Nghiên cứu biến tính Dendrimer polyamidoamine bằng polymer tương hợp sinh học ứng dụng mang thuốc (TT)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ -NGUYỄN THỊ TRÂM CHÂU NGHIÊN CỨU BIẾN TÍNH CÁC DENDRIMER POLYAMIDOAMINE BẰNG POLYMER TƯƠNG HỢP SINH HỌC (PEG VÀ PLURONIC) ỨNG DỤNG MANG THUỐC Chuyên ngành: VẬT LIỆU CAO PHÂN TỬ VÀ TỔ HỢP Mã số : 62.44.01.25 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ KHOA HỌC VẬT LIỆU TP Hồ Chí Minh – 2016 Cơng trình hồn thành tại: Phịng Vật liệu hóa dược, Viện Khoa học vật liệu ứng dụng, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Những người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN CỬU KHOA TS TRẦN NGỌC QUYỂN Phản biện 1: Phản biện 2: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện tổ chức Viện Khoa học vật liệu ứng dụng, viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt nam, Số 1, Mạc Đĩnh Chi, Q.1, TP Hồ Chí |Minh vào hồi ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Thư viện Quốc gia Việt nam, Thư viện Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam GIỚI THIỆU MỞ ĐẦU Cùng với phát triển khoa học kỹ thuật, người khơng ngừng nghiên cứu để tìm vật liệu nhằm phục vụ cho nhu cầu sống Công nghệ nano đời đáp ứng nhu cầu cấp thiết Trong năm gần đây, nanopolymer tập trung nghiên cứu ứng dụng lĩnh vực y dược Dendrimer nanopolymer nghiên cứu nhiều cấu trúc hình cầu có nhiều khoảng trống bên ứng dụng làm chất mang thuốc, protein phân phối gen Ngày có nhiều loại thuốc sử dụng phải đối mặt với vấn đề độ hòa tan, tác dụng sinh học, độ hấp thụ thời gian tồn trữ ngắn Ngoài ra, thuốc đặc trị có nhiều tác dụng phụ Đặc biệt thuốc chống ung thư gây độc với tế bào ung thư mà gây độc tế bào lành Nhiều báo cáo khoa học việc đóng gói loại thuốc điều trị ung thư vào hệ chất mang polymer hay nanopolymer nâng cao đáng kể độ tan nước độ ổn định lưu trữ thuốc, giúp tăng cường hoạt động chống khối u giảm tác dụng phụ thuốc Dendrimer PAMAM chất mang nanopolymer làm việc cơng cụ hữu ích cho việc phân phối loại thuốc, liệu pháp gen hóa trị [14, 22, 35, 44, 53, 68, 74-76] Tuy nhiên, có nhược điểm dendrimer PAMAM gây độc tính máu ly giải tế bào tương tác mạnh mẽ nhóm -NH2 bề mặt PAMAM với màng tế bào, dẫn đến phá vỡ màng tế bào, đồng nghĩa diệt tế bào [44, 53, 79, 88] Để giải vấn đề này, nhóm -NH2 bề mặt dendrimer PAMAM biến tính polymer tương hợp sinh học, làm triệt tiêu điện tích dương nhóm amine ngăn chặn tiếp xúc nhóm -NH2 với màng tế bào giúp giảm độc tính, tạo khả tương tác sinh học cao chất mang, từ nâng cao hiệu mang thuốc điều trị [14, 35, 80, 83] Ngoài việc biến tính bề mặt PAMAM làm tăng khả mang thuốc PAMAM Trên sở đó, chúng tơi đề xuất đề tài “Nghiên cứu biến tính dendrimer polyamidoamine polymer tương hợp sinh học (PEG Pluronic) ứng dụng mang thuốc” MỤC TIÊU CỦA LUẬN ÁN Nghiên cứu tổng hợp chất mang thuốc sở biến tính dendrimer PAMAM polymer tương hợp sinh học (Pluronic, Polyethylene glycol), với mục tiêu làm giảm độc tính PAMAM (tăng tính tương hợp sinh học) tăng khả mang thuốc PAMAM Trang 3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU LUẬN ÁN Tổng hợp dendrimer PAMAM đến hệ G5.0 từ tâm ethylenediamine (EDA) Nghiên cứu biến tính hệ dendrimer PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 Polyethylene glycol 4000 (PEG4K), Polyethylene glycol 6000 (PEG6K), Polyethylene glycol 10000 (PEG10K), Polyethylene glycol 12000 (PEG12K) Nghiên cứu biến tính hệ dendrimer PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 Pluronic P123, Pluronic F68, Pluronic F127 Pluronic F108 Nghiên cứu tổng hợp dendrimer PAMAM G4.0-F127 với tỷ lệ mol PAMAM/F127 khác Nghiên cứu hiệu nang hóa thuốc chống ung thư 5-Fluorouracil (5-FU) chất mang nano PAMAM-PEG PAMAM-Pluronic Khảo sát tốc độ giải phóng thuốc 5-Fluorouracil hệ dendrimer PAMAM G4.0PEG6K/5-FU in vitro với môi trường đệm PBS (pH=7.4) Khảo sát tốc độ giải phóng thuốc 5-Fluorouracil hệ dendrimer PAMAM G4.0P123/5-FU PAMAM G4.0-F127/5-FU in vitro với môi trường đệm PBS (pH=7.4) Nghiên cứu độc tính tế bào ung thư vú MCF-7 nguyên bào sợi (Fibroblast) hệ chất mang nano dendrimer PAMAM, PAMAM-PEG, PAMAM-Pluronic, PAMAMPEG/5-FU PAMAM-Pluronic/5FU Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA LUẬN ÁN - Tổng hợp biến tính hệ dendrimer PAMAM với polymer tương hợp sinh học PEG Pluronic nhằm tạo hệ chất mang thuốc có tính tương hợp sinh học khả mang thuốc cao - Việc nghiên cứu biến tính PAMAM polymer PEG Pluronic với khối lượng phân tử khác làm sở khoa học cho điều kiện phản ứng gắn kết số lượng mạch PEG hay Pluronic khác lên phân tử PAMAM tạo hệ PAMAM biến tính có kích thước nano khác có khả mang thuốc khác nhau, đặc biệt thuốc chống ung thư 5FU - Kết đề tài sở khoa học cho nghiên cứu nhằm chế tạo hệ mang thuốc “thông minh” hướng tới đích sở PAMAM ĐĨNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN (1) Về mặt tổng hợp PAMAM-Pluronic: - Đã nghiên cứu tổng hợp biến tính thành công dendrimer PAMAM hệ G2.0; G3.0; G4.0; G5.0 với Pluronic có khối lượng phân tử khác (P123; F68; F127; F108) - Trong đó, Pluronic mạch dài khó gắn kết với PAMAM Trang (2) Về mặt so sánh nang hóa thuốc chất mang PAMAM-PEG PAMAMPluronic PAMAM G4.0-PEG PAMAM G4.0-Pluronic có khả nang hóa thuốc tốt Trong đó, PAMAM-Pluronic nang hóa thuốc kỵ nước 5-FU tốt PAMAM-PEG tương ứng (3) Khả mang thuốc PAMAM-P123> PAMAM-F127> PAMAM-F108 > PAMAM-F68 chịu ảnh hưởng giá trị HLB ảnh hưởng mạch cấu trúc BỐ CỤC CỦA LUẬN ÁN Luận án có 169 trang với 30 bảng, 102 hình, đồ thị Ngồi phần mở đầu (2 trang), kết luận (3 trang), danh mục cơng trình cơng bố (2 trang) tài liệu tham khảo (14 trang), phụ lục(15 trang), luận án chia thành chương sau: Chương 1: Tổng quan 41 trang Chương 2: Thực nghiệm 26 trang Chương 3: Kết biện luận 66 trang Trang CHƯƠNG TỔNG QUAN Giới thiệu dendrimer cụ thể dendrimer polyamidoamine (PAMAM), phương pháp tổng hợp, tính chất ứng dụng chúng lĩnh vực y- dược Giới thiệu phương pháp mang thuốc PAMAM, ý nghĩa việc mang thuốc, đặc biệt mang thuốc chống ung thư (ví dụ 5-Flourouracil) cách thụ động chủ động Các phương pháp biến tính bề mặt PAMAM tác nhân tương hợp sinh học polyethyleneglycol (PEG) hay Pluronic nhằm làm tăng tính tương hợp sinh học, tăng khả mang thuốc PAMAM Tổng quan số cơng trình nghiên cứu lĩnh vực tổng hợp, biến tính PAMAM làm hệ mang thuốc chống ung thư Nhìn chung năm gần đây, có nhiều nghiên cứu biến tính dendrimer PAMAM polymer tương hợp sinh học Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu sử dụng phương pháp hoạt hóa Pluronic, PEG NPC khống chế tỷ lệ mol 1:1 (Pluronic/PEG : NPC) sử dụng xúc tác (pyridine) hay dung mơi (benzene) q trình phản ứng Nhược điểm phương pháp dễ xảy khả Pluronic hay PEG bị hoạt hóa hai đầu NPC kết Pluronic hay PEG liên kết đầu vào PAMAM, tạo lớp màng bao phủ bề mặt PAMAM ngăn cản phần thuốc không vào khoảng trống cấu trúc PAMAM [67, 110, 124] Mặt khác, chưa thấy công bố sử dụng hệ Pluronic có khối lượng phân tử khác để biến tính chuỗi hệ PAMAM, nhằm xây dựng hệ thống ảnh hưởng cấu trúc dendrimer PAMAM hệ, cấu trúc Pluronic loại đến mức độ biến tính, độc tính tế bào hiệu nang hóa thuốc Vì cơng trình nghiên cứu luận án này, chúng tơi tập trung biến tính dendrimer PAMAM hệ G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 loại PEG loại Pluronic có khối lượng phân tử khác để xây dựng tính hệ thống mức độ biến tính khả mang thuốc nanopolymer Trang CHƯƠNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ Hóa chất sử dụng nghiên cứu luận án hóa chất tinh khiết hãng Sigma–Aldrich, Acros Organics (Mỹ), Merck (Đức), Amresco (Hàn Quốc) Thiết bị dụng cụ sử dụng máy đông khô chân không FDU-2100 Eyela (Nhật Bản) Viện Cơng nghệ hóa học, Viện HLKH&CN VN; máy JEOL JEM 1400 (Nhật Bản) chụp hình TEM, Trường Đại học Bách Khoa, TP HCM; máy phân tích quang phổ hồng ngoại FTIR Equinox 55 Bruker (Đức), Viện Khoa học Vật liệu ứng dụng, Viện HLKH&CN VN; máy sắc ký gel GPC Agilent 1260 (Hoa Kỳ); sắc ký lỏng HPLC đo máy Agilent 1260 (Hoa Kỳ); Phân tích dịng chảy tế bào đo PTN-SHPT- BM Di truyền Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TP HCM 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Sử dụng phương pháp divergent để tổng hợp nano-dendrimer PAMAM hệ Sử dụng phương pháp phổ 1H NMR, FTIR GPC để xác định thành phần cấu trúc khối lượng phân tử PAMAM hệ PAMAM biến tính với polymer tương hợp sinh học Sử dụng kính hiển vi điện tử truyền qua TEM để khảo sát hình thái sản phẩm PAMAM-PEG PAMAM-Pluronic Sử dụng phương pháp nhuộm SRB, nhuộm MTT nhuộm huỳnh quang FDA/EB để đánh giá độc tính tế bào in vitro Sử dụng UV-Vis HPLC để đánh giá khả mang nhả thuốc PAMAMPEG/5-FU PAMAM-Pluronic/5-FU Sử dụng kỹ thuật nuôi cấy tế bào để đánh giá tương hợp sinh học loại hydrogel hydrogel composite tổng hợp 2.3 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 2.3.1 Tổng hợp PAMAM dendrimer đến hệ G5.0 từ core ethylenediamine (EDA) Quá trình tổng hợp PAMAM dendrimer hệ G5.0 qua 12 giai đoạn, giai đoạn tổng hợp hệ G -0.5 xuất phát core ethylenediamine (EDA) đến hệ ké tiếp G0, G0.5, G1.0, G1.5, G2.0, G2.5, G3.0, G3.5, G4.0, G4.5 G5.0 (hình 2.1) Trang Hình 2.1 Sơ đồ tổng hợp PAMAM dendrimer hệ 2.3.2 Tổng hợp biến tính dendrimer PAMAM hệ G2.0; G3.0; G4.0; G5.0 với PEG 4000 (PEG4K); PEG 6000 (PEG6K); PEG 10000 (PEG10K) PEG 12000 (PEG12K) Để kết nối PEG vào phân tử dendrimer PAMAM với nhóm NH2 bề mặt thơng qua ba giai đoạn, cần thiết phải sử dụng pnitrophenyl chloroformate (NPC) tyramine (TA) tạo chất trung gian Cấu trúc sản phẩm trung gian NPC-PEG-NPC, NPC-PEG-TA sản phẩm PAMAM-PEG xác định qua kết phân tích phổ 1H-NMR, FTIR, GPC hình ảnh TEM 2.3.3 Tổng hợp biến tính dendrimer PAMAM hệ G2.0; G3.0; G4.0; G5.0 với Pluronic P123; F68; F127 F108 Tương tự PEG cấu trúc sản phẩm trung gian NPC-Plu-NPC, NPC-Plu-TA sản phẩm PAMAM-Pluronic xác định qua kết phân tích phổ 1H-NMR, FTIR, GPC hình ảnh TEM 2.3.4 Tổng hợp chất mang nano PAMAM G4.0-F127 với tỷ lệ mol PAMAM G4.0: F127 khác 2.3.5 Nang hóa thuốc chống ung thư 5-Fluorouracil (5-FU) lên loại dendrimer PAMAMPEG PAMAM-Pluronic 2.3.6 Khảo sát tốc độ giải phóng thuốc 5-FU PAMAM-PEG/5-FU, PAMAM-Pluronic/5FU 5-FU 2.3.7 Xác định độc tính tế bào chất mang nano Độc tính hệ chất mang nano xác định lên tế bào ung thư vú MCF-7 nguyên bào sợi (Fibroblast) Trang CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 TỔNG HỢP PAMAM TỪ THẾ HỆ G-0.5 ĐẾN THẾ HỆ G5.0 3.1.1 Xác định cấu trúc dendrimer PAMAM dựa vào phổ khối lượng MS Phổ khối lượng MS phương pháp hiệu để xác định khối lượng phân tử polymer Hình 3.1 Phổ MS dendrimer PAMAM từ G-0.5 đến G2.0 Phổ MS chứng minh sản phẩm từ G-0.5 đến G 2.0 với cấu trúc sản phẩm, phù hợp với lý thuyết (Hình 3.1 bảng 3.1) Bảng 3.1 Khối lượng phân tử dendrimer PAMAM dựa vào phổ MS Thế hệ PAMAM G-0.5 G0.0 G0.5 G1.0 G1.5 G2.0 G2.5 G3.0 G3.5 G4.0 G5.0 Lý thuyết MS MLT MMS Hiệu số sai lệch (%) C18H32O8N2 407 405 0,02 C22H48O4N10 517 517 0,00 C54H96O20N10 1212 1206 0,06 C62H128O12N26 1430 1428 0,02 C126H224O44N26 2823 2808 0,15 C142H288O28N58 3256 3259 0,03 C270H480O92N58 6045 * C302H608O60N122 6909 * C558H992O188N122 12489 * C622H1248O124N250 14215 * C1262H2528O252N506 28826 * (*: Không xác định được) CTPT Trang Tuy MS phương pháp hiệu để xác định khối lượng phân tử, với dendrimer có khối lượng phân tử lớn từ G2.5 (M = 6049) trở MS khơng xác định Kết phù hợp với nghiên cứu nhóm Schwartz [98] Hood [46] Cho nên 1H-NMR phương pháp hiệu để theo dõi, đánh giá khối lượng phân tử độ chuyển hóa dendrimer đặc biệt dendrimer [25, 29, 49, 58, 73, 112-113] đặc biệt dendrimer hệ (G) lớn [47, 69] 3.1.2 Xác định cấu trúc dendrimer PAMAM dựa vào phổ 1H-NMR Độ dịch chuyển hóa học cho proton đặc trưng dendrimer PAMAM ghi nhận theo nhiều báo cáo trước [38, 88-89, 98, 102, 106, 119, 124] Trong kết phổ 1H-NMR tương ứng với proton điển hình cấu trúc dendrimer: CH2CH2N< (a) δH = 2.6 ppm; -CH2CH2CO- (b) δH = 2.8-2.9 ppm; - CH2CH2CONH- (c) δH = 2.3-2.4 ppm; -CH2CH2NH2 (d) δH = 2.7-2.8 ppm; CONHCH2CH2N- (e) δH = 3.2-3.4 ppm; -CH2CH2COOCH3- (g) δH = 2.4-2.5 ppm -COOCH3 (h) δH = 3,7 ppm Dưới kết 1H-NMR dendrimer PAMAM hệ (Hình 3.2) [74] H-NMR PAMAM G-0.5: δH = 2.497 ppm (a), δH = 2.756-2.784 ppm (b), δH = 2.386- 2.454 ppm (g) δH = 3.628-3.702 ppm (h) H-NMR PAMAM G0.0: δH = 2.561-2.573 ppm (a), δH = 2.771-2.815 ppm (b), δH = 2.373-2.400 ppm (c), δH = 2.728-2.753 ppm (d) δH = 3.246-3.336 ppm (e) H-NMR PAMAM G0.5: δH = 2.536-2.560 ppm (a), δH = 2.730-2.783 ppm (b), δH = 2.338-2.394 ppm (c), δH = 3.255-3.312 ppm (e), δH = 2.423-2.496 ppm (g) δH = 3.6313.674 ppm (h) H-NMR PAMAM G1.0: δH = 2.588-2.601 ppm (a), δH = 2.802-2.829 ppm (b), δH = 2.375-2.402 ppm (c), δH = 2.733-2.758 ppm (d) δH = 3.258-3.270 ppm (e) H-NMR PAMAM G1.5: δH = 2.567-2.654 ppm (a), δH = 2.778-2.848 ppm (b), δH = 2.391-2.419 ppm (c), δH = 3.266-3.368 ppm (e), δH = 2.472-2.499 ppm (g) δH = 3.688 ppm (h) H-NMR PAMAM G2.0: δH = 2.582-2.608 ppm (a), δH = 2.795-2.822 ppm (b), δH = 2.368-2.394 ppm (c), δH = 2.699-2.741 ppm (d) δH = 3.250-3.328 ppm (e) H-NMR PAMAM G2.5: δH = 2.536-2.631 ppm (a), δH = 2.748-2.858 ppm (b), δH = 2.390-2.417 ppm (c), δH = 3.261-3.331 ppm (e), δH = 2.473-2.499 ppm (g) δH = 3.6833.688 ppm (h) H-NMR PAMAM G3.0: δH = 2.605-2.618 ppm (a), δH = 2.804-2.831 ppm (b), δH = 2.379-2.404 ppm (c), δH = 2.735-2.760 ppm (d) δH = 3.261-3.334 ppm (e) Trang 10 Hình 3.3 Sơ đồ tổng hợp NPC-PEG-NPC (a), NPC-PEG-TA (b), PAMAM-PEG (c) Phản ứng biến tính PAMAM (G2.0, G3.0, G4.0, G5.0) với nhiều PEG độ dài mạch carbon khác (PEG4K, PEG6K, PEG10K, PEG12K) có bước phản ứng, phổ đồ H-NMR tương tự nhau, nên sử dụng phổ đồ phản ứng PAMAM với PEG4K làm ví dụ, cịn phổ đồ PEG cịn lại có phần phụ lục 4, 5, Kết phổ 1H-NMR NPC-PEG-NPC, NPC-PEG-TA, PAMAM-PEG đo dung mơi CDCl3 Giai đoạn 1: Kết phân tích thành phần, cấu trúc NPC-PEG-NPC thể qua phổ cộng hưởng từ hạt nhân (hình 3.4 phụ lục 4) Phổ đồ có tín hiệu proton có PEG sau: tín hiệu δH = 3,40-3,79 ppm proton nhóm methylene (-OCH2CH2O-) EO tín hiệu proton methylene liên kết trực tiếp với nhóm carbonate δH = 4,44 ppm (-CH2-O-NPC) Sự xuất hai tín hiệu đơi δH = 7,39 ppm δH = 8,29 ppm hai tín hiệu đặc trưng proton nhóm NPC (-CH=CH-) Độ hoạt hóa PEG đạt 90% tính từ tỷ lệ tích phân proton thơm (NPC) proton methylene (PEG) Kết phù hợp với nghiên cứu Park [64] Nguyen [26] Hình 3.4 Phổ 1H-NMR NPC-PEG4K- NPC Phổ đồ 1H-NMR NPC-PEG-NPC khác thể phụ lục cho kết tương tự phổ đồ 1H-NMR NPC-PEG4K-NPC Trang 14 Giai đoạn 2: Kết phân tích thành phần, cấu trúc NPC-PEG-TA thể qua phổ cộng hưởng từ hạt nhân (hình 3.5 phụ lục 5) Phổ đồ có tín hiệu proton có PEG sau: tín hiệu δH = 3,40-3,79 ppm proton nhóm methylene (-OCH2CH2O-) EO PEG Proton methylene liên kết trực tiếp với nhóm carbonate NPC δH = 4,44 ppm (-CH2-O-NPC) Ngồi ra, cịn xuất thêm proton methylene liên kết trực tiếp với nhóm carbonate TA δH = 4,2 ppm (-CH2-O-TA) Kết phù hợp với nghiên cứu Park [64] Nguyen [26] Hình 3.5 Phổ 1H-NMR NPC-PEG4K-TA Sự xuất hai tín hiệu đơi δH=7,40 ppm δH=8.29 ppm hai tín hiệu đặc trưng proton thơm NPC (-CH=CH-) Phổ đồ xuất tín hiệu δH = 6,78 ppm δH = 7,02 ppm tín hiệu proton liên hợp vịng thơm (-CH=CH-) nhóm tyramine Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyen [26] Khoảng 50% gốc NPC thay TA Kết thu từ phép tính tỷ lệ tích phân proton NPC proton TA Phổ đồ 1H-NMR NPC-PEG-TA khác thể Phụ lục cho kết tương tự phổ đồ 1H-NMR NPC-PEG4K-TA Giai đoạn 3: Kết phân tích thành phần, cấu trúc PAMAM PAMAM-PEG thể qua phổ cộng hưởng từ hạt nhân (hình 3.2, hình 3.6 phụ lục 6) Các PAMAM-PEG sau tổng hợp thẩm tách màng MWCO ngày Phổ đồ có tín hiệu proton PAMAM PAMAM-PEG (hình 3.6 phụ lục 6) như: -CH2CH2N< δH = 2.6 ppm; -CH2CH2CO- δH = 2.8 ppm; -CONHCH2CH2N- δH = 3.3-3.4 ppm Các tín hiệu giống với tín hiệu proton PAMAM (hình 3.2) Kết phù hợp với nghiên cứu Xiang Wang [119], Tran [78] Zhuojun Gu [124] Trang 15 Hình 3.6 Phổ 1H-NMR PAMAM G4.0-PEG4K Ngồi ra, phổ đồ hình 3.6 phụ lục 6, khơng cịn thấy xuất hai tín hiệu đặc trưng proton thơm NPC (-CH=CH-) δH=7,40 ppm δH=8.29 ppm; thấy có xuất hai tín hiệu đơi δH = 6,78 ppm δH = 7,02 ppm tín hiệu đặc trưng proton liên hợp vịng thơm (-CH=CH-) nhóm tyramine Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyen [26] Phổ đồ 1H-NMR PAMAM-PEG khác thể phụ lục cho kết tương tự phổ đồ 1H-NMR PAMAM G4.0-PEG4K Điều cho thấy thành công tổng hợp PAMAM-PEG Sự thành công khẳng định thêm qua kết FTIR, GPC TEM 3.2.2 Kết phân tích FTIR PAMAM PAMAM-PEG Dendrimer PAMAM PAMAM-PEG xác định rõ ràng quang phổ hồng ngoại FTIR Hình 3.7 Phổ FTIR PAMAM G4.0 (a) PAMAM G4.0-PEG4K(b) Trang 16 Kết FTIR cho thấy độ chuyển dịch hóa học 3287 cm-1 dao động đặc trưng cho nhóm amine bậc (-NH2) amine bậc (-NH-) PAMAM Đồng thời tín hiệu xuất quang phổ hồng ngoại PAMAM-PEG với độ chuyển dịch hóa học 3423 cm-1, tín hiệu thay đổi mạnh, điều phần cho thấy số lượng nhóm –NH2 giảm đáng kể Bên cạnh đó, hình 3.7.a 3.7.b xuất tín hiệu peak 2942 cm-1 (hình 3.19.a) 2888 cm-1- dao động hóa trị nhóm methylene (-CH2-), nhóm amide (HNC=O) thấy tín hiệu 1644 cm-1 (hình 3.7.a) 1648 cm-1 (hình 3.7.b) Ngồi cịn xuất tín hiệu phổ FTIR PAMAM G4.0-PEG4K độ chuyển dịch 1113 cm-1 đặc trưng cho nhóm C-O-C PEG [7] Kết FTIR 1H-NMR cho thấy NPC-PEG-TA liên hợp với dendrimer PAMAM Phổ FTIR PAMAM-PEG khác thể phụ lục cho kết tương tự phổ IR PAMAM G4.0-PEG4K 3.2.3 Kết GPC PAMAM-PEG Sự thành cơng q trình tổng hợp PAMAM-PEG khẳng định phép đo GPC Trong đó, số nhóm liên hợp tỷ lệ liên hợp tính tốn tương đối theo cơng thức sau: Tính tốn sở kết GPC sản phẩm PAMAM-PEG thống kê đồ thị 3.1 mức độ tỷ lệ biến tính PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 với loại polymer có khối lượng phân tử khác PEG 4K, PEG 6K, PEG 10K, PEG 12K Đồ thị 3.1 Tỷ lệ liên hợp PAMAM-PEG Trang 17 Kết đồ thị 3.1 cho thấy dendrimer PAMAM G4.0 có khả liên hợp cao dendrimer PAMAM G2.0, G3.0 G5.0 Mặt khác, hệ dendrimer PAMAM mức độ liên hợp PEG với PAMAM giảm dần theo tăng chiều dài mạch phân tử PEG (tăng khối lượng phân tử) Ngồi ra, PEG có khối lượng phân tử khác PEG có khối lượng phân tử lớn cấu trúc mạch phân tử dài, cồng kềnh gây cản trở không gian khả liên hợp với PAMAM giảm theo tăng chiều dài mạch carbon phân tử PEG 3.2.4 Kết TEM PAMAM PAMAM-PEG Các phân tử PAMAM PAMAM-PEG quan sát thấy rõ TEM Kết TEM cho thấy kích thước PAMAM G4.0 khoảng 4,5 nm (Hình 3.8.a), kích thước PAMAM-PEG 70-100 nm (Hình 3.8.b hình 3.8.c) (a) (b) (c) Hình 3.8 Hình ảnh TEM PAMAM G4.0 (a), PAMAM G4.0-PEG4K (b) PAMAM G4.0-PEG6K (c) 3.3 TỔNG HỢP PAMAM-PLURONIC Trong tổng hợp PAMAM-Pluronic thành phần cấu trúc sản phẩm trung gian NPC-Plu-NPC, NPC-Plu-TA, PAMAM PAMAM-Pluronic xác định qua kết phân tích phổ 1H-NMR, FTIR, GPC TEM 3.3.1 Qui trình tổng hợp sản phẩm trung gian NPC-Plu-NPC, NPC-Plu-TA, PAMAM sản phẩm PAMAM-Pluronic Qui trình tổng hợp PAMAM-Pluronic thực theo giai đoạn (tương tự qui trình tổng hợp PAMAM-PEG): Hình 3.9 Sơ đồ tổng hợp NPC-Plu-NPC (a), NPC-Plu-TA (b) PAMAM-Pluronic (c) Trang 18 Phổ 1H-NMR NPC-Plu-NPC, NPC-Plu-TA, PAMAM PAMAM-Plu đo dung môi CDCl3 Kết phân tích 1H-NMR sản phẩm trung gian NPC-Plu-NPC, NPC-PluTA, PAMAM PAMAM-Pluronic (giống sản phẩm PAMAM-PEG trên) cho thấy sản phẩm tổng hợp có cấu trúc dự đoán Kết khẳng định thêm qua kết FTIR, GPC TEM 3.3.2 Tính tốn xác định độ chuyển hóa q trình biến tính gắn mạch Pluronic lên PAMAM Kết biến tính dendrimer PAMAM-Pluronic cho kết tương tự PAMAM-PEG Thống kê kết GPC để đánh giá mức độ tỷ lệ biến tính PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 với loại Pluronic có khối lượng phân tử khác Pluronic P123, Pluronic F68, Pluronic F127 Pluronic F108 thể đồ thị 3.2 Kết đồ thị 3.2 cho thấy dendrimer PAMAM G4.0 có khả liên hợp cao dendrimer PAMAM G2.0, G3.0 G5.0 Mặt khác, hệ dendrimer PAMAM mức độ liên hợp Pluronic với PAMAM giảm dần theo tăng chiều dài mạch phân tử Pluronic (tăng khối lượng phân tử) Đối với Pluronic có khối lượng phân tử khác Pluronic có khối lượng phân tử lớn cấu trúc mạch phân tử dài, cồng kềnh gây cản trở khơng gian khả liên hợp với PAMAM giảm theo tăng chiều dài mạch carbon phân tử Pluronic Đồ thị 3.2 Tỷ lệ liên hợp PAMAM-Pluronic 3.3.3 Kết TEM PAMAM PAMAM-Pluronic Kết TEM cho thấy kích thước PAMAM G4.0 khoảng 4,5 nm (Hình 3.8.a), Pluronic F127 15 nm (hình 3.10.a) Trong đó, kích thước PAMAM-Pluronic tăng đáng kể từ 60-150 nm (hình 3.10.b, hình 3.10.c, hình 3.10.d hình 3.10.e), cụ thể: PAMAM-P123 có kích thước phân tử từ 60-100 nm, PAMAM-F68 90-130 nm, PAMAM- Trang 19 F127 100-150 nm PAMAM-F108 120-180 nm Kích thước phù hợp cho việc mang thuốc, đặc biệt mang thuốc chống ung thư (a) (b) (c) (d) (e) Hình 3.10 Hình ảnh TEM Pluronic F127 (a), PAMAM G4.0-P123 (b), PAMAM G4.0-F68 (c), PAMAM G4.0-F127 (d) PAMAM G4.0-F108 (e) 3.4 TỔNG HỢP CHẤT MANG NANO PAMAM G4-F127 VỚI CÁC TỶ LỆ MOL KHÁC NHAU Q trình biến tính PAMAM G4.0 Pluronic F127 khảo sát với tỷ lệ mol khác (tỷ lệ mol PAMAM : Pluronic F127 = 1:8 ; 1:16; 1:32; 1:64) Kết cho thấy khả liên hợp PAMAM G4.0 Pluronic F127 tăng tương ứng với việc tăng tỷ lệ mol phản ứng: 25% (với tỷ lệ 1:8) < 31,25% (với tỷ lệ 1:16) < 34,38% (với tỷ lệ 1:32) < 42,19% (với tỷ lệ 1:64) 3.5 KHẢ NĂNG MANG THUỐC CHỐNG UNG THƯ 5-FLUOROURACIL CỦA CÁC CHẤT MANG NANO PAMAM BIẾN TÍNH 3.5.1 Phương pháp tính tốn, xác định khả mang thuốc PAMAM biến tính Để đánh giá hiệu mang thuốc, dựa vào kết HPLC nhằm xác định gián tiếp lượng thuốc 5-FU mang chất mang nano (PAMAM, PAMAM-PEG, PAMAM-Pluronic) Lượng 5-FU tự do, không mang vật liệu chất mang nano tính tốn trực tiếp dựa phương trình đường chuẩn Y = 33,101x + 27,857 (R2 = 0,9993) xây dựng với nồng độ khác nhau, từ 20-100µg.mL-1 (phụ lục 1) Tỷ lệ hàm lượng 5-FU nang hóa chất mang (EE% DL%) xác định gián tiếp thông qua kết đo HPLC công thức sau, Wtotal 5-FU lượng thuốc 5FU ban đầu lượng 5-FU không tải chất mang Wfree-5-FU [9, 68] Trang 20 Các dendrimer PAMAM G2.0, G3.0, G4.0 G5.0 sau biến tính PEG có khối lượng phân tử khác (PEG 4K, PEG 6K, PEG 10K, PEG 12K) sử dụng để nang hóa thuốc kỵ nước 5-FU Tuy nhiên, với ảnh hưởng cấu trúc hệ dendrimer PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 loại PEG có mạch phân tử dài ngắn khác tác động lên hiệu mang thuốc 3.5.2 Khảo sát khả mang thuốc PAMAM-PEG Thống kê kết HPLC thu đồ thị 3.3 hiệu mang thuốc kỵ nước 5FU hệ chất mang PAMAM-PEG: Đồ thị 3.3 Hiệu nang hóa thuốc 5-FU PAMAM-PEG Các PAMAM G4.0-PEG có hiệu mang thuốc cao Tuy nhiên, hệ dendrimer PAMAM chiều dài mạch PEG ảnh hưởng khơng nhiều tới khả mang thuốc 5-FU PEG có khối lượng phân tử lớn cồng kềnh gây cản trở khơng gian làm thuốc 5-FU khó vào khoảng trống bên cấu trúc dendrimer PAMAM nên hiệu mang thuốc giảm theo tăng chiều dài mạch carbon phân tử PEG 3.5.3 Khảo sát khả mang thuốc PAMAM-Pluronic Thống kê kết HPLC thu đồ thị 3.4 hiệu mang thuốc chất mang nano PAMAM G2.0, G3.0, G4.0, G5.0 sau biến tính với loại Pluronic có khối lượng phân tử khác Pluronic P123 (5800 Da), Pluronic F68 (8400 Da), Pluronic F127 (12600 Da) Pluronic F108 (14600 Da) Trang 21 Đồ thị 3.4 Hiệu nang hóa thuốc 5-FU PAMAM-Pluronic Đồ thị 3.4 cho thấy PAMAM-Pluronic hệ G4.0 có khả mang thuốc 5-FU cao Các Pluronic có cấu trúc mạch phân tử dài, cồng kềnh gây cản trở không gian làm cản trở khả mang thuốc PAMAM-Pluronic Ngồi ra, loại Pluronic có giá trị HLB (là tỉ lệ nhóm nước nhóm dầu phân tử) khác hiệu mang thuốc khác Pluronic có nhóm kị nước nhiều (tức giá trị HLB cao hơn) có khả mang thuốc kỵ nước 5-FU tốt Và cấu trúc phân tử Pluronic ngồi nhóm EO (ưa nước) cịn có nhóm PO (kỵ nước), phân tử PEG gồm nhóm EO ưa nước nên PAMAMPluronic mang thuốc kỵ nước 5-FU tốt PAMAM-PEG 3.6 KHẢO SÁT TỐC ĐỘ GIẢI PHÓNG THUỐC 5-FU CỦA PAMAM-PEG/5-FU, PAMAM-PLURONIC/5-FU VÀ 5-FU Trong môi trường PSB (pH=7.4), PAMAM-PEG PAMAM-Pluronic có tốc độ giải phóng thuốc từ từ, có kiểm sốt so với 5-FU đối chứng Kết khảo sát tốc độ giải phóng thuốc 5-FU (thực lần) PAMAM-PEG/5-FU PAMAM-Pluronic/5-FU khoảng 22% sau 96 so với mẫu 5-FU đối chứng giải phóng 90% đầu 3.7 KẾT QUẢ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA HỆ CHẤT NANO DẪN TRUYỀN 5-FU Tính tương hợp sinh học hệ chất mang nano đánh giá sở thử nghiệm hoạt tính gây độc lên tế bào ung thư vú MCF-7 dòng nguyên bào sợi (Fibroblast) 3.7.1 Kết độc tính tế bào ung thư vú MCF-7 hệ chất nano dẫn truyền 5-FU Kết độc tính tế bào ung thư vú MCF-7 hệ chất mang nano thực phương pháp nhuộm SRB Kết sau 48 bảng 3.3 cho thấy nồng độ 100 μg/ml: PAMAM chưa biến tính (PAMAM G4.0) gây độc tế bào, PAMAM sau biến tính PEG hay Pluronic (PAMAM G4.0-PEG PAMAM G4.0-Pluronic) làm giảm đáng kể khả gây độc tế bào PAMAM Trang 22 Bảng 3.3 Kết độc tính tế bào MCF-7 theo phương pháp nhuộm SRB Mẫu Nồng độ (μg/ ml) Hoạt động kháng sinh (Tăng trưởng tế bào %) PAMAM G4.0 100 Inhibited 35,49 ± 3.93% G4.0-PEG4K 100 Inhibited -1,10 ± 4,32% G4.0-PEG6K 100 Inhibited -2,00 ± 2,05% G4.0-PEG10K 100 Inhibited -4,09 ± 8,13% G4.0-PEG12K 100 Inhibited -12,75 ± 3,54% G4.0-P123 100 Inhibited -1,27 ± 4,55% G4.0-F68 100 Inhibited 2,41 ± 2,99% G4.0-F127 100 Inhibited 4,20 ± 4,15% G4.0-F108 100 Inhibited 1,54 ± 3,97% Ngoài ra, PAMAM sau biến tính PEG hay Pluronic nang hóa thuốc 5-FU (PAMAM G4.0-PEG6K/5-FU, PAMAM G4.0-P123/5-FU PAMAM G4.0-F127/5FU) có khả gây độc tế bào mạnh với nồng độ gây độc tế bào IC50 cao gấp 2-3 lần so với 5-FU đối chứng Đồ thị 3.5 Kết gây độc tế bào IC50 chất mang nano 3.7.2 Kết gây độc nguyên bào sợi (Fibroblast) hệ chất nano dẫn truyền 5-FU a Kết theo phương pháp nhuộm MTT Kết gây độc nguyên bào sợi (Fibroblast) phương pháp nhuộm MTT thể đồ thị 3.6 Đồ thị 3.6 Kết gây độc nguyên bào sợi theo phương pháp nhuộm MTT Trang 23 b Kết theo phương pháp nhuộm huỳnh quang FDA/EB Kết gây độc nguyên bào sợi (Fibroblast) hệ chất mang nano (PAMAM G4.0, G4.0-PEG6K, G4.0-P123 G4.0-F68) khẳng định thêm phương pháp nhuộm huỳnh quang FDA/EB thể hình 3.11 Trong đó, hình nhuộm FDA (màu xanh lá) đặc trưng tế bào sống hình nhuộm EB (màu đỏ) (a) (b) (c) (d) (e) (f) (g) (h) (l) (m) Hình 3.11 Kết gây độc nguyên bào sợi theo phương pháp nhuộm huỳnh quang FDA/EB Kết đồ thị 3.6 hình 3.11 đánh giá khả tăng trưởng nguyên bào sợi cho thấy sau 24 48 Mẫu đối chứng (control) sống phát triển ổn định môi trường nuôi cấy Các mẫu G4.0-PEG6K (hình 3.11.e-f), G4.0-P123 (hình 3.11.g-h) G4.0-F68 (hình 3.11.l-m) thể tăng trưởng mạnh số lượng tế bào, với tỷ lệ tế bào chết hình thái tương đương so với mẫu đối chứng Từ kết thử hoạt tính gây độc hệ chất mang nano lên tế bào ung thư MCF-7 (bảng 3.3, đồ thị 3.5) nguyên bào sợi (đồ thị 3.6, hình 3.11) cho thấy PAMAM chưa biến tính (PAMAM G4.0) gây độc tế bào, PAMAM sau biến tính PEG hay Pluronic (G4.0-PEG, G4.0-Pluronic) khơng gây độc tế bào (có tính tương hợp sinh học) Trang 24 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu hoàn thành nội dung luận án, rút kết luận sau: (1) Đã tổng hợp thành công dendrimer PAMAM đến hệ G5.0 Sản phẩm dendrimer PAMAM hệ từ G-0.5 đến G5.0 xác định cấu trúc phương pháp MS 1H-NMR cơng thức tính toán sở liệu phổ 1H NMR (2) Đã biến tính thành cơng dendrimer PAMAM hệ G2.0, G3.0, G4.0 G5.0 với polymer tương hợp sinh học PEG có chiều dài mạch khác (PEG4K, PEG6K, PEG10K PEG12K) Khối lượng phân tử sản phẩm dendrimer PAMAM-PEG số lượng nhánh polymer PEG gắn PAMAM xác định tính tốn 1H-NMR GPC (3) Đã biến tính thành cơng dendrimer PAMAM hệ G2.0, G3.0, G4.0 G5.0 với polymer tương hợp sinh học Pluronic có cấu trúc mạch khác (P123, F68, F108 F127) Khối lượng phân tử sản phẩm dendrimer PAMAM-Pluronic số lượng nhánh polymer Pluronic gắn PAMAM xác định tính tốn 1H-NMR GPC (4) Trong dendrimer PAMAM hệ G2.0, G3.0, G4.0 G5.0 PAMAM G4.0 biến tính tốt (có số lượng nhánh polymer gắn lên PAMAM nhiều nhất) biến tính với PEG hay Pluronic Ngoài ra, mạch polymer (cả PEG lẫn Pluronic) dài khó biến tính (số lượng nhánh polymer gắn lên PAMAM giảm) (5) Dendrimer PAMAM với nhóm amine bề mặt có khả gây độc tế bào, nhiên tất sản phẩm biến tính PAMAM-PEG PAMAM-Pluronic khơng gây độc tế bào (tế bào bệnh tế bào lành), PAMAM-PEG có tính tương hợp sinh học tốt PAMAM-Pluronic (6) PEG khơng có khả nang hóa thuốc 5-FU (chỉ nang hóa 0,15%), Pluronic nang hóa (18,75%), dendrimer hệ G2.0, G3.0, G4.0 G5.0 nang hóa từ 21,90% đến 42,35%, PAMAM hệ G4.0 nang hóa nhiều Tuy nhiên, hệ chất mang PAMAM-PEG nang hóa nhiều thuốc 5-FU hẳn (từ 31,05% đến 66,35%) PAMAM-PEG hệ G4.0 nang hóa nhiều cả, cịn PAMAMPluronic nang hóa nhiều (từ 38,05% đến 76,25%) PAMAMPluronic hệ G4.0 nang hóa nhiều Ngồi ra, so sánh PAMAM-PEG PAMAM-Pluronic tương ứng PAMAM-Pluronic nang hóa thuốc kỵ nước 5-FU tốt (7) Dendrimer PAMAM-PEG hay PAMAM-Pluronic sau nang hóa thuốc 5- FU có tốc độ giải phóng thuốc chậm nhiều so với mẫu 5-FU đối chứng Trang 25 (8) Khi nang hóa PAMAM biến tính (PAMAM G4.0-PEG6K, PAMAM G4.0-P123 PAMAM G.4.0-F127), thuốc 5-FU có độ độc giảm khoảng 2-3 lần so với 5FU đối chứng KIẾN NGHỊ Nghiên cứu biến tính dendrimer PAMAM polymer khác dextran, chitosan, gelatin, alginate Sau tiến hành kiểm tra khả mang giải phóng thuốc chất mang nano với nhiều thuốc chống ung thư khác Doxorubicin (DOX), Methotrexate (MTX), Paclitaxel (Taxol), cis Platin Nghiên cứu in vivo PAMAM-PEG/5-FU PAMAM-Pluronic/5-FU trên, thử nghiệm cận lâm sàng động vật Trang 26 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CƠNG BỐ QUỐC TẾ Thi Bich Tram Nguyen, Thi Tram Chau Nguyen, Hoang Chinh Tran, Cuu Khoa Nguyen & Ngoc Quyen Tran (2014), 1H NMR Spectroscopy as an Effective Method for Predicting Molecular Weight of Polyaminoamine Dendrimers and their Derivatives, tạp chí quốc tế (SCIE) International Journal of Polymer Analysis and Characterization, DOI: 10.1080/1023666X.2014.955632 (IF:1.4); Thi Tram Chau Nguyen, Cuu Khoa Nguyen, Ngoc Quyen Tran, Thi Hiep Nguyen (2016), Highly lipophilic pluronics-conjugated polyamidoamine dendrimer nanocarriers as potential delivery system for hydrophobic drugs, tạp chí quốc tế (SCIE) International Journal of Materials Science and Engineering C (IF: 3.1) Accept; T T Chau Nguyen, Dai Lam Tran, Cuu Khoa Nguyen, Ngoc Quyen Tran (2016), pluronic-conjugated dendrimer nanocarrier for enhancing drug entrapment efficiency and inhibiting mcf-7 cancer cell growth, tạp chí quốc tế (SCIE) International Journal of Green Processing and Synthesis (IF: 1.3) Accept; CÔNG BỐ TRONG NƯỚC T Tram Chau Nguyen, Cuu Khoa Nguyen, Ngoc Quyen Tran, T Bich Tram Nguyen (2013), Dendrimer-based nanocarriers demonstrating a high efficiency for loading and releasing anticancer drugs in vitro and in vivo, Journal of science and technology, vol 51, no 5A2013, pp 224-232; Nguyen Thi Tram Chau, Tran Hoang Chinh, Mai Bich Thoa, Nguyen Dai Hai, Tran Ngoc Quyen, Nguyen Cuu Khoa (2015), Thermo-sensitive dendrimer-based nanocarrier for enhancing anticancer drug loading efficiency, Tạp chí Hóa Học, no 53(4e3), pp.60-73; Nguyen Thi Tram Chau, Tran Hoang Chinh, Nguyen Cuu Khoa, Tran Ngoc Quyen (2015), Efficiency of peglyated PAMAM G4.0 as a potential nanocarrier enhancing encapsulation fluorouracil, Tạp chí Hóa Học Accept; Nguyễn Thị Trâm Châu, Nguyễn Đình Trung, Lê Cao Quỳnh, Phan Thị Hồng Hương, Trần Ngọc Quyển, Nguyễn Cửu Khoa (2015), Nghiên cứu ảnh hưởng chất mang dendrimer G4, G5 đặc tính nhóm chức bề mặt đến hiệu mang thuốc, Tạp chí Hóa Học, no 53(6e1,2), pp.309-314; THAM GIA HỘI NGHỊ QUỐC TẾ Nguyen Thi Tram Chau, Tran Hoang Chinh, Nguyen Dai Hai, Nguyen Cuu Khoa, Tran Ngoc Quyen (2014), Thermosensitive Dendrimer nanocarrier exhibiting a highly drug loading and releasing eficiency, the 7th International Workshop on Advanced Materials Science and Nanotechnology (IWAMSN2014), Halong City, Vietnam; Trang 27 Nguyen Thi Tram Chau, Nguyen Cuu Khoa, Tran Ngoc Quyen (2015), Drug loading efficiency of pegylated PAMAM nanocarriers and its anticancer cell activity, International Workshop on Nanoscience and Nanotechnology, Joint 4th Asia-Pacific Chemical and Biological Microfluidics Conference ((IWNN-apcbm), Da Nang, VietNam Trang 28 ... polyamidoamine polymer tương hợp sinh học (PEG Pluronic) ứng dụng mang thuốc? ?? MỤC TIÊU CỦA LUẬN ÁN Nghiên cứu tổng hợp chất mang thuốc sở biến tính dendrimer PAMAM polymer tương hợp sinh học (Pluronic,... độc tính PAMAM (tăng tính tương hợp sinh học) tăng khả mang thuốc PAMAM Trang 3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU LUẬN ÁN Tổng hợp dendrimer PAMAM đến hệ G5.0 từ tâm ethylenediamine (EDA) Nghiên cứu biến tính. .. dendrimer PAMAM với polymer tương hợp sinh học PEG Pluronic nhằm tạo hệ chất mang thuốc có tính tương hợp sinh học khả mang thuốc cao - Việc nghiên cứu biến tính PAMAM polymer PEG Pluronic với khối lượng