Nghiên cứu khả năng kháng nấm mốc aspergillus flavus DC213 ở lạc bởi chế phẩm vi khuẩn đối kháng pseudomonas putida 199b

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUÊ Khoa Cơ khí - Công nghê KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu khả kháng nấm mốc Aspergillus flavus DC213 lạc chế phẩm vi khuẩn đối kháng Pseudomonas putida 199B Sinh viên thực hiên : Nguyễn Thị Hồng Lớp : Công nghê thực phẩm 44 Thời gian thực tập : 27/10/2014 – 28/2/2015 Địa điểm thực tập : Phòng thí nghiêm khoa Cơ khí – Công nghê Giáo viên hướng dẫn : TS Nguyễn Hiền Trang Bộ môn : Quản lý chất lượng thực phẩm HUÊ, 2015 Lời cảm ơn Để hoàn thành đề tài nghiên cứu mình, nhận giúp đỡ nhiều tập thể cá nhân Trước hết xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Hiền Trang Cô trực tiếp định hướng, tận tình giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm quý báu để hoàn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô khoa Cơ khí - công nghệ dạy dỗ, truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập nghiên cứu Những lời động viên, khích lệ từ gia đình, với chia sẻ học hỏi kinh nghiệm từ bạn bè góp phần nhiều để hoàn thành tốt khóa luận Do trình độ hiểu biết hạn chế nên trình làm khóa luận khó tránh khỏi thiếu sót, mong bảo thầy cô để hoàn thành đạt kết tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Huế, tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thị Hồng DANH MỤC CÁC CHỮ VIÊT TẮT Aflatoxin B1 : AFB1 Aflatoxin B2 : AFB2 Aflatoxin G1 : AFG1 Aflatoxin G2 : AFG2 Aspergillus flavus : A flavus Aspergillus niger : A niger Aspergillus parasiticcus : A parasiticcus Chất kháng sinh : CKS 2,4- diacetyphloroglucinol : 2,4- DAPG, Fusarium monoliforme : F monoliforme Penicillium citrinum : Pe Citrinum Penicillium purpurogenum : Pe Purpurogenum Phenazine-1-carboxylic acid : PCA Potato Dextro Agar : PDA Pseudomonas cremoricolorata : P cremoricolorata Pseudomonas fulva : P fulva Pseudomonas monteilii : P monteilii Pseudomonas mosselii : P mosselii Pseudomonas oryzihabitans : P oryzihabitans Pseudomonas parafulva : P parafulva Pseudomonas plecoglossicida : P plecoglossicida Pseudomonas putida : P putida MỤC LỤC Lời cảm ơn ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIÊT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG .viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix PHẦN 1: MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU .3 2.1 Tổng quan nấm mốc A flavus .3 2.1.1 Hình thái 2.1.2 Sinh thái .4 2.1.3 Tác hại A flavus 2.1.4 Điều kiện sinh trưởng sinh bào tử 2.1.5 Độc tố Aflatoxin A flavus sản sinh .6 2.1.5.1 Công thức cấu tạo số tính chất lý hoá Aflatoxin 2.1.5.2 Tác hại Aflatoxin .8 2.2 Tổng quan vi khuẩn P putida 2.2.1 Đặc điểm chung vi khuẩn P putida 2.2.2 Khả đối kháng với mầm bệnh vi khuẩn P putida 10 2.2.3 Tình hình nghiên cứu nước liên quan đến đề tài .11 2.2.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 11 2.2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 12 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Đối tượng nghiên cứu .14 3.2 Nội dung nghiên cứu 14 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện thu nhận dịch chiết vi khuẩn P putida199B đến khả kháng nấm mốc A flavus DC213 14 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả kháng nấm mốc A flavus DC213 .14 3.3 Phương pháp nghiên cứu 14 3.3.1 Phương pháp cấy chuyền nấm mốc A flavus DC213 vi khuẩn P putida 199B .14 3.3.1.1 Phương pháp cấy chuyền nấm mốc A flavus DC213 14 3.3.1.2 Phương pháp cấy chuyền P putida 199B 14 3.3.2 Phương pháp nuôi cấy tăng sinh giữ giống nấm mốc A flavus DC213 vi khuẩn P putida199B 15 3.3.2.1 Phương pháp nuôi cấy tăng sinh giữ giống nấm mốc A flavus DC213 .15 3.3.2.2 Phương pháp nuôi cấy tăng sinh giữ giống vi khuẩn P putida 199B 15 3.3.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng nấm mốc A flavus DC213 15 3.3.4 Phương pháp đo sinh khối .16 3.3.5 Phương pháp bố trí thí nghiệm 16 3.3.5.1 Ảnh hưởng điều kiện thu nhận dịch chiết đến khả kháng nấm mốc A flavus DC213 .16 3.3.5.2 Ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả kháng nấm mốc A flavusDC213 18 3.3.6 Phương pháp phân tích khả sinh độc tố Aflatoxin chủng A flavus DC213 vi khuẩn đối kháng P putida 199B 19 3.3.7 Phương pháp xử lý số liệu .21 PHẦN 4: KÊT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện thu nhận dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả kháng nấm mốc A flavus DC213 22 4.1.1 Ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ 22 4.1.2 Ảnh hưởng điều kiện pH 25 4.1.3 Ảnh hưởng điều kiện thời gian 27 4.1.4 Ảnh hưởng tốc độ lắc 31 4.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida199B đến khả kháng nấm mốc A flavusDC213 34 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ dịch chiết đến kích thước đường kính tảng nấm 34 4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida199B đến khả thu nhận sinh khối nấm mốc A flavus DC213 37 4.3 Kết phân tích khả sinh độc tố Aflatoxin chủng A flavus DC213 vi khuẩn đối kháng P putida 199B .39 Từ kết khảo sát khả kháng nấm mốc A flavus DC213 dịch chiết vi khuẩn P putida 199B, nhận thấy dịch chiết vi khuẩn P putida 199B có khả ức chế môi trường đặc (đường kính tảng nấm) môi trường lỏng (khối lượng sinh khối) Tuy nhiên để kháng sinh độc tố Aflatoxin chủng A flavus DC213 vi khuẩn P putida 199B, tiến hành phân tích độc tố Aflatoxin chủng A flavus DC213 môi trường PDB nồng độ 50% Kết phân tích thu sau: 39 Mẫu 39 Hàm lượng Aflatoxin (µg/kg) 39 Mẫu đối chứng .39 468,37 39 Mẫu có bổ sung dịch chiết vi khuẩn P putida 199B .39 8,00 39 Từ kết ta nhận thấy rằng, bổ sung dịch chiết vi khuẩn P putida 199B hàm lượng Aflatoxin có mẫu giảm đáng kể, đặc biệt nồng độ 50% hàm lượng Aflatoxin lại thấp (µg/kg), so với mẫu không bổ sung dịch chiết gần 59 lần .39 PHẦN 5: KÊT LUẬN VÀ KIÊN NGHI 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Kiến nghị 40 TÀI LỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.2 Nồng độ tương ứng với dung dịch aflatoxin chuẩn 20 Bảng 4.1 Đường kính tản nấm A flavus DC213 sau kháng .22 dịch chiết vi khuẩn P putida199B theo nhiêt độ .22 Bảng 4.2 Đường kính tản nấm A flavus DC213 sau kháng dịch chiết 25 vi khuẩn P putida 199B theo pH .25 Bảng 4.3 Đường kính tản nấm A flavus DC213 sau kháng dịch chiết 28 vi khuẩn P putida 199B theo thời gian 28 Bảng 4.4 Đường kính tản nấm A flavus DC213 sau kháng dịch chiết 31 vi khuẩn P putida199B theo tốc độ lắc .31 Bảng 4.5 Đường kính tảng nấm A flavus DC213 sau kháng dịch chiết .34 vi khuẩn P putida 199B theo nồng độ 34 Bảng 4.6 Kết ức chế A flavus DC213 dịch chiết 38 vi khuẩn P putida199B theo nồng độ 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh về nấm mốc A flavus [47] Hình 2.2 Hình ảnh về A flavus [44] Hình 2.3 Đặc điểm cấu tạo A flavus [10] Hình 2.4 Một số loại thực phẩm bị nhiễm A flavus [37] Hình 2.5 Công thức cấu tạo Aflatoxin B1, B2, G1, G2 [46] Hình 4.1 Biểu đồ thể hiên khả ức chế A flavus dịch chiết .22 vi khuẩn P putida 199B thay đổi nhiêt độ 22 Hình 4.2 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 24 vi khuẩn P putida 199B thay đổi nhiêt độ 24 Hình 4.3 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiế .24 vi khuẩn P putida 199B thay đổi nhiêt độ 24 Hình 4.4 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 24 vi khuẩn P putida 199B thay đổi nhiêt độ 24 Hình 4.5 Biểu đồ thể hiên khả ức chế A flavus dịch chiết .25 vi khuẩn P putida 199B thay đổi pH 25 Hình 4.6 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 27 vi khuẩn P putida 199B thay đổi pH 27 Hình 4.7 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 27 vi khuẩn P putida 199B thay đổi pH 27 Hình 4.8 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 27 vi khuẩn P putida 199B thay đổi pH 27 Hình 4.9 Biểu đồ thể hiên khả ức chế A flavus DC213 dịch chiết 28 vi khuẩn P putida199B thay đổi thời gian 28 Hình 4.10 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 30 vi khuẩn P putida 199B thay đổi thời gian nuôi cấy vi khuẩn 30 Hình 4.11 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 30 vi khuẩn P putida 199B thay đổi thời gian nuôi cấy vi khuẩn 30 Hình 4.12 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 30 vi khuẩn P putida 199B thay đổi thời gian nuôi cấy vi khuẩn 30 Hình 4.13 Biểu đồ thể hiên khả ức chế A flavus DC312 dịch chiết 31 vi khuẩn P putida 199B thay đổi tốc độ lắc 31 Hình 4.14 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 33 vi khuẩn P putida199B thay đổi tốc độ lắc 33 Hình 4.15 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 33 vi khuẩn P putida199B thay đổi tốc độ lắc 33 Hình 4.16 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 33 vi khuẩn P putida199B thay đổi tốc độ lắc .33 Hình 4.17 Biểu đồ thể hiên khả ức chế A flavus DC312 dịch chiết 34 vi khuẩn P putida199B thay đổi nồng độ dịch chiết 34 Hình 4.18 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 37 vi khuẩn P putida199B thay đổi nồng độ 37 Hình 4.19 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 37 vi khuẩn P putida199B thay đổi nồng độ 37 Hình 4.20 Kết kháng A flavus DC213 sau ngày dịch chiết 37 vi khuẩn P putida199B thay đổi nồng độ 37 Hình 4.21 Biểu đồ thể hiên khả thu nhận sinh khối A flavus DC312 thay đổi nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida199B 38 Hình 4.22 Khả thu nhận sinh khối A flavus DC312 thay đổi nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B 39 29 Peter J Cotty, Development of Aspergillus flavus AF36, United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Department of Plant Sciences, University of Arizona, Tucson, AZ 30 Rajendiran, R., Jegadeeshkumar, D., Sureshkumar, B.T., and Nisha, T., 2010, Invitro assessment of antagonistic activity of Trichoderma viride against post harvest pathogens, Journal of Agricultural Technology Vol.6(1): 31-35 31 Raju R B, M and Krishna Murthy, K.V.M (2000) Efficacy of Trichoderma spp In the management of collar rot of groundnut caused by Aspergillus niger Van Teighem Indian J Plant Prot 28: 197-199 32 Varga J., J.C Frisvad and R.A Samson1, 2009, A reappraisal of fungi producing aflatoxins, CBS Fungal Biodiversity Centre; World Mycotoxin Journal (3): 263-277 Trang Web 33 http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-su-nhiem-nam-moc-va-aflatoxin-tu-nhien-tren mot -so-giong-ngo-lac-trong-o-mot-so-tinh-va-kha-nang-phong-tru-bang-10545/ 34 http://123doc.org/document/1400095-tai-lieu-dao-tao-nghe-ky-thuat-lac-phan-iiso-nn-ptnt-quang-tri.htm 35 http://123doc.vn/document/63516-su-dung-cac-dong-vi-khuan-pseudomonas fluorescens-phong-tru-vi-khuan-ralstonia-solanacearum-gay-benh-heo-xanh-tren-cayca-chua.htm 36 http://d.violet.vn/uploads/resources/561/2864707/preview.swf 37 http://khoeplus.net/suc-khoe/thuoc.html 38 http://khotailieu.com/luan-van-do-an-bao-cao/nong-lam-nghiep/nong-hoc/ nghien - cuu-su-dung-che-pham-nam-doi-khang-trichoderma-phong-chong-benh-hai-chinh-do- nam-gay-ra-tren-nguyen-lieu-lac-trong-kho-bao-quan-tai-tinh-bac-giang.html 39 http://luanvan.co/luan-van/aspergillus-flavus-va-a-parasiticus-sinh-docto-aflatoxin-2922/ 40 http://luanvan.co/luan-van/de-tai-nghien-cuu-dac-tich-cua-lipid-trong-hatco-dau-54462/ 44 41 http://luanvan.net.vn/luan-van/luan-van-nghien-cuu-su-khang-thuoc-cua -nhom-vi-khuan-pseudomonas-spp-trong-moi-trong-ao-nuoi-ca-tra-pangasianodon -49650/ 42 https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Pseudomonas_putida#Higher_order_taxa 43.http://tai-lieu.com/tai-lieu/khoa-luan-toi-uu-hoa-quy-tinh-chuyen-gene-gfpvao-vi-khuan-pseudomonas-fluorescens-bang-phuong-phap-tiep-hop-ba-thanh-6773/ 44 http://vietsciences.free.fr/biographie/biologists/takamine-jokichi.htm 45 http://vi.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas 46 https://voer.edu.vn/m/sinh-truong-cua-vi-sinh-vat-va-qua-trinh-lamhong-thuc-pham/3cc2ea67 47.http://www.impeqn.org.vn/impeqn/vn/portal/InfoDetail.jsp? area=58&cat=1066&ID=2551 45 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hình ảnh peak sắc ký Aflatoxin B1 CHUAN 100PPB Mẫu có bổ sung dịch chiết vi khuẩn P putida 199B Mẫu 21.31 không bổ sung dịch chiết vi khuẩn P putida 199B Phụ lục 2: Phụ lục thống kê Xử lý số liệu phần mềm SPSS Phụ lục 2.1 Ảnh hưởng điều kiên nhiêt độ Between Groups ANOVA Sum of Squares 172.155 df Mean Square 57.385 139 017 F 3302.741 Sig .000 Duongkinh2ngay Within Groups 172.294 134.403 224 11 44.801 028 1601.947 000 Duongkinh3ngay Total Between Groups Within Groups Total Between Groups 134.627 110.231 11 36.744 1642.172 000 179 022 110.410 11 Duongkinh4ngay Within Groups Total N Duongkinh2ngay Subset for alpha = 0.05 Nhietdo Tukey HSDa 30 25 35 DC Sig Duncana 25 35 DC 3 16.1767 17.0400 17.7767 25.6467 1.000 30 Sig 1.000 1.000 1.000 16.1767 17.0400 17.7767 25.6467 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 Duongkinh3ngay Nhietdo a Tukey HSD N 30 25 35 DC Sig Duncan a 25 35 DC Sig 28.3800 29.2033 36.1567 1.000 1.000 28.3800 29.2033 36.1567 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Duongkinh4ngay N Subset for alpha = 0.05 Nhietdo a Tukey HSD 25 35 DC Sig Duncan a 25 35 DC Sig 1.000 35.2433 36.4800 37.0533 43.0933 1.000 30 1.000 27.9200 1.000 30 27.9200 1.000 30 Subset for alpha = 0.05 1.000 1.000 1.000 35.2433 36.4800 37.0533 43.0933 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 Phụ lục 2.2 Ảnh hưởng điều kiên pH ANOVA Sum of Squares 182.701 Between Groups df Mean Square 36.540 884 12 074 F 495.835 Sig .000 Duongkinh2ngay Within Groups 183.586 244.149 2.053 17 12 48.830 171 285.397 000 Duongkinh3ngay Total Between Groups Within Groups Total Between Groups 246.203 255.745 17 51.149 258.538 000 2.374 12 198 258.119 17 Within Groups Duongkinh4ngay Total N pH Tukey HSD a DC Duncan DC 15.5533 16.5867 17.4367 18.4900 24.0267 1.000 13.9133 Sig a Duongkinh2ngay Subset for alpha = 0.05 1.000 1.000 1.000 1.000 15.5533 16.5867 17.4367 18.4900 24.0267 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Duongkinh3ngay pH Tukey HSDa N 23.1400 DC Sig Duncana 1.000 13.9133 Subset for alpha = 0.05 24.6467 26.0233 27.5767 28.9033 34.5767 1.000 23.1400 1.000 24.6467 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 DC 26.0233 27.5767 28.9033 34.5767 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 pH Tukey HSD a DC Sig Duncan a Duongkinh4ngay Subset for alpha = 0.05 N DC Sig 29.4100 31.6400 32.8800 34.4700 36.0133 41.3200 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 29.4100 31.6400 32.8800 34.4700 36.0133 41.3200 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ lục 2.3 Ảnh hưởng điều kiên thời gian Between Groups ANOVA Sum of Squares 197.725 df Mean Square 49.431 F 1413.127 Sig .000 Duongkinh2ngay Within Groups 350 10 035 198.074 266.863 734 14 10 66.716 073 908.602 000 Duongkinh3ngay Total Between Groups Within Groups Total Between Groups 267.597 295.993 14 73.998 1207.937 000 Within Groups 613 10 061 Total 296.606 14 Duongkinh4ngay Duongkinh2ngay N Thoigian Tukey HSDa Subset for alpha = 0.05 48 36 12.4033 14.5967 24 12 DC Sig Duncana 17.4133 23.2100 1.000 48 36 24 12 DC Sig 16.2900 1.000 1.000 1.000 1.000 12.4033 14.5967 16.2900 17.4133 23.2100 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 N Thoigian Tukey HSDa 48 36 24 12 DC Sig Duncana Duongkinh3ngay Subset for alpha = 0.05 20.7633 22.8733 25.2633 27.2767 33.0500 1.000 48 36 24 12 DC Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 20.7633 22.8733 25.2633 27.2767 33.0500 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 N Thoigian Tukey HSDa 48 36 24 12 DC Sig Duncana 36 24 12 DC 28.3033 30.0533 32.0400 34.1200 41.1133 1.000 48 Sig Duongkinh4ngay Subset for alpha = 0.05 1.000 1.000 1.000 1.000 28.3033 30.0533 32.0400 34.1200 41.1133 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ lục 2.4 Ảnh hưởng tốc độ lắc Between Groups ANOVA Sum of Squares 240.744 df Mean Square 80.248 063 008 F 10233.519 Sig .000 Duongkinh2ngay Within Groups 240.806 395.057 090 11 131.686 011 11757.648 000 Duongkinh3ngay Total Between Groups Within Groups Total Between Groups 395.147 488.244 11 162.748 9264.591 000 141 018 488.384 11 Duongkinh4ngay Within Groups Total Duongkinh2ngay Tocdolac N 12.4133 200 250 Tukey HSDa 150 DC Sig 1.000 200 12.4133 250 Duncana 150 DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 14.2433 15.8100 1.000 1.000 24.1200 1.000 14.2433 15.8100 1.000 1.000 24.1200 1.000 Duongkinh3ngay RPM N 20.4233 200 250 Tukey HSDa 150 DC Sig 1.000 200 20.4233 250 Duncana 150 DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 23.1267 25.3100 1.000 1.000 35.5867 1.000 23.1267 25.3100 1.000 1.000 35.5867 1.000 Duongkinh4ngay RPM N 27.7433 200 250 Tukey HSDa 150 DC Sig 1.000 200 27.7433 250 Duncana 150 DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 29.4533 32.4500 1.000 1.000 44.0900 1.000 29.4533 32.4500 1.000 1.000 44.0900 1.000 Phụ lục 2.5 Ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida199B đến kích thước đường kính tảng nấm ANOVA Sum of Squares 514.809 271 515.080 856.789 152 856.942 935.432 099 935.531 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Duongkinh 2ngay Duongkinh 3ngay Duongkinh 4ngay df 10 14 10 14 10 14 Mean Square 128.702 027 F 4747.991 Sig .000 214.197 015 14054.944 000 233.858 010 23637.944 000 Duongkinh2ngay Nongdo N 8.1233 24% 18% 12% a Tukey HSD 6% DC Sig 1.000 24% 8.1233 18% 12% a Duncan 6% DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 9.1033 10.5033 12.3867 1.000 1.000 1.000 24.2300 1.000 9.1033 10.5033 12.3867 1.000 1.000 1.000 24.2300 1.000 Duongkinh3ngay Nongdo N 13.4100 24% 18% 12% Tukey HSDa 6% DC Sig 1.000 24% 13.4100 18% 12% Duncana 6% DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 15.2133 17.1700 20.3467 1.000 1.000 1.000 34.5333 1.000 15.2133 17.1700 20.3467 1.000 1.000 34.5333 1.000 Subset for alpha = 0.05 1.000 Duongkinh4ngay Nongdo N 19.6600 24% 18% 12% Tukey HSDa 6% DC Sig 1.000 24% 19.6600 18% 12% Duncana 6% DC Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 23.4167 25.2400 27.4400 1.000 1.000 1.000 42.6233 1.000 23.4167 25.2400 27.4400 1.000 1.000 1.000 42.6233 1.000 Phụ lục 2.6 Ảnh hưởng nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả thu nhận sinh khối nấm mốc A flavus DC213 ANOVA Sinhkhoi Between Groups Within Groups Sum of Squares 019 000 df 12 Total 019 17 Mean Square 004 000 F 2592.521 Sig .000 Sinhkhoi N Nongdo Tukey HSD a 50% 24% 18% 12% 6% DC Sig Duncana 24% 18% 12% 6% DC Sig Subset for alpha = 0.05 041033 061633 072333 077100 083833 145200 1.000 50% 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 041033 061633 072333 077100 083833 145200 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 1.000 [...]... phát triển và khả năng tạo ra độc tố của nấm mốc A flavus Ngoài ra các nhà khoa học cũng đã tìm ra nhiều chủng vi khuẩn có khả năng kháng nấm như B subtilis, Pseudomonas putida (P putida) [33] Trong đó vi khuẩn P putida có khả năng đối kháng với nhiều loại vi sinh vật gây bệnh [4] Do đó, vi c nghiên cứu khả năng kháng nấm mốc A flavus ở lạc bởi vi khuẩn P putida là rất cần thiết Từ đó nghiên cứu phát... ở các dạng chế phẩm và thử nghiệm ứng dụng vào thực tiễn bảo quản lạc nhằm phòng trừ nấm mốc A flavus Với ý nghĩa đó, chúng tôi tiến hành đề tài "Nghiên cứu khả năng kháng nấm mốc A flavus DC213 ở lạc bởi chế phẩm vi khuẩn đối kháng P putida 199B" 2 Mục tiêu của đề tài - Ức chế sự phát triển của nấm A flavus trong điều kiện invitro từ đó áp dụng vào vi c bảo quản lạc sau thu hoạch - Làm giảm khả năng. .. Ảnh hưởng của tốc độ lắc 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả năng kháng nấm mốc A flavus DC213 - Ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida1 99B đến kích thước của đường kính tảng nấm A flavus DC213 - Ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida1 99B đến khả năng thu nhận sinh khối của nấm mốc A flavus DC213 3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.3.1... cứu - Chế phẩm vi khuẩn P putida 199B do phòng thí nghiệm, Khoa cơ khí công nghệ, trường đại học Nông Lâm Huế cung cấp - Chủng nấm mốc A flavus DC213 phân lập từ lạc sau thu hoạch ở Nghệ An 3.2 Nội dung nghiên cứu 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của các điều kiện thu nhận dịch chiết vi khuẩn P putida1 99B đến khả năng kháng nấm mốc A flavus DC213 - Ảnh hưởng của nhiệt độ - Ảnh hưởng của pH - Ảnh hưởng... Khảo sát ảnh hưởng của các điều kiên thu nhận dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả năng kháng nấm mốc A flavus DC213 4.1.1 Ảnh hưởng của điều kiện nhiệt độ Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ ở các mức 25 0C, 300C và 350C để thu được dịch chiết vi khuẩn P putida 199B Dịch chiết sau đó được sử dụng để thực hiện nghiên cứu khả năng kháng nấm theo phương pháp cấy chấm điểm Kết quả được trình bày ở. .. được sử dụng ở đây là PCA ½ Sau đó tiến hành tương tự như khảo sát nồng độ Sau 4 ngày ta tiến hành lọc để thu sinh khối, sinh khối được sấy khô đến khối lượng không đổi Cân sinh khối và xác định khả năng kháng của dịch chiết vi khuẩn P Putida 199B đối với nấm mốc A flavus DC213 3.3.6 Phương pháp phân tích khả năng sinh độc tố Aflatoxin của chủng A flavus DC213 bởi vi khuẩn đối kháng P putida 199B Nguyên... hạn chế bệnh do nấm Phytophthora gây ra Vì vậy, các chủng này có khả năng hạn chế bệnh chết nhanh hồ tiêu ở giai đoạn vườn ươm, hai chủng vi khuẩn có hiệu quả nhất là 150A và 214D (Tran et al., 2008) Tuy nhiên ở nghiên cứu này, các chủng vi khuẩn này không có khả năng phân giải bào tử phân sinh của nấm A niger, nhưng chất putisolvin của chúng có khả năng ức chế sự sinh trưởng của nấm ở điều kiện in vitro... kính tản nấm 3.3.5.2 Ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết vi khuẩn P putida 199B đến khả năng kháng nấm mốc A flavusDC213 - Ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết đến kích thước của đường kính tản nấm Sau khi khảo sát xong các điều kiện nhiệt độ, pH, thời gian và tốc độ lắc ta tiến hành nuôi cấy vi khuẩn P Putida 199B ở các điều kiện tối ưu trên.Tiếp đến đem đi ly tâm với tốc độ 12000 vòng/15phút ở 40C, rồi... Kết quả kháng A flavus DC213 sau 3 ngày của dịch chiế vi khuẩn P putida 199B khi thay đổi nhiệt độ DC 350C 250C 300C Hình 4.4 Kết quả kháng A flavus DC213 sau 4 ngày của dịch chiết vi khuẩn P putida 199B khi thay đổi nhiệt độ 24 4.1.2 Ảnh hưởng của điều kiện pH Sau khi khảo sát ảnh hưởng của pH ở các mức 4, 5, 6, 7 và 8 thì tiến hành thu dịch chiết vi khuẩn P putida 199B Ta tiến hành kháng nấm theo... là đối với mỗi loài vi sinh vật sẽ có khả năng kháng khác nhau Riêng đối với loài P putida 2 có thể kháng tốt đối với loài nấm Fusarium Từ kết quả thu được, chúng tôi lựa chọn nhiệt độ tốt nhất trong điều kiện nghiên cứu để thu dịch chiết vi khuẩn P putida 199B là 300C cho các thí nghiệm tiếp theo DC 350C 250C 300C Hình 4.2 Kết quả kháng A flavus DC213 sau 2 ngày của dịch chiết vi khuẩn P putida 199B ... flavus DC213 vi khuẩn đối kháng P putida 199B .39 Từ kết khảo sát khả kháng nấm mốc A flavus DC213 dịch chiết vi khuẩn P putida 199B, nhận thấy dịch chiết vi khuẩn P putida 199B có khả ức chế. .. quản lạc nhằm phòng trừ nấm mốc A flavus Với ý nghĩa đó, tiến hành đề tài "Nghiên cứu khả kháng nấm mốc A flavus DC213 lạc chế phẩm vi khuẩn đối kháng P putida 199B" Mục tiêu đề tài - Ức chế. .. tích khả sinh độc tố Aflatoxin chủng A flavus DC213 vi khuẩn đối kháng P putida 199B Từ kết khảo sát khả kháng nấm mốc A flavus DC213 dịch chiết vi khuẩn P putida 199B, nhận thấy dịch chiết vi