Khảo Sát Ảnh Hưởng Của Chất Điều Hòa Sinh Trưởng Và Nước Dừa Đến Quá Trình Nhân Giống In Vitro Cây Lan Nhất Điểm Hồng

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN QUÁ TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN NHẤT ĐIỂM HỒNG (Dendrobium draconis) Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực TS TRẦN THỊ DUNG TRẦN HOÀNG NAM Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 TÓM TẮT Đề Tài : Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng Giáo viên hướng dẫn : TS.Trần Thị Dung Đề tài tiến hành Phòng nuôi cấy mô – Trung tâm nghiên cứu phát triển nông nghiệp công nghệ cao Thành phố Hồ Chí Minh Thời gian thực : tháng 9/09 đến tháng 12/09 Nội dung đề tài thực gồm thí nghiệm:  Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ nước dừa thích hợp cho trình nhân chồi lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ nước dừa = 200 ml/l bổ sung vào môi trường MS cho kết hình thành chồi nhiều (2,65 chồi) thời gian nảy chồi nhanh (14,78 NSC)  Thí nghiệm : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ BA tốt cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ BA = 1,5 mg/l bổ sung vào môi trường MS thích hợp cho hình thành chồi với số chồi hình thành cao ( 3,17 chồi), thời gian hình thành ngắn (15,89 NSC)  Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ BA kết hợp NAA tốt cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ii Kết thu được: Sự kết hợp nồng độ BA = mg/l NAA = 0,5 mg/l môi trường cho kết hình thành chồi tối ưu nhất, với thời gian hình thành chồi ngắn ( 13,22 NSC), số chồi đạt cao ( 3,28 chồi)  Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ NAA tốt cho trình hình thành rễ in vitro lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ NAA = mg/l bổ sung vào môi trường MS thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng với số rễ nhiều (3 rễ), thời gian rễ nhanh (17,22 NSC) iii MỤC LỤC Trang tựa Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách hình vii Danh sách bảng viii MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung giống lan Dendrobium 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Điều kiện sinh thái 2.1.3 Tình hình sản xuất lan giới nước 2.1.4 Đặc điểm lan Nhất Điểm Hồng 10 2.2 Lịch sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 2.3 Các phương pháp nhân giống in vitro 12 2.3.1 Nhân giống chồi nách 12 2.3.2 Nhân giống chồi đỉnh 12 2.3.3 Nhân giống chồi bất định 13 2.3.4 Nhân giống qua nuôi cấy callus 13 2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình nhân giống in vitro 14 2.4.1 Mẫu nuôi cấy 14 2.4.2 Môi trường nuôi cấy 15 2.4.2.1 Các nguyên tố đa lượng 17 2.4.2.2 Các nguyên tố vi lượng 19 2.4.2.3 Vitamin 19 2.4.2.4 Than hoạt tính 20 2.4.2.5 Nước dừa 20 iv 2.4.2.6 Agar 20 2.4.2.7 Các chất điều hoà sinh trưởng 21 2.5 Các công trình nghiên cứu Dendrobium 22 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 3.2 Đối tượng nghiên cứu 24 3.3 Vật liệu nghiên cứu 24 3.3.1 Trang thiết bị dụng cụ phòng nghiên cứu 24 3.3.2 Điều kiện nuôi cấy 24 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 25 3.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 26 3.4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 27 3.4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng 28 3.4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng 29 3.4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng 30 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA : Benzyl – – aminopurin NAA : α – napthlen acetic acid MS : Murashige Skoog (1962) NT : Nghiệm thức MT : Môi trường NSC : Ngày sau cấy ĐC Đối chứng : vi DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Sự đa dạng hình dạng màu sắc Dendrobium Hình 2.2 Hoa lan Nhất Điểm Hồng (Dendrobium draconis) Hình 3.1 Cách bố trí chai nước biển 26 Hình 4.1 : Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 33 Hình 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 36 Hình 4.3a : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 39 Hình 4.3b : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 40 Hình 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro vii 43 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 3.1: Các nồng độ nước dừa sử dụng thí nghiệm 27 Bảng 3.2: Các nồng độ BA sử dụng thí nghiệm 28 Bảng 3.3: Các nồng độ BA NAA sử dụng thí nghiệm 29 Bảng 3.4: Các nồng độ NAA sử dụng thí nghiệm 30 Bảng 4.1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 31 Bảng 4.2: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 34 Bảng 4.3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 37 Bảng 4.4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro viii 41 Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Hoa lan người tiêu dùng ưa chuộng vẻ đẹp đặc sắc hình thức đa dạng chúng Hoa lan quà tạo hóa Đây không loài hoa đẹp có giá trị mặt tinh thần mà có giá trị kinh tế cao có thị trường tiêu thụ mạnh nước xuất Ngày nay, thấy hoa lan khắp nơi dễ bị choáng ngợp trước vẻ đẹp quyến rũ, biến hóa muôn màu, muôn vẽ loài hoa như: Cattleya, Phalaenopsis, Dendrobium, Vanda, Cymbidium Thành phố Hồ Chí Minh nằm vùng khí hậu nhiệt đới nóng, phù hợp với số loài lan, nhiên việc sản xuất hoa lan quy mô nhỏ chủ yếu sản xuất giống ngoại nhập lan Mokara, Phalaenopsis, Dendrobium Với mức sống ngày cao người, bên cạnh việc thỏa mãn nhu cầu ăn, mặc việc thõa mãn nhu cầu tinh thần thiếu Trong nông nghiệp, loài có giá trị kinh tế như: lương thực, công nghiệp, ăn có vai trò nuôi sống người hoa kiểng đóng vai trò quan trọng đời sống tinh thần người Nó biểu tượng cho vẻ đẹp, cho hạnh phúc sức sống người Hiện hoa sử dụng rộng rãi khắp nơi vào nhiều dịp như: lễ, tết, hội họp, … Do vậy, việc phát triển hoa xây dựng hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa việc làm cần thiết Được cho phép Khoa Khoa Hoc Ứng Dụng – Bộ môn Công Nghệ Sinh Học – Trường Đại Học Tôn Đức Thắng Chúng tiến hành thực đề tài : “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích Xác định môi trường thích hợp cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng 1.2.2 Yêu cầu - Xác định nồng độ nước dừa đến khả hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng - Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng  Nhận xét: Qua bảng kết 4.1, sau 45 ngày nuôi cấy cho thấy :  Về số chồi Nghiệm thức (200 ml/ nước dừa) có số chồi hình thành nhiều (2,65 chồi), khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại Khi sử dụng nước dừa bổ sung vào môi trường nuôi cấy có tác động tốt đến khả hình thành chồi nước dừa có nhiều hàm lượng chất hữu cơ, chất khoáng chất tương tự cytokinin Nghiệm thức nghiệm thức có lượng nước dừa lớn nghiệm thức số chồi hình thành dùng nước dừa với nồng độ cao làm giảm hình thành chồi, xuất hóa nâu gốc chồi gây độc cho  Về chiều cao chồi Nghiệm thức có kích thước chồi cao (1,32cm), khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức 5, khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (ĐC) nghiệm thức  Về thời gian nảy chồi Các nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức có thời gian hình thành chồi nhanh (14,78 NSC)  Về trọng lượng cụm chồi Nghiệm thức có trọng lượng cao (0,16g) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức khác biệt ý nghĩa với nghiệm thức Nước dừa thêm vào với lượng thích hợp kích thích hình thành phát triển chồi hình thành Vậy môi trường MS có bổ sung 200 ml nước dừa kết hợp với mg/l BA 0,5 mg/l NAA cho kết hình thành chồi cao, thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 32 NT1 (ĐC) NT2 NT3 NT4 NT5 NT 1: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + ml nước dừa NT 2: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 100 ml nước dừa NT 3: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 200 ml nước dừa NT 4: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 300 ml nước dừa NT 5: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 400 ml nước dừa Hình 4.1 : Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 33 4.2 Thí nghiệm : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Trong môi trường MS bổ sung nồng độ BA khác kích thích hình thành chồi tăng số lượng chồi khác Bảng 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy BA NT Thời gian hình thành Số chồi Chiều cao chồi (cm) Trọng lượng cụm Đặc điểm (mg/l) chồi (NSC) (ĐC) 18,78ab 0,98c 1,06a 0,08ab Chồi xanh non, nhỏ 17,22 c 1,88 b 0,66b 0,10ab Chồi xanh, có 1,5 15,89 d 3,17 a 0,62 bc 0,12 a Chồi xanh, to, khỏe 18,33 b 1,22bc 0,39d 0,12 a Chồi xanh, nhỏ, có 2,5 19,11 a 0,87c 0,46cd 0,06 b Chồi xanh, nhỏ CV (%) 2,10 12,32 13,88 15,44 LSD 0,6831 0,7479 0,1627 0,05753 chồi (g)  Ghi chú: Các giá trị theo sau không mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 34  Nhận xét: Trong thí nghiệm nồng độ BA bố trí tăng dần qua nghiệm thức Qua bảng 4.2 ta thấy số chồi hình thành có khác biệt có ý nghĩa NT  Về số chồi Nghiệm thức (BA= 1,5 mg/l) có số chồi hình thành cao (3,17 chồi) khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức lại Sự khác biệt BA kích thích tạo chồi sử dụng nồng độ thích hợp Ở nghiệm thức nghiệm thức sử dụng nồng độ BA cao gây ức chế hình thành chồi nên số chồi giảm dần  Về chiều cao chồi Nghiệm thức (ĐC) có chiều cao chồi cao (1,06 cm) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại Nguyên nhân nghiệm thức có chiều cao chồi cao nghiệm thức không bổ sung BA, nên vươn dài thân không bị ức chế Ngược lại nghiệm thức khác có bổ sung BA kích thích hình thành chồi, ức chế vươn dài in vitro  Thời gian nảy chồi Các nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức có thời gian hình thành chồi ngắn (15,89 NSC)  Trọng lượng cụm chồi Theo bảng kết cho thấy có khác biệt có ý nghĩa, nghiệm thức (0,12g) có khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức (0,06g) khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức lại Vậy nghiệm thức có nồng độ BA=1,5 mg/l môi trường MS thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 35 NT1(ĐC) NT2 NT3 NT4 NT5 NT 1: mg/l BA NT 4: mg/l BA NT 2: mg/l BA NT 5: 2,5 mg/l BA NT 3: 1,5 mg/l BA Hình 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 36 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Sau 45 ngày nuôi cấy môi trường MS, nồng độ BA NAA có ảnh hưởng lên thời gian khả hình thành chồi Nhất Điểm Hồng in vitro Bảng 4.3 : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy Thời gian Chiều Trọng cao chồi lượng cụm (cm) chồi (g) 1,14e 1,06bc 0,06g Chồi xanh non 17,89a 1,17 de 0,87bcd 0,11cd Chồi xanh, có 0,1 17,33a 1,83bcd 0,54efg 0,12c Chồi xanh, có 1,5 0,1 14,67b 2,16b 0,81cde 0,10de Chồi xanh, to 0,1 14,56b 1,71 bcde 0,53fg 0,14 b Chồi xanh, to 2,5 0,1 15,22b 1,42cde 0,52fg 0,08f Chồi xanh, có 0,5 0,5 13,67c 1,88 bc 1,14ab 0,09ef Chồi xanh, có rễ 0,5 13,22c 3,28a 1,27a 0,17 a Chồi xanh, có rễ 1,5 0,5 15,22b 1,6 bcde 0,71 def 0,15 b Chồi xanh, có 10 0,5 17,89a 1,31cde 0,58efg 0,09ef Chồi xanh, có 11 2,5 0,5 17,67a 1,43cde 0,33g 0,11cd Chồi xanh CV (%) 2,98 10,82 12,87 14,04 LSD 0,8050 0,6815 0,2730 0,01693 BA NAA (mg/l) (mg/l) chồi (NSC) (ĐC) 0 17,78a 0,5 0,1 NT hình thành Số chồi Đặc điểm  Ghi chú: Các giá trị theo sau không mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 37  Nhận xét: Sau 45 ngày nuôi cấy môi trường MS, nồng độ BA NAA có ảnh hưởng đến trình hình thành chồi Dựa vào bảng 4.3 ta thấy: Sự tạo chồi nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa  Về thời gian hình thành chồi Nghiệm thức có ngày hình thành chồi ngắn (13,2 NSC), khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức (13,67 NSC) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại  Về số chồi Số chồi hình thành chiều cao chồi nghiệm thức (3.28 chồi) lớn nhất, khác biệt có ý nghĩa với tất nghiệm thức khác  Về trọng lượng cụm chồi Trọng lượng cụm chồi nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa, nghiệm thức (0.17 g) có trọng lượng lớn Khi bổ sung NAA vào môi trường có BA NAA kích thích trình hình thành chồi diễn nhanh chồi hình thành nhiều Sử dụng NAA nồng độ 0,5 mg/l kết hợp với nồng độ BA việc hình thành chồi thấy có hình thành rễ chồi Vậy nghiệm thức có bổ sung nồng độ BA= mg/l NAA= 0,5 mg/l môi trường MS thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 38 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 NT 1: mg/l BA + mg/l NAA NT 4: 1,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 2: 0,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 5: mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 3: mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT6: 2,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA Hình 4.3a : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 39 NT7 NT8 NT9 NT10 NT 7: 0,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT 8: mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT9: 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT10: mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT11 NT11: 2,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA Hình 4.3b : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 40 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Việc tạo rễ, thân, hoàn chỉnh giai đoạn cuối trình nhân giống in vitro Sử dụng NAA để tạo rễ với nồng độ khác ta kết theo bảng 4.4 Bảng 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy NT NAA Thời gian Số rễ Chiều Chiều rễ hình dài rễ cao (NSC) thành (cm) (cm) Trọng Số lượng (g) (ĐC) 19,56 a 1,30c 0,66a 2,45c 4,97 0,13c 17,22 c 3,00a 0,44 ab 2,95 a 5,10 0,20a 1,5 18,56 b 2,43b 0,57 ab 2,87ab 4,77 0,17b 19,44 a 1,57c 0,41b 2,53bc 4,23 0,14c CV(%) 1,03 13,77 13,46 7,57 10,22 11,70 LSD 0,3622 0,5392 0,2306 0,3859 0,01883  Ghi chú: Các giá trị theo sau không mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 41  Nhận xét:  Về thời gian rễ Thời gian rễ nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức 1(ĐC) có thời gian rễ lâu (19,56 NSC), khác biệt ý nghĩa với nghiệm thức (19,44 NSC) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (17,22 NSC) nghiệm thức (18,56 NSC)  Về số Số nghiệm thức khác biệt mặt thống kê  Về chiều dài rễ Chiều dài rễ nghiệm thức (0,66cm) dài khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (0,41cm), khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (0,44 cm) nghiệm thức (0,57 cm)  Về số rễ Nghiệm thức (3,00 rễ) cho số rễ nhiều có khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức khác Trên môi trường có nồng độ NAA cao (nghiệm thức 5) ảnh hưởng không tốt đến tạo rễ phát triển  Về chiều cao Chiều cao nghiệm thức cao (2,95 cm) khác biệt ý nghĩa với nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại Vậy nghiệm thức có bổ sung NAA= 1mg/l môi trường MS thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 42 NT1 NT2 NT3 NT4 NT 1: mg/l NAA NT 3: 1,5 mg/l NAA NT2: mg/l NAA NT4: mg/l NAA Hình 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 43 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian nghiên cứu đề tài “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ” rút kết luận sau:  Môi trường MS bổ sung 200ml/l nước dừa có số chồi hình thành nhiều (2,65 chồi) thời gian nảy chồi nhanh (14,78 NSC)  Môi trường MS bổ sung 1,5 mg/l BA thích hợp cho hình thành chồi với số chồi hình thành cao ( 3,17 chồi), thời gian hình thành ngắn (15,89 NSC)  Sự kết hợp nồng độ BA = mg/l NAA = 0,5 mg/l môi trường MS cho kết hình thành chồi tối ưu nhất, với thời gian hình thành chồi ngắn ( 13,22 NSC), số chồi đạt cao ( 3,28 chồi)  Môi trường MS có bổ sung mg/l NAA thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng in vitro với số rễ nhiều (3 rễ), thời gian rễ nhanh (17,22 NSC) 44 5.2 Đề nghị  Nghiên cứu thêm nhiều loại môi trường nuôi cấy khác để nhân nhanh số lượng lớn phục vụ cho nhu cầu thị trường  Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống, khảo sát thêm sinh trưởng lan tự nhiên  Nghiên cứu điều kiện sinh trưởng lan Nhất Điểm Hồng vườn ươm  Nghiên cứu tạo hạt nhân tạo để bảo quản giống lan quý dần biến tự nhiên  Nghiên cứu thêm hoa lan Nhất Điểm Hồng điều kiện in vitro 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Như Bích, 2005 Khảo sát yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến nhân giống in vitro lan Hồ Điệp (Phalaenopsis sp.) Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Minh Chơn, 2004 Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật Đại học Cần Thơ 94 trang Trần Hợp, 1988 Phong lan Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Dương Công Kiên, 2003 Nuôi cấy mô thực vật II Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 183 trang Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, 2002 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 376 trang Nguyễn Đình Minh, 2004 Nhân giống in vitro lan Dendrobium phương pháp nuôi cấy mô tế bào lớp mỏng Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Bùi Trang Việt, 2002 Sinh lí thực vật đại cương Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 360 trang http://www.hoalanvietnam.org/Article.asp?ID=469 http://agriviet.com/nd/1167-hoa-lan-viet-nam/ 10 http://www.phonglanviet.com.vn/vn/product_cat.aspx?cat=5&page=2 46 [...]... tái sinh cây trồng có kiểu gen đồng nhất cho tới 10 14 năm 2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nhân giống invitro 2.4.1 Mẫu nuôi cấy - Loại cây: cây 2 lá mầm thường tái sinh tốt hơn cây 1 lá mầm và thực vật hạt trần có khả năng tái sinh rất hạn chế (ngoại trừ cây non) - Tuổi cây: Khi cây già, khả năng tái sinh thường giảm, sử dụng phần non của cây sẽ thích hợp hơn đặc biệt đối với cây thân gỗ và cây. .. Cytokinin Nhóm này bao gồm dạng tự nhiên 2iP (dimethylallyl)aminopurine) và zeatin và dạng tổng hợp là BAP (N6-benzylaminopurine) và Kinetin (6furfurylaminopurine) Dạng tổng hợp có hoạt tính sinh học rất cao nên được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy mô Cytokinin làm cho mô phồng lên, cảm ứng sự phát triển của chồi nách và chồi bất định và điều khiển sự phân chia tế bào Cytokinin bền nhiệt và có... biệt hơn là đỉnh sinh trưởng dần dần sẽ có được tính chất non trẻ Sự trẻ hoá này là kết quả của quá trình gia tăng phân chia tế bào và tái sinh cây - Tuổi của mô và cơ quan: mô non, mềm dễ nuôi cấy hơn là mô già, hóa gỗ Mẫu cấy lấy từ cơ quan già, sự phân chia tế bào và tái sinh cây sẽ giảm - Tình trạng sinh lý: Bộ phận cây non tái sinh mạnh hơn bộ phận cây già Chồi lấy từ cây thân gỗ hay cây bụi ở tình... Nam, đã có nhiều công trình nghiên cứu được tiến hành trên lan Dendrobium Cụ thể như sau : Mai Trần Ngọc Tiếng (1993) tìm hiểu sơ khởi về hiệu ứng cảm quang kỳ và một số điều kiện môi trường khác trên sự ra hoa của phong lan Dendrobium Mai Thị Tân (2000) nghiên cứu ‘ Ảnh hưởng của saccharose, nước dừa, NAA và acid nicotinic đến sự phát sinh chồi từ protocorm và sự sinh trưởng của cây lan Dendrobium E.R... hoạt tính nói chung ảnh hưởng trên 3 mặt: hút các hợp chất cản, hút các chất điều hòa sinh trưởng hoặc làm đên môi trường Người ta cho rằng tác dụng cản sự tăng trưởng của mô cấy khi có sự hiện diện của than hoạt tính trong môi trường là do nó hút chất điều hòa sinh trưởng có trong môi trường NAA, kinetin, IAA, BAP, 2iP liên kết với than hoạt tính Khả năng kích thích sự tăng trưởng của than hoạt tính... lạnh và vùng nóng, nhưng ở vùng lạnh cây sinh trưởng và ra hoa nhiều hơn như Dendrobium primulinum, Dendrobium farmeri nhiệt độ lý tưởng của các loài này là 20oC  Độ ẩm và chế độ tưới nước Các cây lan, sống bám trên các cây cao, chúng lấy nước từ các trận mưa, từ hơi nước trong không khí Chính ẩm độ quyết định sự hiện diện của các loài phong lan Trong thời kỳ sinh trưởng cần tưới đủ, nhất là vào mùa... sự sinh trưởng và phát triển -Sử dụng hóa chất hấp thu phenol hoặc chất khử để ngăn chận sự oxy hóa phenol -Giảm nồng độ muối khoáng và chất điều hòa sinh trưởng -Sử dụng mẫu cấy nhỏ từ mô non và gây ít vết thương trên mẫu cấy -Ngâm mẫu trong dung dịch pH thấp để ngăn chận hoạt động của enzyme phenolase  Hiện tượng thủy tinh thể Quá trình nuôi cấy có thể gây ra hiện tượng sinh lý là thủy tinh thể: cây. .. được cấy trong bình nước biển (500ml) có chứa 50ml môi trường Hình 3.1 Cây lan Nhất Điểm Hồng in vitro  Phương pháp phân tích số liệu: số liệu được xử lý bằng phần mềm thống kê MSTATC, dựa vào giá trị Prob trong bảng Anova để trắc nghiệm phân hạng LSD 26 3.4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy có bổ sung nước dừa đến khả năng hình thành chồi từ cây lan Nhất Điểm Hồng in vitro Sử dụng môi... primulinum Hình 2.1 Sự đa dạng về hình dạng và màu sắc của Dendrobium 9 2.1.4 Đặc điểm của cây lan Nhất Điểm Hồng Lan Nhất Điểm Hồng thuộc: Ngành : Magnoliophyta Lớp : Liliopsida Lớp phụ : Liliidae Bộ : Orchidales Họ : Orchidaceae Giống : Dendrobium Tên khoa học : Dendrobium draconis D draconis (Nhất Điểm Hồng) là một giống phong lan cao chừng 40 cm có 7-9 đốt với vỏ bọc đầy lông đen Hoa nở vào mùa... lượng và vi lượng - Các vitamin - Các amino acid - Nguồn carbon: một số các loại đường - Các chất điều hoà sinh trưởng - Các chất hữu cơ bổ sung: nước dừa, dịch chiết nấm men, dịch chiết khoai tây, bột chuối khô - Chất làm thay đổi trạng thái môi truờng: các loại thạch (agar) Tất cả các hợp chất này đều tham gia vào một hoặc nhiều chức năng trong sự sinh trưởng và phân hoá của thực vật nuôi cấy in vitro ... môn Công Nghệ Sinh Học – Trường Đại Học Tôn Đức Thắng Chúng tiến hành thực đề tài : Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ” 1.2... hợp cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng 1.2.2 Yêu cầu - Xác định nồng độ nước dừa đến khả hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng - Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến khả...TÓM TẮT Đề Tài : Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng Giáo viên hướng dẫn : TS.Trần Thị Dung Đề