Quy trình nhân giống cây Hà Thủ ô đỏ

BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC & KĨ THUẬT MÔI TRƢỜNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (POYGONUM MULTIFLORUM) SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN THU THỦY GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN TH.S PHẠM VĂN LỘC Tp.HCM ngày 30 tháng năm 2014 BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC & KĨ THUẬT MÔI TRƢỜNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (POLYGONUM MULTIFLORUM) Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Th.S PHẠM VĂN LỘC NGUYỄN THU THỦY MSSV: 2008100266 LỚP: 01DHSH1 T.p HCM, ngày tháng năm 2014 ii LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Công Nghệ Sinh Học & Kĩ Thuật Môi Trƣờng Trƣờng Đại Học Công Nghiệp Thực Phẩm Tp.HCM truyền dạy cho em kiến thức quý báu suốt năm học để em có hành trang cho tƣơng lai Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, thạc sĩ Phạm Văn Lộc, ngƣời trực tiếp tận tình hƣớng dẫn em thực môn khóa luận tốt nghiệp Em xin giử lời cảm ơn tới toàn bạn, anh chị em làm việc học tập phòng thí nghiệm công nghệ sinh học thực vật nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực thực khóa luận Tuy em cố gắng nhiều, song báo cáo chắn tránh khỏi nhiều thiếu sót Em kính mong nhận đƣợc phê bình ý kiến đóng góp quý báu thầy cô! Em xin chân thành cảm ơn Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2014 Sinh viên Nguyễn Thu Thủy iii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan báo cáo thực tập thực Các số liệu thu thập kết báo cáo trung thực, không chép từ đề tài nghiên cứu khoa học Ngày 30 Tháng 06 Năm 2014 Sinh viên thực NGYỄN THU THỦY (ký ghi họ tên) iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Hà thủ ô đỏ 1.1.1 Vị trí phân loại .3 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.2 Giới thiệu vi nhân giống 1.2.1 Khái niệm vi nhân giống (Micropropagation) 1.2.2 Một số phƣơng pháp vi nhân giống .7 1.3 Các giai đoạn nhân giống in vitro 1.3.1 Quy trình tạo mẫu chồi in vitro 1.3.2 Sự tái sinh chồi từ mẫu chồi 10 1.3.3 Tăng sinh cụm chồi in vitro 10 1.3.4 Tạo rễ hoàn chỉnh chuyển vƣờn ƣơm 10 1.4 Những vấn đề nuôi cấy mô 11 1.4.1 Lựa chọn vật liệu đê nuôi cấy 11 1.4.2 Điều kiện nuôi cấy 12 1.4.3 Sự tạp nhiễm .12 1.4.4 Tính bất định mặt di truyền 13 1.4.5 Việc sản xuất chất gây độc từ mẫu cấy .13 1.5 Pha chế dung dịch chuẩn bị môi trƣờng cho nuôi cấy 14 1.5.1 Các chất khử trùng thông dụng 14 1.5.2 Các chất điều hòa sinh trƣởng thực vật (ĐHSTTV) 14 v 1.6 Tình hình nghiên cứu nƣớc giới liên quan 17 1.6.1 Nghiên cứu nƣớc .17 1.6.2 Nghiên cứu nƣớc 18 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 20 2.1 Vật liệu 20 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.3 Điều kiện thí nghiệm 26 2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 26 2.5 Phân tích xử lý số liệu 27 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Thí nghiệm 1: khảo sát ảnh hƣởng nồng độ javen lên hiệu khử trùng mẫu.28 3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ NAA BA lên tăng sinh chồi Hà thủ ô đỏ 30 3.3 Thí nghiệm 3: ảnh hƣởng nồng độ IBA lên tạo rễ Hà thủ ô đỏ 34 3.4 Thí nghiệm 4: ảnh hƣởng nồng độ NAA lên tạo rễ Hà thủ ô đỏ 38 3.5 Thí nghiệm 5: khảo sát ảnh hƣởng giá thể lên tỷ lệ sống Hà thủ ô đỏ ex vitro 41 CHƢƠNG CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 Kết luận 44 4.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.2: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Javen lên hiệu khử trùng mẫu 21 Bảng 3.3: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nồng độ NAA BA lên tăng sinh chồi Hà thủ ô đỏ 22 Bảng 3.4: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nồng độ IBA lên trình tạo rễ 24 Bảng 3.5: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nồng độ NAA lên trình tạo rễ .24 Bảng 3.6: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng giá thể lên tỷ lệ sống 25 Bảng 4.1: Kết ảnh hƣởng nồng độ Javen lên hiệu khử trùng mẫu 28 Bảng 4.3: Các nghiệm thức ảnh hƣởng tốt lên tăng sinh chồi Hà thủ ô đỏ 30 Bảng 4.5: ảnh hƣởng nồng độ IBA lên số lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô đỏ 31 Bảng 4.7: ảnh hƣởng nồng độ IBA lên số lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô đỏ 35 Bảng 4.9: Kết ảnh hƣởng nồng độ NAA lên số lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô 39 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hà thủ ô đỏ Hình 2.2 A, B, C, D lần lƣợt hoa, lá, củ Hà thủ ô đỏ Hình 4.1: Hà thủ ô đỏ sau 10 ngày cấy 29 Hình 4.2: Chồi tăng sinh môi trƣờng MS bổ sung BA kết hợp NAA với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 34 Hình 4.4: Ảnh hƣởng IBA lên trình tạo rễ nồng độ khác 37 Hình 4.5: Hình thái sẹo gốc Hà thủ ô đỏ nghiệm thức 38 Hình 4.6: nghiệm thức thăm dò ảnh hƣởng NAA lên trình tạo rễ 41 Hình 4.7: Cây đƣợc trồng vào giá thể sau huấn luyện tuần 41 Hình 4.10: Các gốc nồng độ 0.1 0.3 NAA tạo sẹo gốc lần cấy khảo sát lại .42 Hình 4.11: hình thái sẹo gốc Hà thủ ô đỏ sau xẻ đôi 43 viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1: Ảnh hƣởng nồng độ Javen lên hiệu khử trùng 28 Biểu đồ 4.2: Ảnh hƣởng nồng độ NAA&BA lên số lƣợng chiều cao chồi Hà thủ ô đỏ 31 Biểu đồ 4.4: Ảnh hƣởng nồng độ IBA lên số lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô đỏ 36 Biểu đồ 4.6 Ảnh hƣởng nồng độ NAA lên số lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô đỏ 39 ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4 D 2,4 dichlorophenoxyacetic acid BA 6- Benzyladenine Cs Cộng ĐHSTTV Điều hòa sinh trƣởng thực vật HTOĐ Hà thủ ô đỏ IBA Indol butyric acid KIN Kinetin MS Murashige – Skoog, 1962 NAA α – napthalenene acetic acid NT Nghiệm Thức TCN Trƣớc công nguyên x Polygonum multiflorum Thunb on MCF-7 human breast cancer cells and the possible mechanisms Mol Med Rep, 4(6):1313-9 Murashige T, Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures, physiology Plant, 15, 473 – 497 Lin LC, Nalawade SM, Mulabagal V, Yeh MS, Tsay HS (2003) Micropropagation of Polygonum multiflorum Thunb and quantitative analysis of the anthraquinones emodin and physcion formed in in vitro propagated shoots and plants Biol Pharm Bull, 26(10):1467-71 Liu Z, Liu Y, Wang C, Guo N, Song Z, Xia L, Lu A (2011) Comparative analyses of chromatographic fingerprints of the roots of Polygonum multiflorum Thunb and their processed products using RRLC/DAD/ESI-MS(n) Planta Med, 77(16):185560 Li X, Li Y, Chen J, Sun J, Li X, Sun X, Kang X (2010) Tetrahydroxystilbene glucoside attenuates MPP+-induced apoptosis in PC12 cells by inhibiting ROS generation and modulating JNK activation Neurosci Lett, 483(1):1-5 Lin HW, Sun MX, Wang YH, Yang LM, Yang YR, Huang N, Xuan LJ, Xu YM, Bai DL, Zheng YT, Xiao K (2010) Anti-HIV activities of the compounds isolated from Polygonum cuspidatum and Polygonum multiflorum Planta Med, 76(9):88992 Um MY, Choi WH, Aan JY, Kim SR, Ha TY (2006) Protective effect of Polygonum multiflorum Thunb on amyloid beta-peptide 25-35 induced cognitive deficits in mice J Ethnopharmacol, 104(1-2):144-8 46 PHỤ LỤC THÍ NGHIỆM 1: One-Way ANOVA - ty lê mâu không nhiêm by nông dô Javen Dependent variable: ty lê mâu không nhiêm Factor: nông dô Javen Number of observations: 18 Number of levels: Summary Statistics for ty lê mâu không nhiêm nông dô Count Averag Standard Coeff of Javen e deviation variation 0.0 0.0 % 10 22.2 19.2258 86.6025% 15 44.433 19.2835 43.3987% 20 88.9 19.2258 21.6263% 25 66.7 0.0 0.0% 30 11.1 19.2258 173.205% Total 18 38.888 34.7822 89.4401% Minimu m 0.0 0.0 33.3 Maximu m 0.0 33.3 66.7 Rang e 0.0 33.3 33.4 Stnd skewness 66.7 66.7 0.0 0.0 100.0 66.7 33.3 100.0 33.3 -1.22474 0.0 33.3 1.22474 100.0 0.572693 -1.22474 1.22474 ANOVA Table for ty lê mâu không nhiêm by nông dô Javen Source Sum of Df Mean F-Ratio P-Value Squares Square Between 17605.2 3521.04 14.27 0.0001 groups Within 2961.49 12 246.791 groups Total (Corr.) 20566.7 17 Table of Means for ty lê mâu không nhiêm by nông dô Javen with Standard error intervals Stnd error nông dô Count Mean (individu Lower Upper Javen al) limit limit 0.0 0.0 0.0 0.0 10 22.2 11.1 11.1 33.3 15 44.433 11.1333 33.3 55.5667 20 88.9 11.1 77.8 100.0 47 25 30 Total 3 18 66.7 0.0 11.1 11.1 38.888 66.7 0.0 66.7 22.2 Multiple Range Tests for ty lê mâu không nhiêm by nông dô Javen Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean Javen 0.0 30 11.1 10 22.2 15 44.433 25 66.7 20 88.9 Homogeneous Groups X X XX XX XX X THÍ NGHIỆM 2: One-Way ANOVA - sô luong chôi by nghiêm thuc Dependent variable: sô luong chôi Factor: nghiêm thuc Number of observations: 48 Number of levels: 16 Summary Statistics for so choi nghiem Count Averag Standard thuc e deviation 1.6666 0.57735 2.6666 0.57735 11.0 2.0 5.6666 1.52753 7 4.6666 2.51661 10 10.333 2.08167 11 8.3333 3.05505 Coeff of variation 34.641% Minimu Maximu Rang Stnd m m e skewness 1.0 2.0 1.0 -1.22474 21.6506% 2.0 3.0 1.0 -1.22474 18.1818% 26.9563% 9.0 4.0 13.0 7.0 4.0 3.0 0.0 -0.6613 53.9274% 2.0 7.0 5.0 -0.41407 20.1452% 8.0 12.0 4.0 -0.914531 36.6606% 5.0 11.0 6.0 -0.6613 48 17 20 21 22 3 25 26 27 3 30 31 3 Total 48 12.666 10.333 12.0 11.333 6.6666 11.0 13.333 6.0 8.6666 8.5208 3.05505 24.1188% 10.0 16.0 6.0 0.6613 1.52753 14.7825% 9.0 12.0 3.0 0.6613 2.0 1.52753 16.6667% 13.4782% 10.0 10.0 14.0 13.0 4.0 3.0 0.0 0.6613 1.52753 22.9129% 5.0 8.0 3.0 -0.6613 2.0 3.51188 18.1818% 26.3391% 9.0 10.0 13.0 17.0 4.0 7.0 0.0 0.299299 3.60555 4.50925 60.0925% 52.0298% 3.0 4.0 10.0 13.0 7.0 9.0 0.814636 -0.233933 4.05803 47.6249% 1.0 17.0 16.0 -0.487814 ANOVA Table for so choi by nghiem thuc Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 579.979 15 38.6653 6.38 groups Within 194.0 32 6.0625 groups Total (Corr.) 773.979 47 P-Value 0.0000 Table of Means for so choi by nghiem thuc with Standard error intervals Stnd error nghiem Count Mean (individu Lower Upper thuc al) limit limit 1.6666 0.333333 1.33333 2.0 2.6666 0.333333 2.33333 3.0 11.0 1.1547 9.8453 12.1547 5.6666 0.881917 4.78475 6.54858 7 4.6666 1.45297 3.2137 6.11963 10 10.333 1.20185 9.13148 11.5352 49 11 17 20 21 22 3 25 26 27 3 30 31 3 Total 48 8.3333 12.666 10.333 12.0 11.333 6.6666 11.0 13.333 6.0 8.6666 8.5208 1.76383 6.5695 10.0972 1.76383 10.9028 14.4305 0.881917 9.45142 11.2153 1.1547 10.8453 0.881917 10.4514 13.1547 12.2153 0.881917 5.78475 7.54858 1.1547 2.02759 9.8453 11.3057 12.1547 15.3609 2.08167 2.60342 3.91833 6.06325 8.08167 11.2701 Multiple Range Tests for so choi by nghiem thuc Method: 95.0 percent LSD nghiem Count Mean Homogeneous thuc Groups 1.6666 X 2.6666 XX 7 4.6666 XXX 5.6666 XXX 30 6.0 XX 25 6.6666 XXX 11 8.3333 XXX 31 8.6666 XXXX 10 10.333 XXXX 20 10.333 XXXX 50 26 22 3 21 17 3 27 3 11.0 11.0 11.333 12.0 12.666 13.333 XXX XXX XXX XXX XX X One-Way ANOVA - chiêu cao chôi by nghiem thuc Dependent variable: chiêu cao chôi Factor: nghiem thuc Number of observations: 48 Number of levels: 16 Summary Statistics for chiêu cao chôi nghiem Count Averag Standard thuc e deviation 3.6666 2.08167 3.6666 2.51661 4.3333 2.51661 1.8333 1.04083 2.0 1.0 10 4.6666 1.52753 11 2.1666 1.04083 17 4.1666 2.25462 20 3.1666 2.25462 21 2.0 1.0 22 4.1666 2.25462 25 3.6666 2.02073 Coeff of variation 56.7727% Minimu Maximu Rang Stnd m m e skewness 2.0 6.0 4.0 0.914531 68.6349% 1.0 6.0 5.0 -0.41407 58.0756% 2.0 7.0 5.0 0.41407 56.7727% 1.0 3.0 2.0 0.914531 50.0% 32.7327% 1.0 3.0 3.0 6.0 2.0 3.0 0.0 -0.6613 48.0384% 1.0 3.0 2.0 -0.914531 54.111% 2.0 6.5 4.5 0.233933 71.1987% 1.0 5.5 4.5 0.233933 50.0% 54.111% 1.0 2.0 3.0 6.5 2.0 4.5 0.0 0.233933 55.1107% 1.5 5.5 4.0 -0.510608 51 26 27 30 31 Total 48 2.1666 4.1666 4.1666 2.1666 3.2604 1.25831 58.0756% 1.0 3.5 2.5 0.41407 2.02073 48.4974% 2.0 6.0 4.0 -0.510608 0.288675 6.9282% 4.0 4.5 0.5 1.22474 1.25831 58.0756% 1.0 3.5 2.5 0.41407 1.77149 54.3333% 1.0 7.0 6.0 1.29953 ANOVA Table for chiêu cao chôi by nghiem thuc Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 47.1615 15 3.1441 1.00 groups Within 100.333 32 3.13542 groups Total (Corr.) 147.495 47 P-Value 0.4761 Table of Means for chiêu cao chôi by nghiem thuc with Standard error intervals Stnd error nghiem Count Mean (individu Lower Upper thuc al) limit limit 3.6666 1.20185 2.46482 4.86852 3.6666 1.45297 2.2137 5.11963 4.3333 1.45297 2.88037 5.7863 1.8333 0.600925 1.23241 2.43426 2.0 0.57735 1.42265 2.57735 10 4.6666 0.881917 3.78475 5.54858 11 2.1666 0.600925 1.56574 2.76759 17 4.1666 1.30171 2.86496 5.46837 20 3.1666 1.30171 1.86496 4.46837 52 21 22 3 25 26 27 30 31 Total 48 2.0 4.1666 3.6666 2.1666 4.1666 4.1666 2.1666 3.2604 0.57735 1.30171 1.42265 2.86496 2.57735 5.46837 1.16667 2.5 4.83333 0.726483 1.44018 2.89315 1.16667 3.0 5.33333 0.166667 4.0 4.33333 0.726483 1.44018 2.89315 Multiple Range Tests for chiêu cao chôi by nghiem thuc Method: 90.0 percent LSD nghiem Count Mean Homogeneous thuc Groups 1.8333 X 21 2.0 XX 2.0 XX 11 2.1666 XX 31 2.1666 XX 26 2.1666 XX 20 3.1666 XXX 3.6666 XXX 25 3.6666 XXX 3.6666 XXX 30 4.1666 XXX 27 4.1666 XXX 53 22 17 10 4.1666 XXX 4.1666 XXX 4.3333 XX 4.6666 X One-Way ANOVA - sô luong rê by nông dô IBA Dependent variable: sô luong rê Factor: nông dô IBA Number of observations: 18 Number of levels: Summary Statistics for sô luong rê nông dô Count Averag Standard IBA e deviation 1.0 1.0 0.01 2.3333 2.08167 0.05 5.6666 1.52753 0.1 40.333 16.5025 0.5 33.666 6.02771 25.666 8.32666 Total 18 18.111 17.5563 Coeff of variation 100.0% 89.2143% Minimu m 0.0 0.0 Maximu m 2.0 4.0 Rang e 2.0 4.0 Stnd skewness 0.0 -0.914531 26.9563% 4.0 7.0 3.0 -0.6613 40.9154% 22.0 54.0 32.0 -0.82786 17.9041% 28.0 40.0 12.0 0.347623 32.4415% 19.0 35.0 16.0 0.914531 96.9364% 0.0 54.0 54.0 1.10408 ANOVA Table for sô luong rê by nông dô IBA Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 4468.44 893.689 13.90 groups Within 771.333 12 64.2778 groups Total (Corr.) 5239.78 17 P-Value 0.0001 Table of Means for sô luong rê by nông dô IBA with Standard error intervals 54 nông dô IBA 0.01 0.05 0.1 0.5 Total Stnd error Count Mean (individu al) 1.0 0.57735 2.3333 1.20185 3 5.6666 0.881917 40.333 9.52774 3 33.666 3.4801 25.666 4.8074 18 18.111 Lower limit 0.42265 1.13148 Upper limit 1.57735 3.53518 4.78475 6.54858 30.8056 49.8611 30.1866 37.1468 20.8593 30.4741 Multiple Range Tests for sô luong rê by nông dô IBA Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean Homogeneous IBA Groups 1.0 X 0.01 2.3333 X 0.05 5.6666 X 25.666 X 0.5 33.666 XX 0.1 40.333 X One-Way ANOVA - chiêu dai rê by nông dô IBA Dependent variable: chiêu dai rê Factor: nông dô IBA Number of observations: 18 Number of levels: Summary Statistics for chiêu dai rê 55 nông dô IBA 0.01 0.05 0.1 0.5 Total Count Averag e 4.3333 3 4.1666 3.3333 3 2.6666 2.0 1.0 18 2.9166 Standard deviation 1.52753 Coeff of variation 35.2506% Minimu Maximu Rang Stnd m m e skewness 3.0 6.0 3.0 0.6613 1.25831 30.1993% 3.0 5.5 2.5 0.41407 0.763763 22.9129% 2.5 4.0 1.5 -0.6613 0.763763 28.6411% 2.0 3.5 1.5 0.6613 0.5 0.5 1.45774 25.0% 50.0% 49.9796% 1.5 0.5 0.5 2.5 1.5 6.0 1.0 1.0 5.5 0.0 0.0 0.820212 ANOVA Table for chiêu dai rê by nông dô IBA Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 24.9583 4.99167 5.36 groups Within 11.1667 12 0.930556 groups Total (Corr.) 36.125 17 P-Value 0.0081 Table of Means for chiêu dai rê by nông dô IBA with Standard error intervals Stnd error nông dô Count Mean (individu Lower Upper IBA al) limit limit 4.3333 0.881917 3.45142 5.21525 0.01 4.1666 0.726483 3.44018 4.89315 0.05 3.3333 0.440959 2.89237 3.77429 0.1 2.6666 0.440959 2.22571 3.10763 0.5 2.0 0.288675 1.71132 2.28868 1.0 0.288675 0.711325 1.28868 Total 18 2.9166 Multiple Range Tests for chiêu dai rê by nông dô IBA 56 Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean Homogeneous IBA Groups 1.0 X 0.5 2.0 XX 0.1 2.6666 XXX 0.05 3.3333 XX 0.01 4.1666 X 4.3333 X THÍ NGHIỆM 3: One-Way ANOVA - Sô luong rê by nông dô NAA Dependent variable: Sô luong rê Factor: nông dô NAA Number of observations: 18 Number of levels: Summary Statistics for Sô luong rê nông dô Count Averag Standard NAA e deviation 1.0 1.0 0.05 1.6666 0.57735 0.1 4.0 1.0 0.3 6.0 2.64575 0.5 3.6666 0.57735 0.7 3.0 1.0 Total 18 3.2222 2.01627 Coeff of variation 100.0% 34.641% Minimu m 0.0 1.0 Maximu m 2.0 2.0 Rang e 2.0 1.0 Stnd skewness 0.0 -1.22474 25.0% 44.0959% 15.7459% 3.0 4.0 3.0 5.0 9.0 4.0 2.0 5.0 1.0 0.0 1.03086 -1.22474 33.3333% 62.574% 2.0 0.0 4.0 9.0 2.0 9.0 0.0 2.00983 ANOVA Table for Sô luong rê by nông dô NAA Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 47.7778 9.55556 5.37 groups P-Value 0.0080 57 Within 21.3333 groups Total (Corr.) 69.1111 12 1.77778 17 Table of Means for Sô luong rê by nông dô NAA with Standard error intervals Stnd error nông dô Count Mean (individu Lower Upper NAA al) limit limit 1.0 0.57735 0.42265 1.57735 0.05 1.6666 0.333333 1.33333 2.0 0.1 4.0 0.57735 3.42265 4.57735 0.3 6.0 1.52753 4.47247 7.52753 0.5 3.6666 0.333333 3.33333 4.0 0.7 3.0 0.57735 2.42265 3.57735 Total 18 3.2222 Multiple Range Tests for Sô luong rê by nông dô NAA Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean NAA 1.0 0.05 1.6666 0.7 3.0 0.5 3.6666 0.1 4.0 0.3 6.0 Homogeneous Groups X XX XX XX XX X One-Way ANOVA - chieu dai rê by nông dô NAA Dependent variable: chieu dai rê Factor: nông dô NAA Number of observations: 18 Number of levels: 58 Summary Statistics for chieu dai rê nông dô Count Averag Standard NAA e deviation 4.1666 1.25831 0.05 1.8333 0.763763 0.1 3.6666 0.288675 0.3 3.3333 0.57735 0.5 2.5 0.5 0.7 2.1666 1.04083 Total 18 2.9444 1.09664 Coeff of variation 30.1993% Minimu Maximu Rang Stnd m m e skewness 3.0 5.5 2.5 0.41407 41.6598% 1.0 2.5 1.5 -0.6613 7.87296% 3.5 4.0 0.5 1.22474 17.3205% 3.0 4.0 1.0 1.22474 20.0% 48.0384% 2.0 1.0 3.0 3.0 1.0 2.0 0.0 -0.914531 37.2443% 1.0 5.5 4.5 0.339865 ANOVA Table for chieu dai rê by nông dô NAA Source Sum of Df Mean F-Ratio P-Value Squares Square Between 12.6111 2.52222 3.86 0.0256 groups Within 7.83333 12 0.652778 groups Total (Corr.) 20.4444 17 Table of Means for chieu dai rê by nông dô NAA with Standard error intervals Stnd error nông dô Count Mean (individu Lower Upper NAA al) limit limit 4.1666 0.726483 3.44018 4.89315 0.05 1.8333 0.440959 1.39237 2.27429 0.1 3.6666 0.166667 3.5 3.83333 0.3 3.3333 0.333333 3.0 3.66667 0.5 2.5 0.288675 2.21132 2.78868 0.7 2.1666 0.600925 1.56574 2.76759 Total 18 2.9444 59 Multiple Range Tests for chieu dai rê by nông dô NAA Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean NAA 0.05 1.8333 0.7 2.1666 0.5 2.5 0.3 3.3333 0.1 3.6666 4.1666 Homogeneous Groups X XX XXX XXX XX X 60 [...]... dụng cho nhiều loại cây khác nhau để nhân giống, tạo ra dòng cây sạch bệnh, bảo tồn nguồn gen, đặc biệt là các gen quý hiếm của các loài hoa, cây dƣợc liệu Nuôi cấy in vitro giúp nhân nhanh số lƣợng cây HTOĐ nhằm mục đích bảo tồn giống cây thuốc và phục vụ nguồn dƣợc liệu là hết sức cần thiết Vì những lý do trên tôi đã chọn đề tài là “Khảo sát quy trình nhân giống cây Hà thủ ô đỏ (polygonum multiflorum)”... phép cải thiện giống cây trồng Quá trình dung hợp protoplast có thể đƣợc thực hiện trên hai đối tƣợng cùng loài hay khác loài (Dƣơng Công Kiên, 2002) e Nuôi cấy hạt phấn đơn bội 8 Hạt phấn ở thực vật đƣợc nuôi cấy trên những môi trƣờng thích hợp sẽ tạo thành mô sẹo Mô sẹo này đƣợc tái sinh thành cây hoàn chỉnh là cây đơn bội Ƣu điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực... quy trình nhân giống cây HTOĐ bằng phƣơng pháp tái sinh chồi trực tiếp từ đốt thân cây HTOĐ in vitro 2 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về Hà thủ ô đỏ 1.1.1 Vị trí phân loại Hà thủ ô đỏ thuộc: Ngành (Division) Lớp (Class) Bộ (Ordo) Họ (Familia) Chi (Genus) Loài (Species) Tên Việt Nam: Magnoliophyta Eudicots Caryophyllales Polygonaceae Polygonum Polygonum multiflorum Hà thủ. .. dọa: bậc R, (Bộ công cụ xác định rừng có giá trị bảo tồn cao Việt Nam, 2008) Đề nghị biện pháp bảo vệ: Cần trồng trên diện tích lớn để bảo tồn nguồn dƣợc liệu dồi dào và ổn định 1.2 Giới thiệu về vi nhân giống 1.2.1 Khái niệm vi nhân giống (Micropropagation) Vi nhân giống là khái niệm dùng để miêu tả phƣơng pháp nhân giống từ việc nuôi cấy mô thực vật, nhân giống bằng kĩ thuật nuôi cấy mô bắt đầu bằng... mảnh nhỏ thực vật vô trùng đặt vào môi trƣờng dinh dƣỡng thích hợp Chồi mới hay mô sẹo mà mẫu cấy này tạo ra bằng sự tăng sinh đƣợc phân chia và cấy chuyền nhân giống Nhân giống in vitro giúp nhân nhanh các kiểu gen quý hiếm nhƣ các loại cây rừng, cây cảnh, cây dƣợc liệu, làm sạch bệnh do vi rút bằng cách nuôi cấy đỉnh sinh trƣởng Đồng thời, giúp bảo quản ngân hàng gen giống (Dƣơng Công Kiên, 2002) 1.2.2... dài trong môi trƣờng lỏng tế bào đơn đƣợc tách ra và trải trên môi trƣờng thạch Khi môi trƣờng thạch có bổ sung auxin, tế bào đơn phát triển thành cụm tế bào mô sẹo Khi môi trƣờng thạch có tỉ lệ cytokinin-auxin thích hợp, tế bào đơn sẽ có khả năng tái sinh thành cây hoàn chỉnh c Nuôi cấy mô sẹo Mô sẹo là một mô phát triển vô tổ chức, hình thành do sự phản phân hóa của tế bào đã phân hóa Mô sẹo sẽ phát... (2003) đã xác định các cây HTOĐ có nguồn gốc in vitro sẽ cho tỉ lệ các chất emodin và physcion cao hơn so với cây ngoài tự nhiên Nhân giống cây trồng bằng kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật mang lại hiệu quả kinh tế hơn hẳn các phƣơng pháp truyền thống Kỹ thuật này cho phép sản xuất cây giống với hệ số nhân giống rất cao, có thể tạo ra hàng loạt cá thể đồng nhất về mặt di truyền với quy mô công nghiệp Kỹ thuật... Nam dƣợc thần hiệu 11 quy n, Hải Thƣợng Lãn Ông (1720 – 1791) với bộ sách Hải thƣợng y tôn tâm tĩnh gồm 28 tập (Nguyễn Huy Công và cs, 2005) Hà thủ ô đỏ (HTOĐ) là một vị dƣợc liệu quý đƣợc ghi nhận trong các tác phẩm của các tác giả, danh y lớn nhƣ Bản thảo cƣơng mục, Hà thủ ô lục, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Cây HTOĐ đƣợc quan tâm, nghiên cứu ở cả phƣơng tây lẫn phƣơng đông Tác dụng dƣợc lý... Lợi thì có 1 vị thuốc khác mang tên Hà thủ ô trắng, thuộc họ thiên lý Asclepiadaceae Hà thủ ô trắng cũng có dạng thân leo, dây màu nâu đỏ, chứa nhựa sữa trắng, đƣợc dùng thay thế cho HTOĐ trong các bài thuốc Nhƣng hà thủ ô trắng không có chứa các dẫn chất anthranoid là dẫn chất chức năng chủ yếu có trong HTOĐ Tại Trung Quốc có 1 vị thuốc khác đƣợc gọi là Bạch hà thủ ô thuộc họ thiên lý Asclepiadaceae,... vào thực tiễn nông nghiệp 1.3 Các giai đoạn chính nhân giống in vitro 1.3.1 Quy trình tạo mẫu chồi in vitro Đây là giai đoạn tối quan trọng quy t định toàn bộ quá trình nhân giống in vitro Mục đích của giai đoạn này là tạo ra nguyên liệu vô trùng để đƣa vào nuôi cấy Cụ thể là quá trình khử trùng mẫu chồi bằng các thuốc khử trùng có sẵn: javel, cồn Quá trình này đƣợc xây dựng từ quá trình khử trùng ... lƣợng chiều dài rễ Hà thủ ô 39 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hà thủ ô đỏ Hình 2.2 A, B, C, D lần lƣợt hoa, lá, củ Hà thủ ô đỏ Hình 4.1: Hà thủ ô đỏ sau 10 ngày cấy... CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC & KĨ THUẬT MÔI TRƢỜNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ... niệm vi nhân giống (Micropropagation) Vi nhân giống khái niệm dùng để miêu tả phƣơng pháp nhân giống từ việc nuôi cấy mô thực vật, nhân giống kĩ thuật nuôi cấy mô bắt đầu mảnh nhỏ thực vật vô trùng