Kết quả thực hành môn học thực hành hóa sinh căn bản

Kết quả thực hành môn học thực hành hóa sinh căn bản

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DUY TÂN

BÀI 1: KHẢO SÁT ENZYME

BÀI 2: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ CỦA ENZYME

BÀI 3: SACCHARIDE

BÀI 4: LIPID

BÀI 5: AMINO ACID VÀ PROTEIN

BÀI 6: TÌM NHỮNG CHẤT BẤT THƯỜNG TRONG NƯỚC TIỂU

BÀI 1:

KHẢO SÁT ENZYME I/ MỤC TIÊU:

1 Nắm được cơ chế hoạt động của enzyme

2 Biết được một số enzyme thủy phân cơ bản và những cơ chất tương ứng được

thủy phân bởi các enzyme đó

II/ THỰC HÀNH:

1 Thí nghiệm 1: Thủy phân tinh bột bằng Amylase

a Nguyên tắc:

- Tinh bột khi có mặt của Amylase bị thủy phân thành các dextrin

- Thời gian thủy phân càng kéo dài thì càng tạo các dextrin với phân tử lượng

càng nhỏ và cuối cùng là maltose

- Các sản phẩm tạo thành ở mức độ thủy phân khác nhau từ tinh bột tạo thành

màu khác nhau với dung dịch Iốt

Ống 5: 20pỐng 4: 15pỐng 3: 10p

Ống 1: 0pSau thời

gian

Nhỏ 1 giọt

dd Iốt 1%

d Kết quả và bàn luận:

 Quan sát ta thấy: ( từ trái sang phải)

- Ống 1: có màu tím than

- Ống 2: có màu tím than nhưng nhạt hơn ống 1

- Ống 3: có màu nhạt hơn ống 2 (màu nâu)

3, ống sẽ có màu nhạt hơn ống 2 (dần chuyển qua màu nâu) Ở ba ống 1, 2, 3: thờigian từ 0 đến 10 phút màu còn tối là vì lượng tinh bột chưa được thủy phân hết, cònnhiều nên khi cho Iốt tác dụng với tinh bột cho ra màu nhạt dần từ tím đến nâu Vẫn như vậy, sau 5 phút, khi sang ống 4, ống sẽ có màu vàng cam, sự chuyểnđổi màu rõ rệt hơn vì lượng tinh bột đã bị thủy phân gần hết Cuối cùng là ống 5,lượng tinh bột đã bị thủy phân hết nên có màu vàng nhạt

1.5 ml dd phenolphthalein 1%

 Giải thích:

Ở ống 1, khi cho 1.5 ml dd Urê 10% và 2 giọt dd Phenolphthalein 1% tác dụngvới nhau thì ta thấy xuất hiện mà phớt hồng là bởi vì Urê có tính kiềm yếu nên khicho phenolphthalein vào sẽ có màu như vậy

Ở ống 2, vẫn với lượng dd Urê 10% và dd Phenolphthalein 1% như ống 1, vàthêm 0.5g bột đậu nành thì ta thấy sự tách lớp, vì Urê đã bị thủy phân bởi bột đậunành tạo ra NH3(môi trường kiềm) Khi cho phenolphthalein vào thì dd sẽ có màuhồng bị vẩn đục ở lớp trên, lớp dưới sẽ có màu vàng là do bột đậu nành chưa tanhết

3 Thí nghiệm 3: Thủy phân Lipid bằng Lipase

a Nguyên tắc:

Lipid (Triglyceride) bị thủy phân thành glycerol và acid béo, sự giải phóng raacid làm acid hóa môi trường phản ứng

b Hóa chất và dụng cụ:

- Ống nghiệm - Dd sữa nhũ tương

 Giải thích:

Trong sữa nhũ tương có lipid nên khi cho phenolphthalein vado thì cả hai ốngđều không đổi màu Đến khi nhỏ từ từ Na2CO3 vào hai ống dd bắt màu hồng (vì

Na2CO3có môi trường kiềm)

Tiếp theo khi cho nước cất vào ống 1 và dịch tụy vào ống 2, thì dd trong ống 1vẫn không đổi màu, còn ống 2: vì trong dịch tụy có enzyme thủy phân lipid thànhglycerol và acid béo (môi trường acid), acid sẽ tác dụng với base tạo ra muối (môitrường trung tính) nên sẽ làm mất màu hồng

HÌNH ẢNH CẢ BA THÍ NGHIỆM

BÀI 2:

XÁC ĐINH HỌAT ĐỘ ENZYME I/ MỤC TIÊU:

1 Nắm được phương pháp đo quan và ứng dụng

2 Định lượng sGOT, sGPT, amylase

II/ THỰC HÀNH:

CÁCH VẬN HÀNH MÁY SH PRIETEST TOUCH

Ở bài thí nghiệm này thì cả 3 thí nghiệm đều có những bước tiến hành giốngnhau, chỉ khác ở tỉ lệ pha mẫu thử:

- Đối với thí nghiệm xác định hoát độ sGOT, sGPT:

Bước 1: Khởi động máy

 Vệ sinh máy, kiểm tra dây cáp điện, ống dẫn hóa chất… đã sẵn sàng

 Bật công tắt nguồn

 Hệ thống khởi đông xong màn hình chính hiển thị MENU

 Rửa máy: đưa nước cất đến vị trí hút mẫu, chọn WASH ( tương tự lặp lại 3lần)

Bước 2: Chạy mẫu thử bệnh nhân

 Chuẩn bị mẫu bệnh nhân (hút hóa chất, huyết tương, ủ)

 Trên màn hình chính MENU di chuyển con trỏ đến xét nghiệm cần làm(sGOT, sGPT, Amylase) sau đó chọn ENTER chọn SEL chọn RUN

 Chờ màn hình hiển thị “Press ASP Switch to sip”

 Đưa nước cất đến vị trí hút mẫu, nhấn nút bên dưới ống hút

Sau đó tùy loại xét nghiệm màn hình sẽ hiển thị một trong hai trường hợp sau:

TH1:

 Màn hình hiển thị “Use stored result?”, chọn Yes

 Chờ màn hình hiển thị “Use blank stored result?” chọn Yes

 Chờ màn hình hiển thị “Read sample”, đưa mẫu bệnh nhân đến vị trí hútmẫu, nhấn nút bên dưới ống hút

 Kết quả sẽ hiện ra trong 3 phút

+ Vệ sinh máy sau mỗi lần thí nghiệm

1 Thí nghiệm 1: Xác định hoạt độ sGOT (ASAT) và sGPT (ALAT)

a Nguyên tắc:

- ASAT (GOT) được xác định dựa trên phản ứng:

L-Aspartate + α-Ketoglutarate Oxaloacetate + L-Glutamate

Oxaloacetate + NADHH+L-Malate + NAD+

 MDH – Malate dehydrogenase

- ALAT (GPT) được xác định dựa trên phản ứng :

Alanine + α-Ketoglutarate Pyruvate + L-Glutamate

Pyruvate + NADHH L-Latate + NAD

 LDH – Latate dehydrogenase

b Dụng cụ và hóa chất:

 Hóa chất

- Huyết tương được li tâm thành huyết thanh.

- Thuốc thử Sgot và sgop.

 Dụng cụ

- Ống nghiệm thủy tinh.

- Ông hút thuốc thử và huyết thanh.

- Máy đo quang.

c Tiến hành:

 Định lượng hoạt độ sGOT trong huyết thanh

- Đo bước sóng 340nm (334 – 365nm)

- Nhiệt độ : 30 – 37ºC.

- Đọc đối chiếu với nước cất.

- Trong ống nghiệm cho vào:

+ Thuốc thử : 500 µl

+ Huyết thanh : 50 µl

- Trộn đều và sau khi ủ 1 phút, đọc giá trị.

 Định lượng hoạt độ sGPT trong huyết thanh

- Đo bước sóng 340nm (334 – 365nm).

- Nhiệt độ : 30 – 37ºC.

- Đọc đối chiếu với nước cất.

- Trong ống nghiệm cho vào:

- Kiều My : 22,43 U/L.

*Biện luận :

- Đối với Vũ Đức Anh, trị số 30,48 U/L là bình thường vì trị số sGOTbình thường đối với nam là từ 13-46 U/L Nếu sGOT nhỏ hơn 13 U/Lhoặc lớn hơn 46 U/L thì trị số sGOT là không bình thường

- Đối với Kiều My, trị số 22,43 U/L là bình thường vì trị số sGOT bìnhthường đối với nữ là từ 11-39 U/L Nếu sGOT nhỏ hơn 11U/L hoắc lớnhơn 39 U/L thì trị số sGOT là không bình thường

 Định lượng hoạt độ sGPT trong huyết thanh:

*Kết quả :

- Vũ Đức Anh : 24,21 U/L

-Kiều My : 15,44 U/L.

*Biện luận :

- Đối với Vũ Đức Anh, trị số 24,21 U/L là bình thường vì trị số sGPTbình thường đối với nam là từ 11-59 U/L Nếu trị số sGPT nhỏ hơn 11 U/

L hoặc lớn hơn 59 U/L là không bình thường

- Đối với Kiều My, trị số 15,44 U/L là bình thường vì trị số sGPT bìnhthường đối với nữ là từ 9-37 U/L Nếu trị số sGPT nhỏ hơn 9 U/L hoặclớn hơn 37 U/L là không bình thường

Từ két quả tên ta có được tỉ số Deritis (ASAT/ALAT)

- Vũ Đức Anh : 30,4824,21=1,25

- Kiều My : 22,4315,44=1,45

e Nhận định kết quả:

- Hoạt độ ezyme sGOT và sGPT trong huyết thanh của Vũ Đức Anh vàKiều My là bình thường

- Trong một số trường hợp sgop và sgtp tăng quá cao, quá thấp hoặc 2 trị

số chênh lệch nhau quá nhiều thì có thể mắc 1 số bệnh như : viêm gancấp tính, viêm gan mãn, xơ gan, nhồi máu cơ tim, tăng trọng lượng dưởng

cơ xương, viêm xương, tiêu myglobin

* Những yếu tố ảnh hưởng đến trị số sGOT và sGPT trong huyết thanh

- Yếu tố gây giảm: thiếu vitamin B6

- Yếu tố gây tăng: thuốc điều trị tiểu đường, giảm đau, chống thốngphong,trợ tim, chống động kinh, ngừa thai

2 Thí nghiệm 2: Xác định α amylase huyết thanh

- Ống nghiệm thủy tinh.

- Ông hút thuốc thử và huyết thanh.

- Máy đo quang.

c Tiến hành:

- Thuốc thử: dung dịch RGT đã pha sẵn

- Mẫu thử: huyết thanh

- Bước sóng đo:400 – 410 nm

- Nhiệt độ : 25ºC - 37ºC.

- Đọc đối chiếu với nước cất.

α amylase

- Trong ống nghiệm cho vào:

- Đối với Vũ Đức Anh, giá trị amylase huyết thanh cao hơn so với giá trịbình thường ( >220 U/L).

- Đối với Kiều My, giá trị amylase huyết thanh cũng cao hơn so với giátrị bình thường ( >220 U/L)

e Nhận định kết quả:

- Giá trị bình thường: Amylase huyết thanh, huyết tương <220U/L.

- Huyết thanh, huyết tăng có thể nhận định kết quả là:

+ Suy thận tiến triển: thường tăng, thậm chí cả khí không có viêm tụy.+ Tăng tiết amylase

+ Loét dạ dày tá tràng thủng vào tủy

- Amylase giảm khi tụy bị hoại tử lan rộng, ngoài ra nó còn giảm trong

một số bệnh lý như:

+ Viêm tụy mạn tính

+ Viêm tụy mạn tính tiến triển

+ Xơ hóa ống dẫn tụy tiến triển

BÀI 3:

XÁC ĐINH HỌAT ĐỘ ENZYME I/ MỤC TIÊU:

1 Khảo sát các tính chất hóa học cơ bản của saccharide

2 Định lượng saccharide bằng phương pháp enzyme

Thêm vào mỗi ống nghệm

- Sau khi thêm vào mỗi ống nghiệm 1, 2, 3, 4, 5 lần lượt là 0.5 Glucose 5%,0.5 ml Fructose 5%, 0.5 ml Lactose 5%, 0.5 ml Saccarose 5%, 0.5 ml Formol 5%thì màu dd không đổi

- Sau khi đun cách thủy lần 2 màu dung dịch lần lượt là:

+ Ống 1: Ban đầu dd phớt đỏ, để một thời gian thì có màu hơi xanh, kết tủagạch đỏ

+ Ống 2: Lớp trên có màu phớt đỏ, phía dưới có màu xanh, sau một thời gian

dd có màu xanh đậm hơn ống 1

+ Ống 3: Lớp trên màu vàng nhạt, phía dưới có màu xanh Sau một thời gian

có kết tủa đỏ gạch

+ Ống 4: Có màu xanh, sau một thời gian có kết tủa đỏ gạch

+ Ống 5: Có màu xanh, sau một thời gian có kết tủa đỏ gạch nhưng ít hơnống 4

Giải thích:

Các chất glucose, fructose, lactose, saccarose, formol đều có tính khử, tuynhiên tính khử của các chất giảm dần từ glucose > fructose > lactose >saccarose > formol nên khi hử Cu2+có trong Fehling thành Cu+màu đậm dần từống 1 đến 5

Sau khi đun nóng CuOH tạo thành Cu2O có màu đỏ gạch

R-CHO + 2 Cu(OH)2R-COOH + 2CuOH + 2H2O

2CuOH Cu2O + H2O

2 Thí nghiệm 2: Phản ứng Furfural (Phản ứng Molisch)

a Nguyên tắc:

- Nh ng nhóm –OH rượu bậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thểu b c 2 trong phân t đậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thể ử đường có thể bị khử có thể ường có thể bị khử có thểng có th b kh có thể bị khử có thể ị khử có thể ử đường có thể bị khử có thể ể bị khử có thể

kh nử đường có thể bị khử có thể ước bởi axit mạnh như HCl, Hc b i axit m nh nh HCl, Hởi axit mạnh như HCl, H ạnh như HCl, H ư 2SO4 đ m đ c t o n i đôi ậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thể ặc tạo nối đôi ạnh như HCl, H ối đôi

- Nh ng ch t thu đượu bậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thểc này là d n xu t c a furfural, v i s có m t c aẫn xuất của furfural, với sự có mặt của ủa furfural, với sự có mặt của ớc bởi axit mạnh như HCl, H ự có mặt của ặc tạo nối đôi ủa furfural, với sự có mặt củapolyphenol t o thành ph c h p có màu đ c tr ng khác nhau.ạnh như HCl, H ức hợp có màu đặc trưng khác nhau ợu bậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thể ặc tạo nối đôi ư

b Dụng cụ và hóa chất:

- Fructose 5%

- Ph n ng dảng ức hợp có màu đặc trưng khác nhau ư ng tinh khi xu t hi n vòng tròn màu tím m t phân cáchệm 1ml một dung dịch saccharide, thêm vào 2 giọt ởi axit mạnh như HCl, H ặc tạo nối đôi

gi a 2 l p ch t l ng.ớc bởi axit mạnh như HCl, H ỏng

d Kết quả và bàn luận:

- ng Saccarose: chia thành 2 l p, gi a có 1 vòng màu xanh tím bớc bởi axit mạnh như HCl, H ởi axit mạnh như HCl, H ởi axit mạnh như HCl, H ề

m t phân cách gi a hai l p ch t l ng, l p trên không màu, l p dặc tạo nối đôi ớc bởi axit mạnh như HCl, H ỏng ớc bởi axit mạnh như HCl, H ớc bởi axit mạnh như HCl, H ước bởi axit mạnh như HCl, Hi cómàu tím

Tr ước khi cho axit: c khi cho axit:

Sau khi cho axit:

- ng Glucose: chia thành 2 l p, gi a có 1 vòng màu tím nh t phân cáchớc bởi axit mạnh như HCl, H ởi axit mạnh như HCl, H ạnh như HCl, H

gi a 2 l p ch t l ng, l p dớc bởi axit mạnh như HCl, H ỏng ớc bởi axit mạnh như HCl, H ước bởi axit mạnh như HCl, Hi màu ph t tím, l p trên không màu.ớc bởi axit mạnh như HCl, H ớc bởi axit mạnh như HCl, H

Tr ước khi cho axit: c khi cho axit:

Sau khi cho axit:

- ng Fructose: chia thành 2 l p, l p trên không màu, l p dớc bởi axit mạnh như HCl, H ớc bởi axit mạnh như HCl, H ớc bởi axit mạnh như HCl, H ước bởi axit mạnh như HCl, Hi xanh tím

Tr ước khi cho axit: c khi cho axit:

Sau khi cho axit:

- ng Lactose: gi a có 1 vòng màu tím b m t phân cách 2 l p ch tởi axit mạnh như HCl, H ởi axit mạnh như HCl, H ề ặc tạo nối đôi ớc bởi axit mạnh như HCl, H

l ng, l p trên màuỏng ớc bởi axit mạnh như HCl, H

Tr ước khi cho axit: c khi cho axit:

Sau khi cho axit:

Giải thích:

- Khi cho H2SO4 thì các nhóm OH rượu bậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thểu b c 2 c a glucose, fructose, lactose,ậc 2 trong phân tử đường có thể bị khử có thể ủa furfural, với sự có mặt củasaccarose, formol sẽ b kh nị khử có thể ử đường có thể bị khử có thể ước bởi axit mạnh như HCl, H ạnh như HCl, Hc t o thành furfural ho c chuy n hóa ch tặc tạo nối đôi ể bị khử có thểfurfural

- Furfural ph n ng v i các polyphenol (Molish) cho ra nhũng màu đ cảng ức hợp có màu đặc trưng khác nhau ớc bởi axit mạnh như HCl, H ặc tạo nối đôi

3 Thí nghiệm 3: Khảo sát Polysacccharide (Khảo sát tinh bột)

a Nguyên tắc:

- Tinh b t không tan trong nột dung dịch saccharide, thêm vào 2 giọt ước bởi axit mạnh như HCl, H ạnh như HCl, Hc l nh, trong nước bởi axit mạnh như HCl, Hc nóng t o thành dungạnh như HCl, H

d ch keo g i là h tinh b t.ị khử có thể ọt ồ tinh bột ột dung dịch saccharide, thêm vào 2 giọt

- H tinh b t cho ph n ng Molisch, khppng cho ph n ng kh , v i I tồ tinh bột ột dung dịch saccharide, thêm vào 2 giọt ảng ức hợp có màu đặc trưng khác nhau ảng ức hợp có màu đặc trưng khác nhau ử đường có thể bị khử có thể ớc bởi axit mạnh như HCl, H ối đôi

t o dd màu xanh tím.ạnh như HCl, H

d Kết quả và bàn luận:

Khi cho Iốt vào tinh bột có màu tím than, sau khi đun sôi dung dịch mất màu,dung dịch keo làm lạnh dưới vòi nước thì dd lại có màu tím than, nhưng nhạthơn lúc ban đầu

Ban đầu:

Sau khi đun cách thủy:

Làm lạnh dưới vòi nước:

Giải thích:

- Trong tinh bột có amylose và amylosepectin, amylose sẽ bắt màu xanh vớiIốt, amylosepectin bắt màu tím với Iốt nên dung dịch có màu tím than

- Mặt khác, khi đun nóng thì amylose bị mất màu vì tan trong nước nóng, tạokeo vì amylosepectin không tan trong nước nóng, và khi nguội thì amylose sẽhiện màu trở lại.

4 Thí nghiệm 4: Định lượng glucose bằng phương pháp dùng enzyme (Glucose Oxydase)

- Ống nghiệm thủy tinh.

- Ông hút thuốc thử và huyết thanh.

- Máy đo quang.

e Nhận định kết quả:

- Có thể do nhịn đói lâu ngày

- Giảm trong thiểu năng tuyến yên, tuyến thượng thận, dùng nhiều insulin

BÀI 4 + 5:

LIPID, AMINO ACID VÀ PROTEIN I/ MỤC TIÊU:

1 Khảo sát tính hòa tan của Lipid trong các dung môi khác nhau

2 Nắm được tính chất hóa học của amino acid, protein

3 Hiểu rõ và tiến hành được phương pháp định lượng protein, creatinine

Triglyceride + 3H2O Glycerol + 3R-COOH

Glycerol + ATP Glycerol-3-Phosphate + ADPGlycerol-3-Phosphate Dihydroxyacetone Phosphate + H2O2

2H2O2 + 4-amoniantipyrin + phenol Đỏ quinone + 4H2O

 Thành phần các lipoprotein máu:

Lipoprotein Phân đoạn Lipid Phân đoạn protein

Cholesterol Triglycerid Phospholipid

Peroxydase

 Các thể vi chất (Chymomocrom)

 VLDL: Lipoprotein có tỷ trọng rất thấp [Very Low Density Lipoprotein]

 LDL: Lipoprotein có tỷ trọng thấp [Low Density Lipoprotein]

 HDL: Lipoprotein có tỷ trọng cao [High Density Lipoprotein]

Lượng triglycerid: 132.1 (mg/DL) x 0.0114 = 1.50594 (mmol/l)

Lượng Trigyceride cao hơn so với lượng Triglycerid bình thường

d Nhận định kết quả:

Loại mỡ trong máu Trị số bình thường Trị số không tốt gây hại

cho sức khỏe Cholesterol toàn phần <200 mg/dL

HDL – Cholesterol >50 mg/dL

>1,3 mmol/L)

<40 mg/dL(<1 mmol/L)

 Bình thường: Triglyceride < 2,2 mmol/L

 Triglyceride máu tăng vừa (3 – 4 mmol/L) có thể thấy trong các trường hợpsau: đái đường,cường hoặc thiểu năng tuyến thượng thận, bệnh thống phong(gút), những bệnh về gan (ứ mật,xơ gan), viêm tụy cấp và mạn, hội chứngthận hư, suy thận, Cushing