Bài thực hành lí sinh

Bài thực hành lí sinh TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN KHOA Y DƯỢC  Giảng viên hướng dẫn:Thạc sĩ Hoàng Văn Huệ Sinh viên thực tập: Hồ Thị Lệ Hằng Y Đưnh Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -1- -1- Bài thực hành lí sinh Ka Hải Lớp:Ykhoa K08 Nhóm:2 Bài thực hành lí sinh số 1: XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN CỦA TẾ BÀO HỒNG CẦU I Yêu cầu: • Phân biệt môi trường đẳng trương, ưu trương, nhược trương • Phản ứng tế bào môi trường • Vai trò sợi spectin việc thay đổi hình dạng tế bào hồng cầu II Cơ sở lí thuyết:  Mọi tế bào hay màng sinh chất nơi diễn hoạt động sống tế bào.Nó có chức ngăn cách nội tế bào với môi trường ngoài,trao đổi vật chất môi trường bên bên tế bào nhằm cung cấp nguyên liệu thoát chất thải.Màng nơi thu nhận tín hiệu từ bên ngoài,cho phép tế bào biến đổi để đáp lại tương ứng với môi trường xung quanh  Để thực chức vậy,màng phải có cấu trúc đặc biệt.Theo mô hình Davson-Danielli màng sinh chất cấu trúc theo mô hình khảm động,gồm hai lớp lipit protein ngoài,trong xen kẽ với lớp lipit đôi.Ngoài ra,còn có gluxit.Cấu trúc màng sinh chất lipit hầu hết chức đặc biệt màng liên quan đến protein màng  Lipit:gồm loại lưỡng tính,một đầu kị nước hướng vào trong, đầu lại ưa nước hướng tế bào.Cụ thể:  Photpholipit: chiếm 55% di động tự  Cholesterol:chiếm từ 25-30%.Tỉ lệ cholesterol cao,màng cứng giảm bớt tính linh động  Glycolipit chiếm 18% axit béo kị nước 2%  Protein:dạng cầu hay sợi,phân bố thành đốm ,không đồng tạo dạng khảm,gồm:  Protein ngoại vi gắn bề mặt màng  Protein nội vi gắn phần hay toàn vào lớp lipit  Protein xuyên màng,một phần nằm màng lipit,2 đầu mút thò phía bề mặt  Cấu trúc màng tế bào hồng cầu tương tự vậy,chỉ có điểm khác biệt bề mặt màng tồn mạng lưới vật chất có nguồn gốc từ protein dạng sợi(lưới spectin,chiếm 30% tổng số protein có bề mặt màng),được cấu tạo từ hai chuỗi polipeptit xoắn vào trọng lượng 20000-22000 deltol, ngắn lại duỗi dài nên tế bào hồng cầu thay đổi hình dạng giúp len lỏi qua mao mạch nhỏ li ti khắp thể.Có Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -2- -2- Bài thực hành lí sinh khoảng từ 4.000.000-6.000.000 tế bào hồng cầu mm máu.Chức hồng cầu chủ yếu vận chuyển O2 , CO2 ,đệm pH  Những tế bào hồng cầu già tế bào hồng cầu bị thoái hoá chức khả co dãn sợi speckin bị suy giảm chúng bị tiêu huỷ đại thực bào,chủ yếu gan,lách tuỷ xương  Ở trạng thái lí sinh bình thường, thể tích tế bào hồng cầu bị thay đổi, nồng độ chất tế bào ổn định.Ngoài ra,lượng ion muối hoà tan tế bào số Vì việc thay đổi thể tích tế bào môi trường bên định Có loại môi trường:  Trong mội trường đẳng trương: tế bào hồng cầu bền vững  Trong môi trường ưu trương: tế bào bị teo lại áp suất thẩm thấu bên bên gây tượng nước bên nước môi trường  Môi trường nhược trương: nước từ môi trường vào bên tế bào làm tế bào bị phồng lên chịu áp suất thẩm thấu.Tuỳ theo nồng độ nhược trương mà lượng nước vào tế bào nhiều hay ít.Tới giá trị nhược trương xác định, màng tế bào hồng cầu bị phá vỡ,giải phóng chất nội bào môi trường Đó tượng huyết tiêu III Thực hành: Mục tiêu, nội dung: Xác định nồng độ nhược trương nhỏ mà không gây tượng huyết tiêu Nồng độ tương đương với độ bền tế bào hồng cầu a Dụng cụ,hoá chất:  Dung dịch sinh lí NaCl(1%)  10 ống nghiệm đánh số từ đến  Nước cất  Máu  Máy li tâm  Các pipet b Cách tiến hành:  Ta nhỏ vào 10 ống nghiệm dung dịch NaCl nước cất cho 10 ống nghiệm có nồng độ từ 0%0,9% theo sau: Dung dịch NaCl 1%(ml) H2O(ml) V(ml) C% 0 10 10 1 10 0,1 2 10 0,2 3 10 0,3 4 10 0,4 5 10 0,5 6 10 0,6 7 10 0,7 8 10 0,8 9 10 0,9  Sau nhỏ ống nghiệm giọt máu  Dùng hai ngón tay bịt hai đầu ống nghiệm,đảo nhẹ hai lần  Để yên 40 phút cho máy quay li tâm phút với tốc độ 2500 vòng/phút Kết quả: Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -3- -3- Bài thực hành lí sinh  Các ống có màu sắc khác nhau.Từ ống số 09 màu sắc nhạt dần Các ống từ số 06 có tượng nước ống có màu đỏ ống lại số 7, số 8, số có tượng máu dung dịch bị tách riêng ra, máu ống tách riêng với nước nằm  Ở ống số có nồng độ 0,9 %, nồng độ đẳng trương dung dịch NaCl tế bào hồng cầu, môi trường mà tế bào hồng cầu bền vững Ở ống số có nồng độ 0,7% ống số có nồng độ 0,8% môi trường nhược trương làm tế bào hồng cầu bị phồng lên chưa tới mức bị phá vỡ.Hồng cầu nặng nên chìm phía đáy ống tạo thành vệt đỏ  Ở ống số 06 có nồng độ 00,6% môi trường nhược trương nên chênh lệch nồng độ lớn, dẫn đến áp suất thaåm thấu tăng cao làm cho nước vào tế bào nhiều, làm tế bào bị vỡ nên chất nội bào môi trường có hêmoglobin làm cho dung dịch có màu đỏ  Tế bào hồng cầu có tuổi thọ tối đa từ 90 đến 120 ngày.Các tế bào khác có tuổi thọ khác nhau.Các tế bào non bền tế bào già.Do chúng dễ vỡ  0,7 % nồng độ tối thiểu giữ nguyên thành tế bào không bị vỡ, giảm nồng độ tế bào bị vỡ.Vì nồng độ 0.7 % độ bền tế bào hồng cầu Bài thực hành lí sinh số 2: QUAN SÁT TẾ BÀO HỒNG CẦU VÀ XÁC ĐỊNH KÍCH THƯỚC CỦA CHÚNG BẰNG KÍNH HIỂN VI I Yêu cầu:Xác định hình dạng,kích thước tế bào hồng cầu II Dụng cụ:  Kính hiển vi  Tiêu tế bào hồng cầu  Thước trắc vi vật kính thước trắc vi thị kính III Cách tiến hành:  Quan sát tế bào hồng cầu thước trắc vi thị kính,ta thấy đường kính tế bào lớn tương ứng với vạch nhỏ trắc vi thị kính  Thay tiêu tế bào hồng cầu trắc vi vật kính,quan sát vật kính 100,điêù chỉnh cho vạch trắc vi thị kính trắc vi vật kính trùng nhau,xác định vạch trùng tiếp theo.Đếm số vạch tương ứng Giả sử a vạch trắc vi thị kính tương ứng với b vạch trắc vi vật kính.Biết vạch trắc vi vật kính có kích thước 10 µ m ,áp dụng công thức sau để xác định kích thước L vạch trắc vi thị kính: L= 10b ( µm) a  Thay L vào công thức :d = 4L để tính kích thước d tế bào hồng cầu Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -4- -4- Bài thực hành lí sinh IV Kết quả: Hồng cầu có dạng hình đĩa lõm hai mặt.Hình dạng giúp cho tế bào hồng cầu hút nước trương lên,làm cân nồng độ chất hoà tan bên bên tế bào mà kéo giãn tế bào mức.Hình dạng tạo cho hồng cầu có diện tích bề mặt rộng so với thể tích góp phần làm cho trao đổi chất qua màng tế bào diễn nhanh Bài thực hành số 3: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN TỔNG SỐ ;ALBULIN,GLUBULIN TRONG HUYẾT THANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHÚC XẠ KẾ I Cơ sở lí thuyết: • Khúc xạ kế hệ thống thấu kính mà phận chủ yếu hai lăng kình tam giác.Khi ánh sáng qua lăng kính có tượng khúc xạ.Nếu điều chỉnh góc khúc xạ thu tượng phản xạ toàn phần.Dựa vào góc phản xạ toàn phần ta đo xuất.Từ đo suy hàm lượng phần trăm chất có môi trường • Ngoài khúc xạ kế cấu tạo từ hai thị kính:một dùng để quan sát tượng phản xạ toàn phần,một dùng để đọc giá trị xuất • Trong thị trường quan sát có vạch hình chữ thập.Khi có tượng phản xạ toàn phần thấy hai vùng sáng tối rõ nét.Dùng ốc vi cấp điều chỉnh ranh giới hai vùng sáng tối cho rõ nét điểm hình chữ thập.Đọc kết xuất thị kính thứ hai • Có hai đọc kết có phía dùng để đo xuất • Cách đo xuất: mở khoá,đưa vào hai lăng kính vài giọt cần đo xuất.Sau khoá lại,chất lỏng dàn thành màng mỏng Ví dụ:chiếc xuất nước tinh khiết n= ≈ 1.33 II Thực hành: 1) Dụng cụ,hoá chất: o Dung dịch sunphat amol (NH4)2SO4 bão hoà o Dung dịch Acid acetic 0,04 N o Nước cất o Huyết nguyên chất o Máy li tâm 2) Cách tiến hành:  Lấy ống nghiệm từ 1-4: • Ống 1:lấy 1ml acid acetic 0,04 N+1ml huyết thanh.Sau lắc đều,rồi đem đun cách thuỷ 35s Lấy làm nguội đem li tâm 10 phút với tốc độ 3000 vòng/phút,ta thu Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -5- -5- Bài thực hành lí sinh dung dịch phía suốt,không có chứa protein acid acetic làm cho protein kết tủa đáy.Đo suất dung dịch suốt phía trên,lí hiệu n1 • Ống 2:lấy 1ml huyết thanh+1ml dung dịch sunphat amol (NH 4)2SO4 bão hoà.Sau lắc thấy kết tủa.Đem li tâm 30 phút với tốc độ 3000 vòng /phút thu dung dịch phía suốt không chứa Globulin sunphat amol làm Globulin kết tủa đáy.Đo suất dung dịch suốt phía trên,kí hiệu n2 • Ống 3:lấy 1ml acid acetic 0,04 N+1ml nước cất,lắc ta thu dung dịch acid acetic 0.02 N.Đo suất dung dịch,kí hiệu n3 • Ống 4:lấy 1ml dung dịch sunphat amol (NH 4)2SO4 bão hoà+1ml nược cất ,lắc ta thu dung dịch sunphat amol nửa bão hoà Đo suất dung dịch,kí hiệu n4  Đo suất nước cất ( n5 ) ,huyết nguyên chất ( n6 )  Mỗi dung dịch cần đo từ 3-4 lần,sau lấy giá trị trung bình Ở huyết chiết xuất chủ yếu phụ thuộc vào hàm lượng protein Vì vậy, việc đo chiết xuất huyết phản ánh xác hàm lượng protein có huyết * Công thức để xác định hàm lượng Albumin: A(%) = 2(n1 − n3 ) − 2(n2 − n4 ) 0, 00177 * Công thức tính hàm lượng Globulin: G(%) = n6 − [ n5 + 2(n2 − n4 )] 0, 00229 Trong đó: 0.00177 suất dung dịch Albulin 1% 0.00229 suất dung dịch Glubulin 1% * Tính hệ số tương quan: A(%) K = G (%) Đối với người K = 1,2 → tùy theo chức sinh lý thể 3) Kết quả: Lần đo n1 Trung bình 1.344 1.3455 1.347 1.3455 n2 1.3758 1.376 1.372 1.3746 n3 1.3329 1.3329 1.3329 1.3329 n4 1.3887 1.3887 1.389 1.388 n5 1.3325 1.333 1.333 1.3328 Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -6- -6- Bài thực hành lí sinh n6 1.348 1.348 1.348 1.348 Từ n6 =1.348protein chiếm 7.1% huyết tương Thay giá tri đo vào công thức ta được: Hàm lượng Albumin: 2( n1 − n3 ) − 2(n2 − n4 ) 2(1.3455 − 1.3329) − 2(1.3746 − 1.3888) = = 30.2825 0, 00177 0.00177 A(%) = Hàm lượng Globulin: G(%) = n6 − [ n5 + 2(n2 − n4 )] 0, 00229 = 1.348 − [ 1.3328 + 2(1.3746 − 1.3888) ] 0.00229 = 19.0393 Hệ số tương quan: A(%) 30.2825 = = 1.59 K = G (%) 19.0393 06 Bài thực hành lí sinh số 4: XÁC ĐỊNH ÁP SUẤT THẨM THẤU BẰNG PHƯƠNG PHÁP BAGIERAST I Yêu cầu: - Nắm vai trò ý nghĩa áp suất thẩm thấu thể sinh vật - Nắm chất áp suất thẩm thấu - Nắm phương pháp Bagierast - Xác định giá trị áp suất thẩm thấu huyết II Cơ sở lí thuyết: - Đối với đời sống ,khuếch tán thẩm thấu đóng vai trò quan trọng trao đổi chất.Đặc biệt áp suất thẩm thấu cao đóng vai trò quan trọng việc điều hoà nước máu.Ngoài áp suất thẩm thấu có vai trò việc điều tiết chất cặn bã nguyên nhân gây lực hoá thẩm để thúc đẩy trình tổng hợp ATP - Đối với loài sinh vật khác ,giá trị áp suất thẩm thấu khác nhau.Ở động vật bậc thấp ,giá trị áp suất thẩm thấu thay đổi phạm vi rộng,ngược lại động vật bậc cao người,giá trị áp suất thẩm thay thay đổi khoảng nhỏ Ví dụ:Áp suất thẩm thấu huyết máu người điều kiện sinh lí bình thường có giá trị khoảng 7,4 atm,thay đổi từ 7,35-7,45 atm.Bản chất áp suất thẩm thấu nồng độ Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -7- -7- Bài thực hành lí sinh phân tử chất hoà tan gây nên.Do đó,áp suất thẩm thấu phụ thuộc vào nồng độ,nhiệt độ tuyệt đối môi trường: Ptt =α.CRT (*) Trong đó: C nồng độ chất hoà tan R số khí (R=8,31 103 J/kmol.K= 8,31J/mol.K) T nhiệt độ tuyệt đối α hệ số phân ly ⇒ Áp suất thẩm thấu phụ thuộc vào số lượng tiểu phân Ví dụ:Đối với NaCl, α =2 NaCl → Na + + Cl − - Để quan sát tượng thẩm thấu phải có hai dung dịch với nồng độ khác nhau,được ngăn cách màng bán thấm.Nếu thẩm thấu xảy dung dịch từ nơi có nồng độ cao sang nơi có nồng độ thấp.Tuy nhiên màng bán thấm lí tưởng khó.Vì vậy,để xác định áp suất thẩm thấu thường dùng phương pháp gián tiếp phương pháp Bagierast Phương pháp dựa sở:đối với loại dung dịch có nồng độ khác tạo bề mặt áp suất bão hoà khác nhau.Đối với dung dịch có nồng độ cao áp suất bão hoà lớn.Nếu đưa hai dung dịch có nồng độ khác vào ống thuỷ tinh ngăn cách bọt khí bọt khí dịch chuyển đến nơi có nồng độ thấp hơn.Do vậy,nếu biết nồng độ dung dịch biết nồng độ dung dịch Mục đích:xác định áp suất thẩm thấu huyết dựa vào nồng độ NaCl biết trước III Cách tiến hành: Pha dung dịch khác từ dung dịch NaCl 1% vào ống nghiệm có nồng độ từ 0.4%-0.8% ,mỗi ống tích 5ml Dụng cụ: -2 đĩa đồng hồ -Các ống mao dẫn -Kính hiển vi -Lam kính -La men B1 :Tạo tiêu - Đĩa đồng hồ 1,lấy 2ml dung dịch kiểm tra có nồng độ từ 0.4%-0.8% - Đĩa đồng hồ 2,lấy 2ml huyết - Lấy ống mao dẫn đặt nghiêng vào dung dịch kiểm tra Khi dung dịch dâng lên đến nửa ống lấy dốc ngược đầu để dung dịch kiểm tra chảy xuống phiá Khi cách đầu 1mm đưa vào dung dịch nghiên cứu(huyết thanh).Lúc huyết đẩy dung dịch kiểm tra quay ngược lại.Khi tạo tiêu hai dung dịch khác nhau,cách bọt khí.Đặt tiêu lên la men.Dùng Paraphin đốt nóng,thả giọt vào đầu tiêu để bịt kín.Đưa tiêu lên kính hiển vi để xác định chiều chuyển động bọt khí,kiểm tra đến nồng độ Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -8- -8- Bài thực hành lí sinh nào,bọt khí không di chuyển,ghi lại giá trị vào công thức (*) để xác định áp suất thẩm thấu huyết Kết quả: Tại nhiệt độ phòng 29o C Dung dịch NaCl Chiều dịch chuyển Dung dịch Huyết NaCl 0.4% 0.5% 0.6% 0.7% 0.8% Từ nồng độ % dung dịch NaCl,ta tính nồng độ mol dung dịch NaCl.Nồng độ mol dung dịch NaCl nồng độ mol huyết là: CM = 10.C %.DddNaCl 10.0,6.1 = = 1,0256.10−3 (mol / l ) M NaCl 100.58,5 Thay kết vào biểu thức (*),ta được: Ptt = α CRT = 2.1,0256.10− 3.8,31.(29 + 273) = 5,13( Bar ) = 5,198(atm) Với 1atm=0,987Bar Ta thấy áp suất thẩm thấu huyết thấp so với lí thuyết điều kiện sinh lí bình thường,cơ thể 37 o C nên nhiệt độ tuyệt đối có giá trị lớn hơn.Do áp suất thẩm thấu huyết lớn Bài thực hành lí sinh số 5: XÁC ĐỊNH DẪN XUẤT CỦA HEMOGLOBIN I Cơ sở lí thuyết:  Thành phần tế bào hồng cầu Hemoglobin(Hb).Trong tế bào hồng cầu có khoảng 200 triệu phân tử Hb.Hemoglobin cấu tạo từ thành phần protein Glubin nhóm Hem Hemoglobin ‡ˆ ˆˆ †ˆ Protein Globin + Hem  Nhóm Hem cấu tạo từ vòng phenol với nguyên tử F e++ nằm trung tâm Nhờ nguyên tử F e++ trung tâm nên dễ cung cấp oxi cho tế bào mô khắp thể  Protein Globin cấu tạo từ chuỗi polypeptit.Trong có chuỗi α chuỗi β Mỗi chuỗi gắn kết với gốc Hem.Vậy phân tử Hb chứa gốc Hem nên phân tử Hb kết hợp với phân tử O2 Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang Page 20-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO -9- -9- Bài thực hành lí sinh  Chuỗi β kết hợp với O2 hình dạng bị co cuộn lại,khi giải phóng O2 duỗi  Chuỗi α dù kết hợp hay giải phóng O2 giữ nguyên hình dạng  Khi Hb kết hợp với O2 có tên oxyhemoglobin,có dạng: Hb4 + O2 ‡ˆ ˆˆ †ˆ Hb4O2 Hb4O2 + O2 ‡ˆ ˆˆ †ˆ Hb4O4 Hb4O4 + O2 ‡ˆ ˆˆ †ˆ Hb4O6 Hb4O6 + O2 ‡ˆ ˆˆ †ˆ Hb4O8 Dạng Hb4O8(thường kí hiệu HbO2) dạng bão hoà O2.Chỉ có dạng dễ kết hợp giải phóng O2 Ngoài có dẫn xuất khác metHb(methernoglobin).Khi F e++ → Fe +++ lúc Hb biến thành metHb.MetHb kết hợp với O2 khả giải phóng O 2.Vì vậy,khi thể chứa lượng lớn metHb cản trở trình cung cấp khí cho quan tổ chức,dẫn đến tình trạng thể bị thiếu O2, gây tình trạng ngộ độc O2 II Thực hành: 1) Mục tiêu:Xác định HbO2 , metHb , Hb 2) Dụng cụ,hoá chất: - Kalipheryxianua K3  Fe ( CN )  - Natrithiosunphat Na2S2O3 - Heparin(hoặc Citratnatri):dung dịch chống đông máu - Máy li tâm,ống nghiệm 3) Cách tiến hành: B1: Thu nhận tế bào hồng cầu Bỏ máu chống đông vào li tâm với tốc độ 3000 vòng/phút phút thu hồng cầu lắng phía bắng cách loại bỏ huyết tương B2:Rửa tế bào hồng cầu dung dịch PBS độ pH=7,2 ,đem li tâm phút với tốc độ 3000 vòng/phút để loại bỏ Heparin B3:Làm huyết tiêu cách cho tế bào vào nước cất,đem li tâm phút với tốc độ 3000 vòng/phút để bỏ màng tế bào,ta thu nhận dung dịch đỏ tươi,màu suốt HbO2 Để thu metHb,lấy 3-4 ml dung dịch HbO2 cho thêm vào vài giọt K3  Fe ( CN )  thu metHb màu nâu sẫm Muốn thu nhận Hb,lấy vài giọt Na2S2O3cho vào ống nghiệm,ta thu Hb có màu xanh sẫm Bài thực hành số 6&7: XÁC ĐỊNH NĂNG LƯỢNG HOẠT HOÁ CỦA QUÁ TRÌNH CO BÓP TIM ẾCH - XÁC ĐỊNH TÍNH THẤM CỦA DA ẾCH Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang 10 Page 1020-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 10 - - 10 - Bài thực hành lí sinh I-Mục tiêu: -Xác định lượng hoạt hoá trình co bóp tim ếch tách rời Để cho phản ứng hoá học xảy ra,các nguyên tử ,phân tử tham gia phản ứng phải xếp lại cấu trúc để tạo nên cấu trúc sản phẩm phản ứng.Muốn chũng cần cung cấp lượng tối thiểu để thắng lực đẩy tương tác lớp vỏ điện tử nguyên tử.Năng lượng gọi lượng hoạt hoá.Kí hiệu Ehh Để tăng tốc độ phản ứng hoá học,ta thường tăng nhiệt độ.Và phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nhiệt độ thể qua phương trình Arhenius:  E  KT = P.z.exp  − hh ÷  RT  (1) Trong đó: z hệ số va chạm nguyên tử,phân tử P yếu tố lập thể(phụ thuộc váo cấu hình không gian nguyên tử,phân tử) R số khí R=8,31 J/mol.K Ehh lượng hoạt hoá Ngoài ta có định luật Vanhoff: Q10 = KT +10 KT (2) Q10 tỉ số tốc độ phản ứng hoá học mức nhiệt độ chênh 100 C Thay (1) vào (2),tìm công thức Ehh,đổi ln thành log thay hệ số có,ta được: Ehh = RT T + 10 ln Q10 = 0.46.T (T + 10).lg Q10 10 (3) Trong hệ sinh học,Q10 tốc độ phản ứng hoá học quan thể.Trong thí nghiệm này,Q10 tần số co bóp tim ếch.Trong hệ sinh học Q 10 ≈ 1,7;trong hệ hoá học Q10 từ - mội phản ứng thể sống xảy phạm vi giới hạn nhiệt độ định.Nếu tăng nhiệt độ vượt ngưỡng cho phép thành phần enzim xúc tác phản ứng bị biến đổi làm cho phản ứng xảy -Xác định tính thấm da ếch Cấu tạo da ếch:gồm hai phần: +Ngoài lớp biểu mô +Trong lớp mô liên kết Lớp biểu mô thường cấu tạo từ 38 lớp tế bào.Ngoài lớp màng thông tin có nguồn gốc từ tuyến nhầy da ếch tiết ra.Tiếp theo lớp tế bào sừng.Sau lớp tế bào sừng lớp tế bào hình tròn.Dưới lớp tế bào hình lăng trụ có nhân hình ovan.Trong lớp mô liên kết có chứa lớp sắc tố biểu mô(màu xanh đen).Toàn lớp gọi lớp tế bào sinh trưởng.Nhờ tính chất cấu tạo lớp biểu mô lớp mô liên kết khác mà lớp biểu mô có Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang 11 Page 1120-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 11 - - 11 - Bài thực hành lí sinh tình hấp thụ mạnh tính axit yếu;ngược lại,lớp mô liên kết có tính hấp thụ yếu phản ứng kiềm.Do đó,da ếch có tính thấm chiều từ ngoài(từ lớp mô liên kết đến lớp tế bào biều mô) đối vói số thuốc nhuộm có tính kiềm yếu xanhmetilen(metylblue) II-Cách tiến hành 1- Dụng cụ -Bộ đồ mổ tiểu phẩu + Kim chọc tuỷ + Kẹp phẩu tích + Ống Kenu + Kéo + Bình Ringer -Ly thuỷ tinh -Máy quang phổ 2-Cách tiến hành a-Xác định lượng hoạt hoá trình co bóp tim ếch tách rời B1: Gây mê Ếch (có cách): - Cho ếch ngửi ête - Dùng kim chọc tuỷ B2: Cách mổ ếch - Đặt ếch lên bàn mổ, dùng kẹp phẩu tích kẹp da ếch,dùng kéo nhẹ nhàng rạch da ếch,bên lớp thịt màu trắng.Dùng dao mổ nhẹ nhàng mở rộng lồng ngực ếch, thấy tim ếch bao bọc màng sáng.Dùng kẹp phẩu tích kéo nhẹ nhàng tháo màng sáng ,thấy động mạch trái phải chéo nhau.Dùng luồng xuống phía động mạch để không cho máu lưu thông tim.Nhấc tim ếch ngược lên phía thấy tĩnh mạch ,dùng buộc chặt tĩnh mạch.Lật tim ếch vị trí cũ, động mạch trái dùng kéo mở lổ nhỏ nhẹ nhàng luồn ống Kennu qua lỗ nhỏ xuống tim,vào thẳng tâm thất trái lấy buộc chặt ống Kennu với động mạch lại không cho máu rỉ ngoài.Mọi việc hoàn tất dùng kéo cắt rời động mạch tĩnh mạch với bó xoang phía trên.Khi ta tách rời tim ếch khỏi thể B3: Đo nhịp đập tim ếch - Đặt tim ếch vừa tách vào bình Ringer, nhiệt độ phòng 280 C ta thấy kết sau: Lần 84 Lần 81 Lần 78 Sau lần tim ếch đập trung bình là: 81 lần /phút - Tiếp theo đặt bình Ringer đựng tim ếch vào chậu nước đá 18 C, ta thấy kết sau: Lần 54 Lần 54 Lần 54 Sau lần tim ếch đập trung bình là:54 lần /phút - Vậy tim ếch nhiệt độ T+10=2 80 C đập mạnh nhiệt độ T= 180 C Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang 12 Page 1220-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 12 - - 12 - Bài thực hành lí sinh B4: Xác định lượng hoạt hoá tim ếch Ehh = 0, 46.T (T +10).lg Q10 (*) Trong đó: T+10= 280 C + 273 = 3010 K T = 180 C + 273 = 2910 K KT 84 = = 1.5556 KT −10 54 Thay vào (*): Ehh = 0, 46.291.301.lg1,5556 = 7731,9247 (J) ≈ 1,8472 (kcal) Q10 = b-Xác định tính thấm da ếch Dùng dao mổ rạch đường quanh đùi ếch, nhẹ nhàng lột lớp da chân ếch ta lớp da chân ếch.Một lớp da giữ nguyên theo hình dạng ban đầu, lớp lại lột ngược bên ngoài.Luồn lớp da vao ống nhựa buộc chặt không cho da ếch ống tách rời nhau, sau dùng ống hút lấy 10ml dung dịch Xanhmêtilen cho chảy xuống da ếch.Ngâm lớp da ếch vào ly thuỷ tinh đựng 20ml dung dịch sinh lý thời gian 40 phút.Sau ta thấy kết sau: Một ly có màu sẫm biểu thị tính thấm da ếch từ ,ly lại biểu thị tính thấm từ vào III-Biện luận kết Giải thích: với cấu tạo da ếch, lớp tế bào biểu mô lớp có tính hấp thụ cao có tính axit yếu Ngược lại, lớp mô liên kết có tính chất hấp thụ yếu kiềm Với dung dịch kiềm yếu metylen nên lớp tế bào biểu mô lớp liên kết có tính hấp thụ khác nhau.Vì tế bào biểu mô có tính hấp thụ cao axit yếu hấp thụ mạnh dung dịch kiềm yếu metylen đưa dung dịch Còn lớp mô liên kết có tính hấp thụ yếu kiềm yếu nên không hấp thụ tốt dung dịch metylen lớp mô liên kết hấp thụ giữ lại Như vậy: tính thấm da ếch từ tế bào cao tính thấm cao từ vào Đăk Lăk,ngày 11 tháng năm 2009 Trang 13 Page 1320-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 13 - - 13 - [...]... còn gọi là lớp tế bào sinh trưởng.Nhờ tính chất cấu tạo của lớp biểu mô và lớp mô liên kết khác nhau mà lớp biểu mô có Đăk Lăk,ngày 11 tháng 5 năm 2009 Trang 11 Page 1120-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 11 - - 11 - Bài thực hành lí sinh tình hấp thụ mạnh.. .Bài thực hành lí sinh I-Mục tiêu: -Xác định năng lượng hoạt hoá của quá trình co bóp tim ếch tách rời Để cho một phản ứng hoá học xảy ra,các nguyên tử ,phân tử tham gia phản ứng phải sắp xếp lại cấu trúc để tạo... 1220-01-16Created on 26-03-09 0:02:00 a3/p3/storage1/vhost/convert.123doc.vn/data_temp/document/mhk1453269869-169411114532698695496/mhk1453269869.docLast saved by Cty Tin Hoc SANG TAO - 12 - - 12 - Bài thực hành lí sinh B4: Xác định năng lượng hoạt hoá của tim ếch Ehh = 0, 46.T (T +10).lg Q10 (*) Trong đó: T+10= 280 C + 273 = 3010 K T = 180 C + 273 = 2910 K KT 84 = = 1.5556 KT −10 54 Thay vào (*): Ehh =... nhiệt độ chênh nhau 100 C Thay (1) vào (2),tìm công thức của Ehh,đổi ln thành log và thay các hệ số đã có,ta được: Ehh = RT T + 10 ln Q10 = 0.46.T (T + 10).lg Q10 10 (3) Trong hệ sinh học,Q10 chính là tốc độ của phản ứng hoá học của một cơ quan trong cơ thể.Trong thí nghiệm này,Q10 chính là tần số co bóp của tim ếch.Trong hệ sinh học Q 10 ≈ 1,7;trong hệ hoá học Q10 từ 2 - 4 bởi vì mội phản ứng trong... ngoài(từ lớp mô liên kết đến lớp tế bào biều mô) đối vói một số thuốc nhuộm có tính kiềm yếu như xanhmetilen(metylblue) II-Cách tiến hành 1- Dụng cụ -Bộ đồ mổ tiểu phẩu + Kim chọc tuỷ + Kẹp phẩu tích + Ống Kenu + Kéo + Bình Ringer -Ly thuỷ tinh -Máy quang phổ 2-Cách tiến hành a-Xác định năng lượng hoạt hoá của quá trình co bóp tim ếch tách rời B1: Gây mê Ếch (có 2 cách): - Cho ếch ngửi ête - Dùng kim... hệ sinh học Q 10 ≈ 1,7;trong hệ hoá học Q10 từ 2 - 4 bởi vì mội phản ứng trong cơ thể sống đều chỉ xảy ra trong một phạm vi giới hạn nhiệt độ nhất định.Nếu tăng nhiệt độ vượt quá ngưỡng cho phép thì thành phần các enzim xúc tác các phản ứng bị biến đổi làm cho phản ứng không thể xảy ra -Xác định tính thấm của da ếch Cấu tạo của da ếch:gồm hai phần: +Ngoài là lớp biểu mô +Trong là lớp mô liên kết Lớp... vao một ống nhựa và buộc chặt không cho da ếch và ống tách rời nhau, sau đó dùng ống hút lấy 10ml dung dịch Xanhmêtilen cho chảy xuống da ếch.Ngâm mỗi lớp da ếch vào một ly thuỷ tinh đựng 20ml dung dịch sinh lý trong thời gian 40 phút.Sau đó ta thấy kết quả như sau: Một trong 2 ly có màu sẫm hơn biểu thị tính thấm của da ếch từ trong ra ngoài ,ly còn lại biểu thị tính thấm từ ngoài vào trong III-Biện .. .Bài thực hành lí sinh Ka Hải Lớp:Ykhoa K08 Nhóm:2 Bài thực hành lí sinh số 1: XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN CỦA TẾ BÀO HỒNG CẦU I Yêu cầu: • Phân... thấu huyết thấp so với lí thuyết điều kiện sinh lí bình thường,cơ thể 37 o C nên nhiệt độ tuyệt đối có giá trị lớn hơn.Do áp suất thẩm thấu huyết lớn Bài thực hành lí sinh số 5: XÁC ĐỊNH DẪN... Cty Tin Hoc SANG TAO -5- -5- Bài thực hành lí sinh dung dịch phía suốt,không có chứa protein acid acetic làm cho protein kết tủa đáy.Đo suất dung dịch suốt phía trên ,lí hiệu n1 • Ống 2:lấy 1ml