ảnh hưởng của benzyl adenine (ba), napthalene acetic acid (naa) và khoáng đa lượng ms trên sự nhân chồi và tạo rễ cây muồng hoa pháo (calliandra calothyrsus meissn ) in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC ĐẶNG THỊ THANH TRÂN ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ CÂY MUỒNG HOA PHÁO (Calliandra calothyrsus Meissn.) IN VITRO Luận văn tốt nghiệp Đại học Ngành: SINH HỌC Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC Luận văn tốt nghiệp Đại học Ngành: SINH HỌC Tên đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ CÂY MUỒNG HOA PHÁO (Calliandra calothyrsus Meissn.) IN VITRO Cán hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS Lê Vĩnh Thúc Đặng Thị Thanh Trân MSSV: 3112410 Lớp: Sinh học K37 Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC Luận văn Tốt nghiệp ngành: Cử nhân Sinh Học với đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ CÂY MUỒNG HOA PHÁO (Calliandra calothyrsus Meissn.) IN VITRO Sinh viên thực Đặng Thị Thanh Trân Ý kiến cán hướng dẫn: Cần Thơ, ngày tháng năm 2015 Cán hướng dẫn TS Lê Vĩnh Thúc i TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC Sự chấp thuận hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp với đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN CHỒI VÀ TẠO RỄ CÂY MUỒNG HOA PHÁO (Calliandra calothyrsus Meissn.) IN VITRO Do sinh viên Đặng Thị Thanh Trân thực bảo vệ trước hội đồng chấm luận văn Luận văn tốt nghiệp hội đồng đánh giá mức: Cần Thơ, ngày tháng năm 2015 Duyệt khoa Khoa học Tự nhiên CHỦ NHIỆM KHOA CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn tốt nghiệp trung thực chưa công bố công trình luận văn trước Tác giả luận văn Đặng Thị Thanh Trân iii LỜI CẢM TẠ Kính dâng - Cha mẹ người nuôi khôn lớn nên người Xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến - TS Lê Vĩnh Thúc tận tình giúp đỡ, hướng dẫn em suốt trình thực đề tài luận văn tốt nghiệp - Chân thành cám ơn thầy Mai Vũ Duy, thầy Nguyễn Bảo Toàn, cô Lê Hồng Giang truyền đạt kiến thức nuôi cấy mô để em có nên tảng thực luận văn Cố vấn học tập Phan Kim Định quan tâm dìu dắt lớp em hoàn thành tốt khóa học - Chân thành cám ơn thầy cô khoa Khoa Học Tự Nhiên truyền đạt kiến thức cho em từ đầu năm đến hôm Xin chân thành cảm ơn - Chị Duyên, Chị Trân, bạn Dũng, Hà, Lai, em Hồng Anh, Minh nhiệt tình giúp đỡ suốt trình thực luận văn iv TIỂU SỬ CÁ NHÂN I.LÝ LỊCH CÁ NHÂN Họ tên: Đặng Thị Thanh Trân Ngày sinh: 13/01/1993 Giới tính: Nữ Họ Tên Cha: Đặng Văn Hồng Năm sinh: 1971 Họ Tên Mẹ : Nguyễn Thị Phụng Năm sinh: 1972 Nơi sinh: Chợ Mới, An Giang Địa chỉ: Ấp Kiến Thuận 2, xã Kiến Thành, huyện Chợ Mới, tỉnh An Giang II QUÁ TRÌNH HỌC TẬP 1999-2004: Trường: Tiểu học B Kiến Thành 2004-2008: Trường: Trung học sở Kiến Thành 2008-2011: Trường: Trung học phổ thông Nguyễn Hữu Cảnh 2011-2015 : 37, Trường Đại học Cần Thơ, ngành Sinh học, khóa khoa Khoa học Tự nhiên v MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM TẠ iv TIỂU SỬ CÁ NHÂN v MỤC LỤC vi DANH MỤC BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix DANH SÁCH THUẬT NGỮ VIẾT TẮT x TÓM LƯỢC xi MỞ ĐẦU xii CHƯƠNG 1: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sơ lược muồng hoa pháo 1.1.1 Hệ thống phân loại thực vật 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc điểm sinh học, hình thái 1.1.4 Vai trò muồng hoa pháo đời sống 1.1.5 Thành phần hóa học muồng hoa pháo 1.2 Nuôi cấy mô phương pháp vi nhân giống 1.2.1 Mục đích, ý nghĩa vi nhân giống 1.2.2 Các giai đoạn vi nhân giống 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến vi nhân giống 10 1.3 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng 12 1.4 Một số kết vi nhân giống thân gỗ 14 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 2.1 PHƯƠNG TIỆN 16 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 16 2.1.2 Phương tiện, dụng cụ hóa chất 16 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 17 2.1.4 Môi trường nuôi cấy 17 2.2 PHƯƠNG PHÁP 17 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 17 2.2.2 Chỉ tiêu theo dõi 19 2.2.3 Xử lý số liệu 19 vi CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 3.1 Ảnh hưởng BA, NAA nhân chồi, chiều cao chồi gia tăng số gia tăng muồng hoa pháo in vitro 20 3.1.1 Số chồi gia tăng trung bình 20 3.1.2 Chiều cao chồi gia tăng trung bình 22 3.1.3 Số gia tăng trung bình 24 3.2 Ảnh hưởng NAA nồng độ khoáng đa lượng MS tạo rễ, chiều dài rễ, chiều cao chồi gia tăng số gia tăng muồng hoa pháo in vitro 27 3.2.1 Số rễ tạo thành trung bình 27 3.2.2 Chiều dài rễ trung bình 29 3.2.3 Chiều cao chồi gia tăng trung bình 31 3.2.4 Số gia tăng gia trung bình 32 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 34 4.1 KẾT LUẬN 34 4.2 KIẾN NGHỊ 34 PHỤ LỤC 39 PHỤ LỤC 39 PHỤ LỤC 40 vii DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Số chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (chồi) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 21 3.2 Số chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (chồi) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 23 3.3 Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 24 3.4 Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 25 3.5 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 26 3.6 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC 27 3.7 Số rễ muồng hoa pháo in vitro tạo thành trung bình (rễ) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 29 3.8 Số rễ muồng hoa pháo in vitro tạo thành trung bình (rễ) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 30 3.9 Chiều dài rễ trung bình (cm) muồng hoa pháo in vitro môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 31 3.10 Chiều dài rễ trung bình (cm) muồng hoa pháo in vitro môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 32 3.11 Chiều cao chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 33 3.12 Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 33 3.13 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 34 3.14 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC 35 viii Bảng 3.9 Chiều dài rễ trung bình (cm) muồng hoa pháo in vitro môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) Trung bình (B) 0,5 Khoáng đa lượng (B) 1,06b 0,86b 0,96b MS 2,01a 0,81b 1,41a 1/2 MS b b 1/4 MS 0,99 0,84 0,91b Trung bình (A) 1,35a 0,84b F (A) ** ** F (B) ** F (A*B) 39,95 CV (%) Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1% Sau tuần nuôi cấy (Bảng 3.10), nồng độ NAA ảnh hưởng đến chiều dài rễ mức ý nghĩa 5% Trong đó, nồng độ không bổ sung NAA có chiều dài rễ cao (4,91 cm), khác biệt so với nghiệm thức lại Bên cạnh đó, nồng độ khoáng đa lượng MS có ảnh hưởng đến chiều dài rễ mức ý nghĩa 1%, nồng độ 1/2 MS cho chiều dài rễ cao (5,39 cm), khác biệt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức MS không bổ sung NAA, khác biệt có ý nghĩa 1% so với nghiệm thức lại Tương tự với thí nghiệm Dimassi-Theriou (1995), sử dụng môi trường MS giảm xuống 1/2 giúp nâng tỷ lệ tạo rễ kích thích kéo dài rễ Ngoài ra, ảnh hưởng tương tác nồng độ NAA khoáng đa lượng MS đến chiều dài rễ Bảng 3.10 Chiều dài rễ trung bình (cm) muồng hoa pháo in vitro môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) 4,91a 0,5 3,85b Khoáng đa lượng (B) MS 4,32ab 1/2 MS 5,39a 1/4 MS 3,42b F (A) * F (B) ** F (A*B) ns CV (%) 34,8 Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1%; *: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% 30 3.2.3 Chiều cao chồi gia tăng trung bình Kết Bảng 3.11 cho thấy nồng độ khoáng đa lượng MS không ảnh hưởng đến chiều cao chồi gia tăng TSKC Chiều cao chồi dao động từ 0,28 cm đến 0,35 cm Bên cạnh đó, nồng độ NAA ảnh hưởng đến chiều cao chồi gia tăng mức ý nghĩa 1% Trong đó, nồng độ không bổ sung NAA cho chiều cao chồi cao (0,37 cm), khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nồng độ không bổ sung NAA Điều vai trò auxin có liên quan đến nhiều trình sinh lý Vì auxin vừa có ảnh hưởng đến vươn dài tế bào, đồng thời ảnh hưởng đến sản sinh ethylene Mà ethylene gây ức chế vươn dài tế bào Dó bổ sung auxin ngoại sinh vào môi trường tạo rễ làm tăng hàm lượng auxin mẫu chồi Từ có sản sinh ethylene cao, nên ức chế gia tăng chiều cao chồi Mặt khác, ảnh hưởng tương tác nồng độ NAA khoáng đa lượng MS đến chiều cao chồi gia tăng Bảng 3.11 Chiều cao chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) 0,37a 0,28b 0,5 Khoáng đa lượng (B) 0,35 MS 0,34 1/2 MS 0,28 1/4 MS ** F (A) ns F (B) ns F (A*B) 32,47 CV (%) Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1% Đến TSKC, nồng độ NAA không ảnh hưởng đến chiều cao chồi gia tăng Nồng độ khoáng MS ảnh hưởng đến chiều cao chồi gia tăng mức ý nghĩa 5% Trong đó, nồng độ MS không bổ sung NAA cho chiều cao gia tăng cao (0,65 cm), khác biệt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 1/2 MS, khác biệt 5% so với nghiệm thức lại Mặt khác, ảnh hưởng tương tác nồng độ NAA khoáng đa lượng MS đến chiều cao chồi gia tăng (Bảng 3.12) 31 Bảng 3.12 Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) 0,58 0,5 0,63 Khoáng đa lượng (B) MS 0,65a 1/2 MS 0,63a 1/4 MS 0,53b F (A) ns F (B) * F (A*B) ns CV (%) 20,34 Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; *: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% 3.2.4 Số gia tăng gia trung bình Kết Bảng 3.13 cho thấy, nồng độ NAA khoáng đa lượng MS không ảnh hưởng đến số gia tăng thời điểm TSKC Nhưng có ảnh hưởng tương tác nồng độ NAA khoáng đa lượng MS môi trường nuôi cấy đến số gia tăng, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, nghiệm thức MS không bổ sung NAA cho số gia tăng trung bình cao (0,57 lá), khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức lại Bảng 3.13 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) Trung bình (B) 0,5 Khoáng đa lượng (B) 0,24b 0,57a 0,4 MS b b 0,38 0,28 0,33 1/2 MS 1/4 MS 0,38b 0,33b 0,35 Trung bình (A) 0,33 0,4 F (A) ns ns F (B) ** F (A*B) 41,78 CV (%) Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1% Ở TSKC, nồng độ NAA có ảnh hưởng đến gia tăng số mức ý nghĩa 1% Trong đó, nồng độ 0,5 mg/L NAA cho số gia tăng trung bình cao (0,95 lá), khác biệt ý nghĩa thống kê mức 1% so với nồng độ NAA lại 32 Bên cạnh đó, nồng độ khoáng đa lượng MS có ảnh hưởng đến số gia tăng, khác biệt có ý nghĩa thống kê 5%, nồng độ MS cho gia tăng trung bình cao (0,98 lá), khác biệt so với nghiệm thức lại Mặt khác, có ảnh hưởng tương tác nồng độ NAA khoáng đa lượng MS đến gia tăng số mức ý nghĩa 1% Số gia tăng trung bình cao 1,33 nghiệm thức MS+0,5 mg/L NAA, khác biệt so với nồng độ lại Trong đó, nghiệm thức MS không bổ sung NAA cho số gia tăng trung bình thấp (0,62 lá) (Bảng 3.14) Bảng 3.14 Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Nhân tố NAA (mg/L) (A) Trung bình (B) 0,5 Khoáng đa lượng (B) 0,62c 1,33a 0,98a MS bc bc 0,72 0,72 0,72b 1/2 MS 1/4 MS 0,91b 0,81bc 0,86ab Trung bình (A) 0,75b 0,95a F (A) ** * F (B) ** F (A*B) 26,01 CV (%) Các chữ số theo sau giống khác biệt ý nghĩa thống kê qua phép thử Duncan; ns: khác biệt ý nghĩa thống kê; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1%; *: khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% Nhìn chung, qua kết thí nghiệm cho thấy môi trường 1/2 MS không bổ sung NAA cho hiệu tạo rễ chồi muồng hoa pháo in vitro, có số rễ chiều dài rễ cao 4,38 rễ 5,39 cm TSKC Schwambach et al (2005), chứng minh Ca, Zn N môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng đáng kể đến số lượng rễ hình thành đối tượng bạch đàn (Eucalyptus globulus Labill) Trong thành phần khoáng đa lượng môi trường 1/2 MS có NH4+ 1/2 so với môi trường MS nên tính đối kháng đồng hoá đạm hấp thu cation đa lượng không cao, rễ hình thành nhiều Ở môi trường 1/4 MS, hàm lượng đạm giảm nhiều, không đủ lượng cần thiết cho hấp thu cây, dẫn đến số lượng rễ hình thành thấp Giảm hàm lượng khoáng có hiệu giai đoạn tạo rễ giải thích giảm hàm lượng đạm (Driver and Suttle, 1987) 33 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Môi trường MS bổ sung mg/L BA+0,05 mg/L NAA cho hiệu nhân chồi muồng hoa pháo in vitro cho số chồi gia tăng trung bình cao (1,28 chồi), có số gia tăng trung bình (0,86 lá) chiều cao gia tăng trung bình chồi (0,76 cm) sau tuần nuôi cấy, chồi sinh trưởng tốt Môi trường 1/2 MS không bổ sung NAA cho hiệu tạo rễ chồi muồng hoa pháo in vitro, cho số rễ chiều dài rễ cao 4,38 rễ 5,39 cm, có chiều cao chồi gia tăng trung bình (0,63 cm), số gia tăng trung bình (0,72 lá) TSKC 4.2 KIẾN NGHỊ Tăng nồng độ BA (> mg/L) để khảo sát tiếp tục quy trình nhân chồi muồng hoa pháo in vitro hệ số nhân chồi cao Nghiên cứu tiếp tục dưỡng muồng hoa pháo giai đoạn vườn ươm để hoàn thành qui trình nhân giống khảo sát sinh trưởng điều kiện tự nhiên 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Bá Bổng, 1995 Nhân giống nuôi cấy mô Sở khoa học công nghệ môi trường An Giang Xí nghiệp in An Giang Cao Thị Thanh Loan, 2007 Khảo sát tác động auxin lên sinh trưởng sinh tổng hợp alkaloid Trường xuân hoa (Catharanthus roseus) in vitro Dương Công Kiên, 2002 Nuôi cấy mô thực vật Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 199 trang Khuất Thị Như Diễm, 2013 Khảo sát mức độ ảnh hưởng phân bón lên khả sinh trưởng tính sản xuất keo củi (Calliandra calothyrsus) thành phố Cần Thơ Luận văn tốt nghiệp Đại học ngành Chăn nuôi-thú y Đại học Cần Thơ Cần Thơ Mai Vũ Duy Nguyễn Thị Hồng Nhân, 2012 Bước đầu khảo sát đặc tính nông học suất Calliandra calothyrsus Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Chăn nuôi, 158: 50-56 Mai Vũ Duy Nguyễn Thị Hồng Nhân, 2012 Hiệu chất điều hòa sinh trưởng BA, NAA IBA tạo chồi rễ mai vàng (Ochna integerrima (Lour.) Merr.) Tạp chí Khoa học 2012: 24a 70-77 Nguyễn Bảo Toàn, 2010 Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhà xuất Đại học Cần Thơ, 185 trang Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thuỷ Tiên, 2002 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 355 trang Nguyễn Đức Thành, 2000 Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, 199 trang Nguyễn Xuân Linh (chủ biên), 1998 Hoa kỹ thuật trồng hoa Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Hồng Nhân, Nguyễn Văn Hớn Mai Vũ Duy, 2012 So sánh suất, giá trị dinh dưỡng,khả thích nghi Leucaena leucocephala, Calliandra calothyrsus Flemingia macrophylla Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Chăn nuôi 159: 33-39 Nguyễn Kim Chung, 2007 Hiệu Benzyl adenine, Naphthaleneacetic acid, Indole-3-butyric acid than hoạt tính tạo chồi rễ gấc (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.) in vitro Luận văn tốt nghiệp Đại học ngành Trồng trọt Đại học Cần Thơ Cần Thơ Nguyễn Viết Khoa, Trần Ngọc Hải, Nguyễn Hữu Hồng Vũ Văn Mễ, 2006 Cẩm nang ngành Lâm Nghiệp Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn Phùng Thị Hằng Nguyễn Bảo Toàn, 2011 Nhân giống tràm (Melaleuca cajuputi Powell) phương pháp nuôi cấy mô Tạp chí Khoa học 2011 20b 8996 Triệu Thị Thu Hà, Cấn Thị Lan, Đồng Thị Ưng, 2014 Nghiên cứu nhân giống keo tràm (Acacia auriculiformis A Cunn ex Benth) phương pháp nuôi cấy mô tế bào Tạp chí khoa học Lâm Nghiệp 3508-3515 35 Võ Thị Anh Thi, 2007 Theo dõi khả thích nghi, suất, giá trị dinh dưỡng Leucaena leucocephala, Calliandra calothyrsus Flemingia macrophylla thành phố Cần Thơ Luận văn tốt nghiệp Đại học ngành Chăn nuôithú y Đại học Cần Thơ Cần Thơ Vũ Văn Vụ, 1999 Sinh lý thực vật ứng dụng Nhà xuất giáo dục 148 trang Tiếng Anh Ahn, JH, Robertson, BM, Elliot, R., Gutteridge, RC, Ford, CW, 1989 Quality assessment of tropical browse legumes: tannin content and protein degradation.Animal Feed Science and Technology 27, pp 147 – 156 Chamberlain JR, 2001 Calliandra calothyrsus: an agroforestry tree for the humid tropics Tropical Forestry Papers, No.40 vi + 100 pp Dzowela, BH, Hove, L., Topps, JH, Mafongoya, PL, 1995 Nutritional and anti-nutritional characters and rumen degradability of dry matter and nitrogen for some multipurpose tree species with potential for agroforestry in Zimbabwe Animal Feed Science Technology 55, 207 – 214 Fatima, N., Anis, M., 2012 Role of growth regulators on in vitro regeneration and histological analysis in Indian ginseng (Withania somnifera L.) Dunal Physiology and Molecular Biology of Plants 18, 59–67 Galang, MC (1988) The effect of water logging on the growth of eight leguminous trees and shrub Research Report, Master of Agricultural Studies, The University of Queensland George, E.F., 1993 Plant propagation by tissue culture Part The technology 2nd Editon England: Exegetic Limited Gerrits, A., 1999 “Biodiversity for income generation” ILEIA Newsletter, December 1999 Kamatali, P., Teller, E., Vanbelle, M., Collignon, G and Foulon, M., 1992 In situdegradability of organic matter, crude protein and cell wall of various tree forages.Animal Production 55, pp 29 – 34 Kaitho, RJ, Tamminga, S and Bruchem, J., 1993 Rumen degradation and in vivodigestibility of dried Calliandra calothyrsus leaves Animal Feed Science and Technology 43, pp 19 – 30 Kairo M, Ali B, Cheesman O, Haysom K, Murphy S, 2003 Invasive species threats in the Caribbean region Report to the Nature Conservancy.Curepe, Trinidad and Tobago: CAB International, 132 pp http://www.issg.org/database/species/reference_files/Kairo%20et%20al,%202003.pd f Lowry JB, Macklin B and Macklin W, 1988 Calliandra calothyrsus - an Indonesian favorite goes pan-tropic NFT Highlights, No 88-02, pp L Hakim, M.K Munshi, M.R Islam and Golam Ahmed, 2004 In vitro clonal propagation of Banyan (Ficus benghalensis L.) through axillary bud culture Inter national journal of agriculture and biology.1560–8530/2004/06-02- 321-323 Liyanage M de S, 1993 The role of MPTS [multipurpose trees] in coconutbased farming systems in Sri Lanka Agroforestry Today, 5(3):7-9; ref 36 MacQueen D.J, 1991 Exploration and collection of Calliandra calothyrsus as a foundation for future genetic improvement Nitrogen Fixing Tree Research Reports, 9: 96-98 Macqueen DJ, 1992 Calliandra calothyrsus: implications of plant taxonomy, ecology and biology for seed collection Commonwealth Forestry Review, 71(1):2034 Maasdrop BV, Muchenje V and Titterton M., 1999 Palatability and effect on dairy cow milk yield of dried fodder from the forage trees Acacia boliviana, Calliandra calothyrsus and Leucaena leucocephala Animal Feed Science and Technology 77, 49 – 59 Mahyuddin, P., Little, DA and Lowry, JB (1988) Drying treatment drastically affects feed evaluation and feed quality with certain tropical forage species Animal Feed Science and Technology 22, 69-78 McDonald MA, Stevens PA and Healey JR, 2001 Contour Hedgerows of Calliandra calothyrsus Meissn for Soil and Water Conservation in the Blue Mountains of Jamaica In: Sustaining the Global Farm Selected papers from the 10th International Soil Conservation Organization Meeting.May 24-29, Purdue University and the USDA-ARS National Soil Erosion Research Laboratory [ed by Stott, DE \Mohtar, RH \Steinhard, GC] Meissner, CG (1848) Leguminosae in Plantae Kegelianae Linnaea 21, 251252 (In German.) Murashige, T and F Skoog, 1962 A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 473-497 NAS (1983) Calliandra: A Versatile Small Tree Tropics National Academy Press, Washington DC, 42 pp for the Humid Orwa C, Mutua A, Kindt R, Jamnadass R, Simons A, 2009 Agroforestree Database: a tree reference and selection guide version 4.0 Word Argoforestry Center http://www.worldagroforestry.org/af/treedb/ Palmer, B and Schlink, A.C., 1992 The effect of drying on the intake and rate of digestion of the shrub legume Calliandra calothyrsus Tropical Grasslands, 26: 89-93 Palmer, B., D.J Macqueen, and R.C Gutteridge, 1994 2.4 Calliandra calothyrsus a Multipurpose Tree Legume for Humid Locations In: Gutteridge, R.C and Shelton, H.M.J (Eds.) Forage Tree Legumes in Tropical Agriculture CABI, Wallingford, UK pp 64-65 Palmer, B., and TA Ibrahim 1996 Calliandra calothyrsus forage for the tropics: A current assessment In DO Evans, ed International Workshop on the Genus Calliandra Forest, Farm, and Community Tree Research Reports (Special issue) Winrock International Morrilton, Arkansas, USA p 183-194 Paterson RT, Roothaert RL, Nyatta OZ, Akeyeampong E, Hove L, 1996 Experience with Calliandra calothyrsus as feed for livestock in Africa.In: Proceedings of the International Workshop on the Genus Calliandra Bogor, Indonesia: Winrock International: 195-209 37 Panjaitan M, Stür WW, Jessop R, 1993 Growth of forage tree legumes at four agro-climatic sites in Indonesia Journal of Agricultural Science, 120(3):311-317; 10 ref Satjapradja, O and Sukandi, T (1981) Agroforestry with red Calliandra ( Calliandra calothyrsus ) Ind Agric Res Dev J Vol (3), pp 85 – 88 Sebuliba E, Nyeko P, Majaliwa M, Eilu G, Kizza CL, Ekwamu A, 2012 Enhanced growth of multipurpose Calliandra (Calliandra calothyrsus) using arbuscular Mycorrhiza fungi in Uganda The Scientific World Journal, 2012: Article 830357 http://www.hindawi.com/journals/tswj/2012/830357/ Shah, S.T., R Zamir, T Muhammad and H Ali, 2006 Mass Propagation of Bougainvillea spectabilis through shoot tip culture Pakistan Journal of Botany, 38(4): 953-959 Sila, AM 1996 Calliandra for community development in Sulawesi In DO Evans, ed International Workshop on the Genus Calliandra Forest, Farm, and Community Tree Research Reports (Special issue) Winrock International Morrilton, Arkansas, USA p.13436 Wiersum, K.F and I.K Rika, 1992 Calliandra calothyrsus Meissn In: Westphal, E and P.C.M Jansen (eds.) Plant Resources of Southeast Asia: Forages Pudoc Wageningen, Netherlands, pp 68-70 Yantasath, K., Supatanakul, W., Ungvichian, I., Chamsawad, S., Chantrasiri, S., Patanavibul, S., Hyakitkosol, C., Prompetchara, S., Pithakarnop, N and Chalermklin, P (1985) Tissue analysis and heating parameters of nitrogen fixing trees Nitrogen Fixing Tree Research Reports 3, 53-56 Yaowapha Jirakiattikul, Panumart Rithichai and Arunporn Itharat, 2013 Effects of medium salt strength and plant growth regulators on shoot multiplication and root induction of Smilax corbularia Department of Agricultural Technology Vol.3:1 – Website Winrock International (1999) http://factnet.winrock.org/fnrm/factnet/factpub/FACTSH/C_calothyrsus.htm Nguyễn Văn Quang, 2011 Quy trình kỹ thuật trồng họ đậu thân gỗ Calliandra Calothyrsus vùng đồng Bắc http://www.pgrvietnam.org.vn/?lang=vi&tab=news&pid=37&cid=22&id=148 truy cập ngày 25/10/2011 http://www.tropicalforages.info/key/Forages/Media/Html/Calliandra_calothyrs us.htm http://www.fao.org/ag/aga/agap/frg/visit/ida/calliandra%20calothyrsus.htm 38 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Môi trường nuôi cấy Murashige Skoog (MS , 1962) Phụ bảng 1: Thành phần khoáng đa lượng Khoáng đa lượng Đơn vị tính Hoá chất dạng hợp chất Dung dich gốc x 10 (g/l) (g/l) NH4NO3 1,65 16,5 KNO3 1,9 19 MgSO4,7H2O 0,37 3,7 MS2 CaCl2 0,33 3,3 MS3 KH2PO4 0,17 1,7 FeSO4,7H2O 0,0278 x 100 = 2,78 EDTA 0,0373 x 100 = 3,73 MS1 Fe-EDTA Phụ bảng 2: Thành phần khoáng vi lượng Hàm lượng gốc theo MS (mg/L) Hàm lượng có cải tiến (mg/L) H3BO3 6,2 6,2 MnSO4 22,3 22,3 ZnSO4,7H2O 8,6 11,5 Na2MoO4,2H2O 0,25 0,25 CuSO4,5H2O 0,025 0,025 KI 0,83 0,83 CoCl2 0,025 0,025 Khoáng vi lượng Phụ bảng 3: Thành phần vitamin Hàm lượng gốc theo MS (mg/L) Hàm lượng có cải tiến (mg/L) Nicotinic acid (B3) 0,1 1,0 Pyridoxine (B6) 0,5 1,0 Thiamin (B1) 0,5 1,0 Tên 39 PHỤ LỤC Phụ bảng 1: Số chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (chồi) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,204 0,204 13,362 0,001 Nồng độ BA 3,52 1,173 76,839 0,000 NAA*BA 0,67 0,223 14,636 0,000 Sai số 0,733 48 0,015 Tổng 17,876 56 Nguồn biến động CV (%) 25,68 Phụ bảng 2: Số chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (chồi) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,445 0,445 15,008 0,000 Nồng độ BA 8,742 2,914 98,361 0,000 NAA*BA 0,816 0,272 9,18 0,000 Sai số 1,422 48 0,03 Tổng 37,66 56 Nguồn biến động CV (%) 25,32 Phụ bảng 3: Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,326 0,326 487,511 0,000 Nồng độ BA 1,344 0,448 670,962 0,000 NAA*BA 0,563 0,188 280,773 0,000 Sai số 0,032 48 0,001 Tổng 21,511 56 Nguồn biến động CV (%) 5,4 40 Phụ bảng 4: Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,609 0,609 1,101E3 0,000 Nồng độ BA 4,729 1,576 2,851E3 0,000 NAA*BA 1,303 0,434 785,576 0,000 Sai số 1,303 0,434 Tổng 56,074 56 Nguồn biến động CV (%) 3,38 Phụ bảng 5: Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 1,67 1,67 104,13 0,000 Nồng độ BA 5,349 1,783 111,188 0,000 NAA*BA 4,835 1,612 100,505 0,000 Sai số 0,77 48 0,016 Tổng 47,747 56 Nguồn biến động CV (%) 15,97 Phụ bảng 6: Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ BA NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 3,515 3,515 178,557 0,000 Nồng độ BA 5,08 1,693 86,012 0,000 NAA*BA 6,748 2,249 114,264 0,000 Sai số 0,945 48 0,02 Tổng 77,629 56 Nguồn biến động 13,51 CV (%) 41 Phụ bảng 7: Số rễ muồng hoa pháo in vitro tạo thành trung bình (rễ) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,01 0,01 0,174 0,679 Nồng độ khoáng đa lượng MS 3,187 1,593 26,667 0,000 MS*NAA 3,502 1,751 29,302 0,000 Sai số 2,151 36 0,06 Tổng 163,909 42 Nguồn biến động CV (%) 12,76 Phụ bảng 8: Số rễ muồng hoa pháo in vitro tạo thành trung bình (rễ) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,387 0,387 4,516 0,041 Nồng độ khoáng đa lượng MS 5,753 2,876 33,589 0,000 MS*NAA 11,96 5,98 69,833 0,000 Sai số 3,083 36 0,086 Tổng 474,414 42 Nguồn biến động CV (%) 8,9 Phụ bảng 9: Chiều dài rễ trung bình (cm) muồng hoa pháo in vitro môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 2,794 2,794 14,595 0,001 Nồng độ khoáng đa lượng MS 2,069 1,035 5,404 0,009 MS*NAA 2,497 1,249 6,522 0,004 Sai số 6,892 36 0,191 Tổng 64,561 42 Nguồn biến động CV (%) 39,95 42 Phụ bảng 10: Chiều dài rễ trung bình muồng hoa pháo in vitro gia tăng (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 11,851 11,851 5,107 0,03 Nồng độ khoáng đa lượng MS 27,131 13,566 5,846 0,006 MS*NAA 14,246 7,123 3,07 0,059 Sai số 83,542 36 2,321 Tổng 941,728 42 Nguồn biến động CV (%) 34,8 Phụ bảng 11: Chiều cao chồi muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,094 0,094 8,543 0,006 Nồng độ khoáng đa lượng MS 0,042 0,021 1,893 0,165 MS*NAA 0,017 0,009 0,772 0,47 Sai số 0,397 36 0,011 Tổng 4,922 42 Nguồn biến động CV (%) 32,47 Phụ bảng 12: Chiều cao muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (cm) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,024 0,024 1,587 0,216 Nồng độ khoáng đa lượng MS 0,124 0,062 4,116 0,025 MS*NAA 0,079 0,039 2,626 0,086 Sai số 0,54 36 0,015 Tổng 15,982 42 Nguồn biến động CV (%) 20,34 43 Phụ bảng 13: Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,043 0,043 1,844 0,183 Nồng độ khoáng đa lượng MS 0,039 0,019 0,834 0,442 MS*NAA 0,392 0,196 8,453 0,001 Sai số 0,835 36 0,023 Tổng 6,838 42 Nguồn biến động CV (%) 41,78 Phụ bảng 14: Số muồng hoa pháo in vitro gia tăng trung bình (lá) môi trường có nồng độ khoáng đa lượng NAA khác TSKC Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương F P Nồng độ NAA 0,446 0,446 9,181 0,005 Nồng độ khoáng đa lượng MS 0,477 0,239 4,906 0,013 MS*NAA 1,37 0,685 14,093 Sai số 1,75 36 0,049 Tổng 34,44 42 Nguồn biến động CV (%) 26,01 44 [...]... calothyrsus Meissn. ) in vitro Luận văn tốt nghiệp ngành Cử nhân Sinh học, khoa Khoa học Tự nhiên, trường Đại học Cần Thơ Cán bộ hướng dẫn: TS Lê Vĩnh Thúc TÓM LƯỢC Đề tài Ảnh hưởng của Benzyl adenine (BA), Napthalene acetic acid (NAA) và khoáng đa lượng MS trên sự nhân chồi và tạo rễ cây Muồng hoa pháo (Calliandra calothyrsus Meissn. ) in vitro được thực hiện với mục tiêu tìm nồng độ các chất điều hòa sinh... rửa acid BA Bezyl Adenine CP Protein thô CF Xơ thô DM Vật chất khô In vitro Trong ống nghiệm MS Murashige and Skoog (196 2) NAA Napthalene Acetic Acid NDF Xơ không tan trong chất rửa trung tính OM Chất hữu cơ TSKC Tuần sau khi cấy x ĐẶNG THỊ THANH TRÂN Ảnh hưởng của Benzyl adenine (BA), Napthalene acetic acid (NAA) và khoáng đa lượng MS trên sự nhân chồi và tạo rễ cây muồng hoa pháo (Calliandra calothyrsus. ..DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Lá, hoa và quả của cây muồng hoa pháo 2 2.1 Mẫu chồi muồng hoa pháo in vitro 11 3.1 Chồi muồng hoa pháo in vitro trong môi trường có nồng độ BA và NAA khác nhau ở 6 TSKC 22 3.2 Mô sẹo ở gốc cụm chồi muồng hoa pháo in vitro ở 6 TSKC 27 3.3 Số rễ muồng hoa pháo in vitro trong môi trường có nồng độ khoáng đa lượng và NAA khác nhau ở 4 TSKC 30 ix DANH SÁCH THUẬT... cao chồi gia tăng và số lá gia tăng của chồi muồng hoa pháo in vitro Mục tiêu: Tìm nồng độ khoáng đa lượng MS và NAA thích hợp trên sự tạo rễ của chồi muồng hoa pháo in vitro Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên thừa số hai nhân tố, nhân tố 1 là 2 nồng độ NAA (0; 0,5mg/L) và nhân tố 2 là 3 nồng độ khoáng đa lượng MS (1/4 MS, 1/2 MS, MS) ; gồm 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 7 lần... (Nguồn:http://www.tropicalforages.info/key/Forages/Media/Html/Calliandra _calothyrsus. htm) Hình 1.1: Lá, hoa và quả của cây muồng hoa pháo Hoa muồng hoa pháo mọc thành chùm, cụm hoa bao gồm một vài hoặc nhiều đầu hoa, cụm hoa dài 10-30 cm (Palmer et al., 199 4) Hoa có nhị đực rất dài, màu đỏ tươi như xác pháo (nên gọi là muồng hoa pháo) Hoa sặc sỡ, màu đỏ tía; nhị hoa dài 4-6 cm; đài hoa dài 2 mm; tràng hoa dài 5-6 mm, nhẵn hay gần như nhẵn (không có lông); lá đài và cánh... muồng hoa pháo in vitro cho số chồi gia tăng trung bình (1,28 chồi) , có số lá gia tăng trung bình (0,86 l ) và chiều cao gia tăng trung bình của chồi (0,76 cm) sau 6 tuần nuôi cấy, chồi sinh trưởng tốt; ii) Môi trường 1/2 MS không bổ sung NAA cho hiệu quả tạo rễ chồi muồng hoa pháo in vitro, cho số rễ và chiều dài rễ cao nhất là 4,38 rễ và 5,39 cm, có chiều cao chồi gia tăng trung bình (0,63 cm), số lá... cho sự nhân chồi muồng hoa pháo in vitro, đạt số chồi gia tăng trung bình cao nhất (1,28 chồi) Ảnh hưởng cộng hưởng của BA và NAA trên sự nhân chồi đã được báo cáo rất sớm trên những loài thực vật khác nhau (Lauzer and Vieth, 1990; Abubacker and Alugumanian, 1999; Lal and Ahụa, 200 0) 21 A B C D E F G H Hình 3.1 Chồi muồng hoa pháo in vitro trong môi trường có nồng độ BA và NAA khác nhau ở 6 TSKC (A)... tử khác) (Pop et al., 201 1) Có hai nhóm chất điều hòa sinh trưởng chính là auxin và cytokinin (Nguyễn Đức Thành, 200 0) + Cytokinin Cytokinin là adenine được thay thế N-6, có tác dụng kích thích sự phân chia tế bào, sự hình thành và sinh trưởng của chồi in vitro Cytokinin đầu tiên được phân lập từ DNA tinh trùng cá trích, được thanh trùng và được gọi là kinetin bởi vì nó có khả năng kích thích sự phân... ctv., 200 2), là người đầu tiên nhận thấy tỷ lệ auxin/cytokinin xác định dạng phân hóa cơ quan của tế bào thực vật nuôi cấy Tỷ lệ cytokinin và auxin trong môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến sự thành lập chồi và rễ Khi sử dụng nồng độ cytokinin cao và auxin thấp thích hợp cho sự tạo chồi, ngược lại sử dụng nồng độ auxin cao và cytokinin thấp thích hợp cho tạo rễ, còn ở mức độ trung gian thích hợp cho tạo mô... thích mọc chồi nách, ức chế sự vươn dài chồi , ức chế sự lão hóa lá (Nguyễn Bảo Toàn, 200 5) Ở nồng độ cao, cytokinin có tác dụng kích thích rõ rệt đến sự hình thành chồi bất định, đồng thời ức chế sự tạo rễ của chồi nuôi cấy (Vũ Văn Vụ và ctv., 200 6) Theo Nguyễn Đức Lượng và Lê Thị Thủy Tiên (200 2), ảnh hưởng của cytokynin trên sự nuôi cấy mô và cơ quan phụ thuộc vào loại cytokinin sử dụng, kiểu nuôi cấy, ... Thúc TÓM LƯỢC Đề tài Ảnh hưởng Benzyl adenine (BA), Napthalene acetic acid (NAA) khoáng đa lượng MS nhân chồi tạo rễ Muồng hoa pháo (Calliandra calothyrsus Meissn. ) in vitro thực với mục tiêu... KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC Luận văn Tốt nghiệp ngành: Cử nhân Sinh Học với đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN... KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC Luận văn tốt nghiệp Đại học Ngành: SINH HỌC Tên đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA BENZYL ADENINE (BA), NAPTHALENE ACETIC ACID (NAA) VÀ KHOÁNG ĐA LƯỢNG MS TRÊN SỰ NHÂN