Nghiên cứu khả năng nhân nhanh lan hài mốc hồng (paphiopedilum micranthum) bằng phương pháp in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ THU HOÀI Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG (PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2015-2019 Thái Nguyên, năm 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM DƯƠNG THỊ THU HỒI Tên đề tài “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG (PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K47 - CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2015-2019 Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình Thái Nguyên, năm 2019 i LỜI CẢM ƠN Được sự đồng ý của Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập tốt nghiệp em đã thực hiện đề tài: “Nghiên cứu khả nhân nhanh lan Hài Mốc Hồng (Paphiopedilum micranthum) bằng phương pháp in vitro ” Trang đầu tiên của khoá luận này em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm cùng các thầy cô giáo Khoa đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu này Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới giáo ThS Ngũn Thị Tình, giảng viên khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm đã tận tình chỉ bảo, giúp đỡ và hướng dẫn em thời gian thực hiện đề tài Đồng thời, em xin cám ơn ThS Ma Thị Hoàn đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho em suốt quá trình thực tập tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện vật chất và là chỗ dựa tinh thần cho em suốt thời gian thực tập, cảm ơn bạn bè đã hết lòng động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Trong quá trình thực tập, cũng là quá trình làm báo cáo thực tập thời gian có hạn không tránh khỏi sai sót Em rất mong nhận được ý kiến đóng góp của thầy cô và các bạn để đề tài của em được hoàn thiện Lời cuối em xin kính chúc các thầy, cô giáo nhà trường, khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ thực phẩm, cùng các bạn đồng nghiệp sức khoẻ, thành công cuộc sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 03 tháng năm 2019 Sinh viên thực hiện Dương Thị Thu Hoài ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các nhóm lan Hài Việt Nam theo thứ hạng bảo tồn của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế (IUCN) [1] .8 Bảng 3.1 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 25 Bảng 4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian khử trùng của dung dịch HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của một số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) 37 Bảng 4.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 39 Bảng 4.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 41 Bảng 4.5 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum ( sau 20 ngày nuôi cấy ) 44 Bảng 4.6 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 47 Bảng 4.7 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hồn chỉnh của lan Hài P.micranthum (sau 40 ngày ni cấy ) .49 Bảng 4.8 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) .51 iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh về lan Hài Paphiopedilum micranthum tại nhà lưới khoa CNSH-CNTP 11 Hình 2.2 Sơ đờ q trình phân hóa phản phân hóa của tế bào thực vật Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan Hài P.micranthum 28 Hình 4.1 Biểu đồ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày ni cấy) .36 Hình 4.2 Mợt sớ hình ảnh tạo vật liệu vơ trùng 37 Hình 4.3 Biểu đờ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh đoạn thân mang mầm ngủ lan Hài P micranthum 38 Hình 4.4 Hình ảnh ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy) 39 Hình 4.5 Biểu đồ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày ni cấy) 40 Hình 4.6 Hình ảnh ảnh hưởng của nồng độ NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 41 Hình 4.7 Biêu đồ ảnh hưởng của nồng độ BA đến khả nhân nhanh lan Hài P micranthum (sau 20 ngày nuôi cấy) 42 Hình 4.8 Hình ảnh ảnh nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh chồi lan hài P micranthum ( sau 20 ngày nuôi cấy ) 43 Hình 4.9 Biểu đờ ảnh hưởng của BA tốt nhất kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày ni cấy) 45 Hình 4.10 Hình ảnh ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum ( sau 20 ngày ni cấy ) 46 Hình 4.11 Biểu đờ ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum(sau 20 ngày nuôi cấy ) .47 iv Hình 4.12 Hình ảnh ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum (sau 20 ngày ni cấy) .48 Hình 4.13 Biểu đồ ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày ni cấy) .50 Hình 4.14 Hình ảnh ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy ) 51 Hình 4.15 Biểu đờ ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum(sau 40 ngày nuôi cấy ) .52 Hình 4.16 Hình ảnh ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum (sau 40 ngày nuôi cấy ) 53 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT B5 BAP CS CT CV Đ/C LSD : Gamborg cs, 1976 : 6-Benzyl amino purine : Cộng sự : Công thức : Coeficient of Variation – Hệ số biến động : Đối chứng : Least Singnificant DifferenceTest MS MT GA3 NAA : Murashighe Skoog, 1962 : Môi trường : Gibberellic acid : α-Napthalene acetic acid IAA IBA IUCN : Indole-3-acetic acid : Indole-3-butyric acid : International Union for Conservation of Nature and Natural Resources - Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế : Paphiopedilum micranthum : Paphiopedilum malipones : Woody Plant Medium – Lioyd Mc Cown, 1980 P micranthum P malipoens WPM vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v MỤC LỤC vi Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu của đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài .3 1.4.1 Ý nghĩa khoa học của đề tài 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn .3 Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu về lan Hài (Paphiopedilum) 2.1.1 Phân loại và nguồn gốc .4 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Sinh thái 2.1.4 Hiện trạng lan Hài Việt Nam 2.2 Tổng quan về lan Hài P micranthum 10 2.2.1 Nguồn gốc và sự phân bố lan Hài P micranthum ở Việt Nam 10 2.2.2 Hình thái 10 2.2.3 Các điều kiện bản để nuôi trồng giống lan hài P micranthum 11 2.2.4 Các phương pháp nhân giống vô tính lan Hài Mốc Hồng 12 2.3 Khái quát về nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.2 Cơ sở khoa học của phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.3.3 Điều kiện và môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 vii 2.3.4 Môi trường dinh dưỡng 14 2.3.5 Các công đoạn của nuôi mô tế bào 18 2.4 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài thế giới và nước .19 2.4.1 Trên thế giới 19 2.4.2 Trong nước 21 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 Vật liệu, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 25 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 25 3.1.2 Hoá chất sử dụng .25 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 25 3.2 Phạm vi, địa điểm và thời gian nghiên cứu 26 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu .26 3.2.3 Thời gian nghiên cứu 26 3.3 Nội dung nghiên cứu 26 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian cuả dung dịch khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng 26 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh mầm ngủ lan Hài P micranthum 26 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ đoạn thân mang mầm ngủ .26 3.3.4 Nội dung 4: Nghiên cứu môi trường rễ tạo hoàn chỉnh lan Hài P micranthum 27 3.4 Phương pháp nghiên cứu 27 3.4.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 27 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu quy trình nhân giớng 28 3.4.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 28 3.5 Phương pháp đánh giá và xử lý số liệu 33 viii 3.5.1 Thu thập số liệu .33 3.5.3 Phương pháp sử lý số liệu .34 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .35 4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ, thời gian của dung dịch khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng 35 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh đoạn thân mang mầm ngủ lan Hài P micranthum 37 4.3 Kết qủa nghiên cứu của một số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ đoạn thân mang mầm ngủ 39 4.3.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng cuả NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum 39 4.3.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum 41 4.3.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum 43 4.3.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum .46 4.4 Kết quả nghiên cứu mơi trường rễ tạo hồn chỉnh của lan Hài P micranthum từ mầm ngủ 48 4.4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum 49 4.4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P.micranthum .51 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Averyanov, Phillip Cribb, Phan Kế Lộc, Nguyễn Tiến Hiệp (2008), Lan Hài Việt Nam, Nxb Giao thông Vận tải TP Hờ Chí Minh Lê Trần Bình, Hờ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (2002), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Khoa học và Kỹ thuật Võ Văn Chi (2017), Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam, NXB Giáo Dục Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (Công nghệ di truyền), tập 4, NXB Giáo dục Trương Thị Đẹp (2017), Thực vật dược, NXB Y học, Hà Nội Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắm, Đỗ Thị Thu Hà (2010), Nghiên cứu nhân giống in vitro và nuôi trồng giống lan Hài quý P hangianum perner Gurss (Hài Hằng) thu thập ở Việt Nam, Tạp chí Khoa học và Phát triển 2010 - tập 8, số 2, tr 194-201, Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Quốc Luận, Trịnh Thị Hương, Nguyễn Phúc Huy, Đỗ Khắc Thịnh, Dương Tấn Nhựt (2014), “ Ảnh hưởng của chất bổ sung hữu lên quá trình sinh trưởng phát triển của chồi lan Vân Hài (Paphiopedilum callosum) nuôi cấy intro Mai Xuân Lương (2005), Công nghệ sinh học thực vật, Nxb Đại học Đà Lạt 10 Nguyễn Thị Tuyết Mai (2011), “ Nghiên cứu tạo dòng biến dị in vitro ở lan Hài Hồng (Paphiopedilum delenatii) Vân Hài ( Paphiopedilum callosum) phương pháp chiếu xạ”, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TP HCM 11 Nguyễn Công Nghiệp (2006), Trồng hoa lan, Nxb Trẻ 12 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Nghiên cứu và ứng dụng, Nxb Nông nghiệp 13 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình sinh lý học thực vật, 56 Nxb giáo dục, Hà Nội 14 Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở công nghệ sinh học – T3, Nxb Giáo dục 15 Nguyễn Thiện Tịnh (2001), Lan Việt Nam, Nxb Nơng nghiệp Tp Hờ Chí Minh 16 Bùi Trang Việt (2002), Sinh lý thực vật đại cương, Nxb Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ sinh học tập – Công nghệ sinh học tế bào, Nxb Giáo dục 17 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2002), Công nghệ sinh học – T2, Nxb Giáo dục 18 Sách đỏ Việt Nam (Phần II: Thực vật): Phần - NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ 19 Hoàng Thị Sản (2002), Phân loại học thực vật, Nxb Giáo dục 20 YDVN.NET - Bách khoa toàn thư Y Dược Việt Nam II Tài liệu tiếng anh 21 Chen T Y., Chen J T., Chang W C (2004), “Plant regeneration through direct shoot bud formation from leaf culture of Paphiopedilum orchids”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 76, p 11-15 22 Hong P I., Chen J T., Chang W C (2008), “ Plant regeneration via protocormlike body formation and shoot multiplication from seed-derived callus of a maudiae type slipper orchid”, Acta Physiol Pant 30, p 755-759 23 Huang L C (1988), “A procedure for asexual multiplication of Paphiopedilum in vtro’’, American Orchid Society Bulletin 57, p 274-278 24 Huang L C., Lin C J., Kou C I., Huang B L., Murashige T (2001), “Paphiopedilum cloning in vitro”, Scientia Horticulturae 91, p 111-121 25 Liao Y J., Tsai Y C., Sun Y W., Lin R S., Wu F S (2011), “In vitro shoot induction and plant regeneration from flower buds in Paphiopedilum orchids”, In vitro Cell, Dev Biol plant 47, p 702-709 26 Lin Y.H., Chang c., Chang W.C (2000), “Plant regeneration from callus culture of a Paphiopedilum hybird”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 62, P.21-25 27 Nieman D (1980), “Plantlet formation of Paphiopedilum flower stem”, American 57 Orchid Society Bulletin 49, p 372-373 28 Nhut D T, Thuy D T T., Luan V Q., Don N T., Khiem D V., Tran Thanh Van K (2005), “ Micropropagation of Paphiopedilum delenatii via stem node culture”, Vietnam – Korea International Symposium, Bio-Technology & BioSystem Engineering, p 184-190 29 Sampolinski J (1983), “Formation of plantlets on Paphiopedilum flower stem”, Orchid Review 91, p 229 III Trang Web 30 www.vuonhoalan.net PHỤ LỤC 1: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Bảng 1: Thành phần bản của môi trường MS (Muashige & Skoog) Stock Bottle Component Solution (g/l) I II III IV V Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/l) NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 20 1.650,0 1.900,0 370,0 10 10 10 22,3 10,6 0,83 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 Thiamine acid 100 0,1 0,1 Pyridocine HCl 100 0,5 0,5 Sucrose 30.0000,0 Agar 5.500,0 pH 5,6 - 5,8 Bảng 2: Thành phần bản của môi trường B5 (Gamborg cs, 1976) Đa lượng Vi lượng Các chất hữu Muối khoáng Nồng dộ (mg/l) (NH4)2SO4 134 CaCl2.2H2O 150 MgSO4.7H2O 246 KNO3 2.258 MnSO4.2H2O 10 KI 0.75 Na2MoO4.2H2O 0.25 Na2H2PO4.2H2O 150 ZnSO4.7H2O 2.0 Na2EDTA.2H2O 37.2 H3BO3 CoCl2.6H2O 0.025 CuSO4.5H2O 0.025 FeSO4.7H2O 27.8 Myo- inositol 100 Nicotinic acid Pyrodoxine HCl Thiamine 10 Đường 30 Bảng 3: Thành phần bản của môi trường WPM (Woody Plant Medium Lioyd Mc Cown, 1980) Vi lượng Đa lượng Các chất hữa Muối khoáng Nồng độ (mg/l) CuSO4.5H2O 0.25 Na2EDTA.2H2O 37.2 H3BO3 6.20 MnSO4.H2O 22.30 FeSO4.7H2O 27.8 ZnSO4.7H2O 8.6 CaCl2.2H2O 96 Ca(NO3)2.4H2O 556 KH2PO4 170 K2SO4 990 MgSO4.7H2O 370 NH4NO3 400 NaMoO4.2H2O 0.25 Myo – inositol 100 Pyridoxine HCl 0.5 Glycine 2.0 Nicotinic acid 0.5 Thiamine HCl 1.0 Agar Đường 30 PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ hóa chất thời gian khử trùng bằng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE HGCL2 11/ 5/19 10:58 :PAGE Nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 11659.9 1295.54 20 214.215 10.7107 120.96 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 29 11874.1 409.451 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE HGCL2 11/ 5/19 10:58 :PAGE Nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V004 TLMN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 16461.1 1829.02 20 333.567 16.6783 109.66 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 29 16794.7 579.128 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE HGCL2 11/ 5/19 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V005 TLMC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 26002.5 2889.17 20 214.855 10.7427 268.94 0.000 - * TOTAL (CORRECTED) 29 26217.4 904.048 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL2 11/ 5/19 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TLMS TLMN 3 13.3300 84.4400 2.23000 3 23.3300 63.3300 13.3400 46.6633 36.6600 16.6767 50.8867 19.1100 60.0033 20.9967 0.000000 TLMC 30.0033 0.000000 100.000 19.0300 50.5500 13.3300 36.1200 66.6600 20.0067 13.3333 53.3300 6.67000 40.0000 10 40.1100 0.000000 59.8900 SE(N= 3) 1.88951 2.35785 1.89233 5%LSD 20DF 5.57399 6.95557 5.58231 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL2 11/ 5/19 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 30) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON C OF V |CT % | | | | | | TOTAL SS RESID SS TLMS 30 39.230 20.235 3.2727 8.3 0.0000 TLMN 30 32.086 24.065 4.0839 12.7 0.0000 TLMC 30 28.442 30.067 3.2776 11.5 0.0000 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của số môi trường đến khả tái sinh chồi của lan Hài P micranthum BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE B2 12/ 5/19 0:25 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2599.60 1299.80 87.52 0.001 R 140.926 70.4631 4.74 0.089 * RESIDUAL 59.4080 14.8520 * TOTAL (CORRECTED) 2799.93 349.992 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B2 12/ 5/19 0:25 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 TL 66.6667 56.6567 26.6667 SE(N= 3) 2.22501 5%LSD 4DF 8.72156 MEANS FOR EFFECT R R NOS 3 TL 46.6667 47.7667 55.5567 SE(N= 3) 2.22501 5%LSD 4DF 8.72156 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B2 12/ 5/19 0:25 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Hài P micranthum F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLBC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | (N= 9) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 49.997 18.708 3.8538 7.7 0.0013 0.0887 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE B3 11/ 5/19 22:40 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ VARIATE V003 LN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES TL ============================================================================= T 5.66773 1.41693 231.59 0.000 R 112000E-02 559998E-03 0.09 0.913 * RESIDUAL 489465E-01 611831E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.71780 408414 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B3 11/ 5/19 22:40 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ T NOS TL 3 3 0.166667 1.833333 0.700000 1.566667 0.763333 SE(N= 3) 0.451601E-01 5%LSD 8DF 0.147263 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 0.998000 1.01400 1.01800 SE(N= 5) 0.349809E-01 5%LSD 8DF 0.114069 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B3 11/ 5/19 22:40 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 15 1.0100 0.63907 0.78220E-01 7.7 0.0000 |R | | | | | | | 0.9129 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE CAY 15/ 5/19 1:21 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.85600 964000 123.91 0.000 R 875999E-02 438000E-02 0.56 0.594 * RESIDUAL 622396E-01 777995E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.92700 280500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CAY 15/ 5/19 1:21 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TL 0.666667 1.500000 1.566667 1.900000 2.166667 SE(N= 3) 0.509246E-01 5%LSD 8DF 0.166060 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 1.52600 1.58000 1.57400 SE(N= 5) 0.394460E-01 5%LSD 8DF 0.128630 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CAY 15/ 5/19 1:21 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi lan P.micranthum từ mầm ngủ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 15 1.5600 0.52962 0.88204E-01 5.7 0.0000 0.5944 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE CC 28/ 5/19 13:18 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1.74016 435040 63.65 0.000 R 278533E-01 139267E-01 2.04 0.192 * RESIDUAL 546799E-01 683499E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.82269 130192 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CC 28/ 5/19 13:18 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 DF TL 1.86667 2.06333 2.83333 2.46667 2.13333 SE(N= 3) 0.157319E-01 5%LSD 8DF 0.465649 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 2.21200 2.30800 2.29800 SE(N= 5) 0.369729E-01 5%LSD 8DF 0.120565 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CC 28/ 5/19 13:18 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với Giberellin đến khả nhân nhanh chồi lan P micranthum từ mầm ngủ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.2727 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.36082 0.82674E-01 3.6 0.0000 |R | | | 0.1919 | | | | Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ mầm ngủ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 111 13/ 5/19 9:10 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ mầm ngủ VARIATE V003 HS SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.06843 267107 37.66 0.000 R 653333E-01 326667E-01 4.61 0.046 * RESIDUAL 567333E-01 709166E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.19049 850352E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 111 13/ 5/19 9:10 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ mầm ngủ MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF HS 1.43333 2.23333 2.93333 1.83333 1.66667 SE(N= 3) 0.486198E-01 5%LSD 8DF 0.158544 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HS 1.90600 1.80600 1.74600 SE(N= 5) 0.376608E-01 5%LSD 8DF 0.122808 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 111 13/ 5/19 9:10 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết chuối đến khả nhân nhanh chồi lan Hài P micranthum từ mầm ngủ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT |R | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 15 1.8193 0.29161 0.84212E-01 4.6 0.0001 0.0464 Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMRR FILE IAA 14/5/19 10:57 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum VARIATE V003 VAR03 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1T 8133.33 2033.33 53.02 0.000 2R 4.47560 2.23780 0.06 0.944 * RESIDUAL 306.813 38.3517 * TOTAL (CORRECTED) 14 8444.62 603.187 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IAA 14/ 5/19 10:57 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum MEANS FOR EFFECT VAR01 T NOS 3 3 TL 13.3333 40.0000 56,6667 80.0000 26.6667 SE(N= 3) 3.57546 5%LSD 8DF 11.6592 MEANS FOR EFFECT VAR02 RNOS TL 5 43.3340 42.6640 44.0020 SE(N= 5) 2.76954 5%LSD 8DF 9.03118 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IBA 14/ 5/19 10:57 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | TLMRR 15 43.333 24.560 6.1929 14.3 0.0000 0.9435 |R | Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE TL 14/ 5/19 15:31 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 8466.67 2116.67 79.35 0.000 R 31.1422 15.5711 0.58 0.584 * RESIDUAL 213.414 26.6767 * TOTAL (CORRECTED) 14 8711.22 622.230 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TL 14/5/19 15:31 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 DF TL 23.3333 70.0000 93,3333 53.3333 43.3333 SE(N= 3) 2.98198 5%LSD 8DF 9.72395 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 55.3340 58.6680 55.9980 SE(N= 5) 2.30984 5%LSD 8DF 7.53214 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TL 14/ 5/19 15:31 :PAGE Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh của lan Hài P micranthum F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMRR GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V (N= 15) SD/MEAN NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 15 56.667 24.945 5.1649 |T |R | | | | | | 9.1 0.0000 | | | | 0.5837 ... HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ THU HOÀI Tên đề tài “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI MỐC HỒNG (PAPHIOPEDILUM MICRANTHUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào... nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập tốt nghiệp em đã thực hiện đề tài: Nghiên cứu khả nhân nhanh lan Hài Mốc Hồng (Paphiopedilum micranthum) bằng phương pháp. .. 27 3.4 Phương pháp nghiên cứu 27 3.4.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 27 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu quy trình nhân giớng 28 3.4.3 Phương pháp bố trí