nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh lý bệnh cầu trùng gà tại hợp tác xã chăn nuôi thanh vân huyện tam dương tỉnh vĩnh phúc

Bên cạnh đó, bệnh còn làm giảm sức đề kháng của đàn gà, mở đường cho mầm bệnh truyền nhiễm nguy hiểm khác xâm nhập như: Gumborro, Newcastle, E.coli,… Để tìm hiểu về bệnh cầu trùng trên

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

-

PHAN THỊ THANH VÂN

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH LÝ BỆNH CẦU TRÙNG GÀ TẠI HỢP TÁC XÃ CHĂN NUÔI THANH VÂN HUYỆN TAM DƯƠNG TỈNH VĨNH PHÚC

LUẬN VĂN THẠC SĨ

NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2015

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

PHAN THỊ THANH VÂN

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH LÝ BỆNH CẦU TRÙNG GÀ TẠI HỢP TÁC XÃ THANH VÂN

HUYỆN TAM DƯƠNG TỈNH VĨNH PHÚC

Chuyên ngành: THÚ Y

Mã số: 60.64.01.01

Người hướng dẫn khoa học:

PGS.TS NGUYỄN VĂN THỌ

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất cứ công trình nào khác

Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày tháng năm 2015

Tác giả luận văn

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình học tập và thực hiện đề tài tốt nghiệp, ngoài sự nỗ lực của bản thân, tôi còn nhận được rất nhiều sự giúp đỡ của các tập thể và cá nhân trong và ngoài trường

Nhân dịp hoàn thành luận văn này, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với PGS.TS Nguyễn Văn Thọ, Thầy giáo đã trực tiếp hướng dẫn và chỉ bảo tôi hết sức tận tình trong suốt thời gian học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này

Tôi xin chân thành cảm ơn các Thầy Cô giáo trong Bộ môn Ký Sinh Trùng, Khoa Thú y và Ban quản lý đào tạo Học viện nông nghiệp Việt Nam đã góp ý, chỉ bảo để luận văn của tôi được hoàn thành

Để hoàn thành luận văn này tôi còn nhận được sự động viên khích lệ của người thân, bạn bè, đồng nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn những tình cảm cao quý đó!

Hà Nội, ngày tháng năm 2015

Học viên

Phan Thị Thanh Vân

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN ii

LỜI CẢM ƠN iii

MỤC LỤC iv

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi

DANH MỤC BẢNG vii

DANH MỤC BIỂU ĐỒ viii

MỞ ĐẦU 1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục đích 2

3 Ý nghĩa của đề tài 2

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Một số đặc điểm của cầu trùng 3

1.2 Lịch sử nghiên cứu về bệnh cầu trùng 8

1.3 Những hiểu biết về bệnh cầu trùng gà 12

1.4 Miễn dịch học trong bệnh cầu trùng 20

1.5 Phòng bệnh cầu trùng bằng vaccine 22

1.6 Phòng và trị bệnh cầu trùng bằng thuốc 23

CHƯƠNG II ĐỊA ĐIỂM, ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25

2.1 Địa điểm nghiên cứu 25

2.2 Đối tượng nghiên cứu 25

2.3 Nội dung nghiên cứu 25

2.4 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 26

CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36

3.1 Khảo sát tỷ lệ nhiễm cầu trùng ở một số đàn gà Ai cập, gà lương phượng nuôi tại hợp tác xã chăn nuôi Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh Phúc 36

3.2 Một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu của bệnh cầu trùng gà 51

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 70

1 Kết luận 70

2 Đề nghị 71

TÀI LIỆU THAM KHẢO 72

DANH MỤC BẢNG

Số bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng trên một số đàn gà tại hợp tác xã

chăn nuôi Thanh Vân 36

Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm cầu trùng theo lứa tuổi của gà tại hợp tác xã chăn nuôi Thanh Vân 38

Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm cầu trùng gà theo các phương thức chăn nuôi 41

Bảng 3.4 Cường độ nhiễm cầu trùng ở gà Ai cập và gà Lương Phượng theo các phương thức chăn nuôi 43

Bảng 3.5 Tỷ lệ nhiễm 5 loài cầu trùng ở gà Ai Cập và gà Lương Phượng 45

Bảng 3.6 Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng gà theo mùa vụ 48

Bảng 3.7 Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng gà theo trạng thái phân 50

Bảng 3.8 Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng ở gà mắc bệnh cầu trùng 53

Bảng 3.9 Bệnh tích đại thể trên gà Ai Cập và gà Lương Phượng bị mắc bệnh cầu trùng ở các tuần tuổi khác nhau 55

Bảng 3.10 Bệnh tích vi thể ở một số cơ quan của gà bị bệnh cầu trùng 57

Bảng 3.11 Tần suất xuất hiện các giai đoạn phát triển của cầu trùng gà trên tiêu bản vi thể các cơ quan gà bệnh 60

Bảng 3.12 Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu hệ hồng cầu của gà Lương phượng (4 tuần tuổi) 61

Bảng 3.13 Kết quả nghiên cứu chỉ tiêu hệ bạch cầu của gà Lương Phượng (4 tuần tuổi) 62

Bảng 3.14 Kết quả nghiên cứu hàm lượng protein huyết thanh của gà Lương Phượng (4 tuần tuổi) 65

Bảng 3.15 So sánh tỷ lệ nhiễm cầu trùng giữa lô Đối chứng và các lô có sử dụng kháng sinh phòng cầu trùng 68

DANH MỤC BIỂU ĐỒ

Số biểu đồ Tên biểu Trang Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng trên một số đàn gà tại hợp tác

xã chăn nuôi Thanh Vân 37

Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ nhiễm cầu trùng theo lứa tuổi của gà tại hợp tác xã chăn nuôi thanh vân 40

Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ nhiễm cầu trùng gà theo các phương thức chăn nuôi 42

Biểu đồ 3.4 Cường độ nhiễm cầu trùng gà theo các phương thức chăn nuôi 44

Biểu đồ 3.5 Tỷ lệ nhiễm 5 loài cầu trùng ở gà Ai Cập nuôi công nghiệp và gà Lương Phượng nuôi thả vườn từ 1 đến 6 tuần tuổi 47

Biểu đồ 3.6 Tỷ lệ nhiễm cầu trùng gà theo mùa Xuân và mùa Hè 49

Biểu đồ 3.7 Tỷ lệ nhiễm cầu trùng gà theo trạng thái phân 51

Biểu đồ 3.8 Tỷ lệ các triệu chứng lâm sàng trên gà mắc bệnh cầu trùng 54

Biểu đồ 3.9 Bệnh tích đại thể chủ yếu của gà Ai Cập và gà Lương Phượng mắc bệnh cầu trùng 55

Biểu đồ 3.10a Công thức bạch cầu của gà Lương phượng khỏe mạnh 62

Biểu đồ 3.10b Công thức bạch cầu của gà Lương phượng (4 tuần tuổi) mắc bệnh cầu trùng 64

Biểu đồ 3.11a Các tiểu phần Protein của gà Lương phượng bình thường 66

Biểu đồ 3.11b Các tiểu phần Protein của gà Lương phượng (4 tuần tuổi) mắc bệnh cầu trùng 66

Biểu đồ 3.12 So sánh tỷ lệ nhiễm cầu trùng giữa lô Đối chứng và các lô có sử dụng kháng sinh phòng cầu trùng 68

MỞ ĐẦU

1.Tính cấp thiết của đề tài

Chăn nuôi gia súc, gia cầm từ lâu đã trở thành một vị trí quan trọng trong ngành chăn nuôi của nước ta Trong những năm gần đây ngành chăn nuôi đã có những thay đổi đáng kể và góp phần không nhỏ trong quá trình phát triển của ngành nông nghiệp Việt Nam, góp phần không nhỏ vào việc nâng cao mức sống cho người nông dân ở nông thôn cũng như thành thị

Chăn nuôi gà theo phương thức công nghiệp ở nước ta ngày càng phát triển

Nó không chỉ cung cấp về thực phẩm cho bữa ăn hàng ngày của mỗi gia đình mà còn mang tính chất hàng hóa phục vụ kinh doanh đem lại nguồn thu nhập đáng kể cho người chăn nuôi Để chăn nuôi được thành công thì người chăn nuôi cần phải hiểu rõ về quy trình chăm sóc và phòng chống bệnh xảy ra trên đàn gà Trong các bệnh thường xuyên xảy ra thì bệnh cầu trùng gà (Coccidiosis Avium) là bệnh phổ biến trên đàn gà nuôi công nghiệp có mức độ thâm canh cao (Calnek B.W, 1997) Trong các bệnh ký sinh trùng ký sinh trên gà thì bệnh cầu trùng gà khẳng định được tính chất nguy hiểm hơn về quy mô và mức độ gây thiệt hại cho ký chủ Loại ký sinh trùng này đã phát triển trong đường ruột và gây ra tổn thương mô, ảnh hưởng đến việc ăn, tiêu hóa hoặc hấp thu dưỡng chất, sự khử nước, mất máu và tăng tính mẫn cảm với những tác nhân gây bệnh khác (Calnek B.W, 1997)

Bên cạnh đó, bệnh còn làm giảm sức đề kháng của đàn gà, mở đường cho

mầm bệnh truyền nhiễm nguy hiểm khác xâm nhập như: Gumborro, Newcastle,

E.coli,… Để tìm hiểu về bệnh cầu trùng trên đàn gà nuôi công nghiệp và với những đàn gà được chăn nuôi theo phương thức thả vườn chúng tôi tiến hành nghiên cứu

đề tài: “Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh lý bệnh cầu trùng gà tại

hợp tác xã chăn nuôi Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh Phúc” làm cơ sở

khoa học cho việc chẩn đoán, phòng trị bệnh cầu trùng gây ra cho gà tại các trang trại của hợp tác xã Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh Phúc

2 Mục đích

- Hiểu rõ được thực trạng, diễn biến của bệnh cầu trùng trên một số đàn gà

Ai cập và ,đàn gà Lương Phượng theo dõi tại hợp tác xã chăn nuôi Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh Phúc qua xét nghiệm phân

- Làm rõ các đặc điểm biến đổi bệnh lý chủ yếu của bệnh cầu trùng gà qua quan sát triệu chứng lâm sàng, mổ khám quan sát bệnh tích đại thể và quan sát bệnh tích vi thể trên tiêu bản

3.Ý nghĩa của đề tài

- Kết quả của đề tài giúp người chăn nuôi phát hiện sớm, chẩn đoán nhanh và chính xác về bệnh cầu trùng gà để có biện pháp điều trị kịp thời

- Cung cấp những thông tin cơ sở cho việc phòng bệnh cầu trùng ở gà và so sánh hiệu lực phòng bệnh của một số loại thuốc phòng trị cầu trùng

-Kết quả của đề tài là tiền đề cho những nghiên cứu sâu hơn trong nghiên cứu bệnh cầu trùng gà ở hợp tác xã chăn nuôi Thanh vân nói riêng và trong chăn nuôi nói chung

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Một số đặc điểm của cầu trùng

1.1.1 Cấu trúc của Oocyst cầu trùng

Oocyst (noãn nang) cầu trùng có nhiều hình dạng khác nhau: hình cầu, gần tròn, hình trứng hay hình oval có khi có hình quả lê,… kích thước cũng khác nhau thay đổi

theo từng loài Tuy nhiên phần lớn Oocyst cầu trùng có đặc điểm cấu tạo như sau:

Cấu tạo Oocyst giống Eimeria gây bệnh

1 Nắp Oocyst (Micropyle cap) 2 Hạt cực (Pular granule)

3 Lỗ noãn nang (Micropyle) 4 Thể Stieda (Stieda body)

5.Hạt triết quang nhỏ trong

Sporozoite

(Small Refractile Globule in

Sporozoite)

6.Hạt triết quang lớn trong Sporozoite

(Large Refractile Globule in Sporozoite)

7 Bào tử trùng (Sporocyst) 8.Thể cặn Sporocyst (Sporocyst residuum)

9 Thể cặn Oocyst (Oocyst

residuum)

10.Lớp vỏ trong (Inter layer of Oocyst wall)

11 Lớp vỏ ngoài (Outer layer of

Oocyst wall)

Oocyst màu sáng hoặc không màu, màu vàng nhạt hoặc nâu nhạt Lớp vỏ

ngoài thường nhẵn, cũng có loài xù xì (E spinosa) Vỏ được chia thành 2 lớp: Vỏ

ngoài dày, vỏ trong mỏng Vỏ ngoài và vỏ trong có thể tách rời nhau bằng cách làm

nóng Oocyst ở trong nước hoặc xử lý bằng acid H2SO4

Vỏ ngoài là lớp quinonon protein, vỏ trong là lớp Lipid kết hợp với protein

để tạo nên khúc xạ kép (Lipoprotein) Lớp trong của vỏ Oocyst chiếm 80% gồm:

một lớp Glycoprotein (dày 90 µm), được bao bọc bởi một lớp Lipid dày 10 µm Lớp

Lipid chủ yếu là Phospho lipid, chính lớp này bảo vệ Oocyst cầu trùng chống lại sự

tấn công về mặt hóa học

Một số loài cầu trùng ở phía đầu nhọn có một cái nắp khúc xạ (Micropyle

cap) Nắp này là vị trí có khe hở của màng bao quanh Macrogamete khi thụ tinh

Sau khi thụ tinh thì khe hở đóng lại và vì vậy nhiều loài cầu trùng không thấy

Micropyle nữa

1.1.2 Vòng đời phát triển của cầu trùng

Chu kỳ sinh học của cầu trùng rất phức tạp Tuy nhiên, vòng đời phát triển

của cầu trùng giống Eimeria đã được nhiều tác giả nghiên cứu Chu kỳ sinh học của cầu trùng giống Eimeria gồm 3 giai đoạn: giai đoạn sinh sản vô tính (Schizogonie), giai đoạn sinh sản hữu tính (Gametogonie) và giai đoạn sinh sản bào tử (Sporogonie) Hai giai đoạn đầu thực hiện trong tế bào biểu mô ruột (Endogenic) còn giai đoạn thứ ba diễn ra ở ngoài cơ thể vật chủ (Enxogenic)

Các Oocyst có sức gây bệnh được gà nuốt vào cùng với thức ăn, nước uống

Dưới tác dụng của men tiêu hóa trong dạ dày và ruột non (đặc biệt là men Tripsin),

vỏ của Oocyst bị vỡ, giải phóng ra các bào tử con (Sporocyst) (Goodrich, 1944 và Pugatch,1968) Long P.L (1979) đã mô tả Sporozoit thoát ra lỗ noãn (Micropyle)

dưới tác động của men Trypsin

Sporozoit được giải phóng ra có hình thoi, dài 10 - 15µm có một hạt nhân

Braunius (1982) cho rằng, Sporozoit của loài E necatrix chui vào đỉnh các nhung

mao ruột non, qua biểu mô, vào tuyến ruột Nhiều tác giả đã chứng minh rằng

Sporozoit của các loài cầu trùng khác nhau cũng xâm nhập vào tế bào biểu mô của

các đoạn ruột khác nhau

Vòng đời phát triển của cầu trùng giống Eimeria spp + Giai đoạn sinh sản vô tính (Schyzogonie)

Khi các bào tử nang cầu trùng xâm nhập vào cơ thể qua đường tiêu hóa, dưới tác dụng của các enzyme trong dịch tiêu hóa làm cho vỏ noãn nang bị phá hủy, giải phóng các bào tử thể Các bào tử thể nhanh chóng xâm nhập vào tế bào tế bào biểu bì ruột, thận, mật,…đôi khi vào mô bào dưới niêm mạc Tại đây cùng với sự phân chia của hạt nhân các noãn nang lớn lên nhanh chóng có hình tròn, hình oval

hoặc hình elip với nhiều nhân gọi là thể phân lập thuộc thế hệ 1 (Schizont 1)

Ở Schizont 1, xung quanh mỗi nhân nguyên sinh chất xuất hiện và bao quanh

để hình thành dạng ký sinh nhỏ, hình bầu dục Lúc này chúng được gọi thể phân lập

trung gian (Merozoite) Các Merozoite thế hệ 1 (kích thước 5 x 15µm) sinh trưởng rất nhanh làm tan vỡ tế bào biểu bì của vật chủ (số lượng Merozoite trong một

Schizont thay đổi rất lớn tùy loài dao động từ 8 đến 16, có khi tới 120.000

Merozoite ) Khi các tế bào biểu bì nơi cư trú bị phá hủy thì các Merozoite lập tức

tấn công sang các tế bào biểu bì mới và quá trình phát triển này được lặp lại như cũ

Đến đây các ký sinh này thuộc thế hệ thứ hai và được gọi là Schizont 2

Tùy theo các loài cầu trùng và vật chủ có thể hình thành tiếp các thế hệ

Schizont 3, Schizont 4,…một cách ồ ạt theo cấp số nhân kiểu phản ứng dây chuyền nguyên tử làm cho hàng loạt tế bào biểu bì của vật chủ bị phá vỡ gây tổn thương nặng nề cho niêm mạc nơi bị nhiễm

Mỗi chủng cầu trùng khác nhau có giai đoạn sinh sản vô tính khác nhau, để hình thành nên các thể phân lập và số thế hệ thể phân lập tùy theo loài Sau khi kết thúc giai đoạn sinh sản vô tính chúng chuyển sang giai đoạn sinh sản hữu tính

+ Sinh sản hữu tính (Gametogonie)

Giai đoạn sinh sản hữu tính bắt đầu phát triển từ thể phân lập thế hệ cuối cùng của cầu trùng Sau một số đợt sinh sản vô tính (tùy loài cầu trùng), các

Schizont thế hệ 1, 2, 3, chuyển sang sinh sản hữu tính và bắt đầu tạo ra các thể

lập thế hệ cuối cùng chúng phân chia thành các thể phân đoạn và xâm nhập vào các

tế bào biểu bì ký chủ, biến thành các thể sinh dưỡng Các thể sinh dưỡng này lại

tiếp tục phát triển tạo nên các giao tử đực (Microgametocyte) và giao tử cái (Macrogametocyte) Sau đó các tế bào giao tử cái biến thành những tế bào sinh dục

cái lớn, ít hoạt động và có lỗ noãn

Nhờ 2 lông roi, giao tử đực di chuyển đến gặp giao tử cái, chui vào giao tử

cái qua lỗ noãn (Micropyle) Trong giao tử cái diễn ra quá trình đồng hoá nhân và

nguyên sinh chất để tạo thành hợp tử Hợp tử phân tiết một màng bao bọc bên

ngoài, lúc này nó được gọi là noãn nang (Oocyst) có hình bầu dục, hình tròn hoặc hình trứng hay hình quả lê Đến đây các Oocyst rơi vào trong lòng ruột và kết thúc quá trình sinh sản hữu tính

Thời gian nội sinh kết thúc, Oocyst theo phân gà ra bên ngoài môi trường

Thời gian sinh sản hữu tính kéo dài từ 3 – 22 ngày tùy vào từng loài cầu trùng

Bessay (1995) đã nghiên cứu và thấy rằng thời gian từ khi gà chứa Oocyst có sức gây bệnh đến khi gà thải Oocyst trong phân là 4,5 – 5 ngày (đối với loài E

), 6,5 ngày với loài

+ Sinh sản bào tử (Sporogonie)

Khi Oocyst theo phân ra ngoài, trong lớp vỏ bọc bên ngoài đã chứa đầy

nguyên sinh chất Ở ngoại cảnh, gặp điều kiện thuận lợi như nhiệt độ, độ ẩm thì chỉ sau vài giờ trong nguyên sinh chất đã xuất hiện khoảng sáng và nguyên sinh chất bắt đầu phân chia Sau 13 – 48 giờ tùy vào từng loài cầu trùng nguyên sinh chất sẽ

hình thành 4 túi bào tử (Sporocyst) Trong mỗi túi bào tử, nguyên sinh chất lại phân chia, kéo dài ra tạo thành 2 bào tử con (Sporozoite) Lúc này, trong Oocyst đã hình thành 8 bào tử con và trở thành Oocyst có sức gây bệnh Giai đoạn sinh sản bào tử kết thúc Những Oocyst có sức gây bệnh lẫn vào thức ăn, nước uống và được gà

nuốt vào trong đường tiêu hóa

Trong quá trình sinh sản bào tử, đối với cầu trùng thuộc giống Eimeria, từ mỗi nang trứng (Oocyst) hình thành 4 tiền bào tử (Sporozoite), trong mỗi túi bào tử lại chứa 2 thể bào tử (Sporoblast) Tất cả 8 thể bào tử được bao bọc xung quanh bởi một vỏ cứng dày gồm hai lớp gọi là bào tử nang (Sporocyst), kết thúc giai đoạn 3 của quá trình phát triển cầu trùng Chỉ có các Oocyst sau khi trở thành Oocyst gây

bệnh mới có khả năng gây bệnh và truyền bệnh từ gà này sang gà khác, (N.A.Kolapxki, P.I Paskin, 1980)

Chu trình phát triển của giống cầu trùng Isospora hoàn toàn giống như ở

giống Eimeria Chỉ khác là trong giai đoạn sinh sản bào tử ở ngoài cơ thể, trong mỗi

Oocyst chỉ hình thành 2 túi bào tử (Sporozoite) chứ không phải là 4 bào tử như

Eimeria Nhưng trong mỗi túi bào tử lại hình thành ra 4 thể bào tử, tất cả được bao bọc chung bởi một lớp vỏ cứng dày 2 lớp Bào tử nang được hình thành cũng chứa

8 thể bào tử, kết thúc giai đoạn phát triển sinh sản bào tử cũng giống như Eimeria

1.1.3 Tính chuyên biệt của cầu trùng

Bệnh cầu trùng khác với các bệnh do vi khuẩn và virus về bản chất tự giới hạn trong quá trình sinh trưởng và phát triển của nó Điều đó có được là do tính chuyên biệt của cầu trùng

Tính chuyên biệt của cầu trùng là sự thích nghi phức tạp và lâu dài của cầu trùng với cơ thể ký chủ hoặc cụ thể hơn đối với các cơ quan, các mô bào hay tế bào

nhất định phù hợp cho sự tồn tại và phát triển của chúng (Lê Văn Năm, 2003)

Thời gian gần đây đã có nhiều dẫn liệu chứng tỏ rằng giống cầu trùng

Eimeria có tính chuyên biệt nghiêm ngặt và chỉ có thể nhiễm vào loại kýchủ mà chúng đã thích nghi trong quá trình tiến hóa Ví dụ như các loài cầu trùng cừu không thể nhiễm sang trâu, bò và các loài gia súc khác được Các cầu trùng thỏ chỉ nhiễm vào kí chủ của nó mà không thể nhiễm vào bất kỳ loài nào khác Cầu trùng

gà không gây bệnh cho gà tây và ngược lại

Theo N.A.Kolapxki và cs (1980), tính chuyên biệt nghiêm ngặt của cầu trùng giống Eimeria biểu hiện không chỉ đối với ký chủ của chúng mà còn đối với nơi

chúng ký sinh trong cơ thể gia súc Ví dụ: E tenella chỉ sống trong màng niêm mạc manh tràng gà còn E acervulina trong tá tràng của gà, E bukidnonensis ký sinh ở niêm mạc ruột non bò trong khi đó E cylindrica cũng ở ký sinh trong đường tiêu

hóa của bò nhưng lại ký sinh ở niêm mạc ruột già

Nếu xem xét tính chuyên biệt của cầu trùng thì giống Eimeria biểu hiện rất

rõ rệt, tính chuyên biệt đó đã hình thành trong quá trình thích ứng lâu dài của ký sinh trùng đối với một ký chủ nhất định cũng như đối với từng cơ quan, mô bào riêng biệt

Như vậy có thể nói rằng tùy theo loài cầu trùng mà chúng có thể sống ở trên vật chủ này hay vật chủ khác, hoặc các vị trí ký sinh khác nhau trên cùng một cơ thể gia súc gia cầm Điều này có ý nghĩa quan trọng giúp một phần trong việc phân loại cầu trùng được chính xác

1.2 Lịch sử nghiên cứu về bệnh cầu trùng

1.2 1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước

Cầu trùng là động vật đơn bào có hình thái đa dạng phụ thuộc vào từng loài cầu trùng như hình hơi tròn, hình trứng, hình bầu dục…, chúng ký sinh chủ yếu ở tế bào biểu bì ruột của nhiều loài gia súc, gia cầm và cả con người

Cầu trùng và bệnh cầu trùng đã được phát hiện từ năm 1863 – Rivolta là người phát hiện ra một loại ký sinh trùng có trong phân gà Năm 1864 Eimeria đã

xác định đó là nguyên sinh động vật sinh sản theo bào tử thuộc lớp Sporozoa, bộ

Cocoidie , họ Eimeriaidae …

Levine D.L (1925) đã phân loại cầu trùng như sau:

Ngành nguyên sinh động vật Protozoa

Giống Eimeria và Isospora

Năm 1875 người ta đã xác nhận kết quả nghiên cứu của Eimeria và đề nghị đặt

tên cho loại ký sinh trùng này là Eimeria Từ đó cho đến nay nhiều loài cầu trùng khác

đã được phát hiện trên các loài gia súc, gia cầm khác nhau: Thỏ, ngan, ngỗng, lợn, chó, mèo,… Sự ký sinh của cầu trùng có tính chất chuyên biệt trên mỗi ký chủ, thậm chí trên các cơ quan, mô bào, tế bào nhất định Vì thế các nhà khoa học đã thống nhất lấy tên chung cầu trùng và thêm vào tên của loại gia súc, gia cầm để gọi tên bệnh như: cầu trùng gà, cầu trùng bê nghé, cầu trùng thỏ, cầu trùng lợn,…

Riêng về gà, đến nay trên Thế giới đã xác định có khoảng 12 loài Eimeria Trong đó có 9 loài đã được xác định rõ tên, kích thước, màu sắc: Eimeria tenella,

Eimeria acervulina , Eimeria mitis, Eimeria brunetti, Eimeria necatrix, Eimeria

maxima , Eimeria praecox, Eimeria hagani, Eimeria mivatti

Sau này, một số tác giả khác ở Trung Âu và Liên Xô (cũ) như Yakimoff, Kotlan

đã đưa ra một số công bố về 3 loài: Eimeria beachi, Eimeria tyzzeri, Eimeria johnsoni

Tại Ấn Độ, năm 1945 Ray đã tìm thấy một loài cầu trùng ở một ổ dịch tự nhiên trên gà từ 4 – 6 tuần tuổi tại bang Mukteswar Loài cầu trùng này chưa được

công bố trước đó Ông cho rằng đây là loài không thuộc giống Eimeria và đặt tên cho nó là Nenyolella gallinae, tuy nhiên kết quả này của ông chưa được giới khoa

học công nhận

Sau những năm 1990, các nhà khoa học như J.Eckert, R.Brawn, M.W.Shirley

và P.Coudert đã viết những hướng dẫn nghiên cứu về cầu trùng và bệnh cầu trùng gà

Singh.U.M (1996, 1997) đã nghiên cứu chế tạo vaccine cầu trùng mới bao

gồm E maxima, E.acervulina, E necatrix, E tenella đã được sử dụng thử nghiệm

tại Trung Quốc

* Nghiên cứu về khả năng đề kháng của cầu trùng đối với hóa chất

Nyberg và Knapp (1976) qua kính hiển vi điện tử cho thấy, lớp ngoài cùng

có thể khử bằng dung dịch Sodium hypochlorid 2-3% trong 15 phút, (Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008)

Pernard (1925) đã chứng minh noãn nang tiếp tục sinh bào tử sau nhiều ngày tiếp xúc với nhiều loại hóa chất, chất sát trùng nhưng lại không có khả năng phát triển trong điều kiện khô và nhiệt độ cao

Stotish R.L, Wang C.C (1978), cùng nghiên cứu về bản chất hóa học của thành Oocyst qua xử lí bằng Sodium hypochlorid 5% lại cho rằng chất này không

tác động được đến màng Oocyst mà chủ yếu tác động đến Mycropyle (trường hợp E

maxima ) bởi vì hypochlorid làm suy thoái màng Oocyst và làm tiêu tan Micropyle

* Nghiên cứu về khả năng đề kháng của cầu trùng với nhiệt độ và ẩm độ

Theo Long P.L, (1979) thì Oocyst có thể tồn tại qua mùa đông giá lạnh

nhưng không chịu được nhiệt độ cao và ánh nắng chiếu trực tiếp

Cầu trùng sống được ở sân chơi ngoài trời 14 tuần và tồn tại lâu trong đất ở

độ sâu 5 – 7 cm Ở trong đất, Oocyst duy trì sức sống từ 4 – 9 tháng, ở sân chơi râm

mát từ 15 – 18 tháng (Horton Smith, 1963)

Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008), khi so sánh khả năng đề kháng

với nhiệt độ cao của Oocyst trước và sau khi hình thành bào tử N.Glullough (1952)

thấy rằng: Ở nhiệt độ cao chúng có khả năng đề kháng như nhau Cụ thể là: Chúng đều bị chết ở 400C sau 96 giờ, ở 450C sau 3 giờ và ở 500C sau 30 phút

Khi Oocyst theo phân ra ngoài môi trường, ẩm độ có vai trò quan trọng ảnh hưởng đến thời gian hình thành bào tử và khả năng tồn tại của Oocyst cầu trùng

Goodrich H.P (1994) đã kết luận: Lớp vỏ ngoài cùng đã giữ cho Oocyst

không bị thấm chất lỏng nhưng nó lại dễ nứt do điều kiện khô hạn

Ellis C.C (1986) cho biết: Khi nhiệt độ không thay đổi Oocyst sẽ bị chết khi ẩm

độ giảm Nhiệt độ từ 18 – 400C, ẩm độ 21 – 30% thì Oocyst dễ bị chết sau 4 – 5 ngày

* Nghiên cứu về ảnh hưởng của các tia tử ngoại đến sức sống của cầu trùng

Theo nghiên cứu của Fish (1932) ở phòng thí nghiệm thấy, Oocyst bị tiêu

diệt khi chiếu tia tử ngoại vừa phải (Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008)

Cũng theo Warner D.E (1933), Oocyst tồn tại 18 tuần trong đất râm mát một

phần, 21 tuần trong đất râm mát hoàn toàn Song ánh nắng chiếu trực tiếp tác động

gây hại đến Oocyst, nhưng cỏ dại đã bảo vệ chúng tránh tia X (Long P.L, 1979)

1.2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Các nhà nghiên cứu dự đoán bệnh cầu trùng gà đã có từ rất lâu trong chăn nuôi hộ gia đình Từ thời Pháp thuộc người ta đã thấy gà có những triệu chứng như:

ỉa ra máu, khi mổ gà chết thì thấy hai manh tràng sưng to giống với bệnh tích của cầu trùng ngày nay

Theo những tài liệu để lại thì đến 1970 hầu như các trang trại gà đã phát hiện bệnh cầu trùng và một số trại thì bệnh rất nặng gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi Những năm sau đó, các nghiên cứu về cầu trùng cũng được tiến hành bao gồm: việc định loài, dịch tễ, bệnh lý và phòng trị,…nhờ có những nghiên cứu bước đầu này mà việc ngăn chặn bệnh cầu trùng phần nào có hiệu quả Có thể nói những tác giả như Dương Công Thuận, Đào Hữu Thanh, Nguyễn Văn Lộc là những người đã đặt những viên gạch đầu tiên cho việc nghiên cứu về cầu trùng và bệnh cầu trùng gà

Dương Công Thuận đã phân tích hàng ngàn mẫu phân gà và đưa ra kết luận:

gà công nghiệp ở miền Bắc nước ta nhiễm 5 loài cầu trùng: E tenella, E mitis, E

maxima, E brunetti, E necatrix

Đào Hữu Thanh (1975) đã nghiên cứu về bệnh cầu trùng gà ở các trang trại nuôi tập trung công nghiệp và đưa ra một số kết quả về tình hình dịch tễ của bệnh cầu trùng gà

Dương Thanh Liêm, Võ Bá Thọ (1982) đã đề cập đến bệnh cầu trùng trong chăn nuôi gà công nghiệp là một trở ngại lớn và đặc biệt là cầu trùng manh tràng ở gà con Bạch Mạnh Điều (1995) đã kiểm tra 420 mẫu xe cải tiến, quang thúng thấy

tỷ lệ nhiễm cầu trùng là 4,28%

Hoàng Thạch và cs (1999) khảo sát 250 mẫu ủng dùng trong khu vực chuồng nuôi thấy tỷ lệ nhiễm là 5,6% và khảo sát 250 mẫu từ dụng cụ dọn vệ sinh chuồng nuôi, tỷ lệ nhiễm là 11,2%

Theo Nguyễn Thị Kim Lan và Trần Thu Nga (2005), tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng có sự khác nhau theo tình trạng vệ sinh thú y trong chăn nuôi Gà nuôi trong điều kiện vệ sinh kém có tỷ lệ nhiễm là cao nhất

Lê Tuyết Minh (1994) đã nghiên cứu về tình hình nhiễm Eimeria và bệnh

cầu trùng gà ở một số trại gà tại một số vùng của Hà Nội đã xác định có 4 loài cầu

trùng trên gà thịt là: E tenella, E maxima, E mitis, E necatrix.Vũ Đình Chính và

cs (1977) nói về tình hình bệnh cầu trùng gà và phòng trị bệnh bằng Furazolidon

1.3 Những hiểu biết về bệnh cầu trùng gà

1.3.1 Các loài gây bệnh trên gà đã được nghiên cứu

Có rất nhiều tài liệu nghiên cứu về các loài cầu trùng gây bệnh cầu trùng trên các loài gia súc, gia cầm khác nhau tuy nhiên thì những nghiên cứu, công bố về loài cầu trùng gây bệnh trên gà và thỏ được đề cập đến nhiều nhất

+ Loài E acervulina (Tyzzer, 1929): Loài này ký sinh ở đoạn đầu của ruột

non của gà và còn ký sinh ở ruột gà rừng Gallus lafayettei ở Srilanka Oocyst có hình trứng, vỏ nhẵn, kích thước 16,0 - 20,3 x 12,7 - 16,3µm Oocyst có hai lớp vỏ, không có Micropyle, có một hạt cực, không có thể cặn Sporocyst có hình trứng có thể Stieda, không có thể cặn Thời gian hình thành bào trùng là một ngày

E acervulina gây bệnh nhẹ nhưng nếu có nhiều Oocyst có thể gây nên những

bệnh tích trầm trọng và gây chết gà Thời gian nung bệnh khoảng 4 ngày và bệnh tích chủ yếu trên ruột: làm thành ruột non dày lên và viêm catarr, ít khi xuất huyết

Oocyst của loài E brunetti có hình trứng, kích thước 20,7 - 30,3 x 18,1-24,2

µm Lớp vỏ nhẵn không có Micropyle hay thể cặn, có một hạt cực Sporocyst hình trứng dài 13 x 7,5 µm, có thể Stieda và thể cặn Thời gian hình thành bào trùng là

+ Loài E hagani (Livine, 1942): Loài này hiếm gặp, Oocyst hình bầu dục,

kích thước 15,8 - 29,9 x 14,3 - 29,5µm, lớp vỏ nhẵn, không có lỗ noãn, không màu,

có hạt cực Thời gian sản sinh bào tử là 18 - 48 giờ Loài này ký sinh ở phần đầu ruột non Đây là loài gây bệnh nhẹ và có thời gian nung bệnh từ 6 – 7 ngày

+ Loài E maxima (Tyzzer, 1929): Phân bố rộng và ký sinh ở phần giữa ruột non của gà Oocyst hình bầu dục, kích thước 21,4 - 42,5 x 16,5 - 29,8 µm không có

lỗ noãn, màu hơi vàng, vỏ hơi xù xì Thời gian sản sinh bào tử là 30 - 48 giờ

huyết Cơ của ruột bị mất tính đàn hồi, vách ruột dày lên, viêm ruột catarr

+ Loài E mitis (Tyzzer, 1929): Phân bố rộng khắp trên thế giới, gây bệnh

trên gà chủ yếu ở tất cả các đoạn của ruột non nhưng thường thấy ở phần đầu ruột

non và phần manh tràng của gà Oocyst có hình hơi tròn, kích thước 11 - 19 x 10 -

17µm không màu, không có lỗ noãn Thời gian sản sinh bào tử từ 18 - 24 giờ Giai đoạn nội sinh xảy ra ở tế bào nhung mao ruột đôi khi ở tuyến

Lieberkihn Meront tạo ra 6 – 24 và hiếm khi tạo ra 30 Sporozoite Merozoite có

hình lưỡi liềm, một đầu tù, kích thước 5 x 15µm Quá trình sinh sản vô tính và hữu tính xảy ra song song Thời kỳ nung bệnh kéo dài từ 4 – 5 ngày

+ Loài E mivati (Tyzzer, 1929): Oocyst hình trứng, kích thước 10,7 - 20,0 x

10,1 - 15,3µm có lỗ noãn, không mầu Thời gian sản sinh bào tử là 18 - 21 giờ Loài này ký sinh ở tá tràng

Sporocyst phá vỡ vỏ của Oocyst ở diều và dạ dày tuyến Rất nhiều Sporozoite

được giải phóng di chuyển tới tá tràng trong vòng 20 phút sau khi ăn, chúng xâm nhập sâu vào biểu mô và tế bào tuyến của đoạn đầu và đoạn thứ 3 của ruột non

E mivati gây bệnh nặng hơn E acervulina nhưng cũng là loài gây bệnh nhẹ,

tỷ lệ tử vong không quá 10%

+ Loài E necatrix (Tyzzer, 1929): Phân bố rộng trên thế giới Giai đoạn sinh

sản vô tính thứ nhất và thứ hai xảy ra ở ruột non, giai đoạn sinh sản vô tính thứ 3, tiền giao tử và giai đoạn sinh giao tử xảy ra ở ruột già

Oocyst hình bầu dục, kích thước 13 – 20 x 13,1 - 18,3µm, vỏ noãn nang nhẵn

không màu, gồm hai lớp vỏ, không có lỗ noãn, có hạt cực Sporocyst hình trứng, có thể Stieda, không có thể cặn Thời gian sản sinh bào tử là 24 - 36 giờ

Bên cạnh E tenella, E necatrix gây bệnh nặng nhất và là một loai quan trọng ở gà Nhiều nơi tác hại do E necatrix gây thiệt hại nhiều hơn E tenella Một

số ý kiến cho rằng E necatrix gây bệnh mãn tính hơn E tenella Thực tế hoàn toàn không phải vậy bởi vì E necatrix xâm nhập vào sâu tế bào ruột và thời gian lâu

hơn do đó chúng gây bệnh chậm hơn

+ Loài E praecox (Tyzzer, 1929): Loài này phân bố rộng, định vị trên 1/3

phía trên ruột non của gà

Oocyst hình bầu dục, kích thước 16,6 - 27,7 x 14,8 - 19,4µm, không màu, không có lỗ noãn Thời gian sản sinh bào tử là 24 – 36 giờ Loài này ký sinh ở đoạn đầu ruột non Giai đoạn sinh sản xảy ra ở tế bào biểu mô nhung mao ruột thường dọc theo một phía của nhung mao và ở phía dưới của nhân tế bào, có 3 hoặc 4 quá trình sinh sản vô tính Quá trình thứ hai xảy ra ở 32 giờ sau khi nhiễm Sự phát triển sau đó không tuần từ Hai giai đoạn sinh sản vô tính và hữu tính xảy ra song song

+ Loài E tenella (Orlov, 1975): Loài này phổ biến ở manh tràng gia cầm trên khắp thế giới Oocyst hình bầu dục, kích thước 14,2 - 20,0 x 9,5 - 24,8 µm không có

lỗ noãn, màu xanh nhạt Sporocyst hình trứng, không có thể cặn Thời gian sản sinh

bào tử là 18 – 48 giờ

* Con đường truyền lây:

Theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008), tiêu hóa là con đường truyền lây

duy nhất mà Oocyst cầu trùng có thể xâm nhập vào cơ thể gà để gây bệnh Song,

cầu trùng có thể lây nhiễm theo hai cách: lây nhiễm trực tiếp và lây nhiễm gián tiếp

+ Lây nhiễm trực tiếp: Gà bệnh thải cầu trùng ra ngoài môi trường qua phân,

do đó Oocyst sẽ dễ dàng được phát tán trên khắp nền chuồng, máng ăn, máng uống

và dụng cụ chăn nuôi Tập tính của gà là hay nhặt, bới và tìm kiếm những mảnh

thức ăn thừa, chất độn ở nền chuồng,… nên dễ nuốt phải Oocyst có sức gây bệnh

+ Lây nhiễm gián tiếp: Qua vật môi giới trung gian truyền bệnh như các dụng cụ chăn nuôi, người chăn nuôi, giầy dép, ủng, phương tiện vận chuyển,… đã

mang Oocyst cầu trùng từ bên ngoài khu vực chuồng nuôi vào Ngoài ra các loài côn trùng, các loài gặm nhấm cũng là những nguồn mang Oocyst từ khu vực chăn

nuôi khác vào chuồng nuôi

Nghiên cứu về vấn đề này N.A Kolapxki, P.I Paskin (1980), loài gặm nhấm, côn trùng cũng làm lây lan bệnh rộng Điều này được Lê Minh và cs (2008)

làm sáng tỏ khi nhóm tác giả này nghiên cứu khả năng mang Oocyst cầu trùng của

các động vật có ở xung quanh chuồng nuôi Tất cả các động vật và côn trùng đều có khả năng mang mầm bệnh trong đó ở kiến là 27,27%, ruồi là 22,22% và gián là 16,67% Vì vậy tác giả đã sơ bộ kết luận các loài côn trùng như: Gián, chuột, ruồi,

là tác nhân mang Oocyst cầu trùng từ bên ngoài vào

Theo Phạm Văn Khuê và cs (1996), khi Oocyst bị ruồi nuốt vào, trong đường

tiêu hoá của ruồi, chúng vẫn sống và còn khả năng gây bệnh trong vòng 24 giờ

Về sự biến động của bệnh theo mùa vụ, Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) sau khi tập hợp các nghiên cứu của một số tác giả đã rút ra kết luận: Bệnh cầu trùng

gà phân bố không đồng đều qua các tháng trong năm Vào những tháng có khí hậu

ẩm ướt, mưa nhiều, nhiệt độ thích hợp từ 18 – 350C bệnh thường xuất hiện và dễ bùng phát hơn các tháng khác Vì vậy, ở nước ta mùa xuân và mùa hè là hai mùa có

tỷ lệ nhiễm cầu trùng cao hơn mùa đông và mùa thu

* Tuổi của gà:

Tuổi gà cũng là yếu tố cần chú ý trong đặc điểm dịch tễ của bệnh

Đào Hữu Thanh và cs (1978) đã nhận xét, bệnh cầu trùng gà có tính lây lan mạnh, đặc biệt ở gà dưới 2 tháng tuổi, được coi như một bệnh truyền nhiễm của gà con 10 - 49 ngày tuổi Theo Hồ Thị Thuận (1985), gà nuôi công nghiệp ở một số tỉnh phía Nam nhiễm cầu trùng chủ yếu ở giai đoạn 3 - 6 tuần tuổi

* Điều kiện chuồng trại và vệ sinh thú y

Chuồng trại chăn nuôi là yếu tố quan trọng liên quan đến dịch tễ bệnh cầu trùng

gà Nuôi gà trong lồng và nuôi trên nền chuồng có tỷ lệ nhiễm cầu trùng khác nhau Hoàng Thạch (1996, 1997, 1998) đã khảo sát tỷ lệ nhiễm cầu trùng, thấy: tỷ

lệ nhiễm cầu trùng ở gà nuôi lồng là 0,37%, gà nuôi trong chuồng có đệm lót là trấu nhiễm 22,49 - 57,38% Như vậy, gà nuôi trong lồng không tiếp xúc với phân thì tỷ

lệ nhiễm cấu trùng giảm rất thấp

Morgot A.A (2000) đã nghiên cứu và cho thấy ở những cơ sở chăn nuôi có điều kiện chăm sóc tốt, vệ sinh chuồng trại nghiêm ngặt thì tỷ lệ nhiễm cầu trùng 5 – 10%, còn ở những cơ sở chăn nuôi có điều kiện không đảm bảo thì tỷ lệ nhiễm là từ

30 – 69%, (Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008)

1.3.3 Sinh bệnh học

Vấn đề sinh bệnh học đã có nhiều tác giả đi sâu nghiên cứu về nhiều mặt

Quá trình sinh bệnh học trước hết do tác động trực tiếp của mầm bệnh qua

các giai đoạn phát triển nội sinh trong cơ thể gà làm cho các tế bào biểu bì bị phá hủy hàng loạt, các mạch quản, thần kinh bị hủy hoại, tạo điều kiện thuận lợi cho hệ

vi sinh vật phát triển và gây bệnh thêm cho gà (Vandonin Berke, 1957)

Mặt khác do sự phá hủy hàng loạt các tế bào đã gây ra các ổ hoại tử lớn cho lớp niêm mạc làm cho nhiều đoạn ruột không tham gia vào quá trình tiêu hóa, con vật thiếu máu trầm trọng Protein tổng số của huyết thanh và đường huyết giảm, một số enzyme bị giảm hoạt tính nhất là hoạt tính Phosphataza kiềm ở niêm mạc ruột non, do đó gà mắc bệnh cầu trùng sẽ rối loạn quá trình hấp thu các acid amin, giảm sức lớn và sự phát triển

Dưới tác động của cầu trùng làm cho các mô bào đường tiêu hóa bị tổn

thương, biến đổi tạo điều kiện cho các vi khuẩn có hại xâm nhập như Clostridium

perfringens , Salmonella typhimurium cùng với một số bệnh ghép khác làm cho

bệnh càng nặng và phức tạp thêm

Theo nghiên cứu của Lê Văn Năm thì E.coli gây bại huyết luôn là bạn đồng hành của cầu trùng Trong đó cầu trùng đóng vai trò quyết định, E.coli đóng vai trò

thúc đẩy Trường hợp gà bị cầu trùng, nhất là cầu trùng cấp thì 100% số đàn bị bệnh

đều bị bội nhiễm với E.coli bại huyết Cơ chế sinh bệnh trong trường hợp này được

giải thích là: Do tác động của cầu trùng làm phá vỡ cấu trúc niêm mạc ruột gây rối loạn tiêu hóa, viêm ruột xuất huyết, chức năng hấp thu của ruột bị ảnh hưởng, nhu động của ruột cũng thay đổi,…Tất cả những hiện tượng trên đều dẫn tới phá vỡ cân

bằng sinh học, làm cho các chủng E.coli có lợi bị tiêu diệt, các chủng E.coli có hại

sinh sản nhanh và thâm nhập ồ ạt vào đường máu qua các vùng niêm mạc ruột đã bị tổn thương do cầu trùng gây nên làm gà bị nhiễm trùng huyết cấp tính

1.3.4 Triệu chứng lâm sàng và bệnh tích của gà bị bệnh cầu trùng

1.3.4.1 Triệu chứng lâm sàng

Triệu chứng lâm sàng của gà bị bệnh cầu trùng thay đổi tùy thuộc vào độ

tuổi của gà, loài cầu trùng, số lượng Oocyst có mặt trong từng cá thể gà

Có nhiều tác giả đồng quan điểm là bệnh cầu trùng gà có thời kỳ nung bệnh

từ 4 đến 7 ngày

Triệu chứng bệnh cầu trùng nói chung đều thể hiện hậu quả của quá trình phá huỷ niêm mạc đường tiêu hoá của cầu trùng Theo Trịnh Văn Thịnh (1963), Phạm Văn Khuê và cs (1996), Nguyễn Thị Kim Lan và cs (1999), gà bị bệnh cầu trùng thường lờ đờ, chậm chạp, ăn kém hoặc bỏ ăn, lông xù, cánh xã, phân loãng lẫn máu tươi, khát nước, uống nhiều nước, dễ chết do mất nước và mất máu

Đa số các tác giả khi nghiên cứu về triệu chứng lâm sàng của gà bị mắc bệnh cầu trùng ở các lứa tuổi đều thấy: Bệnh thường xảy ra ở thể cấp mãn tính và thể không có triệu chứng lâm sàng

Gà thường chết sau 6 – 7 ngày bị nhiễm bệnh, tỷ lệ chết từ 50% trở lên Tỷ lệ chết có thể lên đến 90 – 95%, thậm chí toàn bộ số gà nuôi đều bị chết hết nếu không can thiệp kịp thời

+ Thể mãn tính:

Thường thấy ở gà từ 45 – 90 ngày tuổi Cũng với các triệu chứng mô tả như

ở thể cấp tính nhưng mức độ biểu hiện nhẹ hơn, thời gian ốm kéo dài hơn, tỷ lệ chết khoảng 25 – 45%

+ Thể không có triệu chứng lâm sàng:

Theo nhiều tác giả thì đây là thể mang trùng của những gà lớn đã trưởng thành Khi quan sát bề ngoài thì thấy gà hoàn toàn khỏe mạnh, ăn uống, đi lại bình thường Triệu chứng lâm sàng duy nhất nhận thấy được là đôi khi gà bị ỉa chảy, tỷ

lệ đẻ không đều, năng suất trứng giảm 15 – 25% Khi xét nghiệm phân gà thấy có rất nhiều noãn nang cầu trùng

1.3.4.2 Bệnh tích của gà bị bệnh cầu trùng

Về bệnh tích của gà bị bệnh cầu trùng thường thấy mào, yếm, tích, kết mạc trắng bệch

Trường hợp gà bị cầu trùng cấp tính do E tenella hoặc bị ghép với E.coli bại

huyết chủng O78 thì gà bệnh ỉa ra máu tươi hoàn toàn, xác gà chết còn béo tốt, thịt trắng Trường hợp dưới cấp tính hoặc mãn tính thì xác gà ướt, xung quanh lỗ huyệt dính bết đầy phân, gà chết rất gầy và thiếu máu

Gà bị bệnh cầu trùng dù ở thể cấp hay thể mãn tính thì các bệnh tích cũng tập trung chủ yếu ở đường ruột Điều đặc biệt cần chú ý là vị trí của các đoạn ruột và mức độ tổn thương của niêm mạc các đoạn ruột đó khác nhau tùy theo từng loài cầu trùng, tùy theo độ tuổi của gà và tùy theo mức độ nhiễm cầu trùng ở gà Bệnh tích chủ yếu có ở 3 vị trí là: Manh tràng, ruột non, trực tràng

+ Manh tràng: Bị viêm, xung huyết, xuất huyết, phình to, có chưa đầy phân

và máu Niêm mạc bị phá hủy làm vách manh tràng mỏng đi nhiều

+ Ruột non: Nhìn từ bên ngoài có những đốm xuất huyết lấm tấm kéo dài, ruột non căng phồng chứa đầy chất không tiêu hóa được Niêm mạc có nhiều nốt

xuất huyết và hoại tử, thành ruột dày, mỏng gồ ghề Khi bị kế phát bởi E.coli chủng

O78 thì cả ruột non phình to, chứa nhiều hơi và phân lẫn máu

+ Trực tràng: Bị tổn thương từng điểm nhỏ, viêm, xuất huyết, nạo chất chứa

cho lên phiến kính soi thì có thể thấy E brunetti

Trên cơ sở những triệu chứng, bệnh tích ở trên giúp chúng ta có thể sơ bộ chẩn đoán nhanh được bệnh cầu trùng để từ đó có hướng điều trị phù hợp và kịp thời

1.3.5 Các phương pháp chẩn đoán bệnh cầu trùng gà

Bệnh ký sinh trùng nói chung và bệnh cầu trùng gà nói riêng muốn chẩn đoán chính xác được bệnh chúng ta phải kết hợp nhiều biện pháp chẩn đoán bao gồm điều tra dịch tễ, chẩn đoán lâm sàng, mổ khám kiểm tra bệnh tích và xét nghiệm phân từ đó mới cho phép chúng ta kết luận về bệnh

+ Với gà còn sống:

Căn cứ vào dịch tễ học: Đặc điểm đáng chú ý là: lứa tuổi mắc bệnh, mùa vụ,

tình trạng vệ sinh thú y

Căn cứ vào triệu chứng lâm sàng: theo dõi, phát hiện các triệu chứng lâm sàng điển hình của bệnh như đã mô tả: gà bị bệnh cầu trùng thường lờ đờ, chậm chạp, ăn kém hoặc bỏ ăn, lông xù, cánh xã, phân loãng lẫn máu tươi, khát nước, uống nhiều nước

Xét nghiệm phân: mục đích để tìm Oocyst cầu trùng Thông thường có 3

phương pháp đó là: Phương pháp xét nghiệm phân trực tiếp, phương pháp Fulleborn, phương pháp Darling Để đánh giá cường độ nhiễm cầu trùng có thể

sử dụng phương pháp định tính hoặc phương pháp định lượng sử dụng buồng đếm Mc Master

+ Với những gà đã chết:

Việc chẩn đoán được tiến hành thông qua công tác mổ khám kiểm tra bệnh tích kết hợp với soi trực tiếp (dùng phiến kính nạo nhẹ niêm mạc ruột non rồi đem

soi kính để tìm Oocyst cầu trùng)

Dựa vào các bệnh tích đặc trưng ở đường ruột, làm tiêu bản vi thể để xác định các tổn thương bệnh lý ở mức độ vi thể và phát hiện các noãn nang của cầu trùng ở các giai đoạn phát triển trong cơ thể gà

1.4 Miễn dịch học trong bệnh cầu trùng

Miễn dịch trong bệnh cầu trùng là một vấn đề có ý nghĩa to lớn cả về mặt lý thuyết và thực tiễn Đã có nhiều nhà khoa học nghiên cứu và công bố về vấn đề này

Tyzzer (1929), bằng thực nghiệm đã chứng minh được rằng có hai mức miễn dịch trong bệnh cầu trùng

Mức một: Phát sinh sau khi con vật nhiễm một lượng nhỏ cầu trùng, khi đó

sẽ tạo ra miễn dịch yếu và nếu gây nhiễm cho chúng một lượng cầu trùng cao hơn (liều siêu nhiễm) thì chúng sẽ mắc bệnh lại

Mức hai: Phát sinh khi con vật bị nhiễm một lượng lớn cầu trùng Trong trường hợp này sẽ có miễn dịch khi con vật mắc bệnh lại Tác giả cho rằng cường

độ miễn dịch có liên quan đến số lượng cầu trùng xâm nhập vào cơ thể

W Johnson (1927), Tyzzer (1929), bằng kỹ thuật gây bệnh thực nghiệm

chứng minh cường độ miễn dịch không đồng đều, phụ thuộc vào nhiều yếu tố: Loài cầu trùng, liều cầu trùng gây miễn dịch, phương thức gây nhiễm, trạng thái

cơ thể gà,…

Ở gà, những chủng cầu trùng ký sinh trong các tế bào biểu bì trên bề mặt

niêm mạc như: E acervulina, E necatrix, E mitis không tạo được miễn dịch Trong khi các chủng cầu trùng ký sinh trong các tế bào biểu bì nằm sâu trong lớp Muscose của thành ruột như: E tenella, E maxima, E.praecox mới có khả năng tạo được

miễn dịch thực sự nhưng miễn dịch cũng không cao lắm Điều này cũng giúp chúng

ta giải thích tại sao hiệu quả sử dụng vaccine cầu trùng hiện nay vẫn chưa cao

* Cơ chế đáp ứng miễn dịch cầu trùng

Cầu trùng cũng như các sinh vật khác khi xâm nhập vào cơ thể được coi là một kháng nguyên lạ kích thích cơ thể sản sinh ra kháng thể

Mặt khác, bản chất của quá trình đáp ứng miễn dịch bao gồm: Đáp ứng miễn dịch tế bào và đáp ứng miễn dịch dịch thể (Nguyễn Ngọc Lanh (1982), Nguyễn Như Thanh và cs, 1997)

+ Đáp ứng miễn dịch tế bào:

Việc tạo miễn dịch cho gà chống lại bệnh cầu trùng đã được nhiều nhà khoa học nghiên cứu với nhiều hướng nghiên cứu khác nhau Trong đó hướng tạo vaccine chống bệnh cầu trùng gà là một hướng đi chủ động, có nhiều triển vọng và được nhiều nhà nghiên cứu quan tâm Một hướng đi khác cũng đang được quan tâm hiện nay là tạo ra giống động vật có miễn dịch tự nhiên với bệnh cầu trùng

+ Đáp ứng miễn dịch dịch thể:

Adams D.O, Hamilton T.A (1984) cho biết: Đại thực bào có vai trò quan trọng

trong việc ức chế sự di chuyển của Schizont Tế bào Lympho B hoạt hóa trở thành tương bào sản sinh ra kháng thể dịch thể Dưới sự kích thích của các Merozoite và

Schizont, cùng với sự hỗ trợ của tế bào Lympho T, các tế bào Lympho B phân chia biệt hóa thành tế bào Plasma (tương bào), các tương bào tiết kháng thể chống lại các

Merozoite và Schizont Ngoài các nhân tố trên thì Cystokin và Lymphokin cũng có vai

trò trong tạo miễn dịch đối với vật nuôi

Đại thực bào ngoài nhiệm vụ thực bào ngoài nhiệm vụ thực bào và tiêu diệt cầu trùng nó còn đóng vai trò quan trọng trong tạo miễn dịch đặc hiệu Nó tiếp nhận kháng nguyên, chia cắt kháng nguyên thành siêu kháng nguyên rồi trình diện cho các tế bào có thẩm quyền miễn dịch Các tế bào Lympho B sau khi nhân diện kháng nguyên cầu trùng, một nhóm sẽ tạo ra các kháng thể đặc hiệu để kháng cầu trùng, nhóm khác có vai trò là các tế bào “trí nhớ miễn dịch” để khi cầu trùng xâm nhập vào lần sau thì kháng thể được sinh ra nhanh hơn và nhiều hơn Đây chính là cơ sở

để điều chế vaccine phòng bệnh cầu trùng Các tế bào Lympho T sinh ra Lymphokin tiêu diệt cầu trùng, một số có vai trò trong điều hòa miễn dịch, một số nguyên bào Lympho T mẫn cảm cũng trở thành “tế bào nhớ” (Dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và

Tất cả các loại vaccine dù được sản xuất ở nước nào đi chăng nữa đều là một

hỗn hợp kháng nguyên của 3 chủng cầu trùng: E tenella, E maxima, E necatrix

Nói chính xác hơn vaccine cầu trùng là vaccine sống nhược độc gồm các nguyên bào

tử của 3 chủng cầu trùng ký sinh sâu trong lớp niêm mạc ruột Hiện nay ngoài 3 chủng

Eimeria trên còn có thêm 1 - 2 chủng Eimeria nữa

Phương pháp sử dụng là cho uống qua đường miệng lúc gà được 7 – 8 ngày tuổi và có thể lặp lại khi gà được 15 – 18 ngày tuổi

Việc dùng vaccine chế từ các chủng có độc tính (Coccivac, Immucox) dễ gây

ô nhiễm cho cơ sở chăn nuôi và đưa vào những chủng có thể ở đó chưa có Còn vaccine thu được từ những chủng biến đổi đã làm giảm khả năng gây bệnh thì an

toàn hơn nhưng công nghệ phức tạp hơn và giá thành cao

Hiện nay các loại vaccine cầu trùng do các nước sản xuất đang lưu hành tại nước ta đã có khá nhiều cơ sở chăn nuôi sử dụng Tuy nhiên việc sử dụng vaccine vẫn còn nhiều bất cập và kết quả thì vẫn chưa được như mong đợi

Nhìn chung, vaccine cầu trùng hiện nay còn rất nhiều tồn tại, chưa được sử dụng rộng rãi và chưa mang lại hiệu quả cao thiết thực cho người chăn nuôi

1.6 Phòng và trị bệnh cầu trùng bằng thuốc

Trong khi việc phòng bệnh bằng vaccine còn chưa hoàn thiện thì việc phòng, trị bệnh bằng thuốc vẫn giữ vị trí quan trọng Phương pháp này đã đem lại nhiều hiệu quả không nhỏ cho ngành chăn nuôi Cơ sở sinh học của biện pháp này là dùng thuốc ức chế các giai đoạn phát triển trong chu kỳ sinh học của cầu trùng

Để phòng và trị cầu trùng cho đến nay người ta đã khẳng định có 11 nhóm thuốc và hóa chất bao gồm hàng trăm loại nguyên liệu có khả năng ức chế và tiêu diệt căn nguyên cầu trùng

+ Nhóm Sulfamid: Nhóm này rất phổ biến và được sử dụng rộng rãi bao gồm: Sulfathiazol, Sulfadimidin, Sulfadimethoxin, Sulfaquinoxalin, Sulfaguanidin, Sulfachlorpyrazin Nhóm này tác dụng theo cơ chế cạnh tranh hóa học: Do Sulfamid có cấu tạo tương tự như PABA (Para amino benzoic acid) là một yếu tố sinh trưởng của cầu trùng Khi thuốc được hấp thu vào cơ thể gà, nhóm Sulfamid sẽ cạnh tranh và thế vào vị trí của PABA nên cầu trùng không tổng hợp được acid Folic, cầu trùng ngừng phát triển

+ Nhóm Pyrimidin: Nhóm này từ xa xưa đến nay vẫn phát huy tác dụng và cho kết quả phòng, trị cầu trùng rất tốt Nhóm bao gồm: Amprolium, Beclothiamin, Diaveridin, Pyrimethamin, Trimethoprim

Trong nhóm này, cơ chế tác dụng của Amprolium được tìm hiểu rõ Thuốc

có cơ chế cạnh tranh Vitamin B1: cầu trùng cần Thiamin (Vitamin B1) để phát triển sinh sản nhưng Amprolium đã đẩy Thiamin ra khỏi chu trình sinh dưỡng của cầu trùng do đó cầu trùng ngừng phát triển và chết

+ Nhóm Pyridin:

Thuốc có cơ chế ngăn trở quá trình trao đổi năng lượng của cầu trùng Thuốc tác động trực tiếp lên cầu trùng bằng cách phong bế hệ thống enzyme có nhóm – SH biến dưỡng glucose của cầu trùng, làm cho cầu trùng không thể phát triển được ở tất

cả các giai đoạn Ngoài ra thuốc còn kết hợp mạnh với hệ thống vận chuyển điện tử trong sự phân chi bào tử do đó không có năng lượng cho quá trình phân chia điện tử

+ Nhóm kháng sinh: Salinomycin, Monenzin, Chlortetracyclin, Tetracyclin, Semduramycin,… trong đó hiệu quả nhất là Salinomycin, Monenzin

+ Nhóm Nitrofural: Furazolidon, Tripan Cocruleum, Mepacrin,… Đa số các chất trong nhóm này đã bị cấm sử dụng tại nhiều nước trên thế giới Tại Việt Nam, nhóm thuốc này bị cấm sử dụng từ 24/04/2002 do vẫn còn tồn dư một lượng lớn trong thịt của gia súc, gia cầm sau khi sử dụng Các nhóm thuốc này hoạt động theo

cơ chế ức chế tổng hợp Protein của cầu trùng

CHƯƠNG II ĐỊA ĐIỂM, ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Địa điểm nghiên cứu

Địa điểm lấy mẫu: Các trang trại gà của hợp tác xã chăn nuôi Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh Phúc

Địa điểm xét nghiệm mẫu: Phòng thí nghiệm bộ môn ký sinh trùng , Khoa thú y, Học viện nông nghiệp Việt Nam

2.2 Đối tượng nghiên cứu

Gà giống Ai Cập nuôi theo phương thức công nghiệp, giống gà Lương Phượng nuôi thả vườn từ 1 đến 6 tuần tuổi

2.3 Nội dung nghiên cứu

2.3.1 Đánh giá tình hình nhiễm cầu trùng ở những đàn gà Ai Cập nuôi theo phương thức công nghiệp và gà Lương Phượng nuôi thả vườn nuôi tại hợp tác

xã chăn nuôi Thanh Vân huyện Tam Dương tỉnh Vĩnh phúc

- Xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng ở gà theo các khu vực chăn nuôi gà

- Xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng ở gà theo các phương thức chăn nuôi

- Xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng ở gà theo các lứa tuổi của gà

- Xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng ở gà theo mùa vụ

- Xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trùng ở gà theo trạng thái phân khác nhau

- Sơ bộ phân loại các loài cầu trùng gây bệnh ở gà Ai Cập và gà Lương Phượng

2.3.2 Xác định đặc điểm bệnh lý của gà mắc bệnh tự nhiên và hiệu lực phòng bệnh của một số loại thuốc phòng trị cầu trùng

- Quan sát triệu chứng lâm sàng của gà mắc bệnh cầu trùng

- Xác định các bệnh tích đại thể chủ yếu của gà mắc bệnh cầu trùng

- Nghiên cứu bệnh tích vi thể ở ruột của gà mắc bệnh cầu trùng

- Xác định chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu của gà bệnh

+ Các chỉ tiêu sinh lý máu: Số lượng hồng huyết cầu, một số chỉ tiêu hệ hồng cầu, công thức bạch cầu

+ Các chỉ tiêu sinh hóa máu: Protein tổng số, Albumin, Globulin, A/G, hàm lượng đường huyết

- Xác định hiệu lực phòng bệnh của Avicoc (công ty Virbac), Cocci-zione (công ty RTD nhập khẩu và phân phối)

2.4 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Nguyên liệu nghiên cứu

- Mẫu phân gà nghi mắc bệnh cầu trùng

- Máu của gà bị nhiễm cầu trùng nặng sau khi có kết quả xét nghiệm phân

- Dụng cụ phục vụ cho nghiên cứu: Tủ lạnh, tủ sấy, tủ ấm 370C, tủ ấm 560C, máy đúc Block, khuôn đúc, máy cắt mảnh Microtom, kính hiển vi quang học, đũa thủy tinh, ống nghiệm, máy li tâm, vòng vớt, lam kính, lamen, dao, pank, kẹp, cốc đựng hóa chất, đèn cồn, xi lanh, kim lấy máu, buồng đếm Mc Master

- Hóa chất dùng cho nghiên cứu:

+ Dung dịch nước muối bão hòa

+ Hóa chất, môi trường dùng để bảo quản mẫu bệnh phẩm: Formol 10%

+ Hóa chất dùng để nhuộm tiêu bản: nước cất, nước trứng để tãi mảnh, cồn ở các nồng độ, xylen, thuốc nhuộm, parafin nấu với sáp ong, thuốc nhuộm Haematoxylin – Eosin (HE),…

2.4.2 Phương pháp nghiên cứu

2.4.2.1 Phương pháp điều tra dịch tễ học

- Lấy mẫu theo công thức dịch tễ học mô tả (Nguyễn Như Thanh và cs 2001) dung lượng mẫu tính theo công thức:

(1,96)2p (1-p)

n =

d2

Trong đó: + n là số mẫu cần nghiên cứu

- Theo dõi và tiến hành lấy mẫu phân mới vào các buổi sáng và vào các ngày 7,

14, 21, 28, 35, 42 ngày tuổi của giống gà ai cập nuôi công nghiệp và giống Lương Phượng nuôi thả vườn Mỗi mẫu được đựng trong lọ tiêu bản sạch, có nắp đậy Ở mỗi lọ đều phải ghi: Tuổi của gà, địa điểm, giống, tình trạng vệ sinh, trạng thái phân, phương thức chăn nuôi, ngày tháng lấy mẫu và các biểu hiện lâm sàng khác của gà

- Bảo quản mẫu: Mẫu phân lấy về được kiểm tra ngay trong ngày Nếu chưa kịp xét nghiệm thì mẫu sẽ được bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 20C – 40C, không quá 3 ngày

* Mẫu phủ tạng: Chúng tôi lấy mẫu ruột non, hạch màng treo ruột, manh

tràng, gan, thận của gà nghi mắc bệnh Mẫu tổ chức được bảo quản trong Formol 10% để làm tiêu bản vi thể Trên mỗi lọ mẫu đều có ghi: Tuổi của gà, địa điểm, giống, ngày tháng lấy mẫu và các biểu hiện lâm sàng khác của gà

* Mẫu máu: Chúng tôi tiến hành lấy máu ở tĩnh mạch cánh của gà vào các

buổi sáng (từ 7 – 9 giờ sáng)

2.4.2.3 Phương pháp xét nghiệm mẫu phân

- Các mẫu phân được xét nghiệm theo phương pháp Darling để đánh giá mức

độ cảm nhiễm của gà

Cách làm: Cho phân vào cốc thủy tinh, cho nước lã vào, dùng đũa thủ tinh khuấy tan phân, lọc qua lưới lọc để loại bỏ cặn bã thô Đưa phần dung dịch nước phân đã lọc vào máy ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút Tỷ trọng của noãn nang sẽ nặng hơn tỷ trọng của nước nên chìm xuống dưới Từ từ chắt bỏ lớp nước bên trên,

giữ lại phần cặn sau đó cho dung dịch nước muối bão hòa vào lắc đều hoặc dùng đũa thủy tinh khuấy đều rồi lại tiếp tục cho vào máy ly tâm lần nữa trong vòng 3 phút với tốc độ 3000 vòng/phút, noãn nang nhẹ hơn sẽ nổi lên trên Ly tâm xong, dùng vòng vớt vớt lớp màng nổi bên trên cho lên phiến kính và đậy lamen lên phiến kính, đưa lên kính hiển vi soi và tìm noãn nang cầu trùng

Đánh giá mức độ cảm nhiễm của đàn gà dựa vào tỉ lệ nhiếm cầu trùng:

Phương pháp đánh giá cường độ nhiễm cầu trùng

Phương pháp xác định cường độ nhiễm cầu trùng: Cường độ nhiễm được xác định bằng số lượng Oocyst/gam phân (đếm trên buồng đếm Mc.Master và quy định cường độ nhiễm như sau:

- Số lượng Oocyst/gam phân ≤ 4000: Quy định cường độ nhiễm nhẹ (+)

- Số lượng Oocyst/gam phân ≤ 8000: Cường độ trung bình (++)

- Số lượng Oocyst/gam phân > 8000: Quy định cường độ nặng (+++)

2.4.2.4 Phương pháp phân loại cầu trùng:

Các loại cầu trùng được xác định theo khóa phân loại của P.L Long và W.M Reid (1982) dựa vào các đặc điểm sau:

- Đặc điểm hình thái, màu sắc: Kiểm tra dưới kính hiển vi với độ phóng đại

200 lần quan sát được màu sắc và phân biệt được hình thái của nang trứng

- Kích thước nang trứng: Đo kích thước nang trứng bằng micromet chỗ rộng nhất và dài nhất của nang trứng

- Dựa vào vị trí ký sinh của cầu trùng ở trong ống tiêu hóa: Khi gà chết, mổ khám, nạo chất chứa trên niêm mạc ruột non, manh tràng, trực tràng để kiểm tra dưới kính hiển vi tìm nang trứng

2.4.2.5 Phương pháp theo dõi biểu hiện triệu chứng lâm sàng

Theo dõi tình trạng chung của đàn gà, phát hiện những con có biểu hiện khác thường như:

- Ăn, uống (nhiều hay ít hoặc bỏ ăn)

- Dáng đi đứng, hoạt động của đàn gà

- Biểu hiện trạng thái của lông, màu sắc của mào, tích

- Trạng thái, màu sắc của phân

* Vùi bệnh phẩm: (Tạo ra chất nền cho tổ chức dễ cắt)

Tiến hành lần lượt các bước sau:

- Rửa formol: Lấy tổ chức ra khỏi bình ngâm mẫu, cắt thành các miếng tổ chức theo chiều dài có độ dài 4 – 5 mm Cho vào khuôn đúc bằng nhựa, đem rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong vòng 24h để rửa sạch formol

- Khử nước và khử cồn:

Khử nước Cồn 900I : 14 giờ Khử cồn

Cồn 900II : 1 giờ Xylen 1: 2,5 giờ Cồn 1000I : 1 giờ Xylen 2: 1giờ Cồn 1000II : 1 giờ Xylen 3: 1 giờ Cồn 1000III : 3,5 giờ

Mục đích để khử hết nước và khử hết cồn ra khỏi tổ chức

Yêu cầu: Khi nào miếng tổ chức trong như cục thạch là được Nếu để quá lâu

thì miếng tổ chức sẽ ròn, dễ vỡ và khó cắt

- Khử Xylen: Cho qua hệ thống parafin đã ổn định (parafin có từ 5% sáp ong đã nấu, đảo nhiều lần thành một môi trường đồng nhất, ổn định, đặc, chắc, không lẫn tạp chất) Gồm 4 lọ:

3-Lọ 1: Parafin + Xylen với tỷ lệ 1:1 (ở 370C) : 14 giờ

Lọ 2: Parafin I (ở 560C) : 3 giờ

Lọ 3: Parafin II (ở 560C) : 3 giờ

Lọ 4: Parafin III (ở 560C) : 3 giờ Mục đích: Để khử hết Xylen trong tổ chức Trong tổ chức chỉ còn Parafin thấm đều trong các kẽ mô bào

* Đúc Block:

Mục đích: Để vùi miếng tổ chức trong môi trường Parafin thuần nhất tạo thành một thể thống nhất

Tiến hành:

- Đặt miếng bệnh phẩm nằm theo ý muốn vào chính giữa khuôn block và

đổ nhanh parafin lỏng vào block Sau đó đặt khuôn đã đúc sang bàn lạnh của máy làm nguội block Để nguội từ từ đến khi đông cứng, đặc và chắc là được

- Bóc khuôn, chỉnh sửa lại block cho vuông vắn rồi gắn nhãn để tránh nhầm lẫn

* Cắt dán mảnh:

Cắt mảnh bằng máy Microtom với độ dàn mảnh cắt khoảng 3 – 5 µm, sao cho mảnh cắt không rách, nát phần tổ chức là được

Tãi mảnh: Sau khi cắt được, dùng pank kẹp mảnh cắt đặt vào nước lạnh sau

đó dùng phiến kính trong, sáng, không xước, hớt mảnh cắt cho sang nước ấm 480C rồi lấy kính với mảnh cắt sao cho vị trí mảnh cắt ở 1/3 phiến kính Sau đó để tủ ấm

370C đến khi bệnh phẩm khô là được

* Nhuộm tiêu bản: Gồm các bước:

+ Bước 1: Khử parafin : Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ:

Xylen I : 3 – 5 phút Xylen II : 3 – 5 phút Xylen III : 3 – 5 phút

+ Bước 2: Khử Xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ:

Cồn 1000 2 lần (mỗi lần 1 phút) Lọ 3: Cồn 700 : 1 lần

Lọ 2: Cồn 900 : 1 lần Lọ 4: Cồn 500 : 1 lần + Bước 3: Khử cồn: Để tiêu bản dưới vòi nước chảy trong 15 phút

+ Bước 4: Nhuộm Haematoxylin (nhuộm nhân)

Khi nhấc tiêu bản ra khỏi nước, lau khô xung quanh tiêu bản, nhỏ Haematoxylin ngập tiêu bản Để trong vòng 8 – 10 phút, sau đó đổ thuốc nhuộm đi, rửa qua nước chảy

3 – 5 phút cho hết Haematoxylin thừa Đem lau sạch nước xung quanh tiêu bản và vẩy khô đi Kiểm tra màu sắc, nếu thấy tiêu bản có màu xanh tím là được

Nếu nhạt màu thì phải nhúng tiêu bản qua lọ NaHCO3 1% (30 giây)

Nếu màu đậm quá thì nhúng tiêu bản vào lọ cồn axit (cồn 960 + HCl) trong

30 giây Sau khi điều chỉnh màu ta rửa sạch tiêu bản bằng nước cất

+ Bước 5: Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương)

Nhỏ Eosin ngập tiêu bản khoảng 5 – 10 phút tùy theo thực tế màu Eosin Sau

đó rửa dưới vòi nước chảy khoảng 3 – 5 phút cho hết Eosin thừa

+ Bước 6: Tẩy nước: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ:

Lọ 1: Cồn 700 trong 15 giây Lọ 3: Cồn 1000 I trong 15 giây

Lọ 2: Cồn 900 trong 15 giây Lọ 4: Cồn 1000II trong 15 giây + Bước 7: Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản qua lọ đựng Xylen I trong thời gian 1 – 2 phút sau đó đưa qua lọ Xylen II (để trong tủ ấm 370C) trong 2 phút

+ Bước 8: Gắn Baume canada

Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn Xylen trên tiêu bản Ấn nhẹ để dồn hết bọt khí ra ngoài

Đánh giá: Đem soi lên kính hiển vi quang học với vật kính 10 Nếu thấy nhân bắt màu xanh tím, bào tương bắt màu đỏ tươi, tiêu bản trong sáng, không có nước, không có bọt khí là được

* Xác định chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu