy tháng 6 là “Tháng hành động phòng, chống ma túy” và ngày 26/6 là “Ngày toàn dân phòng, chống ma túy”[12] Trước thực trạng này thì vai trò của nhà nước là thực hiện "giảm cung ma túy, giảm cầu ma túy và giảm tác hại do ma túy gây ra" Tuy nhiên việc Phòng chống Ma túy phải là trách nhiệm của mọi cá nhân, gia đình, cơ quan, tổ chức và của toàn xã hội

Để thực hiện đẩy lùi được ma túy thì việc quan trọng là phải có nguồn chứng

cứ kịp thời nhằm thực thi luật pháp và điều trị ngộ độc, cai nghiện Do đó phương pháp giám định ma túy nhanh, chính xác đang được bên công an và các trung tâm giám định quan tâm phát triển là phương pháp điện di mao quản sử dụng detector

đo độ dẫn không tiếp xúc (CE-C4D)

1.3 Các phương pháp xử lý mẫu phẩm sinh học chứa ma túy tổng hợp nhóm ATS

Hàm lượng ma túy nhóm ATS trong mẫu phẩm sinh học thường nhỏ, nên trong quá trình xử lý mẫu người ta thường chiết xuất nhằm mục đích loại bớt tạp chất và làm giàu mẫu Có 2 phương pháp chiết xuất thường dùng là:

1.3.1 Chiết lỏng - lỏng

Hiện nay phương pháp này được sử dụng rộng rãi trên thế giới vì việc lấy mẫu giám định tương đối đơn giản, cách tiến hành nhanh, hóa chất dễ tìm và chi phí thấp [2, 26] Quá trình chiết được tóm tắt ở hình 1.2

Hình 1.1 Qui trình chiết xuất ma túy tổng hợp nhóm ATS trong nước tiểu

Nước tiểu

Cô bay hơi dung môi hữu cơ (8)

mM, 0,5 mL axit axetic 0,1 M và 1 mL methanol Loại bỏ không khí trong cột, sau

đó tiến hành rửa giải bằng 2 mL dung dịch amoniac 3% methanol, làm khô dưới áp suất giảm dòng nitơ thu cặn chiết và tiến hành phân tích [2, 18]

1.4 Các phương pháp xác định ma túy tổng hợp nhóm ATS

Ma túy tổng hợp nhóm ATS được quy định là nhóm các hợp chất cấm sử dụng Tùy thuộc vào tính chất của các chất trong nhóm và điều kiện thí nghiệm mà hiện nay đã có một số phương pháp phân tích hợp pháp khác nhau được công bố

1.4.1 Phương pháp phân tích miễn dịch học (immunoassay)

Phương pháp phân tích miễn dịch học [2, 30] là một trong những phương pháp thông dụng để nhận biết các chất ma túy trong mẫu phẩm sinh học Ưu điểm của phương pháp là không cần phải chiết xuất và làm sạch mẫu, có thể tiến hành nhanh với một số lượng lớn mẫu Nguyên lý của phương pháp này là sử dụng một kháng thể đặc hiệu với chất cần phân tích (là kháng nguyên) và dạng đánh dấu của chính chất cần phân tích Nếu chất đánh dấu là chất đồng vị phóng xạ thì phải đo hoạt tính phóng xạ của chất bị đánh dấu đã kết hợp với kháng với thể Phải tách các chất bị đánh dấu đã kết hợp với kháng thể khỏi các chất không kết hợp Nếu chất đánh dấu là một enzim hoặc một chất huỳnh quang thì sẽ phải sử dụng các phương pháp đo quang và không phải tiến hành tách Cách này nhận biết dựa vào việc so sánh tín hiệu thay đổi giữa mẫu phân tích với mẫu trắng (mẫu đối chứng)

Phương pháp này có vai trò quan trọng trong việc thử nghiệm phát hiện sơ

bộ (on - site screening) sự có mặt của một chất hoặc một nhóm chất ma túy trong mẫu phẩm sinh học Từ đó cho phép loại trừ các trường hợp phản ứng âm tính

Trường hợp phản ứng dương tính chỉ xảy ra khả năng có mặt chất ma túy trong mẫu thử và phải tiến hành tiếp các phương phágp phân tích khác có ý nghĩa khẳng định

do tính đặc hiệu và độ chính xác của phương pháp này rất thấp

Phương pháp phân tích miễn dịch có thể sử dụng để định lượng các chất ma túy nếu xây dựng được đường cong chuẩn của mẫu đối chứng Phạm vi ứng dụng của phương pháp phụ thuộc nhiều vào tính sẵn có và tính đặc hiệu của kháng thể đối với kháng nguyên là chất cần phân tích Khối lượng phân tử thấp thì tính kháng nguyên hạn chế Khi đó người ta có thể gắn thêm vào phân tử ma túy một phân tử khác có khối lượng phân tử cao (thường gọi là hapten) như anbumin hoặc dùng chất tăng khả năng miễn dịch (adjuvant) để kết hợp với kháng nguyên gây miễn dịch

Theo thông tin từ Trung tâm giám định Hình sự, Viện Khoa học Hình sự, Bộ Công an, hiện nay phương pháp được sử dụng để sàng lọc các mẫu nước tiểu trước khi thực hiện bằng quy trình hình 1.2 và phân tích bằng phương pháp sắc kí khí

1.4.2 Các phương pháp sắc kí

1.4.2.1 Phương pháp sắc ký lỏng

Các phương pháp sắc ký lỏng thường sử dụng kết hợp với detector khối phổ (LC-MS/MS) hoặc detector huỳnh quang LC-MS/MS là phương pháp được dùng trong phân tích lượng vết cỡ (ppb, ppm) các hợp chất cần nhận danh chính xác Trong những điều kiện vận hành nhất định ngoài thời gian lưu đặc trưng, các chất

còn được nhận danh bằng phổ khối đặc trưng của nó

Sử dụng phương pháp này tác giả Laurian Vlase cùng các cộng sự [22] đã

phân tích định lượng các ma túy nhóm ATS bao gồm: methamphetamin (MA), methylendioximeth-amphetamin (MDMA) và methylendioxiamphetamin (MDA) trong huyết tương người Sự phân tách được thực hiện trên cột Zorbax SB-C18 với pha động là hỗn hợp có tỉ lệ 15 : 85 (v/v) metanol và 0,1% (v/v) axit formic trong nước ở 45 ºC với tốc độ dòng 1 mL/phút Chế độ sử dụng MS được trang bị với một nguồn ion APCI Quá trình chuyển đổi ion theo dõi là m/z 150 → m/z ( 91 +119 ) cho MA, m/z 180 → m/z 163 cho MDA và m/z 194 → m/z 163 cho MDMA tương ứng Các mẫu huyết tương người (0,2 mL) được kết tủa bằng 7% axit percloric

trong nước (0,1 mL) và phần dịch thu được sau khi ly tâm sẽ bơm trực tiếp vào hệ

thống sắc ký Phương pháp này cho hệ số tương quan tuyến tính tốt (r > 0,996), khoảng tuyến tính của MA, MDA, MDMA lần lượt là 2,03 - 169,04 ng/mL; 2,08 - 173,44 ng/mL; 2,48 - 206,92 ng/mL Hiệu suất thu hồi của các chất là nằm trong khoảng từ 88,3 - 110,4 % Thời gian lưu tương ứng của MA, MDA và MDMA là 1,8; 1,9 và 2,0 phút Phương pháp LC-MS/MS được xác nhận là khá đơn giản và nhanh chóng hơn so với các phương pháp tương tự khác Phương pháp cho phép định lượng nhanh, chính xác các chất ma túy MA, MDMA và MDA trong huyết tương của người

Cũng sử dụng phương pháp này, tác giả Ragnhild Elén Gjulem Jamt và cộng

sự [26] đã phân tích 6 chất Cathinone; methamphetamin; 3,4- amphetamin (MDA); 3,4-methylenedioxy-methamphet-amin (MDMA); ketamin và 2,5-dimetoxy-4-iodoamphetamin (DOI) Chúng được chiết xuất từ các mẫu máu thông qua 1 màng lỏng chất mang hỗ trợ (SLM) chứa 1-etyl-2-nitrobenzene (ENB) Các SLM hoạt động như 1 rào chắn bằng loại trừ hiệu quả của tất cả các đại phân tử

methylenedioxy-và các chất có tính axit trong mẫu Các hợp chất cation quan tâm được chiết xuất qua màng bằng cách áp một điện thế 15V, cho hiệu quả chiết khá tốt Dịch chiết được bơm trực tiếp vào thiết bị LC-MS Phương pháp cho độ thu hồi khoảng 10 - 30% của 80 µL mẫu máu trong thời gian là 5 phút với điện áp sử dụng là 15V Phương pháp đã được thử nghiệm để phân tích các chất quan ma túy tâm trong các mẫu máu lấy được từ ba trường hợp khám nghiệm tử thi pháp y và năm mẫu máu pháp y của người sống Giới hạn phát hiện (LOD) đạt được nằm trong khoảng 40-

2610 pg/mL Giới hạn định lượng (LOQ) là 10 và 250 ng/mL với R2 trên 0,9939, và

độ lặp lại (RSD) là 7 - 32%

Các tác giả da Costa JL, da Matta Chasin AA [19] đã sử dụng phương pháp sắc ký lỏng sử dụng detector huỳnh quang để phân tích các chất MDA, MDMA và MDEA Các mẫu sau khi thực hiện chiết lỏng-lỏng sẽ được phân tích trên thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng cột octadecyl, với detectơ huỳnh quang Việc dẫn xuất bằng natri dodexyl sunfat cho kết quả tách tốt và hiệu quả cao

Phương pháp này có khoản tuyến tính tốt và chính xác cao Hiệu suất thu hồi đạt từ

85 đến 102% và giới hạn phát hiện là 10, 15 và 20 ng/mL tương ứng cho MDA,

MDMA và MDEA

1.4.2.2 Phương pháp sắc ký khí - khối phổ (GC/MS)

Đây là một trong những phương pháp hiện đại, hiệu quả, chính xác nhất dùng để định tính cũng như định lượng các chất, đặc biệt là ma túy trong mẫu phẩm sinh học Sau khi ra khỏi cột sắc ký, các hợp chất hữu cơ bị oxi hóa thành các ion phân tử hay ion mảnh phân tử mang điện tích và các gốc tự do trong điều kiện áp suất thấp Sau đó, các ion được đưa sang bộ phận phân tích khối lượng Dựa vào dữ kiện phổ thu được, có thể định tính và định lượng chất phân tích một cách dễ dàng

Bằng phương pháp này các tác giả Đặng Đức khanh, Trần Việt Hùng, Trần Thị Thúy [4] đã thành công trong việc nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đồng thời 3 chất ma túy tổng hợp MA, MDA, MDMA trong mẫu nước tiểu Thiết bị phân tích sử dụng là máy sắc ký khí 6890N và khối phổ 5973i của hãng Agilent Cột mao quản DB-5 dài 60 m, đường kính 0,25 µm, độ dày lớp màng 1,0 µm, pha tĩnh tẩm 5% phenyl methyl siloxane Quy trình sử dụng chất nội chuẩn đồng vị là MDA-d5, mẫu nước tiểu được tách chiết và làm sạch trên cột chiết pha rắn C8 loại

500 mg, chất ma túy được tạo dẫn xuất với trifluoroacetic anhydride trước khi phân tích trên sắc ký khí khối phổ

Sau khi phân tích chất chuẩn và chất nội chuẩn ở chế độ Scan, các tác giả chọn ra được một số mảnh phổ có tính chất đặc trưng, mảnh phổ có tín hiệu mạnh; các mảnh phổ này dùng để phân tích chế độ SIM nhằm tăng độ nhạy của phép phân tích Từ kết quả phân tích scan, đã xác định được thời gian lưu, diện tích pic và các mảnh phổ cần phân tích Quy trình xây dựng được cho độ thu hồi trong khoảng từ 89,0 - 97,2%; độ lặp lại có RSD < 8%; giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của các chất MA, MDA, MDMA lần lượt là 1,4 ng/mL, 1,5 ng/mL, 1,1 ng/mL và 4,6 ng/mL, 4,9 ng/mL, 3,6 ng/mL Quy trình đã được ứng dụng để phân tích 56 mẫu nước tiểu gửi giám định ma túy, kết quả phát hiện các chất ma túy MA, MDA, MDMA trong mẫu với nồng độ từ 30 - 480 ng/mL

1.4.2.3 Phương pháp điện di mao quản

Hiện nay phương pháp điện di mao quản (CE) được sử dụng rộng rãi do tính

ưu việt về hiệu quả tách cao, thời gian tách ngắn, lượng mẫu tiêu tốn ít, kỹ thuật đơn giản Việc phát hiện và định lượng chất được thực hiện nhờ các loại detector, cửa sổ đo là một đoạn nhỏ (2 - 3 mm) ở gần đầu cuối của mao quản (cột tách), mà không cần một cuvet đo riêng như trong HPLC Hầu hết các thiết bị điện di mao quản thương phẩm hiện nay sử dụng detector hấp thụ phân tử UV-Vis hoặc huỳnh quang Mặc dù đây là những loại detector đã được khẳng định là rất hữu dụng, nhưng chúng cũng có những hạn chế nhất định về khả năng ứng dụng vì không phải tất cả các chất phân tích đều hấp thụ ánh sáng UV hay tạo ra huỳnh quang Trong đó các detector điện hóa, bao gồm cả đo dòng, đo thế và độ dẫn đều có ưu điểm là độ nhạy cao, độ chọn lọc tốt và khoảng tuyến tính rộng Thậm chí, việc thu nhỏ các điện cực còn làm tăng độ nhạy phát hiện do giảm được tín hiệu nhiễu [6, 17, 19]

Tác giả Satoshi Chinaka cùng cộng sự [27] đã dùng phương pháp CE/UV để phân tích đồng thời 9 chất thuộc nhóm ATS gồm: MA, amphetamin (AP), DMA, EP, norephedrin (NE), methylephedrin (ME), MDMA, 3,4- methylenedioxyamphetamin (MDA) và 3,4- methylenedioxy-N-ethylamphetamin (MDEA) Dung dịch đệm là Tris và -CD and heptakis (2,6-di-O-methyl)--CD (DM-- CD) với pH = 2,5 Giới hạn phát hiện đạt được là 0,03 - 1,0g/mL cho tất cả các chất Hiệu suất thu hồi 95 - 105% Một phương pháp khác CE/MS cũng được nhóm tác giả này sử dụng để tách 7 chất nhóm ATS (MA, AP, DMA, EP, NE, ME và EP) Dung dịch đệm tối ưu là 1 M axít formic có chứa heptakis(2,6-diacethyl-6-sulfato)--CD (DAS-- CD) với pH=1,7 Giới hạn phát hiện đạt được là 0,02 g/mL Hiệu suất thu hồi trong khoảng 97,7 - 108,8%

Sử dụng phương pháp CE-UV/Vis và CE-C4D, tác giả Rochelle Epple và cộng sự tại Khoa Hóa và Khoa học pháp y, Đại học Công nghệ Sydney (UTS), Sydney, Australia [25] đã phát hiện và tách được bẩy chất tương tự như amphetamin gồm: 2-(4-Methoxyphenyl)etylamin (2-4-MPEA); 2-Bromo-N-metylbenzylamin (MBA) ;2-Methoxy-N-metylanilin (2-MMA); 2-Phenethylamin.HCl (PEA.HCl); 5-

Aminomethyl-7-cloro-1,3-benzodioxole.HCl (AM-C-BD); 2-Methoxyphenethylamin (MPEA); 3-Methyl-N-methylbenzylamin (MMBA); amphetamin (AMP), dextroamphetamin (DexAMP), 3,4- methylendioxymethamphetamin (MDMA) và methamphetamin (MA) Dung dịch đệm được dùng là 30 mM hydroxypropyl -b -cyclodextrin (HPbCD ) trong 75 mM axit axetic và 125 mM natri axetat, pH =4,55 Kết quả phân tích của C4D và UV khi dùng cùng một loại đệm có sự tương quan tốt Giới hạn phát hiện trung bình cho C4D và UV tương ứng là 1,3 và 1,0 ppm Ảnh hưởng của nồng độ, thành phần pha động và độ chọn lọc của sự phân tách được nghiên cứu với các mẫu là 3,4- methylenedioxymethamphetamin (Ecstasy) và dextroamphetamin Phương pháp có khoảng tuyến tính là 0,5 - 10 ppm cho MDMA

và 0,5 - 30 ppm cho AMP với hệ số tương quan trung bình là R = 0,997 Các LOD trung bình và LOQ trung bình tương ứng với detector C4D là 1,3 và 4,4 ppm Các LOD trung bình và LOQ trung bình với detector UV tương ứng là 1,0 và 3,3 ppm Kết quả cho thấy có sự tương quan tốt khi so sánh C4D với UV Vì vậy, phương pháp này thích hợp cho việc phân tích các chất ma túy tổng hợp và Dexamphetamin dạng viên

Phương pháp CE - C4D cũng được tác giả Thitirat Mantim và cộng sự [28] dùng để tách các chất kích thích như: amphetamin (Amp), methamphetamin (MA), ephedrin (EP), pseudoephedrin (PE), norephedrin (NE) và norpseudoephedrin (NPE) Đệm là axit axetic với pH tối ưu là 2,5 Đồng thời các chất: carboxymethyl -

b -cyclodextrin (CMBCD), heptakis (2,6- di -O- methyl )-b -cyclodextrin (DMBCD) và đồng phân bất đối ether (1)-(18 -crown- 6) axit -2,3,11,12 - tetracarboxylic (18C6H4) cũng đã được nghiên cứu để thêm vào pha động điện di nhằm tăng hiệu quả phân tách Việc sử dụng các chất này đã được áp dụng thành công cho việc tách đồng phân đối quang của NE và NPE Giới hạn phát hiện đạt được trong khoảng 2,3 - 5,7 µmol/L Hiện nay, một số nước phát triển đã áp dụng thành công phương pháp CE - C4D trong việc phân tích các mẫu nước tiểu của các vận động viên để xác định các đồng phân đối quang của các chất kích thích

1.5 Giới thiệu chung về phương pháp điện di mao quản (CE)

Điện di mao quản (CE) là một kỹ thuật tách các chất Cơ sở của sự tách chất

là dựa trên sự di chuyển khác nhau của các phân tử chất (chủ yếu là các ion mang điện tích) trong dung dịch chất điện ly (có chất đệm pH), dưới tác dụng của điện trường (E) nhất định (do thế (V) đặt vào hai đầu mao quản sinh ra) [3, 8] Cấu tạo

của một hệ phân tích điện di mao quản được thể hiện trong hình 1.3

Hình 1.2 Mô hình cấu tạo của một hệ phân tích điện di mao quản

1.5.1 Mao quản

Mao quản là cột tách trong phương pháp điện di mao quản Đây là một trong các yếu tố quyết định quá trình điện di của hỗn hợp các chất mẫu Nó được chế tạo chủ yếu từ silic (mao quản silica), bên ngoài thường phủ một lớp polyme (ví dụ: PVC hoặc polyimid nhằm giúp mao quản dẻo khi uốn lại không bị gãy) Trường hợp mẫu có F- và tách ở pH thấp, người ta dùng mao quản teflon [8]

Mao quản thường có đường kính trong (ID) từ 25 – 150 m, thành dày từ 80 – 120 m, còn chiều dài tùy thuộc vào hỗn hợp mẫu phân tích [8]

Hình 1.3 Mặt cắt ngang của mao quản

* Lớp điện kép trên thành mao quản và dòng điện di thẩm thấu

Trong quá trình điện di, lớp điện kép và thế của chúng (thế Zêta) xuất hiện ở sát thành mao quản, nó phụ thuộc vào lực ion của dung dịch pha động điện di

Hình 1.4 Lớp điện tích kép trên bề mặt mao quản

Khi đó cũng xuất hiện dòng EOF là một loại của dòng chảy khối của chất lỏng trong mao quản, di chuyển từ cực dương sang cực âm, dưới tác dụng của điện trường Nó quan hệ mật thiết với lớp điện tích trên thành mao quản Các cation di chuyển cùng chiều với dòng EOF do đó di chuyển nhanh hơn, ngược lại các anion

di chuyển ngược chiều với dòng EOF do đó di chuyển chậm hơn Các phần tử trung hòa không chịu tác động của điện trường nên di chuyển cùng tốc độ với dòng EOF

Nó đóng vai trò quan trọng trong việc xác định thời gian tồn tại của chất tan trong ống mao quản nên quyết định thời gian lưu của chất phân tích

Hình 1.5 Ảnh hưởng của dòng EOF đến tốc độ các ion trong quá trình điện di

Như vậy cần phải tối ưu hóa các điều kiện điện di, cho tốc độ dòng EOF phù hợp với quá trình sắc ký hỗn hợp chất phân tích để có hiệu quả tách cao

1.5.2 Dung dịch đệm, pH và pha động trong phương pháp điện di mao quản

Chất đệm và giá trị pH của dung dịch đệm dùng để tạo môi trường để cho quá trình điện di xảy ra khi áp thế cao vào 2 đầu mao quản Chúng ảnh hưởng trực tiếp đến bề mặt của mao quản nên quyết định độ linh động điện di của các chất phân tích Mặt khác chúng cũng ảnh hưởng đến độ tan, tốc độ phản ứng của các chất [3,

6, 8] Bảng 1.2 nêu một số chất thường dùng làm pha động trong phương pháp điện

1.5.3 Nguồn điện thế cao

Là nguồn thế V một chiều nhất định được áp vào hai đầu mao quản để tạo ra lực điện trường E và dòng điện I trong mao quản Nó điều khiển và duy trì sự điện

di của các chất

Điện thế V một chiều thường được dùng là từ 15 - 40 kV/1m, hoặc từ 150 –

550 V/1cm mao quản để không cho dòng điện I quá lớn mà chỉ nên nằm trong vùng

từ 10 - 75 µA Việc chọn điện thế V là tùy thuộc vào bản chất của chất phân tích, chất nền của mẫu, giá trị pH và nồng độ của pha động điện di…[6]

1.5.4 Các kỹ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản

Tùy theo trang thiết bị, đối tượng phân tích và mục đích phân tích khác nhau

mà có thể lựa chọn một kiểu bơm mẫu phù hợp trong 3 kiểu sau:

Hình 1.6 Các kĩ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản

* Kĩ thuật bơm mẫu kiểu thuỷ động lực học dùng áp suất

Trong kĩ thuật này (hình 1.7-A): Dùng áp suất thích hợp để nén (đẩy) hoặc hút một lượng mẫu bơm vào đầu cột mao quản trong một thời gian nhất định

* Kĩ thuật bơm mẫu kiểu thuỷ động lực học kiểu xiphông

Trong kĩ thuật này (hình 1.7-B): Dựa vào sự chênh lệch về chiều cao của hai đầu cột mao quản trong một thời gian nhất định Độ cao chênh lệch thường từ 10 -

30 cm trong vài giây đến vài phút tùy thuộc vào hỗn hợp mẫu phân tích

* Kĩ thuật bơm mẫu kiểu điện động học

Kĩ thuật này (hình 1.7-C) sử dụng lực điện khi áp thế cao (5 - 10 kV trong vài giây) để bơm mẫu vào mao quản trong thời gian nhất định Ưu điểm của kĩ thuật này là cho kết quả các pic phân tách có độ sắc nét cao, nhưng lại có nhược điểm rất lớn là diện tích pic (khi định lượng) có độ lặp lại thấp với các nền mẫu khác nhau nên chỉ thường dùng để định tính [6]

1.5.5 Detector trong phương pháp điện di mao quản

Detector là bộ phận có tác dụng phát hiện và ghi nhận tín hiệu của chất phân tích sau quá trình điện di Tùy thuộc vào tính chất của hỗn hợp mẫu mà lựa chọn detector phù hợp Các loại detector thường dùng trong phương pháp điện di mao quản bao gồm: Hấp thụ phân tử (UV-Vis), huỳnh quang phân tử, phát xạ hoặc hấp thụ nguyên tử, phổ khối, điện thế (đo dòng, đo thế, đo độ dẫn), độ dẫn nhiệt, chỉ số chiết suất của chất [9]

Ngày nay người ta đặc biệt quan tâm và phát triển loại detector đa năng như detector đo độ dẫn không tiếp xúc (CE-C4D) Nó được sử dụng khá hiệu quả trong nhiều lĩnh vực khác nhau của khoa học, công nghệ, kinh tế và y dược

* Detector đo độ dẫn không tiếp xúc (C4

Cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc (C4D) với thiết kế hai điện cực đồng trục xuất hiện lần đầu trên thế giới vào năm 1998 Đến năm 2002, nhóm nghiên cứu của

GS Peter Hauser (khoa Hóa, trường đại học Basel, Thụy Sỹ) đã phát triển thành công dòng sản phẩm C4D với nguồn điện thế kích thích xoay chiều cao (HV-C4D, 200V) Sau đó Hãng điện tử eDAQ của Úc đã phối hợp cùng với nhóm nghiên cứu của GS Peter Hauser để phát triển nghiên cứu này Nguyên lý hoạt động của detector được thể hiện trong hình 1.8

Hình 1.7 Nguyên lý hoạt động của cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc

Khi áp nguồn điện xoay chiều (V) với tần số (f) vào điện cực thứ nhất, tại điện cực thứ hai xuất hiện tín hiệu đo ở dạng cường độ dòng điện (I) Vì vậy, dòng điện thu được tại điện cực thứ 2 sẽ phụ thuộc vào độ lớn của điện thế V và tần số f

Vđo = I x RfeedbackTín hiệu đầu ra thu được ở dạng cường độ dòng điện (xoay chiều), sau đó sẽ được chuyển đổi và khuếch đại thành tín hiệu dạng vôn thế (xoay chiều), thông qua việc sử dụng một điện trở khuếch đại (Rfeedback) Vôn thế xoay chiều sau đó được chuyển đổi thành vôn thế 1 chiều, lọc nhiễu và khuếch đại, sau cùng chuyển đổi thành tín hiệu số hóa trước khi được hiển thị và lưu trữ trên máy tính

Như vậy, detector đo độ dẫn không tiếp xúc ngoài ưu điểm là phân tích đa năng còn có lợi thế là không nhất thiết phải có sự tiếp xúc trực tiếp của các điện cực với dung dịch đo Đó là do lợi dụng được tính chất kết nối tụ điện với dung dịch bên trong mao quản hoặc ống phản ứng Đây là một cách rất thông minh loại trừ được ảnh hưởng của điện thế cao đến hệ điện tử của detector đảm bảo an toàn và không làm nhiễm bẩn dung dịch phân tích, trong quá trình phân tách điện di

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM

2.1 Mục tiêu và nội dung nghiên cứu

2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu

Mục tiêu của đề tài là: Nghiên cứu quy trình giám định một số chất ma túy tổng hợp nhóm ATS (gồm: MA, MDA, MDMA, MDEA) trong mẫu nước tiểu và mẫu bị bắt giữ (Viện Khoa học Hình sự cung cấp) bằng phương pháp điện di mao quản, sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc theo kiểu kết nối tụ điện (CE-C4D)

2.1.2 Nội dung nghiên cứu

Trên cơ sở mục tiêu đề ra, nội dung đề tài bao gồm:

- Tổng hợp các tài liệu liên quan đến các chất ma túy tổng hợp nhóm ATS và các phương pháp phân tích

- Nghiên cứu khảo sát các điều kiện tối ưu cho việc giám định đồng thời 4 chất ma túy tổng hợp nhóm ATS gồm: MA, MDA, MDMA, MDEA bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc (CE-C4D), gồm:

+ Khảo sát hệ đệm, nồng độ đệm và pH của dung dịch đệm

+ Khảo sát thời gian bơm mẫu

+ Khảo sát điện thế đặt vào hai đầu mao quản

+ Khảo sát sự ảnh hưởng của các cation đến việc giám định các chất

- Thẩm định, đánh giá phương pháp phân tích

+ Xây dựng đường chuẩn, xác định khoảng tuyến tính (khoảng làm việc) + Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)

+ Đánh giá độ chụm của phương pháp phân tích

+ Đánh giá độ đúng của thiết bị và của phương pháp phân tích

- Áp dụng phân tích hàm lượng 04 chất ma túy tổng hợp trong một số mẫu thực tế: mẫu bị bắt giữ và mẫu nước tiểu do Viện Khoa học Hình sự cung cấp

- Thực hiện phân tích đối chứng một số mẫu có hàm lượng các chất ma túy với phương pháp phân tích tiêu chuẩn GC/MS do Viện Khoa học Hình sự thực hiện

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp phân tích

Phương pháp phân tích trong luận văn là phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc (CE-C4D) Thiết bị này được thiết kế và chế tạo bởi TS Mai Thanh Đức và ThS Bùi Duy Anh kết hợp với nhóm nghiên cứu của

GS Peter Hauser (Thụy Sỹ), là thiết bị có nguồn thế cao lên đến 20 kV, có thể thực hiện bán tự động (hình 2.1)

Hình 2.1 Hệ điện di sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc

2.2.2 Phương pháp xử lý mẫu

Các mẫu được sử dụng trong luận văn gồm mẫu viên thuốc bị bắt giữ và mẫu nước tiểu thu được ở hiện trường các vụ án hoặc tại các trại giam do Viện Khoa học Hình sự cung cấp

2.2.2.1 Xử lý mẫu viên thuốc

Lấy 1 viên thuốc nghiền thành bột và trộn đều Cân 1 lượng bột chính xác (26,0 mg MA viên; 11,4 mg MA đá; 57,0 mg MDMA viên) trên cân phân tích (độ chính xác 0,1 mg) Sau đó cho vào bình định mức 10,0 mL, thêm 3,0 mL metanol (Riêng MDMA thêm 4 mL methanol vì mẫu này ở dạng bazơ khó tan), siêu âm khoảng 10 phút và định mức tới vạch bằng nước đề ion Hỗn hợp được ly tâm (8000 vòng/phút) trong 10 phút, tiếp đến được lọc qua màng 0,2 µm và pha với tỉ lệ thích hợp bằng nước đề-ion trước khi tiến hành bơm mẫu vào thiết bị CE

2.2.2.2 Xử lý mẫu nước tiểu

18 mẫu nước tiểu thu trong vụ “Tổ chức sử dụng trái phép ma túy” đã được phân tích sàng lọc bằng phương pháp thử miễn dịch (Các mẫu được đánh số thứ tự

từ 1 - 18 ) Kết quả có 12/18 mẫu dương tính ma túy nhóm ATS Vì hàm lượng ma túy trong nước tiểu thường nhỏ nên cần được chiết xuất để làm giàu mẫu và loại bỏ bớt tạp chất trước khi bơm mẫu vào thiết bị CE Sau khi tham khảo tài liệu [2, 20]

và căn cứ vào các điều kiện thiết bị, hóa chất có trong phòng thí nghiệm, chúng tôi thực hiện qui trình chiết xuất ma túy nhóm ATS trong mẫu nước tiểu như sau:

1 Lấy mỗi mẫu 5 mL nước tiểu vào ống nghiệm có nắp xoáy

2 Kiềm hóa mẫu về pH: 10-11 bằng dung dịch NH3 (kiểm tra bằng giấy quỳ)

3 Chiết mẫu bằng 2 mL etyl axetat, lắc trong vòng 10 phút

4 Ly tâm cho tách lớp

5 Hút lớp etyl axetat (lớp trên) đuổi dung môi, được cặn chiết

6 Cặn chiết hòa tan vào 100 L methanol rồi tiến hành phân tích trên thiết bị CE-C4D và/hoặc GC-MS

2.3 Các thông số đánh giá độ tin cậy của phương pháp phân tích

2.3.1 Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)

* Giới hạn phát hiện (LOD): Là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích còn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa so với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu nền

Đối với các quá trình sắc ký, LOD là nồng độ nhỏ nhất mà cho tỉ lệ tín hiệu/nhiễu (S/N) bằng 3 [13]

* Giới hạn định lượng (LOQ): Là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà

hệ thống phân tích định lượng được với tín hiệu phân tích khác có ý nghĩa định lượng với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu của nền Thông thường, với các quá trình sắc ký giá trị LOQ được xác định theo tỉ số tín hiệu/nhiễu (S/N) bằng 10 [13]

2.3.2 Độ chụm ( độ lặp lại) của phương pháp

Độ lặp lại đặc trưng cho mức độ gần nhau giữa các giá trị riêng lẻ xi khi tiến hành trên các mẫu thử giống hệt nhau, được tiến hành bằng một phương pháp phân

tích, trong cùng điều kiện thí nghiệm (người phân tích, trang thiết bị, phòng thí nghiệm) trong các khoảng thời gian ngắn [13]

Độ lặp lại của phương pháp được xác định qua độ lệch chuẩn (SD) và độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) theo các công thức sau [10, 13]:

SD i tb (2.1) ;  % x100

S

SD RSD

tb

 (2 2)

Trong đó:

- Si là diện tích của pic điện di thứ i

- Stb là diện tích trung bình của n lần chạy

- n là số lần chạy lặp (n = 6)

2.3.3 Độ đúng (độ thu hồi) của thiết bị, của phương pháp

Độ đúng chỉ mức độ gần nhau giữa giá trị trung bình của dãy lớn các kết quả thí nghiệm và các giá trị quy chiếu được chấp nhận Do đó, thước đo độ đúng thường đánh giá qua sai số tương đối hay bằng phương pháp xác định độ thu hồi [10, 13] Độ thu hồi (H):

C

Trong đó:

H: hiệu suất thu hồi (%)

Ctt: Nồng độ thực tế của mỗi chất phân tích thu được (tính theo đường chuẩn)

Clt: Nồng độ lý thuyết của mỗi chất phân tích tính toán từ lượng chuẩn thêm vào Nếu chất chuẩn thêm vào mẫu từ trước khi xử lý mẫu ta có độ đúng của phương pháp, còn nếu chất chuẩn được thêm vào trước khi bơm vào thiết bị CE ta

có độ đúng của thiết bị Ngoài ra, độ đúng của phương pháp còn được khẳng định qua việc so sánh kết quả thực nghiệm với kết quả đo của một phương pháp đối chứng tiêu chuẩn khác

+ MDA (Lipomed, hàm lượng dạng bazơ = 82,8%)

+ MDMA (Lipomed, hàm lượng dạng bazơ = 40,0%)

+ MDEA (Lipomed, hàm lượng dạng bazơ = 84,66%)

2.4.1.2 Hóa chất dung môi

+ L- Arginine (C6H14N4O2) (Fluka, hàm lượng > 99,5%)

+ L- Histidine ( C6H9N3O2) ( Fluka, hàm lượng 99,5%)

+ Axit acetic (CH3COOH), (PA, Merck, Đức)

+ Axit clohydric (HCl), (PA, Merck, Đức)

+ Natri hydroxyd (NaOH), (PA, Merck, Đức)

+ Methanol (CH3OH), (PA, Merck, Đức)

Nước siêu tinh khiết (nước đề-ion): là nước cất hai lần được lọc qua bộ lọc siêu tinh khiết với các cột trao đổi cation, anion và màng lọc 0,2 µm

2.4.1.3 Chuẩn bị các dung dịch hóa chất

* Pha dung dịch chuẩn gốc

Cân riêng từng chất trên cân phân tích (độ chính xác 0,1 mg) MA: 81,8 mg, MDA: 5,0 mg, MDMA: 96,1 mg, MDEA: 11,3 mg được pha trong dung môi là methanol với lượng thích hợp: MA: 3 mL, MDA: 2 mL, MDMA: 4 mL, MDEA: 4

mL, rung siêu âm trong 30 phút, sau đó thêm vào mỗi dung dịch 1 mL nước thu được các dung dịch gốc có nồng độ tương ứng là MA: 13600 ppm, MDA: 1380 ppm, MDMA:7690 ppm, MDEA: 1910 ppm Dung dịch được bảo quản trong tủ lạnh từ 2 - 8oC, tránh ánh sáng và có thể sử dụng trong vòng 1 năm

Từ dung dịch chuẩn trên ta có thể pha các dung dịch hỗn hợp 4 chất chuẩn (tỉ

lệ nồng độ (ppm) MA : MDA : MDMA : MDEA là 2 : 8,3: 4,2 : 3,7 để làm việc có