Nghiên cứu bệnh đơn bào đường máu Leucocytozoon ở đàn gà của tỉnh Thái Nguyên và biện pháp phòng trị

2005 [49], Leucocytozoon thuộc nhóm nguyên sinh động vật, thuộc bộ huyết bào tử trùng Heamosporidia ký sinh trong máu và cơ quan nội tạng của nhiều loài gia cầm, trong đó gà là loài mẫn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

BÁO CÁO TỔNG KẾT

ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC

“NGHIÊN CỨU BỆNH ĐƠN BÀO ĐƯỜNG MÁU LEUCOCYTOZOON Ở

ĐÀN GÀ CỦA TỈNH THÁI NGUYÊN VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ”

Mã số: ĐH2012-TN03-13

Chủ nhiệm đề tài: GS TS NGUYỄN THỊ KIM LAN

THÁI NGUYÊN, NĂM 2014

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

BÁO CÁO TỔNG KẾT

ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC

“NGHIÊN CỨU BỆNH ĐƠN BÀO ĐƯỜNG MÁU LEUCOCYTOZOON Ở

ĐÀN GÀ CỦA TỈNH THÁI NGUYÊN

Xác nhận của cơ quan chủ trì đề tài

(ký, họ tên, đóng dấu)

THÁI NGUYÊN, NĂM 2014

DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ

ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH

1 Danh sách những thành viên tham gia nghiên cứu đề tài:

- TS Nguyễn Văn Quang

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Việt Nam là nước có hơn 70% dân số làm nông nghiệp với hai ngành sản xuất chính: trồng trọt và chăn nuôi Trong đó, chăn nuôi đã và đang trở thành ngành mũi nhọn trong sản xuất nông nghiệp, góp phần quan trọng vào sự phát triển kinh tế - xã hội của đất nước

Trong những năm gần đây, chăn nuôi gia cầm đang chiếm một vị trí quan trọng và luôn được quan tâm hàng đầu vì nó có khả năng đáp ứng nhanh nhu cầu thực phẩm phục

vụ cho con người

Theo số liệu của Tổng Cục thống kê, tổng đàn gia cầm tại thời điểm 18/12/2013 là 314,7 triệu con, tăng 2,04% so với cùng thời điểm năm 2012 Số lượng gà là 231,8 triệu con, tăng 3,6% so với thời điểm cùng kỳ năm 2012 trong đó có trên 80% là gà thả vườn Sản lượng thịt gia cầm hơi giết thịt tăng 2,4% so với cùng kỳ năm 2012 [52]

Nguyễn Duy Hoan và cs (1999) [2] cho biết: hiệu quả của việc chăn nuôi gia cầm nhanh hơn và cao hơn so với ngành chăn nuôi khác Thịt và trứng gia cầm là thực phẩm

có giá trị dinh dưỡng cao, tương đối đầy đủ và cân bằng về các axit amin thiết yếu, đồng thời dễ chế biến, dễ ăn, ngon miệng, phù hợp với thị hiếu của người tiêu dùng ở mọi lứa tuổi

Vì những ưu thế nói trên, chăn nuôi gia cầm ngày càng có những bước phát triển vượt bậc về cả số lượng và chất lượng, đóng vai trò không thể thiếu trong sự phát triển kinh tế - xã hội, cải thiện đời sống, góp phần vào việc xóa đói giảm nghèo ở các địa phương

Ở nước ta hiện nay, các hộ gia đình chăn nuôi gà chủ yếu với số lượng ít, chuồng trại đơn giản; những gia đình chăn nuôi gà bán công nghiệp và công nghiệp vẫn còn ở quy mô nhỏ Vấn đề vệ sinh thú y trong chăn nuôi gà vẫn chưa được coi trọng, dịch bệnh thường xảy ra, gây trở ngại cho việc phát triển chăn nuôi, gây thiệt hại kinh tế cho nhiều gia đình và cơ sở chăn nuôi gà

Theo Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân (2002) [12]: ngành chăn nuôi gia cầm ở nước

ta còn gặp một số trở ngại do dịch bệnh thường xảy ra, trong đó trước hết phải kể đến

bệnh ký sinh trùng Đàn gia cầm thường nhiễm ký sinh trùng với tỷ lệ cao, diễn ra quanh năm, bất kể mùa vụ và thời tiết nào Hàng năm, thiệt hại kinh tế do bệnh ký sinh trùng gây ra chiếm một tỷ lệ khá cao trong tổng thu nhập của ngành

Việt Nam là một nước nằm trong khu vực khí hậu nhiệt đới, có thảm thực vật và

hệ động vật phong phú, đa dạng, thích hợp cho nhiều loài ký sinh trùng phát triển, ký sinh và gây bệnh Trong các bệnh ký sinh trùng ở gà, có những bệnh do nhóm đơn bào

ký sinh gây ra, chúng chiếm đoạt chất dinh dưỡng, tiết độc tố, gây ra những biến đổi bệnh lý làm cho gà gầy yếu, chậm lớn, giảm mạnh sức sản xuất thịt, trứng Đặc biệt, một

số bệnh đơn bào cũng gây ra các “ổ dịch cấp tính”, làm cho gà chết nhanh, với tỷ lệ cao

không kém các bệnh truyền nhiễm, trong đó có bệnh đơn bào đường máu Leucocytozoon Theo Shane S M (2005) [49], Leucocytozoon thuộc nhóm nguyên sinh động vật, thuộc bộ huyết bào tử trùng (Heamosporidia) ký sinh trong máu và cơ quan nội tạng của

nhiều loài gia cầm, trong đó gà là loài mẫn cảm nhất, đặc biệt là gà được nuôi theo phương thức chuồng hở hoặc bán chăn thả

Bệnh do các loài đơn bào Leucocytozoon ký sinh trong hồng cầu (đôi khi thấy trong

bạch cầu), gây ra xuất huyết, tan vỡ hồng cầu, dẫn đến thiếu máu và ỉa chảy phân xanh màu lá cây, làm gà chết với tỷ lệ cao tới 30 - 50% (Phạm Sỹ Lăng, Tô Long Thành, 2006 [14])

Thái Nguyên là tỉnh trung du miền núi phía Bắc có điều kiện thuận lợi cho chăn nuôi gà, đặc biệt chăn nuôi gà thả vườn Việc phòng bệnh bằng vacxin đã được người dân thực hiện khá nghiêm ngặt Tuy nhiên, nhiều đàn gà vẫn xuất hiện các triệu chứng như ỉa phân màu xanh lá cây, mặt tái, gà thiếu máu, gầy yếu Mổ khám thấy chất chứa trong diều, dạ dày, ruột có màu xanh, gan sưng to, lách sưng, xuất huyết, cơ đùi xuất huyết Các xét nghiệm vi sinh vật cho thấy, gà không mắc bệnh truyền nhiễm Do đó, việc chẩn đoán chính xác các đàn gà này mắc bệnh gì để có biện pháp phòng chống phù hợp là vấn đề cấp thiết

Xuất phát từ thực tiễn trên, chúng tôi thực hiện đề tài: "Nghiên cứu bệnh đơn bào

đường máu Leucocytozoon ở đàn gà của tỉnh Thái Nguyên và biện pháp phòng trị”

2 Mục đích và ý nghĩa của đề tài

2.1 Mục đích nghiên cứu

Nghiên cứu đề tài để có những kết luận khoa học về đặc điểm dịch tễ, lâm sàng,

biện pháp phòng trị bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà tại một số địa phương thuộc tỉnh

Thái Nguyên, từ đó có cơ sở khoa học để xây dựng quy trình phòng trị bệnh đơn bào

Leucocytozoon cho gà có hiệu quả cao

2.2 Ý nghĩa thực tiễn

Kết quả của đề tài là cơ sở để khuyến cáo người chăn nuôi gà áp dụng các biện

pháp phòng trị bệnh đơn bào Leucocytozoon, nhằm hạn chế tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon cho gà, hạn chế thiệt hại do Leucocytozoon gây ra, góp phần nâng cao năng suất chăn

nuôi, thúc đẩy chăn nuôi gà nói riêng và chăn nuôi gia cầm nói chung phát triển

Phần 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Cơ sở khoa học của đề tài

Ký sinh trùng là những sinh vật sống trong hoặc trên cơ thể một sinh vật khác (ký chủ), chiếm đoạt chất dinh dưỡng của ký chủ mà nó ký sinh Trong phân loại học, dựa theo cấu trúc cơ thể của ký sinh trùng mà người ta chia những ký sinh trùng động vật ra làm 3 ngành: nguyên trùng, giun sán và tiết túc Trong đó, nguyên trùng là ký sinh trùng

đơn bào (protozoa), cơ thể chỉ gồm một tế bào, thường ký sinh trong máu (Trypanosoma,

Histomonas, Leucocytozoon…) hoặc trong ruột ký chủ (cầu trùng) (Dương Công Thuận,

1995 [27])

Bệnh do đơn bào Leucocytozoon gây ra có ở nhiều nước trên thế giới Đơn bào Leucocytozoon lưu hành phổ biến trên đàn gà ở một số nước Châu Á: ở Trung Quốc

(7,1%), Thái Lan (13 - 18%), Malaysia (15 - 31%)

Leucocytozoon ký sinh trong hồng cầu gà (đôi khi ký sinh trong bạch cầu, tùy theo

loài), làm tan vỡ hồng cầu, gây thiếu máu và gây chết gà với tỷ lệ cao, ảnh hưởng đến thu nhập của người chăn nuôi gà Bệnh cũng được phát hiện ở nhiều loài chim hoang dã

1.1.1 Đặc điểm của đơn bào Leucocytozoon ký sinh ở gà

1.1.1.1 Vị trí của đơn bào Leucocytozoon trong hệ thống phân loại nguyên bào

Đơn bào nói chung là những nguyên sinh động vật không có khí quan di động, thân thể khi thì trần và có thể biến dạng được, khi thì có màng bọc và có hình dạng nhất định Đơn bào sống ký sinh ở các tế bào, các mô hay dịch thể, có thể suốt đời hoặc những giai đoạn đầu của nó Chúng tự nuôi dưỡng bằng cách thẩm thấu dinh dưỡng chiếm đoạt của ký chủ qua bề mặt cơ thể

Các loài đơn bào thuộc giống Leucocytozoon ký sinh trong máu của nhiều loài gia

cầm, thủy cầm, chim và nhiều loài chim hoang dã Gà là vật chủ cảm thụ đơn bào

Leucocytozoon mạnh nhất Bệnh được Ziemann phát hiện lần đầu tiên vào năm 1898 Từ

đó đến nay, trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu về bệnh

Theo Levine N D (1985) [38], Leucocytozoon gây bệnh cho gà có vị trí trong hệ

thống phân loại như sau:

Ngành Protozoa

Lớp Sporozoa

Bộ Haemosporidia

Họ Leucocytozoidae

Giống Leucocytozoon

Loài L caullergyi (Mathis et Leger, 1909)

L sabrazeis (Mathis et Leger, 1910)

L simondi (Mathis et Leger, 1910)

L smithi (Laveran et Lucet, 1905)

L andrewsi (Atchley, 1951)

L schufneri (Prowazek, 1912)

L schoutedeni (Rodham Pons et Bequaert, 1913)

Đến nay, các nhà khoa học đã phát hiện 107 loài Leucocytozoon spp ký sinh và gây

bệnh cho gà, gà tây, vịt, ngỗng và nhiều loài chim hoang dã

1.1.1.2 Đặc điểm hình thái các loài Leucocytozoon ở gà

Theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs (1999) [8]: cơ thể đơn bào thường do một tế bào rất nhỏ cấu thành, tổ chức của đơn bào gồm màng tế bào, chất nguyên sinh, hạt hoặc nhân tế bào

Đơn bào Leucocytozoon ký sinh ở hồng cầu, bạch cầu, các nội tạng của gà và các

loài chim ở hai dạng: dạng tiểu thể hình dùi trống, hoặc hình thoi nhọn hai đầu với kích thước từ 15 - 20 µm, dạng bào tử hình trứng với kích thước từ 20 - 25 µ m

Phạm Sỹ Lăng và cs (2005) [13] cho biết: các loài Leucocytozoon spp có nhiều

hình dạng khác nhau trong quá trình phát triển ở ký chủ cũng như ở ký chủ trung gian

Kích thước của chúng thay đổi tuỳ thuộc dạng và loài đơn bào Leucocytozoon

- Dạng bào tử (Sporozoit): hình thuẫn, hình elip nhọn 2 đầu, kích thước 10 - 15 µm Thể này thấy ở tuyến nước bọt của dĩn (véc tơ truyền đơn bào Leucocytozoon)

- Dạng tiểu thể (Merozoit): hình tròn, hình trứng, kích thước 15 - 20 µm

- Dạng giao tử (Schizont): hình elip, thon nhỏ 2 đầu, kích thước 20 - 45 µ m

- Dạng đại giao tử (Macrogametocyt): hình đa giác, gần tròn, kích thước 350 - 400

µ m

- Dạng tiểu phối tử (Microgametocyt): hình thuẫn, hình trứng, kích thước 20 - 25

µ m

Theo Phạm Sỹ Lăng và Tô Long Thành (2006) [14]; Phạm Sỹ Lăng và cs (2008)

[15], hai loài L caullergyi và L sabrazeis có hình dạng gần giống nhau, chỉ khác về tính

chất gây bệnh Chúng có dạng hình cầu, hình bầu dục, hình lưỡi liềm; kích thước 20 x 5

µ m, không có sắc tố khi nhuộm Giemsa, ký sinh ở hồng cầu của gà, gà rừng

1.1.1.3 Vòng đời của Leucocytozoon ở gà

Saif Y M (2003) [47] cho rằng: giai đoạn sinh bào tử diễn ra trên vật chủ trung gian và có thể được hoàn thành sau 3 - 4 ngày Noãn nang phát triển và có thể tìm thấy trong đường tiêu hóa của dĩn trong vòng 12 giờ sau khi dĩn hút máu Sau đó các noãn nang này di chuyển đến tuyến nước bọt của dĩn, có thể tìm thấy noãn nang ở tuyến nước bọt dĩn sớm nhất sau khi dĩn hút máu gà bệnh 18 ngày

Phạm Sỹ Lăng và cs (2005) [13] cho biết: các loài Leucocytozoon có vòng đời rất phức tạp, cần vật chủ trung gian là các loài dĩn thuộc giống Simulium spp và Culiloides spp Tuỳ đặc điểm thời tiết khí hậu của các vùng sinh thái khác nhau mà thành phần loài

Các bào tử từ máu xâm nhập vào các tế bào nội quan như: gan, lách, phổi, thận, tổ

chức cơ để trở thành giao tử (Schizont) Các giao tử vào hồng cầu phát triển thành tiểu thể (Merozoit), giao tử thể (Gametocyt), đại giao tử (Marcrogametocyt) và tiểu giao tử (Mircrogametocyt)

Khi dĩn hút máu gia cầm bệnh, vào cơ thể dĩn, các tiểu thể lại phát triển thành

noãn nang (Oocyst), rồi bào tử (Sporozoit) trong vách dạ dày dĩn và vòng đời lại được lặp

lại

Tác giả Lê Minh Thành [56] cho biết vòng đời của Leucocytozoon bao gồm các

giai đoạn như sau:

* Giai đoạn ở tế bào chủ:

Gia cầm bị dĩn - ký chủ trung gian truyền bệnh đốt và truyền mầm bệnh (các bào

tử Sporozoit) vào cơ thể Khi vào cơ thể gia cầm, mầm bệnh theo máu tới gan, lách, thận,

não… Tại đây, chúng xâm nhập vào các tế bào của ký chủ và bắt đầu sinh sản vô tính

bằng hình thức liệt phân, kết quả từ 1 Sporozoit đã tạo ra một lượng lớn Merozoit Chính những Merozoit này mới có khả năng xâm nhập vào máu và ký sinh ở hồng cầu (quá

trình này mất 4 - 6 ngày hoặc kéo dài hơn tùy loài)

Quá trình sinh sản của đơn bào ở trong tế bào gan của vật chủ không có chu kỳ nhất

định Sau khi phát triển ở gan, tất cả các Merozoit đều vào máu

* Giai đoạn ở trong hồng cầu:

Giai đoạn này tạo thể tự dưỡng và thể phân liệt trong đó có thể mang giới tính

(giao tử đực và giao tử cái) Giai đoạn ở trong hồng cầu bắt đầu từ khi các Merozoit từ gan vào máu, tiếp cận với bề mặt hồng cầu có những thụ thể Receptor tương ứng và xâm

nhập vào hồng cầu qua 5 giai đoạn:

- Nhận diện và gắn bám

- Hình thành điểm tiếp giáp

- Tạo nên màng không bào liên tiếp màng hồng cầu

- Lọt vào màng không bào qua điểm tiếp nối chuyển động

- Hồng cầu hàn kín sau khi Merozoit lọt vào

Sau khi lọt vào trong hồng cầu, Merozoit hình thành không bào và phát triển trong

hồng cầu theo kiểu có chu kỳ, qua các thể:

Thể tự dưỡng (Trophozoit): gồm thể Trophozoit non (thể nhẫn), thể Trophozoit phát triển (thể amip) và thể Trophozoit già

Thể phân liệt (Schizont) gồm: Schizont non và Schizont già

Sau khi kết thúc 1 chu kỳ phát triển, các Merozoit trong Schizont phá vỡ hồng cầu

vào máu, một số bị thực bào hoặc chết, một số xâm nhiễm vào hồng cầu khác và tiếp tục phát triển theo chu kỳ tương tự

Sau một số chu kỳ, có những Merozoit tiếp tục xâm nhập vào hồng cầu, nhưng không tạo thành các thể Merozoite nữa mà phát triển thành thể có giới tính: Gametocyte (Macrogametocyt - giao tử cái và Microgametocyt - giao tử đực) Sau đó giao tử đực và giao tử cái kết hợp với nhau tạo thành hợp tử (Zygot), gây phá vỡ hồng cầu và di chuyển trong máu

Khi ký chủ trung gian là dĩn hút máu gia cầm, mầm bệnh sẽ vào ký chủ trung gian

và tiếp tục vòng đời

Trong ký chủ trung gian, hợp tử nở ra và phát triển thành dạng trưởng thành (thoi trùng) Chúng di chuyển lên tuyến nước bọt của dĩn và cư trú ở đó

Khi dĩn hút máu gia cầm, các thoi trùng theo tuyến nước bọt vào máu của gia cầm

và bắt đầu vòng đời mới

\

Hình 1.1 Sơ đồ vòng đời đơn bào Leucocytozoon ở gà

Tuy nhiên, Lê Văn Năm (2011) [19] lại cho rằng: chu kỳ phát triển sinh học của

Leucocytozoon gồm 2 giai đoạn chính Giai đoạn thứ nhất là giai đoạn phát triển trong cơ

thể ký chủ trung gian truyền bệnh và giai đoạn hai là giai đoạn phát triển trong cơ thể vật

chủ:

* Giai đoạn phát triển trong cơ thể ký chủ trung gian truyền bệnh (dĩn) Đây là

giai đoạn hình thành bào tử nang (Sporogony), giai đoạn này kết thúc trong vòng 3 - 4

ngày Vì trong máu của gia cầm bệnh đã có sẵn giao tử đực và giao tử cái, hoặc hợp tử

của Leucocytozoon, nên ngay sau khi hút máu gia cầm bệnh, các tế bào máu chứa mầm

bệnh bị dịch tiêu hóa của ký chủ trung gian (dĩn) làm tan vỡ và giải phóng ra các giao tử

và các hợp tử Chúng nhanh chóng bám vào thành dạ dày và chui vào các tế bào niêm

mạc dạ dày, ruột của dĩn Ở đó chúng bắt đầu phát triển thành bào tử nang (Oocyst) Toàn

bộ quá trình này chỉ diễn ra trong vòng 12 giờ kể từ thời điểm dĩn hút máu gia cầm bệnh lần cuối

Trong mỗi bào tử nang bắt đầu có quá trình sinh trưởng và phát triển thành 4 thoi

trùng (Sporozoit) Các thoi trùng này nhanh chóng lớn lên và di hành đến cư trú trong

tuyến nước bọt của ký chủ trung gian truyền bệnh Chỉ có các thoi trùng này mới có khả năng truyền bệnh Ký chủ trung gian truyền bệnh cho gia cầm thụ cảm thông qua việc hút máu của gia cầm bệnh, sau đó hút máu của gia cầm khỏe và truyền nước bọt kèm theo thoi trùng gây bệnh vào cơ thể gia cầm khỏe Như vậy, kể từ khi dĩn hút máu gia cầm bệnh lần cuối đến lúc có khả năng truyền bệnh phải mất 18 ngày

* Giai đoạn phát triển của Leucocytozoon trong cơ thể gia cầm thụ cảm Ngay sau

khi thoi trùng theo nước bọt của ký chủ trung gian truyền bệnh xâm nhập vào cơ thể gia

cầm, chúng lột xác và hình thành nên các thể phân lập trung gian (Merozoit), các thể

phân lập trung gian này bám ngay vào các tế bào máu và theo máu đi khắp cơ thể Từ đây, chúng phát triển theo hai hướng:

Hướng thứ nhất: Chúng chui vào và ký sinh trong các tế bào máu, sinh trưởng và phát triển theo phương thức tự nhân đôi để tạo ra các thể phân lập thế hệ 1 (Schizont - 1) Các Schizont thế hệ 1 này lớn lên nhanh chóng và tiết ra một chất làm tan hồng cầu, chất

đó được gọi là chất kháng hồng cầu (anti- erythrocyte) Dưới tác động cơ học của nhiều thể phân lập đã sinh ra trong mỗi hồng cầu, và dưới tác động của chất kháng hồng cầu, một số lượng lớn hồng cầu bị phá vỡ và giải phóng ra nhiều thể phân lập thế hệ 1, đây là nguyên nhân chính dẫn đến thiếu máu, tăng Hemobilirubin, máu trở nên loãng, nhớt và khó đông Các thể phân lập thế hệ 1 lập tức tấn công và ký sinh tiếp vào các tế bào hồng

cầu mới, chúng lớn lên và lại nhân đôi để hình thành thể phân lập thế hệ 2 (Schizont - 2),

cứ tiếp tục như vậy chúng hình thành thể phân lập thế hệ 3 (Schizont - 3) thì dừng lại và bắt đầu hình thành các giao tử (Gametocyt) Giao tử đực có kích thước nhỏ gọi là Microgametocyt và giao tử cái có kích thước lớn hơn gọi là Macrogametocyt Kết thúc

giai đoạn sinh sản vô tính và bắt đầu giai đoạn sinh sản hữu tính

Giai đoạn sinh sản hữu tính xảy ra trong các tế bào hồng cầu Giao tử đực chui vào giao tử cái để thụ tinh và hình thành nên hợp tử Hợp tử được bọc bởi một màng và được gọi là bào tử, có kích thước trung bình 5,5 - 14,5 µm Sau đó, chúng phát triển thành các bào tử hình thoi, có kích thước lên đến 45 µ m Chỉ có các thoi trùng này mới

có khả năng lây truyền thông qua côn trùng hút máu gia cầm bệnh và truyền thoi trùng gây bệnh cho gia cầm khỏe

Hướng thứ hai: Sau khi các thoi trùng theo máu di hành khắp các nơi trong cơ thể,

một phần chúng cư trú tại các cơ quan như lách, thận, phổi, gan, dạ dày tuyến, dạ dày cơ, ruột non, buồng trứng, ống dẫn trứng và não Tại đây, chúng lột xác và chui vào ký sinh trong các tế bào nội mô, tế bào lưới và đại thực bào của các cơ quan kể trên của gia cầm thụ cảm Trong các tế bào đó chúng bắt đầu sinh trưởng, lớn lên và sinh sản theo phương thức tự nhân đôi, làm vỡ nát các tế bào của các cơ quan nội tạng ký chủ Sau đó chúng

phát triển và tạo nên thể phân lập cực đại gọi là Megaloschizont với kích thước lên đến

400 µm và làm tắc nhiều mao mạch của các cơ quan ký chủ Để tiếp tục phát triển, trong

mỗi Megaloschizont hình thành nên 2 thể phân lập trung gian Merozoit, chúng lớn lên và rời khỏi Megaloschizont, rời khỏi tế bào của cơ quan ký chủ, chui vào các tế bào máu để

ký sinh và quá trình phát triển được tiếp tục lặp lại như hướng thứ nhất - kết thúc giai đoạn sinh sản vô tính trong các tế bào nội mô ở các cơ quan nội tạng của gia cầm thụ cảm

* Tính chuyên biệt của Leucocytozoon

Theo Johannes Kaufmann (1996) [36] mỗi loài Leucocytozoon chỉ ký sinh trong

một hoặc một số ký chủ nhất định

1.1.2 Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà

1.1.2.1 Những thiệt hại kinh tế do bệnh Leucocytozoon gây ra

Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà không gây thành ổ dịch lớn nguy hiểm, ít làm

cho gà chết đột ngột và chết hàng loạt (trừ trường hợp đặc biệt) Song, đơn bào này đã gây tác hại nghiêm trọng, làm cho sự sinh trưởng và phát triển của gà bị ngừng trệ, cơ thể gầy còm, thiếu máu, khả năng tăng trọng giảm, số lượng và chất lượng của thịt, trứng giảm, dẫn đến năng suất chăn nuôi giảm thấp

Olsen O W (1986) [43] cho biết: ngoài gà (tỷ lệ nhiễm cao và mắc bệnh nặng nhất),

vịt nhiễm Leucocytozoon cũng thường bị bệnh ở thể nặng, các triệu chứng lâm sàng thể hiện

rõ rệt, tỷ lệ tử vong cao

Theo Shane S M (2005) [49], Leucocytozoonosis thường gặp ở các nước nhiệt

đới, đặc biệt là ở những nơi mà các trang trại nằm gần ao, hồ Đàn gia cầm mắc bệnh giảm mạnh tốc độ tăng trưởng, tỷ lệ chết cao có thể lên đến 100% nếu không được chữa trị kịp thời

Phạm Sỹ Lăng và cs (2005) [13] cho rằng: gà bị bệnh đơn bào đường máu

Leucocytozoon ở thể cấp tính có thể chết đột ngột do xuất huyết các nội quan và thiếu

máu cấp Gà mái giảm đẻ hoặc ngừng đẻ, kém ăn, giảm tăng trọng và gầy yếu nhanh

Gà mắc bệnh sẽ chết sau 3 - 6 ngày với tỷ lệ tới trên 50% số gà bị bệnh

Lê Văn Năm (2011) [19] cho biết: tại một số địa phương như Bắc Giang, Thái

Nguyên, Bắc Ninh, Hải Dương, Vĩnh Phúc, bệnh đơn bào Leucocytozoon xuất hiện ở hầu

hết các đàn gà nuôi thả vườn với tỷ lệ giao động từ 40 - 70%, gây thiệt hại vô cùng to lớn cho người chăn nuôi

1.1.2.2 Dịch tễ học bệnh Leucocytozoon ở gà

Lê Đức Quyết và cs (2009) [21] cho biết: tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon phụ thuộc

vào rất nhiều yếu tố như: tuổi gia cầm, giống, địa hình, vùng sinh thái, phương thức chăn nuôi

Theo Lê Văn Năm (2011) [19] bệnh do Leucocytozoon gây ra có tính chu kỳ rõ rệt,

phụ thuộc vào mùa sinh sản và phát triển của côn trùng hút máu truyền bệnh

Loài gây bệnh và động vật mắc bệnh

Trong tự nhiên, gà, gà rừng, chim trĩ và các loài chim thuộc bộ gà (Galliformes)

đều có thể bị bệnh Bệnh từ gà nhà có thể truyền lây sang gà rừng qua ký chủ trung gian

và ngược lại

Phạm Sỹ Lăng và cs (2005 [13]; 2010 [17]) cho rằng: có 4 loài đơn bào giống

Leucocytozoon chủ yếu ký sinh và gây bệnh cho gà:

* L caulleryi (Mathis et Leger, 1909)

Loài này ký sinh và gây bệnh cho gà nhà, gà rừng ở các nước thuộc Đông và Đông Á: Nhật Bản, Malaysia, Thái Lan, Việt Nam, các bang thuộc khu vực Bắc Mỹ

Vật chủ trung gian của L caulleryi là các loài dĩn thuộc giống Culicoides như: C arakava, C circumscriptus, C odibilis

* L sabrazeis (Mathis et Leger, 1910)

Loài này ký sinh và gây bệnh cho gà và chim hoang dã ở các nước Đông Nam Á: Philippine, Thái Lan, Malaysia, Việt Nam

Vật chủ trung gian của L sabrazeis: các loài dĩn Culicoides spp và Simulium spp

* L simondi (Mathis et Leger, 1910)

L simondi ký sinh và gây bệnh cho vịt nhà và vịt trời, ngỗng nhà và ngỗng trời,

các loài thuỷ cầm nuôi và hoang dã ở Mỹ, Canada, các nước vùng Balkan và Việt Nam

Vật chủ trung gian: các loài dĩn Simulium spp

* L smithi (Laveran et Lucet, 1905)

Loài này ký sinh ở gà tây tại các bang thuộc vùng Đông Mỹ (Bắc Dakota, Nebraska), CHLB Đức, các nước vùng Balkan

Vật chủ trung gian của L smithi là các loài dĩn Simulium spp

Lương Văn Huấn và Lê Hữu Khương (1997) [4] cho biết, loài L caullergyi có đặc

điểm như sau: cơ thể đơn bào hơi tròn, kích thước 15,0 - 15,5 µm Tế bào vật chủ cũng

tròn, kích thước 20 µm Ở trong cơ thể dĩn - KCTG, Zygot có dạng tròn đường kính 14

µ m, sau đó kéo dài, kích thước 21 µ m, chúng xuyên qua vách ruột tạo thành Oocyst hình gần tròn, kích thước 4 - 14 x 5-14 µ m Oocyst phát triển thành thoi trùng (Sporozoit) Các

thoi trùng đến tuyến nước bọt của dĩn có kích thước 7 - 11 x 1 - 2 µm

Tuổi mắc bệnh: gà ở các lứa tuổi đều bị bệnh, tuổi gà càng cao tỷ lệ và cường độ

nhiễm bệnh càng tăng

Mùa vụ: gà mắc bệnh ở tất cả các mùa trong năm, nhưng nhiễm nhiều và nặng ở

vụ Hè và vụ Xuân

Điều kiện vệ sinh thú y: điều kiện vệ sinh thú y đối với chuồng trại và khu vực

xung quanh chuồng trại, dụng cụ và môi trường chăn nuôi là một trong những yếu tố có

ảnh hưởng lớn tới khả năng nhiễm bệnh Leucocytozoon của gà Điều này có liên quan

mật thiết với sự tồn tại và phát triển của các loài dĩn hút máu - ký chủ trung gian truyền bệnh

Yếu tố stress: các yếu tố strees như chuồng trại chật chội, khí hậu ẩm, thấp, thức

ăn kém dinh dưỡng đóng vai trò thúc đẩy mức độ và tốc độ lây lan bệnh Leucocytozoon

ở gà

1.1.2.3 Cơ chế sinh bệnh của bệnh Leucocytozoon

Bệnh lây truyền từ gà bệnh sang gà khoẻ qua đường máu nhờ vật chủ trung gian là

các loài dĩn thuộc họ Culicoides spp và Simulium spp… Dĩn hút máu của gà bệnh có đơn

bào ký sinh trong máu Vào cơ thể dĩn, đơn bào phát triển qua 3 giai đoạn, cuối cùng thành bào tử nằm ở tuyến nước bọt của dĩn Khi dĩn mang mầm bệnh hút máu gà khoẻ, bào tử sẽ được truyền cho gà khoẻ và gây bệnh cho gà

Các bào tử xâm nhập vào các tế bào nội quan như: gan, lách, phổi, thận, tổ chức

cơ để trở thành bào tử (Schizont); các bào tử vào hồng cầu phát triển thành tiểu thể (Merozoit), giao tử thể (Gametocyt), đại giao tử (Marcrogametocyt) và tiểu giao tử

(Mircrogametocyt) Chúng phát triển, phá huỷ tế bào hồng cầu và gây hoại tử các cơ

quan tổ chức, đặc biệt là lách và gan Đồng thời chúng tiết ra chất antierythrocyte làm tan hồng cầu

1.1.2.4 Triệu chứng và bệnh tích bệnh Leucocytozoon

* Triệu chứng bệnh Leucocytozoon

Orlov F M (1975) [20] cho biết: gà tây thường mắc bệnh trước 12 tuần tuổi Gà bệnh bỏ ăn, suy yếu toàn thân, ít vận động, rối loạn vận động Gà tây bắt đầu chết từ 2 - 3 ngày sau khi xuất hiện những triệu chứng đầu tiên

Theo tài liệu của Viện Thú y Quốc gia (2001) [30], (2002) [31], triệu chứng chủ

yếu của gà mắc bệnh do đơn bào Leucocytozoon gây ra là:

- Ho ra máu và chết đột ngột

- Thiếu máu, đặc biệt mào và tích do thiếu máu nên có màu tím tái

- Nhịp thở nhanh

- Phân có màu xanh

- Giảm sản lượng trứng và trứng có vỏ mỏng (với gà mái đẻ)

- Xuất huyết da chân

Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2009) [10] cho biết: bệnh thường xảy ra thành dịch tại một số khu vực vùng núi và trung du thuộc các nước Đông Nam Á, nhất là vào mùa

hè và mùa xuân, khi các loài dĩn - ký chủ trung gian phát triển và hoạt động mạnh

Thời gian ủ bệnh từ 4 - 7 ngày

Gà bệnh thể hiện các triệu chứng đặc trưng sau:

Thể cấp tính: gà ở lứa tuổi từ 1 - 3 tháng chết đột ngột do xuất huyết các nội tạng, hồng cầu tan vỡ hàng loạt, gây bần huyết cấp tính; ỉa chảy nặng, phân có màu xanh lá cây, thường có lẫn máu Gà mái đang đẻ bị bệnh sẽ giảm đẻ hoặc ngừng đẻ do đơn bào tác động vào cơ quan sinh sản Gà trưởng thành mắc bệnh sẽ giảm tăng trọng, gầy yếu nhanh, nhưng chết ít hơn gà con Gà ở lứa tuổi từ 1 - 3 tháng bị bệnh sẽ chết sau 3 - 6 ngày với tỷ lệ cao

Lê Văn Năm (2011) [19] cho biết, triệu chứng của bệnh Leucocytozoon gồm các

thể như sau:

- Thể quá cấp:

Trong suốt thời gian ủ bệnh, gà bị sốt cao nhưng có thể vẫn ăn uống bình thường nên người chăn nuôi hầu như không để ý, hoặc không quan sát thấy những biểu hiện bất

thường của đàn gà Bệnh bỗng dưng bùng phát lẻ tẻ khi gặp các yếu tố strees bất lợi, với các triệu chứng điển hình như: đột nhiên ho hoặc hắt hơi, mào, tích tái nhợt, ộc máu ra miệng, mũi, đôi khi ở cả hậu môn rồi chết Một số khác lại có triệu chứng lừ đừ hoặc có triệu chứng thần kinh, nhảy sốc lên rồi rơi xuống nền, dãy dụa và chết Cả hai trường hợp trên đều do dập vỡ gan, hoặc xuất huyết não bởi sự phát triển quá mạnh của các

Leucocytozoon trong các cơ quan đó

Số gà chết như mô tả trên không sảy ra ồ ạt, nhưng tăng dần qua mỗi ngày Nếu không được chẩn đoán đúng và điều trị kịp thời, tỷ lệ chết sẽ rất cao

- Thể cấp tính:

Đây là thể bệnh phổ biến nhất và gắn liền với thời tiết ẩm ướt do mưa phùn kéo dài Khí hậu ẩm thấp tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển, sinh sôi, nảy nở của ký chủ trung gian truyền bệnh

Trong những đàn gà mắc bệnh ở thể này, lúc đầu chỉ thấy một số ít gà có biểu hiện sốt cao, mào thâm tái, sau vài ngày trở nên trắng bệch Khi cắt tiết gà thấy máu rất loãng, khó đông

Gà bị bệnh giảm ăn, ít vận động, đi lại không vững Gà bị tiêu chảy, phân có màu xanh đậm

Gà bệnh gầy sút nhanh, yếu dần và rất khó thở, thở khò khè, phải vươn cổ ra để thở Nếu độ ẩm không khí cao, chuồng nuôi ẩm thấp thì gà bệnh càng khó thở và rất dễ chết Tuy nhiên, gà chết không ồ ạt, nhưng tỷ lệ chết tăng dần qua mỗi ngày Lúc đầu gà chỉ chết vào ban đêm, về sau chết bất kỳ lúc nào, tỷ lệ chết có thể lên đến 70% Bệnh nặng hơn nếu gà bị bệnh ghép với CRD, Newcastle

Ở gà mái: triệu chứng thường thấy là giảm sản lượng trứng, đồng thời khối lượng trứng của gà bệnh cũng giảm rõ rệt, vỏ trứng mềm, dễ vỡ, hoặc ngược lại vỏ rất dầy Khi

cho ấp trứng của những đàn gà đẻ bị mắc bệnh Leucocytozoon thì tỷ lệ ấp nở giảm, gà mới

nở bị chết yểu trong 3 - 5 ngày đầu chiếm tỷ lệ rất cao

- Thể á cấp tính:

Đây là thể bệnh được chuyển sang từ thể cấp tính, ở những gà có sức đề kháng tốt hoặc ở gà trên 1 năm tuổi Bệnh thường thấy ở gà đang vào thời kỳ đẻ tốt nhất Bệnh cũng có thể xảy ra ở thủy cầm, hoang cầm và ít thấy ở gia cầm khác nuôi trên cạn Gà

bệnh sốt cao, giảm ăn, tiêu chảy, ho hen, chết rải rác Tỷ lệ chết ngày càng tăng và có thể lên đến 30 - 40 % tổng đàn

- Thể mạn tính:

Đây là thể bệnh thường gặp ở gà bị nhiễm số lượng Leucocytozoon ít

Ngoài ra, các loài chim hoang dã, gia cầm sống sót sau khi mắc bệnh hoặc những gia cầm, thủy cầm được chăn nuôi quảng canh cũng có thể bị bệnh ở thể mạn tính

Bệnh có những biểu hiện không rõ ràng, gà vẫn ăn uống bình thường, đôi khi giảm ăn tức thời Các triệu chứng như ủ rũ, động kinh hoặc đi lại không vững đều ngắt quãng, không xuất hiện liên tục Gà bệnh thiếu máu, lờ đờ, tỷ lệ chết không đáng kể nhưng chúng mang mầm bệnh trong nhiều năm và trở thành nguồn bệnh tiềm tàng nguy hiểm

Nguyễn Văn Sửu (2012) [22] cho biết: gà bị bệnh do Leucocytozoon sp gây ra

đều có triệu chứng chung như phân xanh màu lá cây, mắt đỏ, mào tích tái, chân khô và ít vận động, sốt…

* Bệnh tích bệnh Leucocytozoon

Mổ khám gà bệnh thấy: xuất huyết đỏ sẫm ở tất cả các phủ tạng (tim, lách, phổi, thận) và

tổ chức cơ Đôi khi cũng có các điểm hoại tử trắng trên mặt gan giống như bệnh tụ huyết trùng gia cầm Ngoài ra, có thể thấy bệnh tích ở đường tiêu hóa như: niêm mạc đường tiêu hoá bị tổn thương và xuất huyết

Olsen O W (1986) [43] cho biết: gà bị nhiễm đơn bào Leucocytozoon ở cường độ

nặng, có các bệnh tích điển hình thì tỷ lệ tử vong cao Các cơ quan nội tạng ký chủ có số lượng đơn bào ký sinh khác nhau Các đơn bào ký sinh trong các cơ quan được bao bọc

bởi một lớp do tế bào lympho và bạch cầu đơn nhân lớn tạo nên thể Megaloschizont

Theo Lâm Thị Thu Hương (2005) [6], khi mổ khám và quan sát bằng mắt thường, thấy trên cơ thể gà có những nốt mầu trắng đục hay vàng, đỏ hoặc chuyển sang đen, có kích thước từ 0,2 - 0,5 mm, đôi khi lên đến 1 mm Những nốt này là bệnh tích do một

giai đoạn phát triển của đơn bào L caulleryi gây ra Đơn bào Leucocytozoon được phát hiện ở nhiều vị trí trên cơ thể gà Một gà có thể nhiễm Leucocytozoon cùng lúc trên 6 cơ quan phủ tạng Sự nhiễm Leucocytozoon thường gặp nhiều nhất ở các cơ quan như phổi,

gan, thận, mô cơ

Khi mổ khám 56 gà bị bệnh Leucocytozoon tại Thái Nguyên, Nguyễn Văn Sửu

(2012) [22] cho biết: tỷ lệ xuất hiện bệnh tích là 51/56, chiếm 90,07% Hầu hết gà mổ

khám đều có những bệnh tích đặc trưng của bệnh như: máu loãng, khó đông, tổ chức cơ nhạt, các cơ quan nội tạng như gan, lách, thận sưng, xuất huyết

Lê Văn Năm (2011) [19] cho biết: bệnh tích đại thể của bệnh do đơn bào

Leucocytozoon gây ra ở gà rất điển hình, được quan sát thấy trong nhiều cơ quan nội tạng

như: gan, lách, thận, tim, phổi, ruột non, não, buồng trứng và ống dẫn trứng Những biến đổi đại thể ở các cơ quan nội tạng như sau:

Gan: sưng to, mềm nhũn và dễ vỡ, trên bề mặt gan thấy nhiều điểm trắng Đây là kết quả của các thể phân lập của Leucocytozoon ở gan tạo nên, làm ròn, xốp và tắc nghẽn

các mao mạch, dẫn đến xuất huyết tràn lan, thậm chí vỡ mao mạch, dẫn đến vỡ gan, chảy máu vào xoang bụng

Lách: sưng to, ròn, dễ vỡ, trên bề mặt lách có nhiều điểm xuất huyết hoặc hoại tử Thận: sưng to, xuất huyết

Buồng trứng và ống dẫn trứng: buồng trứng bị viêm, thoái hóa; ống dẫn trứng

sưng, dầy lên và có nhiều điểm xuất huyết

Tim: tim to, cơ tim dầy lên nhưng trương lực cơ bị giảm, cơ trở nên mềm nhão

Phổi: sung huyết nặng

Ruột non, dạ dày tuyến, dạ dày cơ: viêm tăng sinh, dầy lên, đôi khi thấy các điểm

hoại tử hoặc nốt loét

Não: các đại hợp bào phát triển ở não gây tắc nghẽn các mao mạch, dẫn đến bị

phù nề, sung huyết và xuất huyết não

Nguyễn Thị Kim Lan (2012) [11] cho biết: gà bị bệnh Leucocytozoon có bệnh tích

chủ yếu là: xuất huyết gan, lách, thận, phổi, cơ; gan, thận và lách sưng to có thể gấp 2 – 3

lần so với bình thường Tỷ lệ cơ quan có Leucocytozoon ký sinh biến động từ 17,39% –

phải do ký sinh trùng đường máu Leucocytozoon gây ra hay không, người ta thường sử

dụng kết hợp các phương pháp chẩn đoán để mang lại hiệu quả cao hơn

Chẩn đoán lâm sàng: gà lứa tuổi 1 - 3 tháng chết đột ngột, các phủ tạng đều

bị xuất huyết; ỉa chảy, phân xanh có lẫn máu làm cho gà chết với tỷ lệ cao

Chẩn đoán xét nghiệm: lấy mẫu máu và phủ tạng, dàn tiêu bản, nhuộm Giemsa và

soi kính để tìm đơn bào gây bệnh

Phạm Sỹ Lăng và cs (2009) [16] cho rằng: có thể sử dụng phương pháp làm tiêu bản máu, dàn mỏng, nhuộm Giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi tìm ký sinh trùng, và sử

dụng phương pháp ngưng kết trên gel thạch để phát hiện kháng thể kháng Leucocytozoon spp

Lê Đức Quyết và cs (2009) [21] cho biết: gần đây, các phương pháp huyết thanh học cũng đã được áp dụng để chẩn đoán bệnh như phương pháp Latex - agglutination, phương pháp khuyếch tán trên thạch

Chẩn đoán phân biệt:

Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2009) [10] cho biết: cần chẩn đoán phân biệt với bệnh tụ huyết trùng gia cầm Triệu chứng và bệnh tích của bệnh đơn bào đường máu ở gia cầm cũng giống như bệnh tụ huyết trùng gia cầm Nhưng bệnh đơn bào đường máu chỉ làm chết gà ở lứa tuổi 1 - 3 tháng Tuy nhiên, bệnh tụ huyết trùng làm gà chết ở tất cả các lứa tuổi Bệnh tụ huyết trùng gia cầm điều trị bằng Streptomycin có hiệu quả nhưng bệnh do đơn bào đường máu điều trị bằng Streptomycin lại không có hiệu quả

Theo Lê Văn Năm (2011) [19], cần chẩn đoán phân biệt bệnh do đơn bào

Leucocytozoon gây ra với các bệnh sau:

Bệnh Marek: không có các biến đổi ở gan, lách, thận phổi ở gà dưới 45 ngày tuổi và trên 1 năm tuổi Bệnh Marek không có ở thủy cầm và ít gặp ở hoang cầm

Bệnh bạch huyết (Leucosis): bệnh ít gặp ở gia cầm dưới 6 tháng tuổi Bệnh có rất nhiều thể khác nhau như Leucosis dạng võng mô, Leucosis hồng cầu, Leucosis tủy xương, Leucosis limfo Mỗi thể bệnh khác nhau chúng lại có những đặc điểm riêng khác

biệt

Bệnh sốt rét gà: các biểu hiện về dịch tễ và lâm sàng của bệnh sốt rét gà rất giống

với bệnh do Leucocytozoon gây ra Tuy nhiên, khi mổ khám thì bệnh sốt rét gà không có những biểu hiện giống như bệnh Leucocytozoon Gan của gà bị sốt rét có màu xanh đen

hoặc đen, kích thước nhỏ hơn bình thường, túi mật căng chứa đầy mật

- Không nên xây chuồng ở những vùng gần đồng ruộng, vùng có ao hồ hay vùng

có diện tích mặt nước lớn, vì đây là môi trường thích hợp cho ký chủ trung gian phát triển

* Trị bệnh

Theo Nguyễn Thị Kim Lan (2012) [11], có thể sử dụng một trong các loại Sulfonamide sau để điều trị gà bệnh:

- Pyrimethamin: dùng liều 0,5 - 1 ppm/ kg thức ăn, cho gà ăn 2 tuần liên tục

- Sulfadimethoxin: dùng liều 50 – 75 mg/ kg thức ăn, cho gà ăn liên tục 1 - 2 tuần

- Sulfaquinoxalin: dùng liều 50 mg/ kg thức ăn, cho gà ăn liên tục 1 - 2 tuần

Để nâng cao hiệu quả điều trị, dùng phối hợp thuốc Sulfonamide với Vitamin B1

và Vitamin C

Orlov F M (1975) [20] cho biết: aterbin có tác dụng đến giao tử bào thành thục Tuy nhiên, Saif Y M (2003) [47] cho rằng: hiệu quả điều trị bệnh

Leucocytozoonsis còn hạn chế Đối với L simondi, điều trị không có hiệu quả

Pyrimethamine (1 ppm) và Sulfadimethoxine (10 ppm) sử dụng đồng thời để điều trị

bệnh cũng không có hiệu quả với L caullergyi

Theo Lê Văn Năm (2011) [19]: Các loại thuốc có chứa các nguyên liệu như: Sulfamonomethoxin, Salfadimethoxin, Clopidol đều có tác dụng phòng trị tốt bệnh do

Leucocytozoon gây ra Tác giả cho biết thêm, hiện nay bệnh ký sinh trùng đường máu

thường bị bội nhiễm và ghép với nhiều bệnh khác Do đó, cần phải phối hợp các phác đồ điều trị thì mới có hiệu quả điều trị cao

1.2 Tình hình nghiên cứu về bệnh Leucocytozoon

1.2.1 Tình hình nghiên cứu trong nước

Theo Hoàng Thạch (2004) [23], nếu nhiễm Leucocytozoon ở cường độ nhẹ thì chưa

thấy biến đổi gì ở các cơ quan nội tạng, nhưng nếu nhiễm vừa và nặng (3 - 6 ký sinh trùng trên 1 vi trường) thì xuất hiện sự thoái hoá, biến màu, thậm chí hoại tử từng đám nhỏ; nếu kéo dài thì tăng sinh, làm giảm chức năng hoạt động hoặc bị phá hủy, rõ nhất là gan và lách

Lâm Thị Thu Hương và cs (2005) [6] cho biết: tần suất xuất hiện các nang

Leucocytozoon trên một số cơ quan phủ tạng của gà như sau: ở cơ là 96,22%, phổi là

92,45%, thận là 86,80%, gan là 81,13%

Theo Lê Đức Quyết và cs (2009) [21]: tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon phụ thuộc vào

rất nhiều yếu tố như: tuổi gia cầm, giống, địa hình, vùng sinh thái, phương thức chăn

nuôi… Kết quả nghiên cứu của tác giả về Leucocytozoon ở gà tại một số tỉnh Nam Trung

Tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon cao nhất là ở gà giai đoạn > 6 tuần tuổi (15,6%), kế

đến là ở độ tuổi 4 - 6 tuần (13,5%) và thấp nhất là ở độ tuổi dưới 4 tuần (7,6%)

Bằng phương pháp nhuộm Giemsa và định loại đơn bào Leucocytozoon ký sinh

trên đàn gà ở một số tỉnh Nam Trung Bộ (căn cứ vào hình thái, vị trí, màu sắc, kích thước

của các giao tử Gametocyt ký sinh trong máu gà), tác giả cũng đã xác định có 2 loài ký sinh trên đàn gà là L caullergyi và L sabrazesi

Khi khảo sát tình hình nhiễm ký sinh trùng đường máu trên gà thịt tại hai tỉnh Vĩnh Long và Sóc Trăng, Nguyễn Hữu Hưng (2011) [5] cho biết: đàn gà thịt nhiễm ký sinh trùng đường máu với tỷ lệ khá cao (30,47%) Trong đó tỷ lệ nhiễm ở Vĩnh Long là

32,38% và ở Sóc Trăng là 28,22% Tác giả cũng cho biết gà Tam Hoàng có tỷ lệ nhiễm cao hơn hai giống Newlohman và Brown AAA Gà nuôi nuôi theo kiểu chuồng hở tỷ lệ nhiễm cao hơn so với kiểu chuồng kín

1.2.2 Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài

Trong 91 con chim sẻ ở thung lũng Jordan (Israel) được xét nghiệm máu, người ta

đã xác định được tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon là 79% [53]

Ở một số gà con 9 - 20 ngày tuổi tại Stewart Island, đã phát hiện 100% số mẫu xét

nghiệm dương tính với đơn bào Leucocytozoon [54]

Ở Liên Xô (cũ), Nikitin N K và Artemenko M N (1927) đã kiểm tra máu chim

trời ở Ucrain và tìm thấy Leucocytozoon ở 7% số chim (dẫn theo Orlov F M, 1975,

[20])

Sehgal R N., và cs (2006) [48], đã xét nghiệm máu của 148 gà ở làng Uganda và

Cameroon, xác định được tỷ lệ nhiễm Leucocytozoon schoutedeni là 18,3%

Peter Shurulinkov và Vassil Golemansky (2003) [46] đã phát hiện có 6 loài

Leucocytozoon trong máu của 9/ 17 loài chim được nghiên cứu

Huchzermeyer F W và Sutherland B (1978) [35] lần đầu tiên đã phát hiện được

Leucocytozoon smithi ở phía Bắc Châu Phi, tác giả cho rằng Simulium nigritarse là ký

chủ trung gian của ký sinh trùng này

Morii T và cs (1984) [39] đã thử nghiệm lây nhiễm những thoi trùng

Leucocytozoon được chiết từ tuyến nước bọt của dĩn, kết quả cho thấy: các thoi trùng

được phân lập vào ngày thứ 2 sau khi dĩn hút máu gia cầm bệnh thì không gây nhiễm được cho gà Các thoi trùng được phân lập vào ngày thứ 3 thì có khả năng gây nhiễm cho

gà

Morii T và cs (1986) [40] đã phân lập các thoi trùng từ tuyến nước bọt của

Culicoides arakawa và gây bệnh cho gà Kết quả thấy thoi trùng xuất hiện trong ngoại vi

máu gà vào ngày thứ 15 và không còn vào ngày thứ 26 sau khi gây nhiễm Kháng nguyên hòa tan được tìm thấy trong huyết thanh của gà gây nhiễm trong khoảng 10 - 17 ngày, kháng thể tương đồng xuất hiện ở ngày thứ 17 sau gây nhiễm

Nakamura K và cs (2001) [42] đã nghiên cứu ảnh hưởng có hại của Leucocytozoon đến

khả năng sản xuất trứng của gà, thậm chí có thể làm gà ngừng đẻ Tác giả đã phát hiện thấy một

số lượng lớn thể phân liệt thế hệ 2 trong buồng trứng và ống dẫn trứng của gà bệnh, gây phù và làm giảm áp lực của các mô lân cận các mô có đơn bào ký sinh

Steele E J và cs (2001) [50] cho biết: sự phát triển của Leucocytozoon smithi có những nét tương đồng với sự phát triển của các loài Plasmodium và Haemoproteus trong

ký chủ trung gian

Bằng phương pháp PCR để định loại đơn bào ký sinh ở gà, Hellgren O và cs

(2004) [34] đã tìm thấy 22 loài ký sinh trùng khác nhau, gồm 4 loài Haemoproteus, 8 loài Plasmodium và 10 loài Leucocytozoon trong 6 loài chim tước mà tác giả nghiên cứu

Shane S M (2005) [49] cho biết: việc kết hợp Clopidol anticoccidial trong thức

ăn chăn nuôi với các hàm lượng khác nhau từ 125 - 250 ppm đã làm giảm tỷ lệ nhiễm

Leucocytozoonosis ở gà tây tại Hoa Kỳ

Omori S và cs (2008) [44] đã phân tích bộ gen của Leucocytozoon caulleryi Kết quả đã mô tả được bộ gen nhiễm sắc thể của L caulleryi với chiều dài 5.959 bp

Tully T N và cs (2009) [51] cho rằng: việc sử dụng Chloriquine (250 mg/ 120 ml nước uống trong 1 - 2 tuần) hoặc pyrimethamine có thể điều trị được bệnh do

Leucocytozoon gây ra Có thể sử dụng kết hợp pyrimethamine (1 ppm) với salfadimethoxin (10 ppm) trong thức ăn chăn nuôi để phòng bệnh do L caulleryi và sử dụng Clopidol (0,0125 - 0,025%) trong thức ăn để phòng bệnh do L smithi gây ra ở gà

và gà tây

Nghề chăn nuôi vịt tại các bán đảo phía Bắc của Michigan - Seney đã bị ngừng trệ

do đơn bào Leucocytozoon gây bệnh làm chết một số lượng lớn vịt, gây thiệt hại nghiêm

trọng về kinh tế cho người chăn nuôi [57]

Mullen G R., Durden L (2009) [41] cho biết: gà tây nuôi trên đồng cỏ Attwater

đã bị tấn công bởi ký sinh trùng đường máu thuộc giống Leucocytozoon, gây thiệt hại

nghiêm trọng cho chăn nuôi

Omori S và cs (2010) [45] đã sử dụng phương pháp phân tích, đếm tế bào dòng

chảy, tách Leucocytozoon để xác định sự có mặt của đơn bào trong máu Phương pháp

này có thể xác định được những mẫu máu bị nhiễm ký sinh trùng đường máu mà các phương pháp thông thường khác không tìm thấy được

Hill A G và cs (2010) [33] sử dụng phương pháp PCR để kiểm tra 107 mẫu máu chim cánh cụt mắt vàng từ 4 khu vực khác nhau ở phía Nam đảo Oamaru Kết quả thấy,

83% số mẫu kiểm tra dương tính với Leucocytozoon

Có thể sử dụng kết hợp pyrimethamine (1 ppm) với salfadimethoxin (10 ppm)

trong thức ăn chăn nuôi để phòng bệnh do L caulleryi và và sử dụng Clopidol (0,0125 – 0,025%) trong thức ăn để phòng bệnh do L smithi gây ra [55]

PHẦN 2 ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

* Đối tượng nghiên cứu

- Gà nuôi tại tỉnh Thái Nguyên

- Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà

* Địa điểm nghiên cứu

- Đề tài được thực hiện ở các nông hộ, các trại chăn nuôi gà gia đình và tập thể với các quy mô khác nhau tại tỉnh Thái Nguyên

- Địa điểm xét nghiệm mẫu:

+ Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên

+ Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương

* Thời gian nghiên cứu: Từ 01/2012 đến 12/2013

2.2 Vật liệu nghiên cứu

* Vật liệu nghiên cứu

- Mẫu máu gà (để xét nghiệm đơn bào Leucocytozoon và các chỉ số huyết học)

- Gà chết và gà bị bệnh do đơn bào Leucocytozoon (để mổ khám bệnh tích và thu

thập bệnh phẩm)

- Các cơ quan có bệnh tích điển hình của bệnh Leucocytozoon (để làm tiêu bản vi

thể)

- Gà khỏe và gà bệnh để thử nghiệm hiệu quả điều trị của một số phác đồ và xây

dựng quy trình phòng trị bệnh Leucocytozoon cho gà

- Các mẫu dĩn (để xác định loài dĩn - véc tơ truyền đơn bào Leucocytozoon cho

gà)

* Dụng cụ và hoá chất

- Kính hiển vi quang học, kính lúp

- Bộ kim lấy máu

- Tube tráng chất chống đông máu (dung dịch EDTA 1%)

- Thuốc điều trị bệnh Leucocytozoon ở gà: Daimentol, Sutrim-NT, Tricory-sul,

Biomunliquid; thuốc phun diệt dĩn: Hantox-200

- Lam kính và lamen

- Thuốc nhuộm giemsa

- Dầu Bạch dương, cồn 960, cồn methanol

- Hoá chất và các dụng cụ thí nghiệm khác

2.3 Nội dung nghiên cứu

2.3.1 Thành phần loài đơn bào Leucocytozoon gây bệnh ở gà tại Thái Nguyên

- Thành phần loài đơn bào Leucocytozoon gây bệnh ở gà tại Thái Nguyên

2.3.2 Đặc điểm dịch tễ bệnh đơn bào Leucocytozoon ở gà tại Thái Nguyên

* Tình hình nhiễm đơn bào Leucocytozoon ở gà tại tỉnh Thái Nguyên

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà tại các địa phương

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo địa hình

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo mùa vụ

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tuổi gà

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo phương thức chăn nuôi

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo điều kiện vệ sinh thú y

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo loại gà

- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tính biệt

* Nghiên cứu về ký chủ trung gian truyền Leucocytozoon cho gà

- Sự phân bố vật môi giới trung gian truyền bệnh cho gà ở các địa phương

- Xác định loài ký chủ trung gian truyền bệnh Leucocytozoon

- Đặc điểm hoạt động của ký chủ trung gian truyền bệnh

2.3.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý và lâm sàng bệnh Leucocytozoon ở gà

- Xác định các biểu hiện lâm sàng của gà bị bệnh

- Xác định một số chỉ tiêu huyết học của gà bệnh

- Xác định bệnh tích đại thể của gà bị bệnh do Leucocytozoon

- Biến đổi vi thể ở một số khí quan của gà bệnh

2.3.4 Nghiên cứu biện pháp phòng và trị bệnh cho gà ở tỉnh Thái Nguyên

* Nghiên cứu lựa chọn phác đồ điều trị có hiệu quả cao

- Thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà trên diện hẹp

- Thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà trên diện rộng

- Lựa chọn phác đồ điều trị an toàn và có hiệu quả cao để ứng dụng điều trị cho gà trên thực địa

* Nghiên cứu biện pháp phòng bệnh Leucocytozoon cho gà

* Đề xuất biện pháp phòng trị bệnh Leucocytozoon cho gà ở tỉnh Thái Nguyên

2.4 Bố trí thí nghiệm và phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Phương pháp bố trí theo dõi xác định loài Leucocytozoon ký sinh ở gà tại Thái Nguyên

Các tiêu bản máu sau khi xét nghiệm thấy có đơn bào đường máu ký sinh, chúng tôi tiến hành phân loại theo căn cứ vào hình thái, kích thước, của các loại đơn bào đã phát hiện được theo khóa định loại của Levine N D (1985) [38]

2.4.2 Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở

gà tại các địa phương

2.4.2.1 Bố trí thu thập mẫu

Bố trí lấy mẫu máu gà theo phương pháp lấy mẫu phân tầng

Chọn 6 huyện, mỗi huyện chọn 5 xã, mỗi xã lấy 66 - 68 mẫu

Mỗi gà làm 3 tiêu bản máu

Dung lượng mẫu thu thập cho đề tài được tính toán theo công thức:

n = 1,96 x p (1 – p)

d2 Trong đó:

n: là số mẫu tối thiểu cần đạt được p: là tỷ lệ gia súc nhiễm bệnh dự kiến (1 – p): là tỷ lệ gia súc không nhiễm bệnh

d2: là độ chính xác mong muốn

2.4.2.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Lecocytozoon ở gà tại các địa phương

* Phương pháp thu thập mẫu

Mẫu máu được thu thập ngẫu nhiên từ gà nuôi tại các nông hộ, các trại chăn nuôi gà ở các địa phương của Tỉnh Thái Nguyên

Chuẩn bị những phiến kính mới đã được tẩy mỡ bằng cách ngâm và rửa xà phòng, sau

đó ngâm trong cồn 960 trong 3 giờ rồi lau khô bằng khăn mềm không có xơ Đồng thời, chọn những lamen kích thước 2 x 2 cm, rìa thật phẳng và nhẵn

Trước khi lấy mẫu máu xét nghiệm, quan sát kỹ các biểu hiện lâm sàng của gà Dùng kim lấy 1 giọt máu tươi của gà tại tĩnh mạch cánh, đặt lên phiến kính, cách bờ phiến kính khoảng 1 cm Đặt cạnh của một lamen lên giọt máu, nghiêng 450 với phiến

kính Khi giọt máu đã tràn ra khắp cạnh của lamen thì đẩy lamen về phía trước, làm cho máu được dàn thành một lớp mỏng và đều trên phiến kính Cố định tiêu bản bằng cồn methanol Làm 3 tiêu bản máu/ gà Tiêu bản được ghi số thứ tự bằng bút chì mỡ Ghi nhật ký thí nghiệm các thông tin: chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, giống gà, tuổi gà, phương thức chăn nuôi, tính biệt, trạng thái và màu sắc phân, điều kiện vệ sinh thú y, các

biểu hiện lâm sàng (nếu có)

* Chuẩn bị thuốc nhuộm giemsa cơ bản

Theo Phan Lục (2006) [18], dung dịch giemsa cơ bản bao gồm:

* Phương pháp nhuộm giemsa

Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [9] cho biết: Nhuộm tiêu bản máu bằng thuốc nhuộm giemsa gồm 3 bước như sau:

- Bước 1: Pha thuốc nhuộm giemsa

+ Giemsa cơ bản: 1 phần + Nước cất trung tính (pH = 7,2): 9 phần Nước cất để sẵn trong 1 cốc nhỏ có mỏ (100 ml), lấy dung dịch giemsa cơ bản bằng 1 pipet, nhỏ chậm giemsa vào cốc nước, không được lắc cốc

- Bước 2: Đổ chậm dung dịch nhuộm vào hộp nhuộm cho ngập các tiêu bản, đậy nắp hộp nhuộm để tránh bụi

Thời gian nhuộm 45 - 50 phút

- Bước 3: lấy tiêu bản

Dùng 1 pince kẹp, cặp lần lượt từng tiêu bản và để nghiêng dưới vòi nước cất chảy nhẹ (pH = 7,2) cho trôi hết thuốc nhuộm dư thừa Sau đó dựng nghiêng tiêu bản vào cạnh 1 cái hộp,

để khô tự nhiên

* Phương pháp kiểm tra tìm Leucocytozoon trên tiêu bản máu nhuộm giemsa

Nhỏ 1 giọt dầu bạch dương lên tiêu bản, kiểm tra tiêu bản dưới kính hiển vi vật

kính dầu, độ phóng đại 10 x 90 hoặc 10 x 100 để tìm Leucocytozoon

Những mẫu máu tìm thấy đơn bào Leucocytozoon được xác định là có nhiễm,

ngược lại là không nhiễm

Cường độ nhiễm được xác định bằng tỷ lệ % số hồng cầu có đơn bào ký sinh và quy định các mức cường độ nhiễm: nhẹ, trung bình và nặng

≤ 5% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm nhẹ (+)

> 5% - 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm trung bình (++)

> 10% hồng cầu có đơn bào ký sinh: nhiễm nặng (+++)

2.4.3 Bố trí lấy mẫu và xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo địa hình

2.4.3.1 Phương pháp bố trí theo dõi

Căn cứ vào độ cao của các địa phương nghiên cứu so với mực nước biển, phân ra làm 3 vùng địa hình: vùng núi, vùng trung du, vùng đồng bằng

Chúng tôi tiến hành thu thập mẫu máu gà tại các địa phương theo các vùng sinh thái như sau:

- Vùng núi: 139 mẫu

- Vùng trung du: 142 mẫu

- Vùng đồng bằng: 138 mẫu

2.4.3.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo địa hình

Tiến hành thu thập mẫu máu gà, phiết kính, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon trong máu gà ở các địa hình khác nhau theo phương pháp như

- Mùa thu: 141 mẫu

- Mùa đông: 137 mẫu

2.4.4.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo mùa vụ

Tiến hành thu thập mẫu máu gà, phiết kính, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon trong máu gà ở các mùa vụ khác nhau theo phương pháp như

Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các lứa tuổi khác nhau theo phương pháp như đã trình bày ở mục 2.4.2.2

2.4.6 Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở

gà theo phương thức chăn nuôi

2.4.6.1 Bố trí lấy mẫu

Chúng tôi thu thập mẫu máu gà tại các địa phương theo 3 phương thức chăn nuôi như sau:

- Nuôi truyền thống: 163 mẫu

- Nuôi bán công nghiệp: 172 mẫu

- Nuôi công nghiệp: 172 mẫu

2.4.6.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở gà theo phương thức chăn nuôi

Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các phương thức chăn nuôi khác nhau theo phương

pháp như đã trình bày ở mục 2.4.2.2

2.4.7 Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tình trạng vệ sinh thú y

2.4.7.1 Bố trí lấy mẫu

Chúng tôi tiến hành thu thập mẫu máu gà tại các địa phương theo các tình trạng VSTY như sau:

Tình trạng VSTY phân ra theo 3 mức:

- VSTY tốt: chuồng trại cao ráo, thoáng mát, sạch sẽ, thường xuyên quyét dọn chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi, định kỳ phun thuốc khử trùng, tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, phát quang cây cỏ, khơi thông cống rãnh

- VSTY trung bình: không thường xuyên quét dọn chuồng nuôi, khu vực xung quan`h chuồng nuôi còn có những vũng nước đọng, không thường xuyên tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi và phát quang cây cỏ, không thường xuyên khơi thông cống rãnh ở gần khu vực chăn nuôi

- VSTY kém: Chuồng nuôi và khu vực xung quanh chuồng nuôi ẩm thấp, có nhiều vũng nước đọng, có nhiều bụi cây rậm rạp, không tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, không khơi thông cống rãnh

Số lượng mẫu thu thập theo mỗi tình trạng VSTY như sau:

Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon của gà ở các tình trạng VSTY khác nhau theo phương pháp

Tiến hành thu thập mẫu máu, phiết tiêu bản, nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển

vi tìm đơn bào Leucocytozoon ở gà theo từng loại gà theo phương pháp như đã trình bày ở

2.4.9.2 Phương pháp xác định loài dĩn

Phân loại dĩn theo khóa định loài của Gosevic A B (1973) và Eldridge B F., Edman J

D (2004) [32] tại Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương

2.4.10 Phương pháp xác định quy luật hoạt động của dĩn – véc tơ truyền bệnh Leucocytozoon cho gà

* Phương pháp xác định quy luật hoạt động theo các tháng trong năm

Theo dõi sự xuất hiện và hoạt động của dĩn để xác định quy luật hoạt động của dĩn

ở tất cả các tháng trong năm, từ đó xác định được tháng dĩn bắt đầu hoạt động, những tháng dĩn hoạt động mạnh và những tháng dĩn ngừng hoạt động Kết quả này sẽ là cơ sở khoa học khuyến cáo người chăn nuôi có biện pháp diệt dĩn – véc tơ truyền

Leucocytozoon cho gà phù hợp, hạn chế tác hại do bệnh Leucocytozoon gây ra ở gà

Những tháng dĩn hoạt động nhiều được kí hiệu (+++), tháng dĩn hoạt động bình thường thì ký hiệu (++), tháng dĩn hoạt động ít thì ký hiệu (+), dĩn ngừng hoạt động ký hiệu (-)

* Phương pháp xác định quy luật hoạt động theo giờ trong ngày

Qua theo dõi, chúng tôi thấy dĩn hoạt động nhiều vào thời gian từ tháng 3 đến tháng 9 hàng năm Do vậy, chúng tôi tiến hành theo dõi sự hoạt động theo giờ trong ngày của dĩn ở các tháng này Thời gian trong ngày chia theo các khoảng như sau: từ 6 – 9 h, 9 – 11 h, 11 –

13 h, 13 – 15 h, 15 – 18 h

Những khoảng thời gian trong ngày dĩn hoạt động nhiều được kí hiệu (+++), hoạt động bình thường thì ký hiệu (++), hoạt động ít ký hiệu (+), ngừng hoạt động ký hiệu (-)

2.4.11 Phương pháp bố trí theo dõi và xác định đặc điểm bệnh lý, lâm sàng bệnh Leucocytozoon ở gà

2.4.11.1 Phương pháp xác định những biến đổi lâm sàng của gà

Theo dõi tất cả những gà có kết quả kiểm tra tiêu bản máu dương tính với đơn bào

* Bố trí lấy mẫu xét nghiệm

Dự kiến tiến hành 3 đợt xét nghiệm máu gà, mỗi đợt đều có gà khỏe và gà bị bệnh

đơn bào Leucocytozoon Mỗi đợt xét nghiệm lấy mẫu máu của 15 gà khỏe và 15 gà bị bệnh đơn bào Leucocytozoon

Lấy máu gà ở tĩnh mạch cánh (1 ml/ con) vào ống nghiệm có tráng chất chống đông máu

* Phương pháp xét nghiệm một số chỉ số máu của gà khỏe và gà bị bệnh Leucocytozoon:

- Số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu, hàm lượng huyết sắc

tố, thể tích trung bình hồng cầu, tốc độ lắng hồng cầu, dải phân bố kích thước hồng cầu

và công thức bạch cầu được xác định bằng máy Osmetech OPTI - CCA/Blood Gasanalfzen

2.4.12.3 Phương pháp xác định những biến đổi đại thể và vi thể ở phủ tạng và cơ của

gà do Leucocytozoon gây ra

* Phương pháp bố thí theo dõi

Nội dung này thực hiện trên những gà có triệu chứng của bệnh và khi xét nghiệm máu

thấy có Leucocytozoon trong máu ở cường độ nặng

*Phương pháp xác định bệnh tích đại thể

Mổ khám gà theo phương pháp mổ khám toàn diện của Skrjabin K I (1928) để

xác định những biến đổi đại thể ở các phủ tạng và cơ do đơn bào Leucocytozoon gây ra

Quan sát bằng mắt thường và kính lúp cơ và các nội quan như thận, lách, tim, phổi, ruột Ghi lại những biến đổi của gà mổ khám

Chụp ảnh vùng có bệnh tích điển hình

- Lấy mẫu bệnh phẩm (tim, gan, tụy, phổi, lách, thận, cơ): cắt phần bệnh phẩm có

nhiều tổn thương do Leucocytozoon gây ra

- Cố định bệnh phẩm bằng dung dịch formon 5%

- Rửa nước 12 - 24 h (rửa dưới dòng nước chảy nhẹ) để trôi hết formol

- Khử nước: Dùng cồn tuyệt đối để rút nước từ trong bệnh phẩm ra

- Làm trong bệnh phẩm: Ngâm bệnh phẩm qua hệ thống xylen để làm trong bệnh phẩm

- Tẩm parafin: Ngâm bệnh phẩm đã làm trong vào các cốc đựng paraffin nóng chảy, để ở tủ ấm nhiệt độ 500C

- Đổ Block: Rót parafin nóng chảy vào khuôn giấy rồi đặt miếng tổ chức (bệnh phẩm) đã tẩm parafin vào Khi parafin đông đặc hoàn toàn thì bóc khuôn Sửa lại Block cho vuông vắn

- Cắt và dán mảnh: Cắt bệnh phẩm trên máy cắt Microcom, độ dày mảnh cắt khoảng

3 - 4 µm Dán mảnh cắt lên phiến kính bằng dung dịch Mayer (lòng trắng trứng 1 phần, glyxerin 1 phần; 1 ml hỗn hợp trên pha trong 19 ml nước cất)

- Nhuộm tiêu bản bằng phương pháp Hematoxilin – Eosin

- Gắn lamen bằng Baume canada, dán nhãn và đọc kết quả dưới kính hiển vi

Tỷ lệ tiêu bản có bệnh tích theo từng loại cơ quan được xác định bẳng tỷ lệ phần trăm số tiêu bản có bệnh tích trên tổng số tiêu bản nghiên cứu

2.4.12 Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà

2.4.12.1 Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon trên gà thí nghiệm

* Bố trí thí nghiệm

Bố trí thí nghiệm sử dụng 3 phác đồ điều trị cho những gà có kết quả xét nghiệm máu

là nhiễm Leucocytozoon với cường độ nhiễm nặng theo sơ đồ sau:

Diễn giải Lô 1 Lô 2 Lô 3

Phác đồ sử dụng

và liều lượng

- Daimentol Soda (1 - 2 g/ 1lít nước)

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

- Sutrim - NT (1 g/1lít nước)

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

- T - coryzin (1,5 – 2g/ lít nước)

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

Thí nghiệm được lặp lại 3 lần

* Thành phần các thuốc có trong phác đồ như sau:

- Daimentol Soda: Sulfamonomethoxine Sodium 100%

* Phương pháp xác định hiệu lực và độ an toàn của phác đồ điều trị

Sử dụng 3 phác đồ điều trị cho những gà bị bệnh Leucocytozoon Sau khi cho gà

uống thuốc, hàng ngày lấy máu xét nghiệm bằng phương pháp dàn tiêu bản máu, nhuộm Giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi để xác định hiệu quả của từng phác đồ điều trị Tiếp tục theo dõi như vậy đến ngày thứ 10 sau dùng thuốc, nếu không tìm thấy đơn bào

Leucocytozoon trong máu thì đánh giá thuốc có hiệu lực triệt để đối với Leucocytozoon, nếu vẫn tìm thấy Leucocytozoon trong máu nhưng với số lượng giảm rõ rệt thì đánh giá thuốc có hiệu lực với Leucocytozoon nhưng chưa triệt để Nếu số lượng Leucocytozoon

trong máu không giảm hoặc giảm không đáng kể so với trước khi dùng thuốc thì đánh

giá thuốc không có hiệu lực với Leucocytozoon

Theo dõi gà sau dùng thuốc về các chỉ tiêu: ăn uống, vận động, màu sắc mào yếm,

và các phản ứng khác để xác định thuốc có an toàn hay không

2.4.13.2 Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

- Sutrim- NT (1 g/1lít nước)

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

- T – coryzin (1,5 – 2g/ lít nước)

- Biomunliquid (0,5 - 1ml/1lít nước)

* Phương pháp xác định hiệu lực

Sử dụng 3 phác đồ điều trị cho những gà bị bệnh Leucocytozoon Sau khi cho gà sử

dụng thuốc 15 ngày, xét nghiệm máu của những gà đã điều trị bằng phương pháp dàn tiêu bản máu và nhuộm Giemsa để xác định hiệu quả của từng phác đồ điều trị Nếu

không tìm thấy đơn bào Leucocytozoon trong máu thì đánh giá thuốc có hiệu lực triệt để đối với Leucocytozoon, nếu vẫn tìm thấy Leucocytozoon trong máu nhưng với số lượng giảm rõ rệt thì đánh giá thuốc có hiệu lực với Leucocytozoon nhưng chưa triệt để Nếu số lượng Leucocytozoon trong máu không giảm hoặc giảm không đáng kể so với trước khi dùng thuốc thì đánh giá thuốc không có hiệu lực với Leucocytozoon

2.4.13.3 Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà trên diện rộng

* Phương pháp theo dõi

Tiếp tục sử dụng 3 phác đồ trên để thử nghiệm điều trị bệnh Leucocytozoon cho số

lượng lớn gà bệnh theo sơ đồ:

Xác định hiệu lực của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà trên diện rộng

tương tự như phương pháp xác định hiệu lực trên diện hẹp

* Phương pháp xác định độ an toàn của 3 phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho gà

Xác định độ an toàn của thuốc bằng cách theo dõi trạng thái cơ thể và các phản ứng của gà trước và sau khi dùng thuốc Các chỉ tiêu theo dõi chủ yếu gồm: ăn uống, vận động, màu sắc mào yếm và các phản ứng khác

2.4.14 Thử nghiệm quy trình phòng bệnh Leucocytozon cho gà

* Bố trí thí nghiệm

Thí nghiệm được bố trí trên 2 đàn gà nuôi bán chăn thả bằng phương pháp phân lô

so sánh, tương đối đồng đều về các yếu tố: tuổi, khối lượng, điều kiện chăm sóc nuôi

dưỡng, không bị bệnh Leucocytozoon và các bệnh ký sinh trùng, bệnh truyền nhiễm

Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon trước

thử nghiệm

Lô thí nghiệm được áp dụng các biện pháp phòng bệnh Leucocytozoon cho gà như

sau:

- Vệ sinh chuồng trại, thức ăn, nước uống, dụng cụ chăn nuôi

- Phát quang bụi rậm xung quanh khu vực chăn thả gà

- Định kỳ phun thuốc diệt dĩn – véc tơ truyền Leucocytozoon cho gà

- Sử dụng thuốc để phòng bệnh Leucocytozoon cho gà

Lô đối chứng không được áp dụng các biện pháp trên

* Phương pháp theo dõi

Bắt đầu thử nghiệm chúng tôi cân khối lượng gà của cả hai lô đối chứng và thử nghiệm Bắt đầu áp dụng các biện pháp phòng bệnh cho gà ở lô thử nghiệm Sau 2 và 3 tháng thử nghiệm, chúng tôi tiến hành kiểm tra tỷ lệ và cường độ nhiễm bệnh

Leucocytozoon ở gà cả hai lô thí nghiệm và đối chứng, đồng thời cân khối lượng gà để so sánh hiệu quả của việc áp dụng các biện pháp phòng bệnh Leucocytozoon cho gà

2.5 Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu thu thập được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn

Thiện, 2008, [25]) và trên phần mềm Minitap 14.0

Phần 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Thành phần loài đơn bào Leucocytozoon gây bệnh cho gà tại tỉnh Thái Nguyên

Các tiêu bản máu nhiễm Leucocytozoon được chúng tôi giữ lại và tiến hành định loài đơn bào Leucocytozoon Kết quả được trình bày ở bảng 3.1

Bảng 3.1: Thành phần loài Leucocytozoon gây bệnh cho gà

tại tỉnh Thái Nguyên

Địa phương

(huyện, thị)

Loài Leucocytozoon Số loài

phát hiện

Leucocytozoon caulleryi

Leucocytozoon sabrazesi

Leucocytozoon smithi

Ghi chú: (+): Xuất hiện

(- ): Không xuất hiện Kết quả trình bày ở bảng 3.1 cho thấy:

Đã phát hiện và xác định được ba loài đơn bào thuộc giống Leucocytozoon gây

bệnh cho gà tại tỉnh Thái Nguyên là: Leucocytozoon caulleryi, Leucocytozoon sabrazesi

và Leucocytozoon smithi Loài Leucocytozoon caulleryi phân bố rộng rãi và phổ biến hơn loài Leucocytozoon sabrazesi và Leucocytozoon smithi Loài Leucocytozoon caulleryi xuất hiện ở 100% số địa phương nghiên cứu, loài Leucocytozoon sabrazesi xuất hiện ở 66,67% và Leucocytozoon smithi chỉ thấy ở 33,33% địa phương nghiên cứu Loài Leucocytozoon caulleryi là những đơn bào có dạng hơi tròn, đường kính từ 15 – 15,5 µm

Khi ký sinh trong tế bào vật chủ, đơn bào này làm cho tế bào vật chủ có hình tròn