Bài giảng virus học thú y virus newcastle PGS TS nguyễn bá hiên

Hình thái và phân loại: Virus Newcastle có 6 loại protein cấu trúc:  HN Haemagglutinin-Neuraminidaza: gây ngưng kết hồng cầu và có đặc tính của enzym Neuraminidaza có tác dụng cắt đứt

Virus Newcastle

Lời cảm ơn

Xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Bá Hiên,

Trưởng bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y, Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã dày công biên soạn bộ bài giảng này!

I Giới thiệu chung

 Bệnh Newcastle hay bệnh gà rù là bệnh truyền nhiễm cấp tính, lây lan mạnh ở gà

 Đặc điểm của bệnh: xuất huyết, chảy nước ở hệ thống hô hấp,

tuần hoàn và tiêu hoá.

 Năm 1927, Doyle phân lập được mầm bệnh trong một ổ dịch ở

ngoại ô thành phố Newcastle (Anh).

 Ở Việt Nam bệnh lưu hành trên toàn lãnh thổ và xảy ra quanh

năm gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi gà ở nước ta.

II Đặc tính sinh học của virus

2.1 Hình thái và phân loại:

 Virus Newcastle là một ARN virus thuộc họ Paramyxoviridae

 Trong họ này có 9 nhóm virus ký hiệu từ APMV-1 đến APMV-9 (Avian paramyxo virus – APMV)

 Virus Newcastle thuộc nhóm APMV-1 là nguyên nhân chính gây bệnh ở gia cầm.

 Ngoài ra, các virus thuộc nhóm APMV-2, APMV-3, APMV-6, APMV-7 cũng gây bệnh ở gia cầm.

 Capxit có cấu trúc xoắn nên virus có hình trụ hoặc hình cầu

 Kích thước từ 120 – 230 nm, trung bình khoảng 180 nm

 Có vỏ bọc ngoài là lipit nên rất mẫn cảm với ete, cồn ethylic, chloroform.

II Đặc tính sinh học của virus

1 Hình thái và phân loại:

Virus Newcastle có 6 loại protein cấu trúc:

 HN ( Haemagglutinin-Neuraminidaza): gây ngưng kết hồng cầu và có đặc tính của enzym Neuraminidaza có tác dụng cắt đứt thụ thể hồng cầu.

 F (Fusion protein): liên kết các tế bào bị nhiễm tạo ra hợp bào

syncitium.

 L (Large protein): chưa rõ chức năng.

 M (Matrix protein): có tác dụng gắn ARN của virus với vỏ bọc.

 P(Phosphorylated): chưa rõ chức năng.

 N (Nucleoprotein): là một protein kiềm, có tác dụng bảo vệ RNA của virus.

 Virus có khả năng gây ngưng kết hồng cầu gà, bò, người,chuột lang

Virus Newcastle

 ha

 ha

 VR Newcastle có nhiều chủng, cấu trúc kháng nguyên giống nhau nhưng khác nhau về độc lực, xếp chúng thành 3 nhóm:

 Gồm những chủng Newcastle nhược độc tự nhiên độc lực thấp hoặc

không có độc lực, chúng không có khả năng gây bệnh hoặc chỉ gây bệnh nhẹ cho gà con mới nở

 Gây chết phôi sau khi tiêm > 100h.

 VD : chủng Lasota, B1 ,V4, F… dùng để chế VX phòng bệnh cho gà dưới 2 tháng tuổi , gọi là Vacxin hệ II.

2.2 Nuôi cấy

 Nuôi cấy virus trên phôi :

Dùng phôi gà ấp 9-10 ngày tuổi, tiêm virus vào xoang niệu mô Thời gian gây chết phôi tuỳ độc lực của virus Bệnh tích trên phôi là xuất huyết ở

da đầu, chân và cánh.

 Nuôi cấy virus trên môi trường tế bào:

virus nhân lên tốt trong môi trường nuôi tế bào thận lợn ,thận khỉ, tế bào

xơ phôi gà Sau 24-72h gây nhiễm, tế bào bị hoại tử (CPE) chủ yếu là hình thành Syncitium.

 Nuôi cấy virus trên động vật cảm thụ:

Dùng gà dò để tiêm truyền, với những chủng virus cường độc, bệnh sẽ phát ra giống bệnh trong tự nhiên.

 Virus có vỏ bọc ngoài là lipit nên rất mẫn cảm với các chất làm tan mỡ.

 Các chất sát trùng thông thường diệt virus nhanh chóng.

2.4 Khả năng gây bệnh

 Trong tự nhiên:

 Virus gây bệnh cho các loài: gà, gà tây, bồ câu, chim sẻ, chim cút.

 Vịt, ngan, ngỗng cũng mắc nhưng bệnh thường nhẹ

 Gà ở mọi lứa tuổi đều mắc nhưng cảm thụ nhất là gà con.

 Người cũng có thể bị nhiễm virus, nung bệnh 1-4 ngày ,sốt và cảm mạo.

Trong phòng thí nghiệm :

 Thường gây nhiễm cho gà dò, phôi gà ấp 9-11 ngày để gây bệnh và phân lập VR.Trên gà bệnh xảy ra giống như trong tự nhiên

Turkey

Gallus gallus domesticus



Gà đồi

Gà Newcastle ỏ thể mạn tính

Có dấu hiệu thần kinh, đầu gục xuống, cong như móc cân

Gà Newcastle ỏ thể mạn tính

ó dấu hiệu thần kinh, đầu gục xuống, cong như móc cân

Gà Newcastle ở thể mạn tính

Gà Newcastle

Bệnh Newcastle ỏ thuỷ cầm

khi nhiễm bệnh vịt có dấu hiệu thần kinh

Niêm mạc khí quản bị xuất huyết, bên trong

có chứa nhiều dịch nhầy

Xuất huyết dạ dày tuyết

Xuất huyết dạ dày tuyết

Triệu chứng, bệnh tích gà bị Newcastle

Triệu chứng, bệnh tích gà bị Newcastle

Newcastle

Hình ảnh minh hoạ điều kiện vệ sinh chăn nuôi của người dân rất kém

- Xử lý kháng sinh để diệt tạp khuẩn

- Ly tâm lấy nước trong

- Hoặc tiêm qua phôi gà ấp 9-11 ngày, khi phôi chết, mổ trứng thu nước trứng dùng để chẩn đoán.

 Tiêm ĐVTN:

- Dùng gà giò đủ tiêu chuẩn

- Tiêm 1ml huyễn dịch bệnh phẩm hay 0,5ml nước trứng nghivào bắp hay dưới da

- Nếu trong bệnh phẩm có virus thì sau tiêm 2-3 ngày có triệuchứng:

 Miệng gà đầy nước dãi quánh dính, nếu dốc ngược gà lênthấy có nhiều nước dãi chảy ra,mùi chua khắm

 4-5 ngày sau ,gà thở khó, mào xám, hay ngáp

 Ngày 6-7, thân nhiệt hạ, gà chết

 Nếu bệnh kéo dài, gà có triệu chứng thần kinh :

- Đi siêu vẹo

- Đi giật lùi

- Đầu cổ co giật

- Mổ không trúng thức ăn

 Bệnh tích:

Dọc theo niêm mạc đường tiêu hoá: miệng, họng, thực quản, phủ

chất bựa nhầy màu trắng xám,có xuất huyết điểm.

- Dạ dày tuyến xuất huyết rõ rệt, tạo thành vành đai ở đầu hay cuối

- Ở dạ dày cơ, nếu bóc lớp màng cứng thấy có những đám màu đỏ,

3.2 Chẩn đoán huyết thanh học:

 - Để chẩn đoán bệnh Newcastle hay sử dụng phản ứng

HI(Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu )

- Do virus Newcastle và virus cúm gia cầm đều có đặc tính gây ngưng kết hồng cầu

Vì vậy thường dùng phản ứng HI để giám định virus là

Newcastle hay cúm gia cầm

- Để làm phản ứng HI trước hết phải làm phản ứng HA

(Phản ứng ngưng kết hồng cầu)

3.2.1 Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà - HA

(Haemagglutination test)

 Nguyên lý: Do trên capxit của virus có một bán kháng nguyên HN (Haemagglutinin Neuraminidaza) có khả năng gắn với thụ thể của hồng cầu làm các hồng cầu dính kết với nhau, rồi sau đó cắt đứt các thụ thể hồng cầu để chúng lại rời nhau ra.

 Mục đích:

 Xác định virus có khả năng gây ngưng kết hồng cầu

 Xác định nồng độ virus cao hay thấp.

 Xác định đơn vị ngưng kết dùng cho phản ứng HI

 Chuẩn bị:

 Hồng cầu gà 1%:

- Lấy 10ml máu gà + 5ml Citrat Na 5% để chống đông

- ly tâm 1000 vòng/5-10 phút, bỏ bạch cầu và huyết tương

- Cho nước sinh lý vào rửa hồng cầu và ly tâm tiếp, loại bỏphần nước trong Làm như vậy 3 lần

- Lấy hồng cầu đặc pha với nước sinh lý thành nồng độ1%

 Nước trứng có virus :

Lấy bệnh phẩm, xử lý, tiêm huyễn dịch bệnh phẩm quatrứng, khi phôi chết, mổ trứng thu nước để phát hiện virus

Đơn vị tính: microlit

Giếng

Nguyên liệu 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Đối chứng (-)

đối chứng (+)

 Để yên 15-20 phút rồi đọc kết quả

- Phản ứng dương tính :

Hồng cầu ngưng kết (NK) nằm rải đều thành mảng ở đáy lỗ

- Hiệu giá ngưng kết :

 Là độ pha loãng virus lớn nhất mà tại đó vẫn có hiện tượngngưng kết hồng cầu rõ

 Ví dụ :

 ở nồng độ 1/16 có NK, 1/32 không có NK  hiệu giá NK là 1/16

 1/16 là một đơn vị NK hay 1 đơn vị HA

 Hiệu giá NK càng lớn ,nồng độ virus trong hỗn dịch càng cao

 Phản ứng âm tính:

 Hồng cầu lắng xuống đáy thành một cục màu đỏ, nước bêntrên trong

Phản ứng ngưng kết hồng cầu

Phản ứng ngưng kết hồng cầu

3.2.2 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu

gà (HI-Haemagglutination Inhibition test)

 Nguyên lý :

 Kháng thể đặc hiệu với virus có trong huyết thanh, gặp kháng nguyên tương ứng, phản ứng trung hoà xảy ra Virus bị kháng thể trung hoà, không còn khả năng gây ngưng kết hồng cầu.

 Ứng dụng:

 Chẩn đoán bệnh

 Giám định giữa virus cúm gia cầm và virus Newcastle.

 Định lượng hàm lượng kháng thể có trong máu gà để đánh giá mức độ miễn dịch của đàn gà khi sử dụng vacxin.

 Xác định thời gian tái chủng vacxin.

*: virus Newcastle chuẩn được pha ở nồng độ 4HA

 Trộn đều giếng thứ 1, hút 25 microlit chuyển giếng thứ 2

 Trộn đều giếng thứ 2, hút và chuyển tiếp… đến giếng thứ 10 hút bỏ đi 25 m l.

 Cho tiếp 25 m l dung dịch virus pha loãng ở nồng độ 4 HA (với virus Newcastle), 8HA (với virus cúm gia cầm) vào tất cả các giếng, trừ giếng 12 làm ĐC +.

 Để 20 phút cho kháng thể trung hoà virus tương ứng.

 Cho 50 microlit hồng cầu vào tất cả các giếng trong dãy phản ứng.

 Trộn đều để 20 phút rồi đọc kết quả.

 Kết quả của phản ứng :

 Nếu bên dãy có chứa KT Newcastle không ngưng kết hồngcầu  kết luận nước trứng có chứa virus Newcastle, vì

kháng thể Newcastle đã trung hoà hết virus Newcastle

 Còn bên dãy có chứa KT cúm gà có ngưng kết hồng cầu gà

 kết luận nước trứng chứa virus Newcastle Vì KT cúm

gà không trung hoà được virus Newcastle

 Nếu bên dãy có chứa KT cúm gia cầm (H5N1) hồng cầu không

bị ngưng kết  kết luận nước trứng có chứa virus cúm giacầm (H5N1), vì KT cúm gia cầm đã trung hoà hết virus cúm

 Còn bên dãy có chứa KT Newcastle có hiện tượng ngưng kếthồng cầu gà  kết luận nước trứng có chứa virus cúm giacầm Vì KT Newcastle không trung hoà được virus cúm giacầm

 Nếu cả hai bên đều không gây ngưng kết hồng cầu  kết luậntrong nước trứng có cả hai loại virus Newcastle và virus cúmgia cầm

3.2.3 Phản ứng trung hòa:

*Trung hoà trên gà: Dùng 2 lô gà

- Lô thí nghiệm :

 Tiêm vacxin Newcastle để gây miễn dịch

- Lô đối chứng không tiêm vacxin

 Sau 7-10 ngày dùng bệnh phẩm tiêm cho cả 2 lô gà trên

Nếu bệnh phẩm có virus thì lô gà TN không chết Lô ĐC chếtvới triệu chứng, bệnh tích điển hình của bệnh

 Trung hoà trên phôi gà :

 Dùng phôi gà ấp 9-10 ngày chia làm 2 lô

- Lô TN phôi phát triển bình thường

- Lô ĐC phôi chết với bệnh tích điển hình do VR tác động

IV Phòng và Trị bệnh

 Phòng bệnh bằng vệ sinh:

 Khi dịch chưa xảy ra:

 Bằng mọi biện pháp không cho mầm bệnh xâm nhập vào đàn gia cầm: thực hiện nghiêm ngặt quy trình vệ sinh thú y , chăm sóc nuôi dưỡng tốt ,tiêm phòng vacxin đúng quy trình kỹ thuật, đúng lịch.

 Khi có dịch xảy ra:

 ở các trại chăn nuôi có quy mô lớn, để nhanh chóng dập tắt dịch, cần khoanh vùng ,xử lý toàn bộ số gà đang mắc bệnh và nghi nhiễm Tiến hành các biện pháp vệ sinh nghiêm ngặt,tẩy uế chuồng trại,sử lý phân rác độn chuồng và xác

Phòng bệnh bằng vacxin

 Phòng bệnh bằng vacxin :

 Vacxin Newcastle có 2 loại

+ Vacxin Newcastle vô hoạt có bổ trợ dầu:

- Dạng vacxin Newcastle đơn giá

- Dạng vacxin đa giá (Newcastle+ Gumboro+ IB +Reovirus ) tiêm dưới da ,tiêm bắp.

+ Vacxin Newcastle nhược độc :

Hiện nay ở nước ta đang sử dụng 2 loại vacxin nhược độc

Newcastle phòng bệnh cho gà, vacxin có 2 loại.

Vacxin chỉ dùng cho gà từ 2 tháng tưổi trở lên với gà đã có miễn

dịch cơ sở với vacxin Lasota

Khi dùng vacxin tiêm dưới da

Vacxin loại này an toàn kém hơn vacxin nhóm trên nhưng thời gian miễn dịch dài hơn

Lịch dùng vacxin Newcastle cho gà

Ngày tuổi

VX dùng cho

Gà giống thịt (bố mẹ )

60 Newcastle hệ I Newcastle hệ I Newcastle hệ I

145 Newcastle hệ I Newcastle hệ 1 Newcastle hệ I

260 Newcastle hệ I Newcastle hệ I New castle hệ I