thực hành vi sinh vật thú y (Escherichia coli và Salmonella cholerasuis)

Trong chương trình học của ngành chăn nuôi thú y thì vi sinh vật là môn quan trọng bởi qua nó ta hiểu biết về vi khuẩn, virus từ đó xác định chính xác bệnh trên vật nuôi. trong đó e. coli và sal là những loài vi khuẩn thường gặp gây bệnh trên nhiều vật nuôi, để phát hiện và điều trị bệnh do e. coli hoặc sal gây nên ta cần hiểu rõ đặc tính sinh hóa, sinh trường của chúng.

Th i gian: t 18/01/2016 đ n 21/01/2016ời gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ừ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ến 21/01/2016

Đ a đi m: phòng 119 khu thí nghi mịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ệm

Đ i tối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ượng thí nghiệm: vi khuẩn ng thí nghi m: vi khu n ệm ẩn Escherichia coli (E coli) và Salmonella (Sal.)

K t qu c n đ t: ến 21/01/2016 ả cần đạt: ần đạt: ạt:

- Xác đ nh địa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ượng thí nghiệm: vi khuẩn c vi khu n ẩn E coli và Sal thu n ch ng và thí nghi m các chần đạt: ủng và thí nghiệm các chỉ ệm ỉtiêu sinh hóa đ i v i vi khu n thu n.ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ới vi khuẩn thuần ẩn ần đạt:

- Hi u bi t cách làm và đ c k t qu kháng sinh đ ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ến 21/01/2016 ọc kết quả kháng sinh đồ ến 21/01/2016 ả cần đạt: ồ

- Ph i m t áo blouse khi vào phòng thí nghi m.ả cần đạt: ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ệm

- Trưới vi khuẩn thuần.c, trong và sau khi ti n hành thí nghi m c n r a tay b ng c n 70 đến 21/01/2016 ệm ần đạt: ửa tay bằng cồn 70 để ằng cồn 70 để ồ ểm: phòng 119 khu thí nghiệmsát trùng

- Trong quá trình thí nghi m c n tuân th các quy đ nh c a phòng thíệm ần đạt: ủng và thí nghiệm các chỉ ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ủng và thí nghiệm các chỉ

1.1.1/ D ng c và thi t b ụng cụ và thiết bị ụng cụ và thiết bị ết bị ị:

- Que c y th ng, que c y vòng đã đấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ượng thí nghiệm: vi khuẩn c thanh trùng

- Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring nghi m đã thanh trùng, đĩa petriệm

- Óng nghi m đ ch a môi trệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ứa môi trướng vận chuyển ưới vi khuẩn thuần.ng v n chuy nận chuyển ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

- C n, khăn gi y, giá đ ng nghi m, microwave, micropipet.ồ ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

1.1.2/ Nguyên v t li u: ật liệu: ệu:

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng v n chuy n NA ¼.ận chuyển ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

Conkey)

1

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chuyên bi t cho ệm Sal.monella: BGA (Brilliant Green Agar); XLD

(Xylose lysine deoxycholate agar)

- Các môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng đ ki m tra sinh hóa: KIA (Kligler Iron Agar), Indole,ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệmMR_VP, Nutrient Broth, Ci (Simon Citrate Agar)

- Thu c th và hóa ch t ki m tra sinh hóa: kovac’s, methyl red KOH 40%, ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 để ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ểm: phòng 119 khu thí nghiệm αnapthol, gi y t m ureấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng gi tr ng NA (Nutrient Agar).ữ trống NA (Nutrient Agar) ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn

1.2/ L y m u: ấy mẫu: ẫu:

1.2.1: Chu n b môi tr ẩn bị: ị: ường vận chuyển: ng v n chuy n: ật liệu: ển:

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng c n chu n b đ ch a m u là môi trần đạt: ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ứa môi trướng vận chuyển ẫu là môi trường NA 1/4 ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA 1/4

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng cho vào microwave cho tan, sau đó chia đ u vào các ngề ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn nghi m có n p đ y.ệm ắp đậy ận chuyển

- Đem ng nghi m ch a môi trối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng đi thanh trùng 121oC/ 15 phút

- Sau khi thanh trùng c n ph i b o qu n l nh liên t c đ tránh n m m cần đạt: ả cần đạt: ả cần đạt: ả cần đạt: ạt: ục để tránh nấm mốc ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn phát tri n làm h ng môi trểm: phòng 119 khu thí nghiệm ỏng môi trường ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

1.2.2: L y m u: ấy mẫu: ẫu:

- C n chu n b bông th m nần đạt: ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ưới vi khuẩn thuần.c, tăm bông vô trùng, ng nghi m ch a môiối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ứa môi trướng vận chuyển

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng v n chuy n đã chu n b đ ch a m u đận chuyển ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ứa môi trướng vận chuyển ẫu là môi trường NA 1/4 ượng thí nghiệm: vi khuẩn c b o qu n trong thùngả cần đạt: ả cần đạt: đá

- Trưới vi khuẩn thuần.c khi l y m u c n v sinh vùng xung quanh h u môn c a con v t c nấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ần đạt: ệm ận chuyển ủng và thí nghiệm các chỉ ận chuyển ần đạt:

l y m u trách m u t p.ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ẫu là môi trường NA 1/4 ạt:

- L y tăm bông vô trùng cho vào h u môn c a con v t cho ng p ph n bôngấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ận chuyển ủng và thí nghiệm các chỉ ận chuyển ận chuyển ần đạt: gòn đ l y m u phân (chú ý: khi cho tăm bông vào c n ph i chú ý theo sểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ần đạt: ả cần đạt: ự

co bóp c a c vòng h u môn con v t tránh gây t n thủng và thí nghiệm các chỉ ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ận chuyển ận chuyển ổn thương con vật và gây ươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng con v t và gâyận chuyển

t p m u).ạt: ẫu là môi trường NA 1/4

- M ng nghi m ch a môi tr% ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng h mi ng ng nghi m trên ng n l a đènơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 để

- Cho tăm bông đã l y m u vào (ng p trong môi trấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng)

- H ph n cán tăm bông (n i ti p xúc c a tay) b b t đi n u dài h n ngơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ần đạt: ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ến 21/01/2016 ủng và thí nghiệm các chỉ ẻ bớt đi nếu dài hơn ống ới vi khuẩn thuần ến 21/01/2016 ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn nghi m, h mi ng ng nghi m sau đó đ y n p l i.ệm ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ận chuyển ắp đậy ạt:

- Luôn b o qu n l nh m u trả cần đạt: ẩn ạt: ẫu là môi trường NA 1/4 ưới vi khuẩn thuần.c khi nuôi c y m u.ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4

Hình 1: Môi trường EMB (trái) và môi trường

tr ước nuôi cấy: c nuôi c y: ấy:

- M u phân gà, phân chó ẫu là môi trường NA 1/4

ch a trong môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

v n chuy n.ận chuyển ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

- M u vi khu n ẫu là môi trường NA 1/4 ẩn E coli đã

chu n b s n.ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẵn

- Đĩa petri ch a môi ứa môi trướng vận chuyển

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chuyên bi t đ ệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệmnuôi c y ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng E coli:

+ 2 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC+ 2 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB

 M i đĩa môi trỗi đĩa môi trường chia ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chia làm 2 ph n.ần đạt:

- Que c y, đèn c n, c n,ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ồ ồ

1.3.1.2/ Phân l p m u phân đ xác đ nh vi khu n E coli ập mẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ể xác định vi khuẩn E coli ị ẩn bị :

M u s d ng: m u phân gà và m u phân chó.ẫu là môi trường NA 1/4 ửa tay bằng cồn 70 để ục để tránh nấm mốc ẫu là môi trường NA 1/4 ẫu là môi trường NA 1/4

Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng nuôi c y đã chu n bấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm:

+ 1 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC

+ 1 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB

* C y m u phân vào môi tr ấy: ẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ường : ng

- M i ph n đã chia trên đĩa môi trỗi đĩa môi trường chia ần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng ch a m t m u phân, 2 đĩa khác môiứa môi trướng vận chuyển ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ẫu là môi trường NA 1/4

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng có cùng code m uẫu là môi trường NA 1/4

- H nóng que c y vòng, đ ngu i.ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi

- L y các ng nghi m ch a m uấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ứa môi trướng vận chuyển ẫu là môi trường NA 1/4

phân, h mi ng ng nghi m, dùngơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

k p đã h qua ng n l a đèn c nẹp đã hơ qua ngọn lửa đèn cồn ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 để ồ

g p tăm bông ra m t ph n.ắp đậy ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ần đạt:

- Rút tăm bông ra và cho vào đĩa petri, dàn ra m t ph n Sau đó đ tăm bông trột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ần đạt: ểm: phòng 119 khu thí nghiệm %

l i ng nghi m h ph n đ u tăm bông trên ng n l a đèn c n trạt: ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ần đạt: ần đạt: ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 để ồ ưới vi khuẩn thuần.c khi đ y h tẩn ến 21/01/2016vào ng nghi m (tránh gây t p m u) H mi ng ng nghi m qua ng n l a đènối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ạt: ẫu là môi trường NA 1/4 ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 để

c n trồ ưới vi khuẩn thuần.c khi đ y ng nghi m l i.ận chuyển ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ạt:

- Dùng que c y vòng dàn đ u ph n m u trên đĩa petri theo hình zigzag:ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ến 21/01/2016 ần đạt: ẫu là môi trường NA 1/4

- C y tấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng t trên đĩa còn l i chú ý code m u 2 đĩa ph i gi ng nhau.ự ạt: ẫu là môi trường NA 1/4 ả cần đạt: ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn

- Đem các đĩa môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng đã c y đi trong 24h 37ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ủng và thí nghiệm các chỉ % oc

Ngày 19/01/2016

- Sau 24h , đ c k t qu đủng và thí nghiệm các chỉ ọc kết quả kháng sinh đồ ến 21/01/2016 ả cần đạt: ượng thí nghiệm: vi khuẩn c:

 Trên môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB m u phân gà, phân chó: màu môi trẫu là môi trường NA 1/4 ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng không thay đ i, khu n l c màu tím có ánh kimổn thương con vật và gây ẩn ạt:

 Trên môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC m u phân gà, phân chó: màu môi trẫu là môi trường NA 1/4 ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng không

→ ch n m t s khu n l c đ c tr ng đ chu n b ki m tra đ thu n c a ọc kết quả kháng sinh đồ ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ẩn ạt: ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ư ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ần đạt: ủng và thí nghiệm các chỉ E coli.

1.3.1.3/ nuôi c y vi khu n E coli v i m u s n có: ấy: ẩn bị ớc nuôi cấy: ẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ẵn có:

- M u s d ng: m u vi khu n ẫu là môi trường NA 1/4 ửa tay bằng cồn 70 để ục để tránh nấm mốc ẫu là môi trường NA 1/4 ẩn E coli c a cô đã chu n b s n (m u E28d,ủng và thí nghiệm các chỉ ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẵn ẫu là môi trường NA 1/4 E28d4)

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng nuôi c y đã chu n b :ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm

+ 1 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC

+ 1 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

EMB

* C y m u vào môi trấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng:

- H nóng que c y vòng, đơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

ngu iột mẫu phân, 2 đĩa khác môi

- Dùng que c y ch n 1 khu nấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ọc kết quả kháng sinh đồ ẩn

l c r i, đ c tr ng trên đĩaạt: ời gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ư

petri ch a m u.ứa môi trướng vận chuyển ẫu là môi trường NA 1/4

- Đ a que c y ch a m u vàoư ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ứa môi trướng vận chuyển ẫu là môi trường NA 1/4

đĩa petri ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

c n nuôi c y, dàn đ u theoần đạt: ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ề

hình zigzag (làm tươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng tự

trên c 2 môi trả cần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

- C y tấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng t trên đĩa còn l i chú ý code m u 2 đĩa ph i gi ng nhau.ự ạt: ẫu là môi trường NA 1/4 ả cần đạt: ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn

- Đem trong 24h 37ủng và thí nghiệm các chỉ % oc

- Sau 24h , đ c k t qu đủng và thí nghiệm các chỉ ọc kết quả kháng sinh đồ ến 21/01/2016 ả cần đạt: ượng thí nghiệm: vi khuẩn c:

o Trên môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB

m u E.28d, E28d4: màuẫu là môi trường NA 1/4 môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng không thay

đ i, khu n l c màu tím cóổn thương con vật và gây ẩn ạt:

ánh kim

Hình 4: Hình đ i chi u sau khi nuôi c yối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ến 21/01/2016 ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng

Hình 5: M u đã đẫu là môi trường NA 1/4 ượng thí nghiệm: vi khuẩn ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùngc c y trên MC và EMB(2 đĩa bên trái c y m u phân chó và gà,ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4

2 đĩa bên ph i c y 2 m u có s n)ả cần đạt: ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ẵn

o Trên môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC m u E.28d, E28d4: màu môi trẫu là môi trường NA 1/4 ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng không thay

đ i, khu n l c màu h ng nh t có áng mây.ổn thương con vật và gây ẩn ạt: ồ ạt:

→ Ch n m t s khu n l c đ c tr ng đ chu n b ki m tra đ thu n c a ọc kết quả kháng sinh đồ ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ẩn ạt: ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ư ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ần đạt: ủng và thí nghiệm các chỉ E coli.

Ngày 19/01/2016

1.3.1.4/ Ki m tra E coli thu n: ể xác định vi khuẩn E coli ần:

- Ch n 3 đĩa petri đã kh trùng:ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 để

+ Đĩa 1: Ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC

+ Đĩa 2: Ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB

+ Đĩa 3: Ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA

- Chia m i đĩa ra 10 ph n (s ph nỗi đĩa môi trường chia ần đạt: ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ần đạt:

đượng thí nghiệm: vi khuẩn c chia b ng s khu n l c đằng cồn 70 để ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ẩn ạt: ượng thí nghiệm: vi khuẩn cxem là đ c tr ng trong m u đã nuôiặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ư ẫu là môi trường NA 1/4

c y)ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng

- Đ c trên nh ng đĩa petri ch a môiọc kết quả kháng sinh đồ ữ trống NA (Nutrient Agar) ứa môi trướng vận chuyển

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chuyên bi t c a vi khu n ệm ủng và thí nghiệm các chỉ ẩn E coli đ ch n ra nh ng khu n l c cóểm: phòng 119 khu thí nghiệm ọc kết quả kháng sinh đồ ữ trống NA (Nutrient Agar) ẩn ạt: các đ c đi m đ c tr ng c a ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ư ủng và thí nghiệm các chỉ E coli

(đánh d u l i)ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ạt:

- Dùng que c y vòng h qua ng n l aấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ọc kết quả kháng sinh đồ ửa tay bằng cồn 70 đểđèn c n, đ ngu i ch n m t khu n l c đã đánh d u, sau đó l n lồ ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ọc kết quả kháng sinh đồ ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ẩn ạt: ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ần đạt: ượng thí nghiệm: vi khuẩn ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùngt c yvào c 3 môi trả cần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

o Ở môi trường MC: Gạch một đường thẳng duy nhất vào khoảng môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC: G ch m t đạt: ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng th ng duy nh t vào kho ngẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ả cần đạt:

gi a c a ph n đã chia.ữ trống NA (Nutrient Agar) ủng và thí nghiệm các chỉ ần đạt:

o Ở môi trường MC: Gạch một đường thẳng duy nhất vào khoảng môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng EMB: Thao tác tươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng t nh trên môi trự ư ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC

o Ở môi trường MC: Gạch một đường thẳng duy nhất vào khoảng môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA: C y theo hình zigzag đ u trên ph n đã chiaấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ề ần đạt:

7Hình 7: Đĩa petri đượng thí nghiệm: vi khuẩn c chia

Hình 8; Đĩa petri đã được cấy mẫu

- Chú ý:

 Ch l y khu n l c m t l n duy nh t cho c 3 môi trỉ ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ạt: ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ần đạt: ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ả cần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng và ph i cóả cần đạt: cùng v trí đánh d u trên 3 đĩa môi trịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

 C y vào đúng ph n đã ch n đ ch a vi khu n và ch c y m t đấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ần đạt: ọc kết quả kháng sinh đồ ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ứa môi trướng vận chuyển ẩn ỉ ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

th ng duy nh tẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng

 Khi c y chú ý không đấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ượng thí nghiệm: vi khuẩn ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùngc c y g n vách chia các ph n, không ch mần đạt: ần đạt: ạt: vào tâm, thành ngoài c a đĩa.ủng và thí nghiệm các chỉ

- Ti p t c làm tến 21/01/2016 ục để tránh nấm mốc ươ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gâyng t v i các khu n l c đã ch n còn l i trên các ph n đĩa.ự ới vi khuẩn thuần ẩn ạt: ọc kết quả kháng sinh đồ ạt: ần đạt:

- Đem đĩa đã c y đi trong 24h 37ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ủng và thí nghiệm các chỉ % oc

- Sau 24h , đ c k t qu trên đĩa ch a môi trủng và thí nghiệm các chỉ ọc kết quả kháng sinh đồ ến 21/01/2016 ả cần đạt: ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MC và đĩa môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ngEMB, n u khu n l c trên c 2 đĩa thu n, v y ta ch n khu n l c có cùngến 21/01/2016 ẩn ạt: ả cần đạt: ần đạt: ận chuyển ọc kết quả kháng sinh đồ ẩn ạt:

code m u (v i codeẫu là môi trường NA 1/4 ới vi khuẩn thuần

m u trên 2 môiẫu là môi trường NA 1/4

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng trưới vi khuẩn thuần.c) trênmôi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA đểm: phòng 119 khu thí nghiệm

sinh hóa trên E coli

thu n trên môi trần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA đ làm các thí nghi m sinh hóaểm: phòng 119 khu thí nghiệm ệm

Ngày 20/01/2016

231.3.1.5/ Ki m tra sinh hóa trên E coli: ể xác định vi khuẩn E coli

- Chu n b 5 ng nghi m (đã thanh trùng)ẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

 Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring 1: Ch a 5môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng KIA

 Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring 2: Ch a 2ml môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng Indole

 Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring 3: Ch a 2ml môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MR_VP(ki m tra MR)ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

 Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring 4: Ch a 2ml môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng MR_VP (ki m tra VP)ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

 Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring 5: Ch a 4ml môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng Ci

→ Đem ng nghi m có ch a môi trối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng đi thanh trùng, môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng KIA là môi

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng có c th ch nghiêng v th ch đ ng, môi trả cần đạt: ạt: ạt: ạt: ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng Ci là môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng th chạt: nghiêng do đó c n đ nghiên ng nghi m đ đ m b o môi trần đạt: ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ả cần đạt: ả cần đạt: ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng đúng đ ti nểm: phòng 119 khu thí nghiệm ến 21/01/2016

Hình 9: Đĩa petri sau nuôi cấy

- Chu n b các hóa ch t, thu c th đ ki m tra sinh hóa: kovac’s, methylẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 để ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

- Que c y th ng, ng nh gi t.ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ỏng môi trường ọc kết quả kháng sinh đồ

- Vi khu n thu n đã đẩn ần đạt: ượng thí nghiệm: vi khuẩn c xác đ nh trênịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm

môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng NA trong thí nghi m trệm ưới vi khuẩn thuần.c

* Ti n hành thí nghi m: ến hành thí nghiệm: ệm:

- ng nghi m 1: ch a môi trỐng nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng KIA

+ L y que c y th ng chon m t khu n l c.ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ẩn ạt:

+ Đ a que c y vào ng nghi m theoư ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

đười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng th ng đ n ph n đ ng nẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ến 21/01/2016 ần đạt: ọc kết quả kháng sinh đồ ưới vi khuẩn thuần ủng và thí nghiệm các chỉc c a th chạt:

nghiêng, sau đó ti p t c đ a vào ph n th chến 21/01/2016 ục để tránh nấm mốc ư ần đạt: ạt:

đ ng (theo đứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng th ng, không ch m đáyẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ạt:

ng nghi m)

ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

+ Rút que c y ra kh i ph n th ch đ ng theo đấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ỏng môi trường ần đạt: ạt: ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng th ng, đ n ph nẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ến 21/01/2016 ần đạt:

th ch nghiêng thì di chuy n que c y theo hình zigzag ngạt: ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ượng thí nghiệm: vi khuẩn c lên trên cho đ nến 21/01/2016khi que c y ra kh i ph n th ch nghiêng.ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ỏng môi trường ần đạt: ạt:

+ trong 24h 37ºc Ủ trong 24h ở 37ºc %

Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ỏng môi trường

+ Dùng que c y l y khu n l c trên môiấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ạt:

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng cho vào ng nghi m, khu y nh cho viối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẹp đã hơ qua ngọn lửa đèn cồn

khu n vào môi trẩn ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

+ trong 24h 37ºCỦ trong 24h ở 37ºc %

Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016

+ Dùng que c y l y khu n l c trên môiấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ạt:

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng cho vào ng nghi m, khu y nh cho viối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẹp đã hơ qua ngọn lửa đèn cồn

khu n vào môi trẩn ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

ng nghi m 4: ch a môi tr ng MR_VP

Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016

+ Dùng que c y l y khu n l c trên môiấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ạt:

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng cho vào ng nghi m, khu y nh cho viối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẹp đã hơ qua ngọn lửa đèn cồn

khu n vào môi trẩn ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

+ trong 24h 37ºCỦ trong 24h ở 37ºc %

- Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petring nghi m 5: ch a môi trệm ứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng CI

+ Dùng que c y l y khu n l c trên môiấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn ạt:

trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng cho vào ng nghi m, di chuy n que c yối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng

theo hình ch Z trong ng nghi m.ư ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

+ trong 24h 37ºCỦ trong 24h ở 37ºc %

+ Sau 24h , môi trủng và thí nghiệm các chỉ ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng không đ i màu.ổn thương con vật và gây

Hình 13: Kết quả nuôi cấy trên môi trường MR_VP

Hình 14: Kết quả nuôi cấy trên môi trường Ci

ng nh gi t l y 2 gi t thu c th

ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ỏng môi trường ọc kết quả kháng sinh đồ ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ọc kết quả kháng sinh đồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 đểKovac’s cho t t vào ng nghi m ừ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ừ 18/01/2016 đến 21/01/2016 ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm(thu c th ch y d c thành ng ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 để ạt: ọc kết quả kháng sinh đồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn

11 Hình 15: Kết quả kiểm tra sinh hóa trên môi trường KIA

ng nghi m 3 (MR_VP Broth): dùng

Ống nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm

ng nh gi t l y 2 gi t thu c th

ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ỏng môi trường ọc kết quả kháng sinh đồ ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ọc kết quả kháng sinh đồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 để

Methyl red cho vào ng nghi m.ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

Hình 16: Kết quả kiểm tra sinh hóa trên môi

trường Indole

Hình 17: Kết quả kiểm tra sinh hóa trên môi trường MR_VP

ng nghi m 4 (MR_VP Broth): cho 6 gi t thu c th napthol vào ng nghi mỐng nghiệm đã thanh trùng, đĩa petri ệm ọc kết quả kháng sinh đồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ửa tay bằng cồn 70 để α ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

l c đ u, cho ti p 2 gi t dung d ch KOH 40% vào ng nghi m.ắp đậy ề ến 21/01/2016 ọc kết quả kháng sinh đồ ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

Lên men Glucose Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng t màuừ 18/01/2016 đến 21/01/2016

đ chuy n sang màuỏng môi trường ểm: phòng 119 khu thí nghiệmvàng (ph n th chần đạt: ạt:

đ ng và ph n th chứa môi trướng vận chuyển ần đạt: ạt:

nghiêng), không cómàu đen, kh i th chối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ạt:

b n t.ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ứa môi trướng vận chuyển

Trên m t môi trặt áo blouse khi vào phòng thí nghiệm ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng

n i ti p xúc v i thu cơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ến 21/01/2016 ới vi khuẩn thuần ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn

th chuy n sang màuửa tay bằng cồn 70 để ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chuy nểm: phòng 119 khu thí nghiệm

Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng có màu

-Hình 20: Kết quả kiểm tra sinh hóa trên E coli

K t lu n : ết bị ật liệu: M u phân chó có ch a vi kh u E coliẫu là môi trường NA 1/4 ứa môi trướng vận chuyển ần đạt:

1.3.2/ Thí nghi m nuôi c y và phân l p ệu: ấy mẫu: ật liệu: Sal.:

Ngày 18/01/2016

1.3.2.1 Chu n b tr ẩn bị ị ước nuôi cấy: c thí nghi m: ệm:

- M u phân gàẫu là môi trường NA 1/4

- M u vi khu n ẫu là môi trường NA 1/4 ẩn Sal đã chu n b s n c a côẩn ịa điểm: phòng 119 khu thí nghiệm ẵn ủng và thí nghiệm các chỉ

- Đĩa petri ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng chuyên bi t c a ệm ủng và thí nghiệm các chỉ Sal.:

 2 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng BGA

 2 đĩa ch a môi trứa môi trướng vận chuyển ười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng XLD

→ M i đĩa chia làm 2 ph nỗi đĩa môi trường chia ần đạt:

- Môi trười gian: từ 18/01/2016 đến 21/01/2016ng tăng sinh Rappaport

- Que c y, đèn c n, c n, túi nilon vô trùng, ng nghi m, micropipetteấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ồ ồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ệm

1.3.2.2/ Phân l p m u phân đ xác đ nh vi khu n Sal.: ập mẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ẫu phân để xác định vi khuẩn E coli ể xác định vi khuẩn E coli ị ẩn bị

- Do vi khu n ẩn Sal nh y c m v i các y u t nh nhi t đ , đ m, bên ngoàiạt: ả cần đạt: ới vi khuẩn thuần ến 21/01/2016 ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ư ệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ẩn

c th đ ng v t Nên sau khi l y m u phân trong đó có r t ít vi khu n ơ vòng hậu môn con vật tránh gây tổn thương con vật và gây ểm: phòng 119 khu thí nghiệm ột mẫu phân, 2 đĩa khác môi ận chuyển ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẩn Sal.

vì chúng r t d ch t -> không đ s lấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ễ chết -> không đủ số lượng cho quá trình nuôi cấy Vì vậy ến 21/01/2016 ủng và thí nghiệm các chỉ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ượng thí nghiệm: vi khuẩn ng cho quá trình nuôi c y Vì v yấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ận chuyển

trưới vi khuẩn thuần.c khi ti n hành nuôi c y c n ph c h i và tăng s lến 21/01/2016 ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ần đạt: ục để tránh nấm mốc ồ ối tượng thí nghiệm: vi khuẩn ượng thí nghiệm: vi khuẩn ng vi khu n lên.ẩn

- Sau khi l y m u phân v phòng thí nghi m (s d ng m u đã dùng đ nuôiấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng ẫu là môi trường NA 1/4 ề ệm ửa tay bằng cồn 70 để ục để tránh nấm mốc ẫu là môi trường NA 1/4 ểm: phòng 119 khu thí nghiệm

c y ấy thẳng, que cấy vòng đã được thanh trùng E coli trưới vi khuẩn thuần.c đó)

15