Nghiên cứu điều chế cốm pha hỗn dịch CLARITHROMYCIN 125 mg

Nghiên cứu điều chế cốm pha hỗn dịch CLARITHROMYCIN 125 mg

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

MAI XUÂN LAN

NGH IÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CỐM PHA HỖN DỊCH

CLARITHROMYCIN 125 mg

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh – 2015

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

MAI XUÂN LAN

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CỐM PHA HỖN DỊCH

CLARITHROMYCIN 125 mg

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Người hướng dẫn: PGS TS LÊ HẬU

Thành phố Hồ Chí Minh – 2015

MỤC LỤC

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT V DANH MỤC BẢNG VIII DANH MỤC HÌNH X LỜI CÁM ƠN XI

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

2.1.HOẠT CHẤT 2

2.1.1 Tính chất vật lý 2

2.1.2 Tác dụng dược lý và cơ chế tác động 2

2.1.3 Các dạng chế phẩm chứa clarithromycin 5

2.2.CỐM PHA HỖN DỊCH 6

2.2.1 Khái niệm về hỗn dịch và cốm pha hỗn dịch 6

2.2.2 Thành phần của cốm pha hỗn dịch 7

2.2.3 Phương pháp điều chế cốm pha hỗn dịch 9

2.2.4 Đánh giá cốm pha hỗn dịch 10

2.3.CÁC PHƯƠNG PHÁP CHE VỊ 11

2.3.1 Vị giác 11

2.3.2 Các phương pháp che vị 12

2.3.3 Phương pháp đánh giá độ đắng 14

2.4.MỘT SỐ NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN 15

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

3.1.NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ 17

3.2.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

3.2.1 Thẩm định quy trình định lượng bằng phương pháp HPLC 18

3.2.2 Lựa chọn phương pháp che vị đắng 21

3.2.3 Thiết lập công thức cốm pha hỗn dịch 30

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33

4.1.THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 33

4.1.1 Tính tương thích hệ thống 33

4.1.2 Tính đặc hiệu 34

4.1.3 Khoảng nồng độ và tính tuyến tính 35

4.1.4 Độ chính xác của phương pháp 36

4.1.5 Độ đúng 37

4.1.6 Ảnh hưởng của thời gian lên khả năng chiết mẫu 38

4.1.7 Độ ổn định của dung dịch mẫu 38

4.2.LỰA CHỌN PHƯƠNG PHÁP CHE VỊ ĐẮNG 39

4.2.1 Khảo sát ngưỡng đắng của nguyên liệu 39

4.2.2 Lựa chọn phương pháp che vị đắng 40

4.3.ĐIỀU CHẾ CỐM PHA HỖN DỊCH 49

4.3.1 Tạo hạt nhân clarithromycin bằng phương pháp bao bồi 49

4.3.2 Công thức cốm pha hỗn dịch 52

4.3.3 Đánh giá các tính chất của cốm 52

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56

5.1.KẾT LUẬN 56

5.2.ĐỀ NGHỊ 56

TÀI LIỆU THAM KHẢO 57

PHỤ LỤC 1

Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học – Năm học 2014 – 2015

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CỐM PHA HỖN DỊCH CLARITHROMYCIN 125 mg

Mai Xuân Lan Thầy hướng dẫn: PGS TS Lê Hậu

Mở đầu và đặt vấn đề

Clarithromycin là kháng sinh thường được sử dụng để điều trị các bệnh nhiễm ở trẻ em Tuy nhiên thuốc không bền khi bảo quản ở dạng lỏng và có vị đắng gắt Do đó, mục tiêu của đề tài là điều chế cốm pha hỗn dịch chứa clarithromycin 125 mg có vị dễ chịu nhằm tăng cường sự tuân thủ điều trị ở trẻ

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Đề tài đã khảo sát ngưỡng đắng của nguyên liệu clarithromycin (CLR) từ đó lựa chọn các phương pháp che vị đối với hoạt chất như tạo phức với kyron, β – cyclodextrin, xát hạt với các polyme eudragit và sử dụng hệ màng bao để ngăn chặn sự tan của CLR tại khoang miệng Sau đó cốm che vị CLR được trộn hoàn tất với các tá dược tạo vị ngọt khác nhau, mùi trái cây, aerosil, sucrose là tá dược độn, natri carboxy methyl cellulose là tá dược treo Cốm pha hỗn dịch được kiểm nghiệm các chỉ tiêu về góc nghỉ, độ ẩm, độ đắng, định tính,

định lượng và độ phóng thích hoạt chất in vitro Đề tài cũng xây dựng và thẩm định quy

trình định lượng CLR trong chế phẩm và trong thử nghiệm độ phóng thích hoạt chất bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Kết quả và bản luận

Quy trình định lượng bằng phương pháp HPLC đạt các tiêu chí thẩm định, có thể áp dụng

để định lượng CLR trong chế phẩm và thử nghiệm độ phóng thích hoạt chất Phương pháp bao hạt nhân CLR với hai lớp màng bao lần lượt là surelease®

với mức tăng trọng 2% và eudragit EPO với mức tăng trọng 30% tạo ra cốm có vị đắng không đáng kể Hạt nhân CLR được điều chế bằng phương pháp bao bồi hỗn dịch CLR lên hạt nhân trơ MCC 101 kích thước 350 µm Cốm pha hỗn dịch sử dụng chất làm ngọt là sucralose cùng với các tá dược chức năng khác đạt các chỉ tiêu đề ra, có mùi vị dễ chịu và phóng thích hơn 80% hoạt chất sau 20 phút

Kết luận

Đề tài bào chế thành công cốm pha hỗn dịch chứa 125 mg clarithromycin, chế phẩm đạt các chỉ tiêu đã đề ra và đáp ứng được yêu cầu điều trị

Final assay for the degree of BS Pharm – Academic year: 2014 – 2015

PREPARATION OF CLARITHROMYCIN 125 MG GRANULES FOR ORAL SUSPENSION

Mai Xuan Lan Supervisor: Assoc Pro Dr Le Hau Introduction

Clarithromycin (CLR) has been used for treatment of infection in children for a long time However the drug is unstable when stored in liquid formulation and have extremely bitter taste Therefore, the aim of this study is to prepare granules for oral suspension containing

125 mg of clarithromycin which has desirable taste to enhance treatment compliance of children

Materials and methods

Bitter threshold of clarithromycin API was determined as a basis for selection of taste masking methods such as complexation with kyron, β – cyclodextrine, wet granulation using eudragit polymers as binders and polymer coating Taste-masked granules were mixed with a variety of sweeteners, fruity flavour, sucrose, sodium carboxy methyl cellulose, aerosil Granules for oral suspension were evaluated for angle of repose,

moisture content, bitterness level, identification, assay and in vitro drug release A high

performance liquid chromatography (HPLC) method was developed and validated for the determination of clarithromycin content in the granules as well as percentage of CLR released

Results and discussion

The HPLC method was proven to be applicable in quantitative estimation of CLR in formulation CLR spheres were prepared by drug layering method on MCC 101 350 µm spheres Two layered polymer coating on CLR spheres with Surelease® at 2% weight gain and Eudragit EPO at 30% weight gain totally masked the bitter taste of CLR Granules for oral suspension prepared using sucralose as sweetener and other excipients met the mentioned requirements and released more than 80% drug content after 20 minutes

Conclusion

Successfully prepared clarithromycin granules for oral suspension which met treatment requirement

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

Từ viết tắt Từ nguyên gốc Nghĩa tiếng Việt

BCS Biopharmaceutics Classification System Phân loại sinh dƣợc học

FDA Food and Drug Administration Cục quản lý Thực phẩm và

Dƣợc phẩm Hoa Kỳ HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu năng cao HPMC Hydroxypropyl methylcellulose

HPMCP Hydroxypropyl methylcellulose phtalate

MCC Microcrystalline Cellulose Cellulose vi tinh thể

Thông số quy trình bao che vị trên cốm xát hạt 46

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1 Công thức cấu tạo CLR 2

Hình 2.2 Cấu trúc giải phẫu của lưỡi 11

Hình 3.1 Sơ đồ điều chế cốm che vị CLR chỉ sử dụng tá dược tạo vị ngọt 23

Hình 3.2 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với kyron 24

Hình 3.3 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với β - cyclodextrin 25

Hình 3.4 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng cách xát hạt với dịch polyme 26

Hình 3.5 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp nghiền nhão với polyme 27

Hình 3.6 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp bao polyme 29

Hình 4.1 Sắc ký đồ mẫu trắng 34

Hình 4.2 Sắc ký đồ mẫu giả dược 34

Hình 4.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 35

Hình 4.4 Sắc ký đồ mẫu thử 35

Hình 4.5 Đường biểu diễn diện tích đỉnh theo nồng độ của các dung dịch chuẩn 36

Hình 4.6 Kết quả khảo sát các phương pháp che vị 46

Hình 4.7 Khảo sát hiệu quả che vị với lớp bao lót Surelease 47

Hình 4.8 Đường biểu diễn độ phóng thích hoạt chất sơ bộ 48

Hình 4.9 Khảo sát hiệu quả che vị của phương pháp bao trên hạt nhân 51

Hình 4.10 Đường biểu diễn sự phóng thích hoạt chất với các lớp bao khác nhau 54

LỜI CÁM ƠN

Lời đầu tiên em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy PGS TS Lê Hậu, sự hướng dẫn

tận tình của thầy là hành trang để em tự tin bước trên con đường sự nghiệp trong tương lai của mình

Em cũng chân thành cảm ơn thầy ThS Lê Tuấn Tú vì đã bỏ nhiều thời gian quý báu để

đọc, phản biện và góp ý để khóa luận được hoàn thiện hơn

Xin cảm ơn quý thầy cô bộ môn Công nghiệp dược đã tạo nhiều điều kiện thuận lợi để em hoàn thành các công việc thực nghiệm cũng như một người không thể không nhắc đến ở

đây là chị Nguyễn Thị Nhiễn vì đã giúp đỡ chúng em rất nhiều khi làm việc ngoài giờ

Lời cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè đặc biệt là các bạn cùng làm khóa luận tại

bộ môn về những lời động viên tinh thần vô giá trong suốt thời gian qua

Mai Xuân Lan

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trẻ em là một đối tượng sử dụng thuốc đặc biệt do đặc điểm sinh lý ở lứa tuổi này vẫn chưa phát triển hoàn thiện như ở người trưởng thành Một trong những đặc điểm đó là phản xạ nuốt kém gây khó khăn trong việc sử dụng thuốc, ngoài ra, tâm lý của trẻ không thích việc uống thuốc do vị đắng thường gặp trong nhiều hoạt chất Chính vì vậy, dạng bào chế thường được lựa chọn cho đối tượng này thường là dạng bào chế lỏng có mùi vị ngọt, hấp dẫn Đối với một số hoạt chất không bền vững trong môi trường nước, điển hình là các kháng sinh thì thường được bào chế dưới dạng cốm pha hỗn dịch

Clarithromycin là kháng sinh nhóm macrolid được chỉ định nhiều để điều trị các bệnh nhiễm ở trẻ em Tuy nhiên, thuốc không bền khi bảo quản ở dạng lỏng, hầu như không tan trong nước, lại có vị đắng mạnh gây ảnh hưởng đến sự tuân thủ điều trị của trẻ

Vì những lý do đã nêu, đề tài ―Nghiên cứu điều chế cốm pha hỗn dịch clarithromycin 125 mg‖ được thực hiện với các mục tiêu:

1- Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng clarithromycin bằng phương pháp HPLC 2- Lựa chọn phương pháp che vị đắng phù hợp cho clarithromycin mà vẫn đảm bảo được

sự phóng thích hoạt chất

3- Xây dựng công thức hoàn tất cho dạng bào chế

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Cảm quan: Bột kết tinh trắng hoặc trắng đục, không mùi, vị đắng

Tính tan: Hầu như không tan trong nước, tan trong aceton và cloroform, tan kém trong methanol, ethanol và ether [7]

Nhiệt độ nóng chảy: 217 – 220 o

C Phân loại BCS: nhóm II (khó tan, dễ thấm)

Công thức cấu tạo (Hình 2.1)

CLR có tác dụng mạnh hơn erythromycin một chút đối với Moraxella (Branhamella) catarrhalis và Legionella spp Tác dụng rất mạnh đối với Chlamydia spp, Ureaplasma urealyticum và hơn hẳn các macrolid khác đối với Mycobacterium avium nội bào (MAI = Mycobacterium avium intracellulaire) Nó cũng có tác dụng với M leprae Trong một vài tài liệu có nói đến tác dụng in vitro với Toxoplasma gondii và có một vài tác dụng với Cryptosporidis

Dược động học

Hấp thu: CLR bền vững trong môi trường acid, hấp thu nhanh qua đường tiêu hóa và mức

độ hấp thu không bị ảnh hưởng bởi thức ăn, không làm ảnh hưởng đến tạp khuẩn ruột Nồng độ đỉnh của CLR và chất chuyển hóa chính 14 - hydroxy clarithromycin thoảng 0,6 - 0,7 microgam/ml, sau khi uống một liều duy nhất 250 mg Ở trạng thái cân bằng động ở cùng mức liều trên cho nồng độ đỉnh khoảng 1 microgam /ml

Phân bố: CLR và chất chuyển hóa chính là 14 - hydroxy clarithromycin được phân bố

rộng rãi và nồng độ trong mô cao hơn nồng độ trong huyết thanh, tập trung ở phổi, tai, mũi, họng, trong dịch đàm, nước bọt, nước mũi … Thể tích phân bố là 175 l

Chuyển hóa: Thuốc chuyển hóa nhiều ở gan, chịu sự chuyển hóa đầu tiên ở mức độ cao

làm cho khả dụng của thuốc giảm xuống còn khoảng 55% Chất chuyển hóa 14 - hydroxy

clarithromycin có hoạt tính và có thể hiệp đồng in vitro với thuốc mẹ để làm tăng đáng kể hoạt tính của CLR trên lâm sàng đối với Haemophilus influenzae

Thải trừ: Đào thải qua đường mật, một phần đáng kể được đào thải qua nước tiểu, khoảng

20 và 30%, theo thứ tự ứng với liều 250 và 500 mg được thải qua nước tiểu dưới dạng không chuyển hóa Đường chuyển hóa phụ thuộc liều sử dụng: Ở liều thấp, sự đào thải qua hai đường là như nhau, ở liều cao, đào thải thủ yếu qua đường tiểu 14 - hydroxy CLR cũng như các chất chuyển hóa khác cũng được thải qua nước tiểu Nửa đời của CLR khoảng 3 - 4 giờ khi người bệnh uống 250 mg CLR, 2 lần/ngày, và khoảng 5 - 7 giờ khi người bệnh uống liều 500 mg, 2 lần/ngày Nửa đời bị kéo dài ở người bệnh suy thận Chất chuyển hóa có nửa đời từ 4 - 9 giờ

Chỉ định

Chỉ định thay thế cho penicillin ở người bị dị ứng với penicillin khi bị nhiễm vi khuẩn nhạy cảm như viêm amidan, viêm tai giữa, viêm xoang cấp, viêm phế quản mạn có đợt cấp, viêm phổi, da và mô mềm

CLR chỉ nên dành để điều trị viêm phổi do Mycoplasma pneumonia và Legionella, bệnh bạch hầu, giai đoạn đầu của ho gà và nhiễm khuẩn cơ hội do Mycobacterium

CLR được dùng phối hợp với một thuốc ức chế bơm proton hoặc với một thuốc kháng

khuẩn khác để diệt trừ H.pylori trong điều trị loét dạ dày tá tràng đang tiến triển

Chống chỉ định

Người bị dị ứng với các macrolid Chống chỉ định tuyệt đối dùng chung với terfenadin, đặc biệt trong trường hợp bị bệnh tim như loạn nhịp, nhịp chậm, khoảng Q – T kéo dài, bệnh thiếu máu cơ tim cục bộ hoặc mất cân bằng điện giải

Tác dụng không mong muốn (ADR)

Thường gặp, ADR > 1/100

Rối loạn tiêu hóa, đặc biệt là ở người bệnh trẻ với tần suất 5%

Phản ứng dị ứng ở mức độ khác nhau từ mày đay đến phản vệ và hội chứng Stevens – Johnson Cũng có thể bị viêm đại tràng màng giả từ nhẹ đến đe dọa tính mạng

Toàn thân: Phản ứng quá mẫn như ngứa, mày đay, ban da, kích thích

Ít gặp, 1/1000 < ADR < 1/100

Tiêu hóa: Các triệu chứng ứ mật (đau bụng trên, đôi khi đau nhiều), buồn nôn, nôn

Gan: Chức năng gan bất thường, bilirubin huyết thanh tăng và thường kèm theo vàng da, sốt phát ban và tăng bạch cầu ưa eosin

Thính giác: Điếc (nếu dùng liều cao), thần kinh giác quan có thể hồi phục

Trên một số ít người, vi khuẩn H.pylori có thể trở nên đề kháng CLR Giống như những

kháng sinh macrolid khác, việc sử dụng CLR ở những bệnh nhân uống đồng thời với những thuốc được chuyển hóa bởi hệ thuống cytocrom P450, có thể làm tăng nồng độ những thuốc đó trong huyết thanh

Thời kỳ mang thai

Chỉ dùng CLR khi thật cần thiết và theo dõi thật cẩn thận

Thời kỳ cho con bú

Cần thận trọng khi cho người cho con bú dùng CLR

Tương tác thuốc

Tương tác quan trọng nhất của kháng sinh macrolid với các thuốc khác là do macrolid có khả năng ức chế chuyển hóa trong gan của các thuốc khác Tác dụng ức chế cytocrom P450 thấy rõ sau khi uống CLR Với các thuốc trị động kinh, CLR ức chế sự chuyển hóa của carbamazepin và phenytoin làm tăng tác dụng phụ của chúng CLR ức chế chuyển hóa

của cisaprid dẫn đến khoảng cách Q – T kéo dài, xoắn đỉnh, rung thất CLR ức chế chuyển hóa trong gan của theophylin và làm tăng nồng độ theophylin trong huyết tương dẫn đến nguy cơ gây ngộ độc Thuốc cũng làm giảm sự hấp thụ của zidovudin Các nghiên cứu dược động học đã chứng minh rằng CLR và các kháng sinh macrolid khác ảnh hưởng đến chuyển hóa của terfenadin dẫn đến tăng tích lũy thuốc này

Liều lượng và cách dùng

Thời gian điều trị CLR còn tùy thuộc vào loại nhiễm khuẩn và mức độ nặng nhẹ của bệnh

và thường kéo dài 7 – 14 ngày

Người lớn: Nhiễm khuẩn đường hô hấp và da: 250 – 500 mg, 2 lần/ ngày Đối với người

bệnh suy thận nặng, liều giảm xuống còn một nửa còn 250 mg, 1 lần/ ngày hoặc 250 mg, 2 lần/ngày Giảm liều xuống 50% nếu độ thanh dải dưới 30 ml/phút

Trẻ em: Liều thông thường: 7,5 mg/kg thể trọng, 2 lần/ ngày đến tối đa 500 mg, 2

lần/ngày Viêm phổi cộng đồng: 15 mg/kg thể trọng, 12 giờ một lần.[2]

2.1.3 Các dạng chế phẩm chứa CLR

Một số chế phẩm chứa hoạt chất CLR hiện đang lưu hành trên thị trường được trình bày trong Bảng 2.1

Một số chế phẩm chứa hoạt chất CLR Bảng 2.1.

Tên thương mại Dạng chế phẩm Hàm lượng Nhà sản xuất

Biaxin Granules Cốm pha hỗn dịch 250 mg/ 5 ml Abbott

2.2 CỐM PHA HỖN DỊCH

2.2.1 Khái niệm về hỗn dịch và cốm pha hỗn dịch

Hỗn dịch là một hệ phân tán dị thể bao gồm 2 pha, pha liên tục (hay pha ngoại), thường ở thể lỏng hoặc bán rắn, pha phân tán (hay pha nội) là chất rắn không tan trong pha ngoại nhưng được phân tán đồng nhất trong pha ngoại

Theo DĐVN, hỗn dịch thuốc gồm các dạng thuốc lỏng để uống, tiêm, dùng ngoài, chứa các hoạt chất rắn không hòa tan, ở dạng nhỏ phân tán đều trong chất dẫn

Ngoài hỗn dịch dạng lỏng có thể uống ngay, còn có một dạng thuốc của hỗn dịch mà người

sử dụng chỉ phân tán trước khi dùng Các chế phẩm này là hỗn hợp khô như bột hoặc cốm, chỉ thành hỗn dịch khi thêm nước vào Dược điển Hoa kỳ quy định trên nhãn của các chế phẩm này phải có dòng chữ ―for oral suspension‖ (―để pha hỗn dịch uống‖) để phân biệt với hỗn dịch dạng lỏng uống ngay là ―oral suspension‖ và các dạng bào chế khác như thuốc bột, thuốc cốm

Ưu điểm

Đối với hỗn dịch nói chung

- Cung cấp dược chất ở thể lỏng thuân lợi cho bệnh nhân khó uống thuốc dạng rắn Mặt khác ở thể lỏng sự chia liều điều chỉnh dễ dàng hơn

- Phù hợp trong trường hợp dược chất khó tan hoặc tan kém trong nước (hoặc dung môi thân nước) ở nồng độ trị liệu

- Mùi vị chế phẩm được cải thiện

- Một số dược chất yêu cầu hiện diện trong ống tiêu hóa dưới dạng phân tán thật mịn nên bào chế dưới dạng hỗn dịch sẽ cung cấp một diện tích bề mặt lớn như mong muốn Cốm pha hỗn dịch

- Bột hoặc cốm để pha hỗn dịch thường là dạng bào chế của các dược chất không bền vững trong môi trường nước Có nhiều dược chất độ ổn định rất kém khi pha chế thành dạng dung dịch hoặc hỗn dịch Dạng bột hoặc cốm pha hỗn dịch có thời gian bảo quản dài vì được tồn trữ, phân phối ở dạng rắn Sau khi pha nước vào, chế phẩm có tuổi thọ rất ngắn, nhưng vẫn phù hợp với một đợt trị liệu nếu được bảo quản trong tủ lạnh

- So với hỗn dịch dạng lỏng, thuốc bột hoặc cốm pha hỗn dịch hạn chế tối đa các hiện tượng biến đổi vật lý như sự thay đổi pH dẫn đến sự thay đổi độ tan của dược chất, sự

tương kỵ của các thành phần có trong chế phẩm, thay đổi độ nhớt, sự chuyển dạng kết tinh của dược chất, sự đóng bánh …

2.2.2 Thành phần của cốm pha hỗn dịch

Dược chất

Hầu như các dược chất trong chế phẩm bột hoặc cốm pha hỗn dịch là các kháng sinh và đối tượng sử dụng là trẻ em Các kháng sinh được dùng như cefaclor, cefadroxil, ampicillin, clarithromycin

Các tá dược

Bột hoặc cốm pha hỗn dịch cần có 2 yêu cầu quan trọng:

- Có tính chất của thuốc bột hoặc thuốc cốm là khô, tơi, đồng nhất và có độ chảy tốt

để dễ phân liều khi đóng gói

- Dễ dàng phân tán thành hỗn dịch khi lắc (không dùng lực phân tán mạnh)

Do vậy, dạng thuốc này vừa sử dụng các tá dược độn, điều vị, mùi của thuốc bột vừa chứa các tá dược dính để xát hạt và các tá dược đặc trưng của dạng hỗn dịch Tá dược sử dụng trong công thức phải có vai trò cụ thể và phù hợp với từng loại dược chất Các tá dược đa chức năng nên được sử dụng để đơn giản hóa công thức

Các tá dược sử dụng trong điều chế thuốc bột/cốm pha hỗn dịch

Chất gây treo (Suspending agent)

Tá dược gây treo phải là loại có tác dụng mạnh, nghĩa là giúp phân tán dược chất để tạo thành hỗn dịch chỉ bằng cách lắc Các tá dược cần hydrat hóa, cần nhiệt độ hoặc lực phân tán mạnh để có thể tạo thành hỗn dịch không phù hợp cho dạng thuốc này Các tá dược gây

treo như thạch, carbomer, methyl cellulose được xem là không phù hợp Khi sử dụng các tá dược mang điện tích cần có sự thận trọng vì có thể gây tương kỵ với các thành phần khác trong chế phẩm

Các chất gây treo thường dùng là bột gôm arabic, natri carboxymethyl cellulose (có thể kết hợp với cellulose vi tinh thể), propylen glycol alginat, gôm adragant, gôm xanthan…

Tá dược làm ngọt

Thường dùng nhất là đường sucrose Trong trường hợp dạng thuốc có chứa các mùi thơm, sucrose có thể được nghiền mịn để tăng diện tích bề mặt, như vậy làm tăng tính hấp phụ các mùi Các chất làm ngọt khác có thể sử dụng như aspartam, saccharin, glucose, manitol

Chất gây thấm

Chất gây thấm chỉ cần thiết trong trường hợp dược chất có tính sơ nước Các chất gây thấm thường dùng nhất là các chất diện hoạt Chất diện hoạt gây phân tán mạnh nhất cần được lựa chọn để có thể dùng ở tỷ lệ thấp nhất Sử dụng quá nhiều chất diện hoạt sẽ làm cho chế phẩm có nhiều bọt khi lắc và chế phẩm có vị khó uống Chất diện hoạt thường dùng nhất là tween 80 Tween 80 ít gây phản ứng tương kỵ do là chất diện hoạt không ion hóa và tác dụng hữu hiệu ở nồng độ ít hơn 0,1% Natri lauryl sulfat có thể được sử dụng nhưng cần lưu ý sự tương kỵ của chất này với các dược chất mang điện tích dương

Tá dược tạo mùi

Che lấp mùi không dễ chịu của hoạt chất như các chất có lưu huỳnh, chế phẩm acid amin, kháng sinh … Các chất thơm có thể từ thiên nhiên hay tổng hợp như tinh dầu, vanilin, mùi cacao, …

Tá dược tạo màu: tạo hình thức đẹp, hấp dẫn cho sản phẩm Các chất màu có thể dùng như

màu thiên nhiên, màu vô cơ, màu hữu cơ tổng hợp

Tá dược độn hay pha loãng:

Nhằm tăng thể tích, khối lượng hạt hoặc pha loãng trong trường hợp dược chất có hoạt tính mạnh Các tá dược độn thường dùng là: nhóm tinh bột (tinh bột, tinh bột biến tính), nhóm đường (lactose, glucose, sucrose, manitol, sorbitol), nhóm cellulose (cellulose vi tinh thể)

Tá dược dính: giúp cho các tiểu phân rắn liên kết lại với nhau tạo thành hạt có độ cứng

thích hợp Một số tá dược dính thông dụng như gôm arabic, hồ tinh bột, polyvinyl pyrolidon …

Tá dược trơn: làm tăng lưu tính của hạt, giúp đạt độ đồng đều khối lượng Các tá dược

thường dùng: talc, aerosil, magnesi stearat

2.2.3 Phương pháp điều chế cốm pha hỗn dịch

Phương pháp trộn đơn giản

Trong các tài liệu chuyên ngành trước kia chỉ đề cập đến dạng thuốc bột pha hỗn dịch, trong đó thuốc bột được điều chế bằng phương pháp trộn đơn giản, không qua giai đoạn tạo hạt Cụ thể là : nguyên liệu ban đầu được nghiền, trộn, đóng gói, không qua giai đoạn tạo hạt Phương pháp đơn giản, dễ thực hiện Tuy nhiên, bột có độ chảy thấp, dễ bay bụi, khó đóng gói Vì vậy, hiện nay người ta thường dùng các phương pháp tạo hạt để điều chế thuốc cốm pha hỗn dịch

Xát hạt qua cỡ rây thích hợp: Khối bột được xát bằng tay hoặc ép bằng máy qua một lưới thép không rỉ có kích thước mắt lưới thích hợp tạo sợi cốm Ngoài việc tạo hạt bằng cách xát qua rây bằng tay hay phương pháp ép đùn bằng máy, hạt có thể được tạo bởi những thiết bị khác như máy tạo hạt siêu tốc, máy tạo hạt tầng sôi

Sấy hạt ở nhiệt độ thích hợp - thường từ 40 đến 70 oC để tránh hư hoạt chất hoặc làm thay đổi tính chất của tá dược Tốc độ sấy cũng cần lưu ý tránh bốc hơi không đều làm cho bề mặt cốm bị cứng nhưng bên trong vẫn chưa khô Thiết bị dùng để sấy có thể là sấy tĩnh bằng tủ sấy hoặc sấy tầng sôi Thời gian sấy thường kéo dài để cốm khô và đạt độ ẩm nhất định Nếu không có quy định cụ thể thì độ ẩm kết thúc thường là ≤ 5%

Sửa hạt qua cỡ rây quy định

Sau đó, hạt có thể được trộn hoàn tất với tá dược tạo mùi, tá dược trơn chảy trước khi đóng gói

Phương pháp xát hạt khô

Nghiền và trộn bột kép: giống như phương pháp xát hạt ướt

Hỗn hợp bột khi được dập thành viên thô trên máy dập viên hoặc được ép qua trục

Nghiền qua máy nghiền với cỡ rây thích hợp

Ngoài các phương pháp xát hạt trên còn có các phương pháp khác như tạo hạt bằng phương pháp phun sấy, tạo hạt bằng nhiệt nóng chảy tá dược

Nhìn chung, về phương diện bào chế, nhà sản xuất ứng dụng kỹ thuật bào chế và bảo quản thuốc bột, người sử dụng sẽ tự chế và bảo quản dạng hỗn dịch Ở giai đoạn bào chế phải đảm bảo sự đồng nhất, không có sự phân lớp các thành phần có trong thuốc Đối với bột pha hỗn dịch uống đa liều thì sau khi pha nước vào, hỗn dịch cần có độ nhớt nhất định để tránh lắng cặn.[3]

Đồng đều khối lượng hoặc đồng đều hàm lượng đối với hỗn dịch đơn liều

Thể tích rót được (Deliverable volume) với hỗn dịch đa liều

pH

Giảm khối lượng do làm khô [17]

Theo Dược điển Việt Nam IV, các chỉ tiêu chung áp dụng cho thuốc cốm (phụ lục 1.8 ) bao gồm:

Hình thức

Thuốc cốm phải khô, đồng đều về kích thước hạt, không có hiện tượng hút ẩm, không bị mềm và biến màu

Độ ẩm

Xác định nước trong các thuốc cốm nói chung theo phương pháp Xác định mất khối lượng

do làm khô (Phụ lục 9.6), trong các thuốc cốm chứa tinh dầu theo phương pháp cất với dung môi (Phụ lục 12.13) Các thuốc cốm có độ ẩm không quá 5,0%, trừ các chỉ dẫn khác

Độ đồng đều khối lượng (Phụ lục 11.3)

Thuốc cốm không quy định thử độ đồng đều về hàm lượng thì phải thử độ đồng đều khối lượng

Độ đồng đều hàm lượng (Phụ lục 11.2)

Trừ khi có chỉ dẫn khác, phép thử này áp dụng cho các thuốc cốm đóng gói một liều, có chứa một hoặc nhiều dược chất, trong đó có các dược chất có hàm lượng dưới 2 mg hoặc dưới 2% (kl/kl) so với khối lượng cốm trong 1 liều

Định tính và định lượng

Theo chuyên luận riêng

Các yêu cầu kỹ thuật khác

Theo yêu cầu chung của thuốc cốm và theo chuyên luận riêng

Vị ngọt thường được cảm nhận ở đầu lưỡi trong khi vị đắng thường ở gốc lưỡi, vị mặn và chua ở hai bên lưỡi Sự nhạy cảm vị giác của lưỡi khác nhau tùy người và tùy lứa tuổi: trẻ

em dưới 6 tuổi nhạy với vị giác hơn trẻ lớn hơn 6 tuôi và người lớn Điều này do các búi vị giác phát triển sớm ở trẻ em và mất dần đi cùng tuổi tác

Hình 2.2.Cấu trúc giải phẫu của lưỡi

Giữa cấu trúc hóa học của một chất và vị giác gây ra cũng thường có mối liên quan Các muối có trọng lượng phân tử thấp thường có vị mặn trong khi các muối có trọng lượng phân tử lớn, các hợp chất chứa nitơ (alkaloid) thường có xu hướng đắng Các hợp chất hữu

cơ có chứa gốc hydroxyl, khi số lượng nhóm OH tăng lên thường cho cảm nhận vị ngọt tăng lên.[4]

Mùi vị của thuốc là một yếu tố quan trọng được quan tâm đối với thuốc dùng bằng đường uống Trong các vị, vị đắng mang lại cảm giác khó chịu nhất lại thường gặp nhất đối với dược chất Do vậy, che vị đắng là một biện pháp nhằm tăng sự tuân thủ điều trị của bệnh nhân

2.3.2 Các phương pháp che vị

Bản chất của việc che vị bằng những phương pháp vật lý hay hóa học, từ đơn giản tới phức tạp là nhằm ngăn chặn các phân tử thuốc tiếp xúc với các chồi vị giác Một số biện pháp phổ biến là:

Dùng tá dược tạo mùi, tá dược tạo vị ngọt: để làm giảm hay lấn áp vị đắng của hoạt

chất Một số chất tạo vị ngọt (bảng 2.3.) được FDA công nhận có thể kể đến như sucralose, aspartam, saccharin … [16]

Kỹ thuật này đơn giản, ít tốn kém nhưng lại khó che vị cho các hoạt chất rất đắng chẳng hạn như CLR

Độ ngọt tương đối của các chất làm ngọt so với sucrose [16]

Điều chỉnh pH: Một số hoạt chất kém tan ở pH khác với pH môi trường miệng Vì vậy,

người ta có thể ức chế sự hòa tan của thuốc bằng cách thêm natri carbonat, natri

bicarbonat, natri hydroxid hay calci carbonat để làm tăng pH khiến cho các hạt chứa hoạt chất hòa tan kém trong môi trường miệng

Thay đổi độ nhớt: Việc làm tăng độ nhớt bằng các tác nhân như các loại gôm,

carbonhydrat có thể làm chậm sự tiếp xúc của các phân tử hoạt chất với chồi vị giác

Phương pháp xát hạt: kích thước hạt tăng lên sẽ làm giảm diện tích bề mặt tiếp xúc của

hạt với các tế bào vị giác nên làm giảm cảm giác đắng Tá dược dính có thể đóng vai trò che vị, đặc biệt là các polyme không tan trong pH nước bọt Có thể tạo hệ phân tán rắn, đưa dược chất vào trong những giá mang hoặc matrix Phương pháp này thích hợp cho hoạt chất ít đắng Hiện nay, hiệu quả của phương pháp xát hạt còn dựa trên sự tương tác thuận nghịch ở mức độ phân tử nghĩa là khi sử dụng tá dược dính là polyme cationic sẽ tương tác với hoạt chất có bản chất anionic để tạo ra phức và ngược lại Sự liên kết của hoạt chất với một đại phân tử polyme ngăn chặn sự tiếp xúc của hoạt chất với các receptor cảm nhận vị giác ở lưỡi Sự tương tác này có thể được tạo ra bằng phương pháp xát hạt ướt thông thường hoặc phương pháp xát hạt nóng chảy Phương pháp che vị này được chứng minh là hiệu quả hơn việc đưa hoạt chất vào giá mang hay matrix thông thường khác, tuy nhiên chỉ có thể áp dụng với dạng bào chế có liều sử dụng từ thấp đến trung bình và hoạt chất có khối lượng phân tử thấp [4],[8]

Hấp phụ bằng nhựa trao đổi ion : một số nhựa trao đổi ion (Kyron T134, Kyron T 112,

Indion 214 …) cũng được dùng rộng rãi trong việc che vị các hoạt chất đắng Chúng hấp phụ trên thuốc, ngăn sự hòa tan của thuốc tại miệng và che vị đắng

Cơ chế hấp phụ của nhựa trao đổi cation với CLR:

Trong môi trường nước:

CLAR+ + R- COO-  R-COO-CLAR+

Trong môi trường dịch tiêu hóa:

R-COO-CLAR+ + H+ (hoặc Na+

)  CLAR+ + R-COOH (hoặc R – COO-Na+) [5]

Bao vi hạt (microencapsulation) là một quá trình trong đó, những giọt nhỏ chất lỏng hoặc

tiểu phân rắn (hạt cốm, pellet, …) được bao lại bởi một lớp phim hoặc vật liệu polyme Đây được xem là phương pháp rất hiệu quả và có nhiều ứng dụng trong ngành dược trong

đó có che vị Việc sử dụng các polyme là chất tạo màng phim giúp hình thành sự ngăn cách về mặt vật lý giữa dược chất và các chồi vị giác do đó che được vị Yêu cầu của lớp bao là không được tan trong môi trường trung tính ở miệng nhưng cũng không được làm chậm hoặc thay đổi sự phóng thích của hoạt chất trong ống tiêu hóa Mặt khác, lớp bao

cũng phải che phủ toàn bộ bề mặt vi hạt, điều này dễ áp dụng với những hạt có bề mặt đồng nhất (pellet) hơn những hạt có nhiều góc cạnh (tinh thể, cốm) Vì vậy việc lựa chọn,

sử dụng, phối hợp các chất bao, số lượng, bề dày lớp bao một cách thích hợp là rất quan trọng Các polyme có bản chất anionic (Eudragit L,S ) có thể tương tác với các hoạt chất có tính cationic làm thay đổi sự phóng thích hoạt chất Có thể sử dụng một lớp bao lót mỏng (ví dụ như HPMC) để ngăn chặn sự tiếp xúc trực tiếp của lớp bao chức năng và hoạt chất.[4],[8]

Các kỹ thuật bao vi hạt thường được sử dụng:

- Bao bằng nồi bao (pan coating)

- Phun sấy và phun – đông tụ (spray drying and spray congealing)

- Bay hơi dung môi (solven evaporation)

- Bao bằng thiết bị tầng sôi (Air suspension coating/Fluidized bed spray coating) Đây là

kỹ thuật bao vi hạt thường được sử dụng nhất hiện nay Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình bao bằng thiết bị tầng sôi được thể hiện trong bảng 2.4.[11]

Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình bao vi hạt bằng thiết bị tầng sôi Bảng 2.4.

Thông số quy trình Tính chất hóa lý của hạt và dịch bao

Trong đó phương pháp thường được sử dụng nhất là đánh giá dựa trên người tình nguyện, thử nghiệm tiến hành như sau:

Một nhóm tình nguyện viên từ 5 đến 10 người được huấn luyện để đánh giá độ đắng của một giai mẫu chuẩn có độ đắng tăng dần tương ứng với mức điểm tăng dần Giai mẫu chuẩn thường dùng là quinin sunlfat [4],[9]

Sau đó, dung dịch thử sẽ được đưa cho tình nguyện viên nếm thử và đánh giá trên cùng một thang đo

2.4 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN

Theo nghiên cứu của Koyama và cộng sự (1990), ngưỡng đắng của CLR – nồng độ tại đó 50% người tình nguyện cảm nhận được vị đắng là 14 µg/ml [6] Năm 2002, Toshio yajima công bố nghiên cứu đánh giá độ đắng của cốm pha si rô CLR, theo đó ngưỡng đắng của hoạt chất trong dạng bào chế với sự ảnh hưởng của các tá dược tạo mùi, điều vị là 135 µg/ml [15]

Mou – ying Fu Lu và cộng sự đã nghiên cứu che vị các kháng sinh macrolid bằng phương pháp tạo giá mang polyme Trong nghiên cứu này, CLR được trộn khô với carbopol, một polyme phân tử lượng cao của các acid acrylic, trong máy trộn Hobart Sau đó, dung dịch CLR 4% trong aceton (kl/tt) được thêm từ từ vào hỗn hợp bột khô này, khuấy trộn để phân tán đều rồi làm bay hơi aceton trong tủ sấy chân không ở 50 oC Các tỷ lệ CLR : carbopol khảo sát là 5:3, 5:2, 5:1 được điều chế bằng cách điều chỉnh khối lượng carbopol trong hỗn hợp Kết quả cho thấy sự thay đổi tỷ lệ carbopol không tạo ra sự khác biệt về sinh khả dụng khi thử trên chó, tỷ lệ 5:3 cho cảm quan ít đắng nhất, tuy nhiên phức chất tạo ra vẫn còn vị đắng do đó các tiểu phân phức chất ở tỷ lệ này tiếp tục được bao bằng polyme để cải thiện vị đắng Hạt có kích cỡ từ 40 – 80 mesh được cho là phù hợp, kích thước hạt lớn hơn khó phân tán thành hỗn dịch trong khi kích thước nhỏ hơn sẽ gây nhiều bất lợi trong quá trình bao Thiết bị sử dụng để bao là máy bao tầng sôi Glatt, kiểu bao Wurster, cỡ lô 300 g Nhiều polyme được khảo sát, trong đó HPMCP 55 nồng độ 10% trong dung môi ethanol hoặc hỗn hợp aceton - alcohol cho kết quả tốt nhất cả về che vị đắng và sinh khả dụng Chất hóa dẻo được sử dụng là dầu thầu dầu khoảng 10%, tỷ lệ tăng trọng là 41% [12] Harshada Sanjay Akre và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu điều chế cốm pha hỗn dịch CLR bằng phương pháp bao vi hạt – bay hơi dung môi trong đó Eudragit L 100 đóng vai trò là tá dược che vị Quy trình điều chế như sau: Phân tán Eudragit L 100 trong aceton, khuấy vài phút sau đó thêm một lượng cân CLR vào dịch Eudragit, khuấy trong 15 phút với tốc độ 4000 vòng/ phút để tạo thành một hỗn dịch đồng nhất Cho hỗn dịch vào khay

để bay hơi aceton hoàn toàn ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ Sau khi thu được khối rắn đem

đi nghiền và rây qua rây 80 mesh để thu được cốm mịn Các tỷ lệ hoạt chất : polyme được khảo sát là 1:1, 1: 2, 1:3, 1:4 và 1:5 Các tiêu chí dùng để đánh giá vi hạt là kích cỡ hạt,

hình thái học, phân bố cỡ hạt, hiệu lực bao (encapsulation efficiency) và độ hòa tan in vitro, qua đó tỷ lệ 1:3 được sử dụng để làm nguyên liệu đầu vào để trộn hoàn tất với các tá

dược chức năng khác bao gồm sucralose, aerosil, acid citric, gôm xanthan, quinidine

yellow, đường Độ giải phóng hoạt chất in vitro của cốm thành phẩm sau 8 giờ là 90%.[10]

Ashish Kumar và cộng sự đã nghiên cứu phương pháp che vị CLR bằng nhựa trao đổi ion Tulsion 335 (cross – linked polyacrylic copolyme) Hoạt chất được trộn với nhựa trao đổi với các tỷ lệ 1:1, 1:2, 1:3 và 1:4 Thêm 200 ml nước cất vào hỗn hợp, khuây trong 5 giờ để

sự hấp phụ CLR lên nhựa trao đổi ion hoàn toàn, lọc hỗn hợp qua lọc chân không, rửa lại bằng nước cất sau đó làm khô trong tủ sấy chân không ở 60 oC đến khi độ ẩm đạt dưới 5% Các phức chất với tỷ lệ hoạt chất và nhựa trao đổi ion khác nhau được đem đi định lượng trong điều kiện thích hợp để xác định phần trăm hoạt chất được hấp phụ lên hạt nhựa Với

tỷ lệ 1:1, 1:2, lượng hoạt chất liên kết với nhựa trao đổi ion thấp hơn tỷ lệ 1:3 và 1:4, trong khi giữa hai tỷ lệ 1:3, 1:4 lượng hoạt chất được hấp phụ khác nhau không đáng kể Do vậy,

tỷ lệ hoạt chất : nhựa thích hợp là 1:3 Để đánh giá sự tương tác của hoạt chất với nhựa trao đổi ion, phương pháp phân tích quang phổ hồng ngoại và nhiễu xạ tia X được tiến hành, kết quả cho thấy không có sự tương tác giữa CLR và Tulsion 335 và có sự chuyển dạng của hoạt chất từ dạng tinh thể sang dạng vô định hình trong quá trình tạo phức Ngoài ra nghiên cứu cũng tiến hành khảo sát sự ảnh hưởng của thời gian trộn và pH lên quá trình

hấp phụ CLR lên hạt nhựa Độ phóng thích hoạt chất in – vitro của phức chất trong môi

trường pH 6,8 đạt 100% sau 60 phút [5]

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ

Danh sách nguyên liệu, hóa chất, dung môi dùng trong bào chế và kiểm nghiệm cốm pha hỗn dịch CLR được liệt kê trong bảng 3.1

Nguyên liệu, hóa chất, dung môi dùng trong thực nghiệm Bảng 3.1.

STT Nguyên liệu, hóa chất, dung môi Tiêu chuẩn Nguồn gốc

Ph Eur USP USP USP USP USP USP USP USP TCCS Tinh khiết Tinh khiết Tinh khiết Tinh khiết

Israel Brazil Trung Quốc

Ấn Độ Pháp Đức Đức Đức Việt Nam Pháp Đức Pháp

Mỹ Anh Đức Nhật

Mỹ Trung Quốc Đức

Trung Quốc Đức

Đức Đức Đức

Danh sách thiết bị dùng trong bào chế và kiểm nghiệm cốm pha hỗn dịch CLR được liệt kê trong bảng 3.2

Trang thiết bị dùng trong bào chế và kiểm nghiệm Bảng 3.2.

Thiết bị thử độ hòa tan

Máy siêu âm

Bể cách thủy

Hệ thống HPLC

SARTORIUS TE 412 Metter Toledo

OHAUS MB45 WiseStir MSH 20A CALEVA MCD 2 IKA T25 Digital UltraTurrax MEMMERT 30 – 1060 ERWEKA TYPE TAP Shanghai Yali GHL - 10 Electrolab TDT – 14L ELMASONIC S300 MEMMERT WNB29 SHIMADZU

Đức

Mỹ Thụy Sĩ Hàn Quốc Anh Đức Đức Đức Trung Quốc

Ấn độ Thụy Sĩ Đức Nhật

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.2.1 Thẩm định quy trình định lượng bằng phương pháp HPLC

Quy trình định lượng

Pha động

Methanol và kali dihydrophosphat 0,067 M (3:2), điều chỉnh bằng acid phosphoric để đạt

pH 3,5 Lọc qua màng lọc cellulose acetat 0,45 µm Siêu âm khoảng 5 đến 10 phút để khử khí

Dung dịch chuẩn gốc

Cân chính xác khoảng 50 mg chất chuẩn CLR cho vào bình định mức 50 ml Thêm khoảng

20 ml MeOH Siêu âm cho tan hoàn toàn Thêm 0,5 ml NaOH 1 M và 19 ml KH2PO40,067M vào dung dịch này Thêm MeOH tới vạch

20 ml dung dịch này cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động tới vạch Lọc qua màng lọc cellulose acetat 0,45 µm vào lọ chứa mẫu

Dung dịch thử trong định lượng độ phóng thích hoạt chất

Dịch thử độ phóng thích hoạt chất đƣợc pha loãng phù hợp, lọc qua màng lọc cellulose acetat 0,45 µm vào lọ chứa mẫu

DA

A

T S

S

Trong đó :

AT: Diện tích pic chính của dung dịch thử (µV.s)

AS : Diện tích pic chính của dung dịch chuẩn (µV.s)

Tiến hành sắc ký các loại mẫu sau theo quy trình phân tích:

- Mẫu trắng: Dung môi pha động

- Mẫu giả dược: bao gồm các thành phần tương tự như chế phẩm thuốc nhưng không chứa dược chất

- Mẫu chuẩn: chứa chất chuẩn cần phân tích trong dung môi pha động

- Mẫu thử: chứa dược chất cần phân tích

Ghi lại các sắc ký đồ Xác định thời gian lưu của hoạt chất cần phân tích

Yêu cầu: Sắc ký đồ các mẫu trắng, mẫu giả dược không xuất hiện pic trong khoảng thời

gian lưu tương ứng với thời gian lưu của chất chuẩn

Sắc ký đồ các mẫu thử cho pic có thời gian lưu tương tự với pic của chất chuẩn trong sắc

ký đồ mẫu chuẩn Trên sắc ký đồ mẫu thử nếu xuất hiện các pic tạp thì pic của hoạt chất phải tách hoàn toàn khỏi các pic tạp và đáp ứng các yêu cầu chung của phương pháp sắc ký lỏng được quy định trong dược điển

Mỗi dung dịch pha sau khi pha được tiến hành sắc ký tại bước sóng 210 nm

Vẽ đường biểu diễn tương quan giữa nồng độ và đáp ứng Mối tương quan tuyến tính được thiết lập bằng cách xác định phương trình ŷ = ax + b, xác định R2, đánh giá tính tương thích của phương trình và ý nghĩa của các hệ số hồi quy

Yêu cầu: Phương pháp đạt độ chính xác khi giá trị RSD kết quả định lượng hàm lượng

hoạt chất có trong các mẫu ≤ 2%

3.2.1.5 Độ đúng

Chuẩn bị 3 mẫu thêm chuẩn bằng cách thêm chính xác một lượng chất chuẩn chất cần phân tích vào mẫu thử đã được xác định trước hàm lượng Lượng chất chuẩn thêm vào tương ứng với 3 mức nồng độ 80%, 100%, 120% so với mức nồng độ định lượng trong quy trình

và nằm trong khoảng tuyến tính của phương pháp Tại mỗi mức nồng độ, thực hiện ít nhất

3 mẫu độc lập Phân tích mẫu theo quy trình phân tích

Tính tỷ lệ phục hồi:

Tỷ lệ phục hồi (%) = (lượng hoạt chất tìm lại/ lượng hoạt chất thêm vào) x 100%

Yêu cầu: Phương pháp định lượng đạt độ đúng khi tỷ lệ phục hồi nằm trong khoảng 98 –

102%

3.2.1.6 Khảo sát ảnh hưởng của thời gian chiết mẫu

Khảo sát quy trình ở những khoảng thời gian cách thủy khác nhau: 30, 45, 60 và 90 phút,

cố định thời gian siêu âm là 20 phút Phân tích mẫu theo quy trình, xác định hàm lượng hoạt chất, so sánh kết quả

3.2.1.7 Độ ổn định của dung dịch chuẩn và dung dịch thử

Bảo quản dung dịch chuẩn và dung dịch thử ở nhiệt độ phòng và trong tủ lạnh trong 8 giờ,

16 giờ, 24 giờ, 32 giờ, 40 giờ và 48 giờ

Tiến hành sắc ký và so sánh với thời điểm ban đầu

3.2.2 Lựa chọn phương pháp che vị đắng

3.2.2.1 Khảo sát ngưỡng đắng của nguyên liệu

Pha dung dịch gốc CLR trong nước có nồng độ 20 µg/ml Pha loãng thành giai mẫu có nồng độ lần lượt: 1,6; 4; 8; 10; 16 µg/ ml Tiến hành xác định ngưỡng đắng của CLR nguyên liệu trên người tình nguyện Ngưỡng đắng của nguyên liệu là nồng độ mà tại đó ít nhất 50% người tình nguyện cảm nhận được vị đắng [6]

3.2.2.2 Lựa chọn các phương pháp che vị đắng của CLR

Vị đắng của CLR ảnh hưởng đến sự tuân thủ của bệnh nhân trong điều trị vì vậy việc che

vị đắng của thuốc là cần thiết Các phương pháp được khảo sát trong phạm vi đề tài bao gồm:

- Chỉ sử dụng tá dược tạo vị ngọt để lấn át vị đắng của hoạt chất

- Tạo phức với Kyron T134

- Tạo phức với β - cyclodextrin

- Xát hạt với tá dược dính chứa eudragit L 100, EPO, NE 30 D

- Nghiền nhão với polyme eudragit L 100, EPO, NE 30 D

- Bao bằng polyme (eudragit L 100, eudragit S100, eudragit EPO, eudragit NE 30D, HPMCP 55)

Quy trình bào chế cốm CLR chỉ sử dụng tá dƣợc tạo vị ngọt

- Nghiền và rây CLR, sucrose qua rây 0,5 mm Trộn khô

- Hòa tan tá dƣợc dính vào dung môi phù hợp

- Trộn ƣớt hỗn hợp bột với dung dịch tá dƣợc dính

- Xát hạt qua rây 1,5 mm

- Sấy cốm ở 60 oC tới khi độ ẩm nằm trong khoảng 1% đến 2,5%

- Sửa hạt qua rây 0,8 mm Trộn hoàn tất với các tá dƣợc chức năng

Hình 3.1 Sơ đồ điều chế cốm che vị CLR chỉ sử dụng tá dƣợc tạo vị ngọt

aa

Trộn ướt Cân, hòa tan

Xát hạt (rây 1,5 mm) sấy 60 0 C, sửa hạt (rây 0,8 mm) Trộn khô

Trộn hoàn tất

Cốm hoàn tất

Quy trình bào chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với kyron T 134

- Phân tán Kyron vào một lượng nước vừa đủ (gấp khoảng 2 - 3 lần tổng khối lượng CLR và Kyron) Khuấy đều

- Nghiền và rây CLR qua rây 0,5 mm

- Phân tán CLR vào hỗn dịch trên Khuấy để sự hấp phụ diễn ra hoàn toàn

- Trải hỗn dịch lên khay sấy Sấy ở 60 oC đến khi độ ẩm đạt từ 3% đến 5%

- Rây qua rây 0,5 mm

- Sử dụng phức CLR – Kyron T 134 như nguyên liệu đầu vào để trộn hoàn tất với các tá dược chức năng khác

Hình 3.2 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với kyron

Kyron T134, nước

Hỗn dịch Kyron

Hỗn hợp dịch CLR hấp phụ trên Kyron CLR

Tá dược chức năng

Cân, phân tán Khuấy

aa

Khuâý từ

Cân, rây 0,5 mm Phân tán

sấy 60 0

C rây 0,5 mm

Trộn hoàn tất

Cốm hoàn tất Phức CLR hấp phụ trên Kyron

Quy trình bào chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với β - cyclodextrin

- Nghiền và rây CLR, β - cyclodextrin qua rây 0,5 mm

- Trộn sơ bộ hai nguyên liệu trên trong cối Thêm một lượng nước vừa đủ để cyclodextrin trương nở hoàn toàn

- Tiếp tục nghiền nhão

- Sấy ở 60 oC đến độ ẩm 3% đến 5%

- Nghiền và rây qua rây 0,5 mm

- Sử dụng phức CLR – cyclodextrin như nguyên liệu đầu vào để trộn hoàn tất với các tá dược chức năng khác

Hình 3.3 Sơ đồ điều chế cốm che vị bằng phương pháp tạo phức với β - cyclodextrin

CLR, β - cyclodextrin

Hỗn hợp bột

Khối nhão

Phức CLR với β - cyclodextrin Nước vừa đủ

Tá dược chức năng

Cân, rây 0,5 mm Trộn sơ bộ

aa

Nghiền nhão

sấy 60 0

C, Nghiền mịn, rây 0,5 mm

Trộn hoàn tất

Cốm hoàn tất