Thực hiện 1 quy trình trồng nấm rơm và những công đoạn trong quy trình trồng nấm sò, nấm mỡ và nấm linh chi

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HẢI PHỊNG VIỆN SINH – NƠNG SINH VIÊN THỰC TẬP : PHẠM THỊ HUỆ SINH NGÀY : 02/01/1995 LỚP : CÔNG NGHỆ SINH HỌC K14 BÁO CÁO THỰC TẬP NGHỀ NGƯỜI HƯỚNG DẪN : Tiến sĩ TRẦN ĐĂNG KHÁNH Th.S LƯU THÚY HÒA Giảng viên VŨ LAN PHƯƠNG MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU Sau thời gian tháng thực tập Trung tâm nấm Văn Giang – Hưng Yên, Trường đại học Hải Phòng Viện di truyền Nông Nghiệp- Hà Nội, hướng dẫn tận tình thầy cơ, anh chị trung tâm , viện em hiểu rõ công nghệ nuôi trồng nấm, cách tách chiết DNA, chạy PCR cách nuôi cấy mô tế bào thực vật Em xin chân thành cảm ơn hướng dẫn dạy bảo thầy cô dành cho em Dưới báo cáo em học tập kiến tập trung tâm nấm Văn Giang, trường đại học Hải Phòng Viện di truyền Nông Nghiệp Hà Nội NỘI DUNG A, CÔNG NGHỆ NUÔI TRỒNG NẤM I, Điểm thực tập : trung tâm Nấm Văn Giang – Hưng Yên 1, Người hướng dẫn _ Thầy Trần Đăng Hùng _ Thầy Nguyễn Duy Hạnh 2, Thời gian thực tập _ Thời gian thực tập : 1/6/2015 – 13/6/2015 3, Nội dung cơng việc _ Thực quy trình trồng nấm rơm cơng đoạn quy trình trồng nấm sị, nấm mỡ nấm linh chi II, Quy trình trồng nấm rơm 1, Giới thiệu nấm rơm _Nấm rơm hay nấm mũ rơm (danh pháp hai phần: Volvariella volvacea) loài nấm họ nấm lớn sinh trưởng phát triển từ loại rơm rạ Nấm gồm nhiều lồi khác nhau, có đặc điểm hình dạng khác có loại màu xám trắng, xám, xám đen… kích thước đường kính "cây nấm" lớn, nhỏ tùy thuộc loại Là loại nấm giàu dinh dưỡng Nấm rơm chứa nhiều vitamin A, B1, B2, PP, D, E, C chứa loại a-xít amin, nấm rơm ăn trị nhiều bệnhlà loại quen thuộc, làng quê thường sử dụng làm thực phẩm _Cấu tạo: +) Bao gốc (volva): Dài cao lúc nhỏ, bao lấy tai nấm Khi tai nấm trưởng thành, cịn lại phần trùm lấy phần gốc chân cuống nấm, bao nấm hệ sợi tơ nấm chứa sắc tố melanin tạo màu đen bao gốc Độ đậm nhạt tùy thuộc vào ánh sáng Ánh sáng nhiều bao gốc đen +) Cuống nấm: Là bó hệ sợi xốp, xếp theo kiểu vịng trịn đồng tâm Khi cịn non mềm giịn Nhưng già xơ cứng khó bẻ gãy +)Mũ nấm: Hình nón, có melanin, nhạt dần từ trung tâm rìa mép _Quá trình tạo thành thể nấm rơm gồm giai đoạn: • • • • • • Đầu đinh ghim (nụ nấm) Hình nút nhỏ Hình nút Hình trứng Hình chng (kéo dài) Trưởng thành (nở xòe) Chu kỳ sinh trưởng phát triển nấm rơm nhanh chóng (10-12 ngày) Những ngày đầu nấm nhỏ hạt có màu trắng (giai đoạn đinh ghim), 2-3 ngày sau lớn nhanh hạt ngơ, táo, trứng (giai đoạn hình trứng), lúc trưởng thành (giai đoạn phát tán bào tử) trơng giống dù, có cấu tạo thành phần hoàn chỉnh _Sinh trưởng Ở quốc gia vùng nhiệt đới thích hợp nhiệt độ để nấm rơm sinh trưởng phát triển Nhiệt độ thích hợp để nấm phát triển từ 30-32oC; độ ẩm ngun liệu (cơ chất) 65-70%; độ ẩm khơng khí 80%; pH = 7, thống khí Nấm rơm sử dụng dinh dưỡng cellulose trực tiếp từ nguyên liệu trồng Nấm rơm loại dễ trồng, mau thu hoạch, cho kinh tế cao Nấm rơm sử dụng dinh dưỡng cellulose trực tiếp từ nguyên liệu trồng chứa nhiều vitamin A, B1, B2, PP, D, E, riêng vitamin C chiếm đến 160 mg/100gr Ngồi ra, nấm rơm cịn chứa loại a-xít amin mà thể khơng tổng hợp Nhờ đó, nấm rơm ăn trị nhiều bệnh Bã sau trồng nấm chế biến thành phân sinh học cao cấp Ngồi ra, bã nấm cịn dùng để ni trùn đất, lấy trùn nuôi gia cầm, gia súc tôm, cá 2, Sơ đồ trồng nấm rơm Rơm rạ, phế thải Chăm sóc, thu hái, chế biến Xử lý nguyên liệu nước vôi Ươm sợi Ủ đống Đảo, chỉnh độ ẩm ngun liệu Đóng mơ vào khn cấy giống 3, Công việc tiến hành 3.1 Xử lý nguyên liệu, Ủ đống Chuẩn bị +) Bốn tạ rơm khô +) Cào, kệ, cọc tre, vôi bột, nước , túi nilon, dây buộc _ Tiến hành +) Lấy tạ rơm khô từ kho trải sân +) Dùng vòi phun nước phun đều, cho rơm làm ướt đều, không ướt không khô +) Xếp kệ ( kệ ) , xếp rơm làm ướt lên kệ, đặt cọc thơng khí vào kệ +) Cứ lớp rơm xếp lên kệ ta rắc lớp vôi bột, làm cho hết tạ rơm +) Quây nilon lại dùng dây buộc cố định • Lưu ý: • Dưới đáy đống ủ phải có kệ kê để tránh đọng nước, phía ngồi đống ủ dùng nilon quây xung quanh để giứu nhiệt giữu ẩm phải có cọc thơng khí giúp thơng thống khí cho đống ủ • Cứ sau lớp rơm ta phải rắc lớp vơi bột vơi bột tiếp xúc với nước có q trình sinh nhiệt làm ngun liệu chín * Ngun liệu bơng phế thải +) Bước 1: Trải phế thải sân +) Bước 2: Phun nước cho thật ướt , vừa phun vừa đảo cho ướt +) Bước 3: Rắc vôi bột lên đảo trộn cho +) Bước 4: Xếp kệ, sau xếp bơng phế thải lên kệ ủ đống, đống ủ rộng 1,2m; cao 1,5m; dài 1,5m +) Bước 5: Quây nilon xung quanh để hở đỉnh • Lưu ý : Phải có kệ kê để nước 3.2 Đảo chỉnh độ ẩm nguyên liệu +) Bước 1: Tháo dây tháo nilon xung quanh đống ủ +) Bước 2: Giũ đống rơm ủ cho hết nóng chia đóng ủ làm hai phần: • Phần 1: Toàn phần đống ủ • Phần 2: Tồn phần bên ( giữa) đống ủ +) Bước 3: Xếp rơm lên kệ ( lần khơng ấn chặt rơm), tồn phần cho vào đống ủ, phần cho lên đống ủ +) Bước 4: Quây nilon xung quanh buộc dây lại  Lưu ý : Đống ủ lúc giũ phải chia làm phần phần đóng ủ rơm chín đủ nhiệt độ, phần phần đống ủ rơm chưa chín Vậy nên cần có lần đảo trộn nguyên liệu chín 3.3 Đóng mơ vào khn cấy giống _ Bước 1: Rỡ đống rơm ủ đảo chỉnh nguyên liệu lần cho hết nóng, sau vận chuyển vào lán cấy giống nấm rơm _Bước 2: Chuẩn bị khuôn cấy giống, giống nấm rơm Khuôn cấy giống phải làm gỗ có hình thang cụt có kích thước :       Chiều rộng đáy : 0,4m Chiều rộng đáy : 0,3m Chiều dài đáy : 1,1m Chiều dài đáy : 1,2m Chiều cao khn : 0,4m Có gờ hai đầu khuôn _Bước 3: Trải lớp rơm rạ vào khuôn dày 10-12cm , lấy giống nấm bẻ tơi cấy đường giống xung quanh cách mép khuôn 3-4 cm Cho lớp rơm thứ cấy giống làm tiếp đủ lượt giống lớp rơm, lớp giống trải bề mặt sau dùng lớp rơm dày 3-4cm đậy lên , ép nhẹ cho phẳng Nhấc khuôn cấy tiếp mơ khác , bố trí mơ cách mơ 25- 30 cm 3.4 Ươm sợi chăm sóc, thu hái chế biến chưa thực III, Quy trình trồng nấm sị 1, Giới thiệu nấm sị a) Vị trí phân loại hình thái _ Nấm sị có tên khoa học chung Pleurotus sp, thuộc chi Pleurotus họ pleurotaceae, Agaricales, lớp agricomycetes, ngành phụ agricomycotina, ngành Nấm đảm –Basidiomycota, giới Nấm- Fungi Trong có 39 lồi khác màu sắc, hình dang chúng loại nấm sị tím, Nấm sị trắng, Nấm sị nâu… _ Nấm sị có hình dạng phễu lệch, mọc thành cụm, cánh nấm gồm phần: mũ, phiến, cuống Khi trưởng thành nấm sò phát tán bào tử nhờ gió, bào tử gặp điều kiện mơi trường thích hợp( thân gơc mục) nảy mầm thành hệ sợi sơ cấp với nhân Các sợi sơ cấp phát triển đầy đủ tạo điều kiện nên hệ sợi nấm thứ cấp, sau có kết hợp hệ sợi nấm thứ cấp hình thành thể nấm hồn chỉnh b) Đặc tính sinh học nấm sị _ Nấm sị trồng quanh năm thuận lợi từ tháng năm trước tới tháng năm sau Nhiệt độ thích hợp với nấm sị: + Nhóm chịu lạnh từ 13 – 20 ◦C + Đối với nhóm chịu nhiệt độ cao từ 24 – 28 ◦C _ Độ ẩm chất trồng nấm nước tưới cần pH = 6,5 – 7,0 _Ánh sáng : Không cần thiết thời kỳ nuôi sợi, nấm hình thành thể cần ánh sáng khuếch tán ( 100 – 200 lux) _ Độ thông thống: cần thiết giai đoạn ni sợi nấm lên thơng thống vừa phải nồng độ CO2 ≤ 0,03 % _ Dinh dưỡng : Sợi nấm sò sử dụng trực tiếp nguồn xenlulo chất Có thể bổ sung thêm chất phụ gia giàu chất đạm, khoáng giai đoạn xử lý nguyên liệu C, CÔNG NGHỆ GEN ( THỰC VẬT ) I, Đối tượng thực vật: Lúa Mẫu phải sạch, không bẩn hay bị nhiễm sâu bệnh II, Nội dung công việc 1.Tách chiết DNA 3.Chạy PCR RAPD 2.Điện di kiểm tra độ tinh mẫu SSR 4.Điện di kiểm tra mẫu _ Thời gian thực tập từ 22/6/2015 – 25/6/2015 III, Tách chiết DNA thực vật Dụng cụ , thiết bị, hóa chất *) Dụng cụ, thiết bị : _ Chày , cối sứ _ Kéo, ca nhựa, bình thủy tinh _ pipet, đầu côn, ống eppendorf, máy ly tâm, bể ủ nhiệt, máy điện di, lị vi sóng, tủ lạnh sâu, cân điện tử *) Hóa chất: _ Nitơ lỏng _ CTAB (Cetryl ammonium bromide ) _SDS ( Sodium đoecyl sulyate ) _ Chlorofom _ Agarose _ Nước cất 2.Cách tiến hành Các bước tiến hành Bước : Nghiền nitơ lỏng _ Lấy mẫu lúa M4 dùng kéo cắt nhỏ sau cho vào cối sứ tiếp bổ sung nitơ lỏng vào cối sứ dùng chày sứ nghiền từ từ ( trình nghiền hết nitơ lỏng ta bổ sung thêm nitơ lỏng ), nghiền mẫu mẫu nghiền thành bột mịn _ Sau dùng thìa lấy định mức mẫu bột vừa nghiền ứng với mức 0,5 thành ống eppendorf Giải thích _ Khi cho vào nitơ lỏng trạng thái lạnh, mục đích nitơ lỏng ức chế enzyme gây phân hủy , phá vỡ màng tế bào thực vật Bước 2: Bổ sung 800 μl CTAB buffer 56 μl SDS _ Dùng pipet định mức 200 -1000 μl chỉnh tới định mức 800 μl , lấy đầu côn tương ứng hút 800 μl CTAB nhỏ ống eppendorf vừa đựng mẫu lúa bước 1( cho nhỏ CTAB đầu côn không chạm vào thành ống eppendorf _ Tiếp tục dùng pipet định mức 20 -200 μl để lấy 56 μl SDS _ Ghi tên mẫu tương ứng lên nắp thành ống eppendorf _ CTAB (Cetryl Ammonium Bromide): chất tẩy cation, hòa tan màng tế bào làm cho DNA dễ hòa tan hơn, biến tính protein hình thành phức hợp với polysaccharide, protein, polyphenol,… Bước : cho ống eppendorf đựng mẫu vào bể ủ nhiệt nhiệt độ 65 ◦c vòng 60 phút ( ý 15 phút đảo lần ) Sau bỏ để nguội nhiệt độ phòng _ Nhiệt độ cao đẩy nhanh hoạt tính SDS CTAB giúp DNA tan nhanh Bước : Li tâm _ Dùng pipet định mức 20 -1000 _ Chloroformlà chất hữu có tác dụng biếntínhprotein làm protein tan _ SDS (sodium dodecyl sulfate): chất tẩy, có nhiệm vụ loại bỏ phân tử lipid màng, làm đứt gãy màng tế bào màng nhân thành mảnh nhỏ cho phép DNA phóng thích bên μl chỉnh đến định mức 800 μl Sau lấy đầu tương ứng hút chlorofom nhỏ vào ống eppendorf đựng mẫu vừa để nguội, cho mẫu vào máy li tâm 11000 vòng/phút 15 phút pha hữu khơng hịa tan nucleic acid(DNA, RNA) nằm pha nước Ngồi chloroform cịn có tác dụng loại bỏ phần tử lipid cải thiện phân tách pha nước pha hữu Bước 5: Thu dịch _ ý hút hút dịch vàng bên _ Sau li tâm xong thấy mẫu tránh hút cặn ống eppendorf phân thành hai lớp _ Dùng pipet định mức 200 – 1000 μl chỉnh tới định mức 500 μl, sau dùng đầu tương ứng hút 500 μl dung dịch có màu vàng Bước : Tủa DNA Isopropanol _ Dùng pipet chỉnh hút lấy 800 μl Isopropanol nhỏ vào ống eppendorf đựng mẫu, đậy nắp ống lại lắc nhẹ sau để tủ lạnh sâu vịng _ Mục đích việc tủa DNA nhằm thu nhận DNA dạng cô đặc, mặt nhằm bảo vệ chúng khỏi phân hủy enzyme, mặc khác hịa tan chúng lại dung dịch theo nồng độ mong muốn Bước 7:Li tâm _ Sau để tủ lạnh sâu lấy mẫu cho vào li tâm 12000 vòng/phút vòng 15 phút _ Tác dụng li tâm làm cho DNA tách hoàn toàn khỏi dung dịch Bước 8: _ Lấy mẫu sau li tâm, sau đổ dịch lỏng ống giữ lại DNA đáy ống eppendorf , úp ngược miệng ống xuống giấy để làm khô DNA Bước 9: _ Sau DNA làm khô , pha loãng 100 lần ( 90 μl nước cất 10 μl DNA) búng nhẹ ống để DNA pha lỗng _ DNA hịa tan TE dung dịch chứa tris EDTA DNA hòa tan TE bảo quản lâu để nghiên cứu, thực ta tiến hành hòa tan DNA nước cất Bước 10 : Điện di gel xem kết IV, Điện di _ Phương pháp điện di DNA, gel agarose dựa vào đặc tính tích điện âm phân tử axit Nucleic pH trung tính nhờ nhóm photphat nằm cầu nối phosphodiester axit nucleic Khi dặt điện trường, phân tử axit nucleic chuyển dịch cực dương với tốc độ khác tùy theo kích thước chúng Các phân tử có kích thước lớn di chuyển chậm phân tử có kích thước bé Khả di động phân tử axit nucleic cịn phụ thuộc vào nồng độ gel Trong thí nghiệm sử dụng gel agarose nồng độ agarose 1% a)Dụng cụ thiết bị: _ Bể điện di, lò vi sóng, khay điện di, pipet, bình thủy tinh b) Cách tiến hành _ Chuẩn bị gel agarose: Cho 1g agarose vào dung dịch đệm TAE 1X, đun cho agarose tan hồn tồn lị vi sóng nhiệt độ 1000◦C vòng phút 30 giây Để nguội khoảng 50 0C, đổ dung dịch agarose vào khay điện di có cài sẵn lược Sau khoảng 30 phút, gỡ lược ra, đặt gel vào bể điện di Đổ đệm TAE 1X vào bể để dung dịch ngập cách mặt gel khoảng 2mm tiến hành tra mẫu _ Tra mẫu DNA: Lấy mẫu chứa khoảng 0,5-1 µg ADN pha µl đệm TE trộn với 2µl đệm màu 5X tra vào giếng nhỏ gel Một lượng ADN λ tương ứng cắt phối hợp Hind III EcoR I tra vào gel để làm thị phân tử _ Quá trình chạy điện di tiến hành hiệu điện 100V, với thời gian 25-30 phút _ Nhuộm DNA EtBr (Ethidium Bromide): Gel agarose sau chạy điện di nhuộm dung dịch EtBr (2 µg/ml) thời gian khoảng 10 phút máy lắc nhẹ Sau lấy gel tráng qua nước quan sát ánh sáng tia cực tím DNA nhuộm dung dịch EtBr hiển thị rõ tia cực tím Hình ảnh gel agarose _ Mục đích điện di xác định độ tinh mẫu kiểm tra độ đa dạng mẫu V Chạy PCR 1, Giới thiệu PCR _ PCR kỹ thuật nhằm nhân phân tử DNA đoạn DNA định, lặp lặp lại qua nhiều chu kỳ ống nghiệm thu khối lượng mong muốn _ PCR phương pháp dựa sở khả tái phân tử DNA thể sinh vật _ Các thành phần PCR gồm : ADN khuôn, dNTP, mồi ( primer), enzyme polymerase( Taq), MgCl2 đệm PCR; phản ứng thực máy chu kỳ nhiệt, hay gọi máy PCR _ PCR chuỗi phản ứng liên tục, gồm nhiều chu kỳ nhau, chu kỳ gồm giai đoạn: - Giai đoạn biến tính : Ở nhiệt độ cao 90-95oC ( cao nhiệt độ biến tính ADN khuôn), làm đứt liên kết hydro phân tử ADN, hai mạch phân tử ADN tách rời Đoạn khn ADN có đoạn dài gồm nhiều nucleotide giống nhau, tỉ lệ G-C cao, có nhiệt độ biến tính ( Tm) cao Do cần đặc điểm ADN khuôn để lựa nhiệt độ biến tính phù hợp - Giai đoạn gắn mồi: Ở nhiệt độ khoảng 55-65 oC để mồi bắt cặp với mạch đơn ADN khuôn đầu 3’ theo nguyên lý bổ sung - Giai đoạn tổng hợp : Nhiệt độ 70-72 oC thích hợp với điều kiện enzyme ADN polymerase Enzyme ADN polymerase xúc tác hoạt động tổng hợp gắn thêm nucleotid vào cuối đoạn mồi, mồi kéo dài sở bắt cặp với mạch khn theo ngun lí bổ sung, tạo nên mạch đơn ADN , giai đoạn cịn gọi giai đoạn polymer hóa Dụng cụ, thiết bị _ Máy chạy PCR, bể điện di, lò vi sóng _ Ống eppendorf, pipet Các bước tiến hành quy trình chạy PCR _ Mẫu DNA pha loãng sau tách chiết a)Bước 1: _ Lấy ống eppendorf chứa 90μl nước cất , sau dùng pipet định mức 20 μl chỉnh đến mức 10 μl, gắn đầu tương ứng hút lấy 10 μl mẫu DNA ống eppendorf tách chiết nhỏ vào ống eppendorf chứa 90μl nước cất búng ống eppendorf cho dung dịch bên _ Dùng pipet 10 μl chỉnh đến định mức 2μl, gắn đầu côn tương ứng hút lấy 2μl dung dịch ống eppendorf vừa hòa cho vào ống eppendorf để chuẩn bị chạy PCR b)Bước 2: Các thành phần cần bổ sung để chạy PCR DNA khuôn _ Buffer : 1,5 x 23 = 34,5 _ dNTPs : 0,3 x 23 = 6,9 _ Primer : 1,5 x 23 = 34,5 _ Taq : 1,5 x 23 = 34,5 _ Nước : 5,7 x 23 = 131,1 Chú thích: _ ADN khn ADN khn ( ADN template) hay gọi ADN mục tiêu sử dụng làm khuôn để mồi PCR gắn vào vị trí bổ sung với nó, sau với tham gia thành phần cần thiết , phản ứng tổng hợp diễn tạo nên đoạn ADN giống hệt đoạn ADN nằm hai vị trí gắn mồi _ Mồi PCR Mồi đoạn oligonucleotit ngắn, có chiều dài khoảng từ đến 70 nucleotit, mồi ngẫu nhiên ( mồi RAPD) có chiều dài khoảng 10 nucleotit đa số mồi PCR có chiều dài khoảng 20 đến 30 nucleotit _ dNTPs – deoxyribonucleotides: dNTP ( A,T,G,C) “viên gạch” để xây dựng lên sợi ADN phản ứng chuỗi Nồng độ dNTP thường sử dụng cho phản ứng 200µM Nếu nồng độ dNTP q cao liên kết với Mg2+, ion cần cho hoạt động enzyme tổng hợp, mà ảnh hưởng tới phản ứng tổng hợp dNTP nhạy cảm với thay đồi nhiệt độ, sau 35 chu kỳ PCR dNTP bị suy giảm; mơi trường axit chuyển hóa thành dNDP dNMP Do mà dNTP chất không bền, đặc biệt sử dụng cho PCR _ Enzyme tổng hợp ADN: Là thành phần quan trọng phản ứng PCR Trong điều kiện thích hợp với thành phần cần thiết khác, enzym hoạt động tổng hợp nên ADN Nồng độ sử dụng enzym phụ thuộc vào loại enzym thuộc tính Nếu q nhiều enzym làm tăng nồng độ glycerol dung dịch phản ứng, dẫn tới q trình tổng hợp khơng đồng vị trí tạo hình ảnh điện di khơng rõ nét Ngược lại, q thiếu enzym kết nhận sản phẩm tổng hợp không đầy đủ _ Dung dịch đệm PCR Dung dịch đệm chung PCR bao gồm thành phần KCl, MgCl2 Tris Muối KCl góp phần làm tăng hiệu phản ứng, thông thường mồi cho sản phẩm PCR với kích thước lớn hoạt động tốt mơi trường có nồng độ muối thấp ngược lại cặp mồi cho sản phẩm PCR ngắn hoạt động tốt mơi trường có nồng độ muối cao MgCl2 nhân tố cần thiết để enzym Taq hoạt động, nồng độ MgCl thấp, ức chế hoạt động enzym Taq, nhiên nồng độ cao cho kết PCR không đặc hiệu Tris có vai trị giữ cho pH dung dịch ổn định, thay đổi nồng độ Tris không ảnh hưởng nhiều đến kết phản ứng PCR _ Cho chạy PCR thời gian 15 phút c)Bước : Sau Chạy PCR xong tiến hành điện di _ Chuẩn bị gel agarose : cho 0,8 g agarose vào dung dịch đệm TAE 1X , lắc đều, sau nhỏ giọt dung dịch nhuộm DNA ethidium bromide vào bình đựng agarose vừa pha , sau cho vào lị vi sóng 1000◦c vịng phút 30 giây Sau phút 30 giây lấy bình đựng gel thấy gel bình khơng có vẩn đục đạt yêu cầu Để gel nguội khoảng 50◦c , đổ dung dịch agarose vào khay điện di có cài sẵn lược Sau khoảng 30 phút, gỡ lược ra, đặt gel vào bể điện di Đổ đệm TAE 1X vào bể để dung dịch ngập cách mặt gel khoảng 2mm tiến hành tra mẫu _ Tra mẫu DNA: Lấy mẫu chứa khoảng 0,5-1 µg ADN pha µl đệm TE trộn với 2µl đệm màu 5X tra vào giếng nhỏ gel _ Quá trình chạy điện di tiến hành hiệu điện 100V, với thời gian 25-30 phút _ Sau điện di xong xem kết máy tính Hình ảnh sản phẩm chạy PCR *) Nhận xét: _ Phản ứng PCR thực tốt khơng có tượng nhiễm chéo _ Xuất băng rõ nét đường chạy ( giếng số giếng số 5) mẫu số mẫu số thành công KẾT LUẬN Trên báo cáo em vấn đề em học thực tập trung tâm nấm Văn Giang, trường đại học Hải Phòng Viện di truyền Nông Nghiệp Qua đợt thực tập em hiểu rõ vấn đề mà em cịn thắc mắc, biết rõ quy trình bước thực quy trình chạy PCR, tách chiết DNA Bản báo cáo em nhiều thiếu sót , em mong nhận xét bảo cá thầy cô Em xin chân thành cảm ơn PHỤ LỤC CỦA THÁNG STT Thời gian Ngày 1/6/2015 _ Sáng _ Chiều Ngày 2/6/2015 _ Sáng _ Chiều Ngày 3/6/2015 _ Sáng + chiều Ngày 4/6/2015 _ Sáng _ Chiều Công việc _ Nhận bàn giao công việc trung tâm nấm _ Ủ đống rơm làm nấm rơm _ Đóng bịch, làm cổ nút bịch nấm Linh Chi _ Giũ rơm ủ vào giàn nấm Mỡ _ Giũ rơm lên men vào giàn nấm Mỡ _ Giũ rơm ủ vào giàn nấm Mỡ _ Đảo chỉnh ấm đống rơm ủ ngày 1/6/2015 10 Ngày 5/6/2015 _ Sáng + chiều Ngày 6/6/2015 Ngày 7/6/2015 Ngày 8/6/2015 _Sáng _ Chiều Ngày 9/6/2015 _ Sáng _ Chiều Ngày 10/6/2015 _ Sáng _ Chiều Ngày 11/6/2015 _ Sáng _ Ủ phế thải làm nấm rơm _ Nghỉ _ Vào khuôn cấy giống nấm rơm _ Đảo đống ủ ngày 5/6/2015 phay bơng _ Thu hái đóng gói nấm sị _ Làm cổ nút bịch nấm Linh Chi _ Đập đất phủ giàn nấm Mỡ _Thu hái đóng gói nấm Sò _ Đập đất phủ giàn nấm Mỡ _ Thu hái đóng gói nấm Sị _ Đập đất phủ giàn nấm Mỡ _ Nghỉ 12 13 _ Chiều Ngày 12/6/2015 _ Sáng _ Chiều Ngày 13, 14 /6/2015 Ngày 15/6/2015 14 Ngày 16/6/2015 _ Pha môi trường nhân nhanh Lan Gấm, Địa Lan _ Hấp môi trường 15 Ngày 17/6/2015 _ Cấy chuyển Lan Trần 16 17 Ngày 18-21/6/2015 Ngày 22/6/2015 18 Ngày 23/6/2015 _ Nghỉ làm báo cáo _ Giới thiệu trang thiết bị _ Nhận tài liệu _ Tiến hành tách chiết DNA 19 Ngày 24/6/2015 _ Chạy PCR 20 Ngày 25/6/2015 _ Nộp báo cáo _ Nhận kết 11 _ Vận chuyển rơm vào lán cấy giống _Vào mô cấy giống nấm rơm _ Nghỉ làm báo cáo _ Pha môi trường nhân nhanh Lan Trần