Bài giảng virus học thú y virus newcastle PGS TS nguyễn bá hiên

Virus Newcastle Lời cảm ơn Xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Bá Hiên, Trưởng môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y, Đại học Nông nghiệp Hà Nội dày công biên soạn bài giảng này! I Giới thiệu chung  Bệnh Newcastle hay bệnh gà rù bệnh truyền nhiễm cấp tính, lây lan mạnh gà  Đặc điểm bệnh: xuất huyết, chảy nước hệ thống hô hấp, tuần hoàn tiêu hoá  Năm 1927, Doyle phân lập mầm bệnh ổ dịch ngoại ô thành phố Newcastle (Anh)  Ở Việt Nam bệnh lưu hành toàn lãnh thổ xảy quanh năm gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi gà nước ta II Đặc tính sinh học virus 2.1 Hình thái phân loại:  Virus Newcastle ARN virus thuộc họ Paramyxoviridae  Trong họ có nhóm virus ký hiệu từ APMV-1 đến APMV-9 (Avian paramyxo virus – APMV)  Virus Newcastle thuộc nhóm APMV-1 nguyên nhân gây bệnh gia cầm  Ngoài ra, virus thuộc nhóm APMV-2, APMV-3, APMV-6, APMV-7 gây bệnh gia cầm  Capxit có cấu trúc xoắn nên virus có hình trụ hình cầu  Kích thước từ 120 – 230 nm, trung bình khoảng 180 nm  Có vỏ bọc lipit nên mẫn cảm với ete, cồn ethylic, chloroform II Đặc tính sinh học virus Hình thái phân loại: Virus Newcastle có loại protein cấu trúc: HN ( Haemagglutinin-Neuraminidaza): gây ngưng kết hồng cầu có đặc tính enzym Neuraminidaza có tác dụng cắt đứt thụ thể hồng cầu F (Fusion protein): liên kết tế bào bị nhiễm tạo hợp bào syncitium L (Large protein): chưa rõ chức M (Matrix protein): có tác dụng gắn ARN virus với vỏ bọc P(Phosphorylated): chưa rõ chức  N (Nucleoprotein): protein kiềm, có tác dụng bảo vệ RNA virus Virus có khả gây ngưng kết hồng cầu gà, bò, người,chuột lang Virus Newcastle ha   VR Newcastle có nhiều chủng, cấu trúc kháng nguyên giống khác độc lực, xếp chúng thành nhóm: - Nhóm Velogen :  Chủng cường độc, có độc lực cao ,gây bệnh cho gà lứa tuổi.Gây chết phôi sau tiêm 24-48h - Nhóm Mesogen :  Gồm chủng có độc lực vừa , gây bệnh cho gà 60 ngày tuổi Gây chết phôi sau tiêm 24-60h - Nhóm Lentogen :  Gồm chủng Newcastle nhược độc tự nhiên độc lực thấp độc lực, chúng khả gây bệnh gây bệnh nhẹ cho gà nở  Gây chết phôi sau tiêm > 100h  VD : chủng Lasota, B1 ,V4, F… dùng để chế VX phòng bệnh cho gà tháng tuổi , gọi Vacxin hệ II 2.2 Nuôi cấy  Nuôi cấy virus phôi : Dùng phôi gà ấp 9-10 ngày tuổi, tiêm virus vào xoang niệu mô Thời gian gây chết phôi tuỳ độc lực virus Bệnh tích phôi xuất huyết da đầu, chân cánh  Nuôi cấy virus môi trường tế bào: virus nhân lên tốt môi trường nuôi tế bào thận lợn ,thận khỉ, tế bào xơ phôi gà Sau 24-72h gây nhiễm, tế bào bị hoại tử (CPE) chủ yếu hình thành Syncitium  Nuôi cấy virus động vật cảm thụ: Dùng gà dò để tiêm truyền, với chủng virus cường độc, bệnh phát giống bệnh tự nhiên 2.3 Sức đề kháng  Virus Newcastle có sức đề kháng yếu tự nhiên  Với sức nóng : đun 600C/30’ ;1000C/1’  Nhiệt độ lạnh bảo tồn virus: 40C virus sống hàng tháng, nhiệt độ âm sâu virus tồn lâu  Khả chịu nhiệt chủng Newcastle đặc tính di truyền, chủng khác chịu nhiệt khác  Các chủng chịu nhiệt tồn 25-300C 2-3 tháng, 560C 6h như: chủng V4  Virus có vỏ bọc lipit nên mẫn cảm với chất làm tan mỡ  Các chất sát trùng thông thường diệt virus nhanh chóng Phản ứng ngưng kết hồng cầu 3.2.2 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI-Haemagglutination Inhibition test)  Nguyên lý :  Kháng thể đặc hiệu với virus có huyết thanh, gặp kháng nguyên tương ứng, phản ứng trung hoà xảy Virus bị kháng thể trung hoà, không khả gây ngưng kết hồng cầu  Ứng dụng:  Chẩn đoán bệnh  Giám định virus cúm gia cầm virus Newcastle  Định lượng hàm lượng kháng thể có máu gà để đánh giá mức độ miễn dịch đàn gà sử dụng vacxin  Xác định thời gian tái chủng vacxin Chuẩn bị : - Kháng nguyên nghi : Là virus phân lập có gây ngưng kết hồng cầu, pha : Hiệu giá có đơn vị HA với virus Newcastle Hiệu giá đơn vị HA với virus cúm gia cầm - Dung dịch hồng cầu gà 1%: chuẩn bị cho phản ứng HA - Kháng thể chuẩn: Kháng thể Newcastle Kháng thể cúm gia cầm(ví dụ:H5N1)  Tiến hành :  Dùng khay nhựa vi ngưng kết có dãy giếng, dãy dùng cho mẫu HT Cho nước sinh lý kháng thể theo sơ đồ Sơ đồ phản ứng HI Ô giếng 10 ĐC (-) Nước sinh lý 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Kháng thể Newcastle 25 Hiệu giá KT 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 … … KN nghi có đơn vị HA 25 25 25 25 25 25 Hồng cầu gà 1% 50 50 50 50 50 50 Nguyên liệu *: virus Newcastle chuẩn pha nồng độ 4HA ĐC (+) 25 … … … 25 25 25 25 25* 25* 50 50 50 50 50 50 Sơ đồ phản ứng HI Ô giếng 10 ĐC (-) 25 25 25 25 25 25 Nước sinh lý 25 25 Kháng thể cúm gia cầm 25 Hiệu giá KT 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 … … … … … KN nghi Có đơn vị HA 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Hồng cầu gà 1% 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Nguyên liệu 25 25 25 *: virus cúm gia cầm chuẩn pha nồng độ 8HA ĐC (-) 25 25 25 25* 50 50 50  Trộn giếng thứ 1, hút 25 microlit chuyển giếng thứ  Trộn giếng thứ 2, hút chuyển tiếp… đến giếng thứ 10 hút bỏ 25 ml  Cho tiếp 25 ml dung dịch virus pha loãng nồng độ HA (với virus Newcastle), 8HA (với virus cúm gia cầm) vào tất cả giếng, trừ giếng 12 làm ĐC +  Để 20 phút cho kháng thể trung hoà virus tương ứng  Cho 50 microlit hồng cầu vào tất cả giếng dãy phản ứng  Trộn để 20 phút đọc kết quả  Kết phản ứng :  Nếu bên dãy có chứa KT Newcastle không ngưng kết hồng cầu  kết luận nước trứng có chứa virus Newcastle, kháng thể Newcastle trung hoà hết virus Newcastle  Còn bên dãy có chứa KT cúm gà có ngưng kết hồng cầu gà  kết luận nước trứng chứa virus Newcastle Vì KT cúm gà không trung hoà virus Newcastle  Nếu bên dãy có chứa KT cúm gia cầm (H5N1) hồng cầu không bị ngưng kết  kết luận nước trứng có chứa virus cúm gia cầm (H5N1), KT cúm gia cầm trung hoà hết virus cúm  Còn bên dãy có chứa KT Newcastle có tượng ngưng kết hồng cầu gà  kết luận nước trứng có chứa virus cúm gia cầm Vì KT Newcastle không trung hoà virus cúm gia cầm  Nếu cả hai bên không gây ngưng kết hồng cầu  kết luận nước trứng có cả hai loại virus Newcastle virus cúm gia cầm 3.2.3 Phản ứng trung hòa: *Trung hoà gà: Dùng lô gà - Lô thí nghiệm :  Tiêm vacxin Newcastle để gây miễn dịch - Lô đối chứng không tiêm vacxin  Sau 7-10 ngày dùng bệnh phẩm tiêm cho cả lô gà Nếu bệnh phẩm có virus lô gà TN không chết Lô ĐC chết với triệu chứng, bệnh tích điển hình bệnh Trung hoà phôi gà :  Dùng phôi gà ấp 9-10 ngày chia làm lô - Lô TN :  Tiêm hỗn dịch bệnh phẩm trộn với lượng tương đương KHT Newcastle chế sẵn - Lô Đ C :  Chỉ tiêm bệnh phẩm nghi  Kết quả : - Lô TN phôi phát triển bình thường - Lô ĐC phôi chết với bệnh tích điển hình VR tác động IV Phòng Trị bệnh  Phòng bệnh vệ sinh:  Khi dịch chưa xảy ra:  Bằng biện pháp không cho mầm bệnh xâm nhập vào đàn gia cầm: thực nghiêm ngặt quy trình vệ sinh thú y , chăm sóc nuôi dưỡng tốt ,tiêm phòng vacxin quy trình kỹ thuật, lịch  Khi có dịch xảy ra:  trại chăn nuôi có quy mô lớn, để nhanh chóng dập tắt dịch, cần khoanh vùng ,xử lý toàn số gà mắc bệnh nghi nhiễm Tiến hành biện pháp vệ sinh nghiêm ngặt,tẩy uế chuồng trại,sử lý phân rác độn chuồng xác gà chết  Tiêm thẳng VX vào ổ dịch  Trong chăn nuôi nhỏ lẻ: dịch xảy tuyệt đối không bán chạy gà ốm mổ thịt gà bừa bãi; xử lý xác chết phân rác kĩ thuật , tiêu độc chuồng trại khu vực chăn nuôi triệt để , kĩ Phòng bệnh vacxin Phòng bệnh vacxin :  Vacxin Newcastle có loại + Vacxin Newcastle vô hoạt có bổ trợ dầu: - Dạng vacxin Newcastle đơn giá - Dạng vacxin đa giá (Newcastle+ Gumboro+ IB +Reovirus ) tiêm da ,tiêm bắp + Vacxin Newcastle nhược độc : Hiện nước ta sử dụng loại vacxin nhược độc Newcastle phòng bệnh cho gà, vacxin có loại - Vacxin Hệ II: Loại vacxin chế từ chủng virus thuộc nhóm Lentogen:Lasota, B1, F, Avinew,V4… Dùng cho gà lứa tuổi, vacxin an toàn thời gian miễn dịch ngắn.Khi dùng vacxin phương pháp nhỏ mũi, mắt ,miệng - Vacxin Hệ I: Loại vacxin chế từ chủng virus thuộc nhóm Mesogen :Mukteswar, H (Hertfordshire) Vacxin dùng cho gà từ tháng tưổi trở lên với gà có miễn dịch sở với vacxin Lasota Khi dùng vacxin tiêm da Vacxin loại an toàn vacxin nhóm thời gian miễn dịch dài Lịch dùng vacxin Newcastle cho gà Ngày tuổi VX dùng cho Gà giống thịt (bố mẹ ) Lasota lần I VX dùng cho Gà giống trứng (bố mẹ ) Lasota lần I VX dùng cho Gà đẻ trứng thương phẩm Lasota lần I Lasota lần I Lasota lần II 25 30 VX dùng cho Gà thịt thương phẩm Lasota lần II Lasota lần II Lasota lần II 40 Lasota lần III 45 Xuất chuồng 60 Newcastle hệ I Newcastle hệ I Newcastle hệ I 145 Newcastle hệ I Newcastle hệ Newcastle hệ I 260 Newcastle hệ I Newcastle hệ I New castle hệ I [...]... nhiều dịch nh y Xuất huyết dạ d y tuyết Xuất huyết dạ d y tuyết Triệu chứng, bệnh tích gà bị Newcastle Triệu chứng, bệnh tích gà bị Newcastle Newcastle Hình ảnh minh hoạ điều kiện vệ sinh chăn nuôi của người dân rất kém III Chẩn đoán 3.1 Chẩn đoán virus học:  Bệnh phẩm : - Não gà nghi bệnh,nghiền ,pha với nước sinh lý thành huyễn dịch 1/10 - Xử lý kháng sinh để diệt tạp khuẩn - Ly tâm l y nước trong... đầu hay cuối - Ở dạ d y cơ, nếu bóc lớp màng cứng th y có những đám màu đỏ, có chất nhớt - Niêm mạc ruột non, tổ chức lymphô dưới niêm mạc (mảng payer) xuất huyết và loét thành đám hình tròn, hình bồ dục - Niêm mạc ruột già, trực tràng, hậu môn xuất huyết thành vệt 3.2 Chẩn đoán huyết thanh học:  - Để chẩn đoán bệnh Newcastle hay sử dụng phản ứng HI(Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu ) - Do virus. .. g y bệnh  Trong tự nhiên:  Virus g y bệnh cho các loài: gà, gà t y, bồ câu, chim sẻ, chim cút  Vịt, ngan, ngỗng cũng mắc nhưng bệnh thường nhẹ  Gà ở mọi lứa tuổi đều mắc nhưng cảm thụ nhất là gà con  Người cũng có thể bị nhiễm virus, nung bệnh 1-4 ng y ,sốt và cảm mạo  Trong phòng thí nghiệm :  Thường g y nhiễm cho gà dò, phôi gà ấp 9-11 ng y để g y bệnh và phân lập VR.Trên gà bệnh xa y. .. lên th y có nhiều nước dãi cha y ra,mùi chua khắm  4-5 ng y sau ,gà thở khó, mào xám, hay ngáp  Ng y 6-7, thân nhiệt hạ, gà chết  Nếu bệnh kéo dài, gà có triệu chứng thần kinh : - Đi siêu vẹo - Đi giật lùi - Đầu cổ co giật - Mổ không trúng thức ăn  Bệnh tích: Dọc theo niêm mạc đường tiêu hoá: miệng, họng, thực quản, phủ chất bựa nh y màu trắng xám,có xuất huyết điểm - Dạ d y tuyến xuất huyết rõ... hồng cầu ) - Do virus Newcastle và virus cúm gia cầm đều có đặc tính g y ngưng kết hồng cầu Vì v y thường dùng phản ứng HI để giám định virus là Newcastle hay cúm gia cầm - Để làm phản ứng HI trước hết phải làm phản ứng HA (Phản ứng ngưng kết hồng cầu) 3.2.1 Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà - HA (Haemagglutination test)  Nguyên lý: Do trên capxit của virus có một bán kháng nguyên HN (Haemagglutinin... đích:  Xác định virus có khả năng g y ngưng kết hồng cầu  Xác định nồng độ virus cao hay thấp  Xác định đơn vị ngưng kết dùng cho phản ứng HI  Chuẩn bị:  Hồng cầu gà 1%: - L y 10ml máu gà + 5ml Citrat Na 5% để chống đông - ly tâm 1000 vòng/5-10 phút, bỏ bạch cầu và huyết tương - Cho nước sinh lý vào rửa hồng cầu và ly tâm tiếp, loại bỏ phần nước trong Làm như v y 3 lần - L y hồng cầu đặc pha... trong tự nhiên Turkey  ha Gallus gallus domesticus  Gà đồi Gà Newcastle ỏ thể mạn tính Có dấu hiệu thần kinh, đầu gục xuống, cong như móc cân Gà Newcastle ỏ thể mạn tính ó dấu hiệu thần kinh, đầu gục xuống, cong như móc cân Gà Newcastle ở thể mạn tính Gà Newcastle ở thể mạn tính Gà Newcastle Bệnh Newcastle ỏ thuỷ cầm khi nhiễm bệnh vịt có dấu hiệu thần kinh Niêm mạc khí quản bị xuất huyết, bên trong... 9-11 ng y, khi phôi chết, mổ trứng thu nước trứng dùng để chẩn đoán  Tiêm ĐVTN: - Dùng gà giò đủ tiêu chuẩn - Tiêm 1ml huyễn dịch bệnh phẩm hay 0,5ml nước trứng nghi vào bắp hay dưới da - Nếu trong bệnh phẩm có virus thì sau tiêm 2-3 ng y có triệu chứng:  ủ rũ, xù lông sã cánh, buồn ngủ, đứng co ro  bỏ ăn, uống nước nhiều  sốt cao  ỉa cha y phân trắng xanh nhão, có bọt  Miệng gà đ y nước dãi... 1%  Nước trứng có virus : L y bệnh phẩm, xử lý, tiêm huyễn dịch bệnh phẩm qua trứng, khi phôi chết, mổ trứng thu nước để phát hiện virus  Tiến hành phản ứng :  Thực hiện trên tấm nhựa vi ngưng kết (Microwell plates) có 96 lỗ đ y: Chữ U Hoặc chữ V  Cho vào d y phản ứng theo sơ đồ sau: Giếng 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Nước sinh lý 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Nước trứng ? 50 Hiệu giá virus 1/2 1/4 1/8 1/16... 4 5 6 7 8 9 Nước sinh lý 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Nước trứng ? 50 Hiệu giá virus 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 Nguyên liệu Hồng cầu gà 1% 50 Đối đối chứng chứng (-) (+) 50 50* 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Đơn vị tính: microlit Ghi chú: * là 50µ virus Newcastle chuẩn