Báo cáo thí nghiệm vi sinh căn bản.

báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn. báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DUY TÂN

- Nguyễn Thị Tình

- Nguyễn Thị Ngọc

Đà Nẵng,tháng 5, năm 2015

Bài 1 CÁC LOẠI HÌNH THỂ CỦA VI KHUẨN.

Theo hình thái bề ngoài,vi khuẩn thường được chia thành 3 loại hình thể chính: cầu khuẩn,trực khuẩn và xoắn khuẩn

1 Cầu khuẩn :(Coccus - từ tiếng Hy Lạp Kokkos - hạt quả): là loại vi khuẩn có hình

cầu Nhưng có nhiều loại không hẳn hình cầu thí dụ như hình ngọn nến như phế cầu khuẩn - Diplococcus pneumoniae hoặc hạt cà phê (lậu cầu khuẩn Neisseria gonorrhoeae).Kích thước của vi khuẩn thường thay đổi trong khoảng 0,5x1,2µm (1 = 10-3 mm) Tuỳ theo từng loài mà chúng có những dạng khác nhau

Đặc tính chung của cầu khuẩn:

- Tế bào hình cầu có thể đứng riêng rẽ hay liên kết với nhau

- Có nhiều loài có khả năng gây bệnh cho người và gia súc

- Không có cơ quan di động

- Không tạo thành bào tử

a Giống Monococcus (Đơn cầu)

Thường đứng riêng lẻ từng tế bào một, đa số chúng thuộc loại hoại sinh Thường thấy chúng sống trong đất, nước và trong không khí (Thí dụ như Micrococcus agilis, M roseus, M luteus)

b Giống Diplococcus (song cầu) :(Từ tiếng Hy Lạp - Diplos - thành đôi) phân cách

theo một mặt phẳng xác định và dính nhau thành từng đôi một Trong số này có

một số có khả năng gây bệnh như giống Neisseria - Lậu cầu khuẩn N meningitidis gonorrhoeae - Não mô cầu khuẩn).

c Giống Tetracoccus (Tứ cầu):

Thường liên kết với nhau thành từng nhóm 4 tế bào một Chúng thường gây bệnh cho người và một số có thể gây bệnh cho động vật

d Giống Streptococcus(Liên cầu)

Từ tiếng Hy Lạp (Streptos - chuỗi) chúng phân cách theo một mặt phẳng xác định và dínhvới nhau thành từng chuỗi một dài Thí dụ như Streptococcus lactic Strep-pyogenes

e Giống Sarcina

Từ tiếng Hy Lạp Saricio - gói hàng Phân cách theo 3 mặt phẳng trực giao với nhau, tạo thành những khối từ 8 - 16 tế bào (hoặc nhiều hơn nữa) Trong không khí chúng ta

thường gặp một số loài như Sarcinalutea, Sarcina auratiaca Chúng thường nhiễm vào cácmôi trường để trong phòng thí nghiệm và tạo thành màu vàng

f Giống Staphilococcus (Tụ cầu)

Từ tiếng Hy Lạp Staphile - chùm nho Thường chúng liên kết với nhau thành những đám trông như chùm nho Chúng phân cách theo một mặt phẳng bất kỳ và sau đó dính lại với nhau thành từng đám như hình chùm nho Bên cạnh các loài hoại sinh còn có một số loài gây bệnh ở người và động vật (Staph Curcreus, Staph Emidermidis )

2 Trực khuẩn : Là tên chung chỉ tất cả các vi khuẩn có hình que Kích thước của

chúng thường từ 0,5 - 1,0 x 1 - 4 m

Thường gặp các loài trực khuẩn sau đây:

a Bacillus (Viết tắt là Bac)

trực khuẩn gram dương, sinh bào tử Chiều ngang của bào tử không vượt quá chiều ngangcủa tế bào Vì thế khi tạo thành bào tử tế bào không thay đổi hình dạng chúng thường thuộc loài hiếu khí hoặc kị khí không bắt buộc

b Bacterium (viết tắt là Bact)

Trực khuẩn gram âm không sinh bào tử Thường có tiên mao mọc xung quanh tế bào người ta gọi là chu mao Các giống Salmonella, Shigella, Erwina, Serratia đều có hình thái giống Bacterium

tạ Một số khác có hình thái giống Corynebacterium gồm có Listeria, Erysipelothric, Microbacterium, Cellulomonas, Arthrobacter.

e Clostridium (Viết tắt là Cl, tiếng Hy Lạp Kloster - con thoi)

Thường là trực khuẩn gram dương Kích thước thường vào khoảng 0,4 - 1 x3- 8

Sinh bào tử, chiều ngang của bào tử thường lớn hơn chiều ngang của tế bào, do đó làm tế bào có hình thoi hay hình dùi trống

Chúng thường thuộc loại kỵ khí bắt buộc, có nhiều loài có ích Thí dụ như các loài cố định nitơ Một số loài khác gây bệnh Thí dụ vi khuẩn uốn ván Cl Botulium

3 Vi khuẩn hình xoắn: gồm 3 dạng sau :

a Phẩy khuẩn: Là tên chung chỉ các vi khuẩn hình que uốn cong giống như dấu

phẩy Giống điển hình là giống Vibro (Từ chữ La tinh Vibrare - dao động nhanh) Một số giống phẩy khuẩn có khả năng phân giải xenluloza (Cellvibrio,

Cellfalcicula) hoặc có khả năng khử sunfat (Desulfovibrio)

b Xoắn khuẩn:Gồm các vi khuẩn dài,mảnh,có nhiều vòng xoắn.Một số có khả năng

gây bệnh cho người như xoắn khuẩn giang mai(Treponema pallidum),xoắn khuẩn Leptospira,xoắn khuẩn hồi quy(Borrelia)

c Spirillum - Từ chữ Spira - Hình cong, xoắn gồm tất cả các vi khuẩn có hai vòng

xoắn trở lên Là loại gram dương, di động được nhờ có một hay nhiều tiên mao mọc ở đỉnh

Đa số chúng thuộc loại hoại sinh, một số rất ít có khả năng gây bệnh (SP Minus) có kích thước thay đổi 0,5 - 3,0 - 5 - 40

Hình ảnh quan sát thực nghiệm :

*Mẫu lấy từ các mảng bám trên răng.

Mẫu vi khuẩn trong sữa chua khi nhuộm đơn bằng violet và safranin:

Bài 2 : PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT

Nhuộm tiên mao Nhuộm bào tử Nhuộm Ziehl - Neelsen Nhuộm Gram

A DỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT

Các dung dịch nhuộm gồm:

 Dung dịch xanh methylene

 Dung dịch tím kết tinh ( Crystal violet )

 Dung dịch lugol

 Dung dịch tẩy màu

 Dung dịch nhuộm bổ sung ( Safranin O hoặc Fuchsin )

B CÁCH LÀM TIÊU BẢN

1 Cách lấy vi sinh vật để làm tiêu bản:

Muốn làm bất kỳ một loại tiêu bản nào về vi sinh vật cũng phải thực hiện các thao tác lấy mẫu vi sinh vật để làm vết bôi trên tiêu bản Các thao tác đó như sau:

- Đốt đèn cồn

- Đặt ống nghiệm mẫu hay đĩa Petri có vi sinh vật vào giữa ngón cái và ngón trỏ của bàn tay trái, lòng bàn tay ngửa ra Ống nghiệm để hơi nghiêng nhưng không được để canh trường vi sinh vật chạm vào nút bông đối với ống nghiệm

- Tay phải dùng que cấy và vô trùng bằng cách hơ trên ngọn lửa đèn cồn Để que cấy thẳng đứng trên ngọn lửa đèn cồn cho đến khi đầu que cấy nóng đỏ rồi từ

từ đặt và di chuyển que cấy theo chiều nằm ngang trên ngọn lửa

- Kẹp nút bông vào giữa ngón út và lòng bàn tay phải, xoay nhẹ nút bông 1

vòng và kéo nút ra Giữ nguyên nút bông như vậy cho đến khi đậy nút vào

- Đốt miệng ống nghiệm trên ngọn đèn cồn

- Khéo léo đưa que cấy (đã nguội) vào ống giống để lấy mẫu và nhẹ nhàng

đưa que cấy ra

+ Nếu ống mẫu là môi trường lỏng chỉ cần nhúng đầu que cấy vào

canh trường rồi rút ra

+ Nếu ống giống là môi trường đặc thì dùng que cấy lấy một chút sinh

khối vi sinh vật trên mặt thạch(nếu quan sát một loại vi khuẩn thì nên lấy trong một khuẩn lạc) và hoà đều vào giọt nước cất vô trùng trên phiến kính Chú ý thao tác hết sức nhẹ nhàng để lấy mẫu mà không cầy mặt thạch lên

- Rút que cấy ra, đốt miệng ống nghiệm, đậy ống nghiệm nghiệm lại và để

ống vào giá

- Đưa giọt canh trường (hoặc sinh khối) vi sinh vật ở đầu que cấy đặt vào

giữa phiến kính để làm vết bôi

- Khử trùng lại que cấy trên ngọn đèn cồn rồi cất vào giá

2 Làm vết bôi:

Đặt một giọt nước sạch vào giữa phiến kính, sau đó dùng que cấy đã khử

trùng lấy một vòng que cấy vi sinh vật cho vào giọt nước và dàn đều ra Trường hợp nuôi cấy trên môi trường lỏng thì dùng pipet để lấy dung dịch nghiên cứu Hơ khô phiến kính đã có vi sinh vật trên ngọn lửa đền cồn hoặc để khô tự nhiên ta được một vết mờ trên phiến kính gọi là vết bôi

- Việc cố định vết bôi nhằm các mục đích sau:

+ Giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an toàn khi tiếp xúc (nếu là vi sinh vật gây bệnh)

+ Gắn chặt vi sinh vào phiến kính để lúc nhuộm không bị rửa trôi

- Các cách cố định:

+ Cố định bằng nhiệt: dùng kẹp gỗ để kẹp phiến kính, hơ mặt dưới của

phiến kính qua lại trên ngọn lửa đèn cồn 2 – 3 lần (chừng vài ba giây), tránh

không để tiêu bản quá nóng

+ Cố định bằng hoá chất:

* Nhúng vết bôi vào cồn 95o khoảng 10 – 15 phút rồi sấy khô

* Ngâm trong axeton 5 phút

* Sấy bằng hơi formol 10 – 15 giây

C PHƯƠNG PHÁP NHUỘM:

1 Phương pháp nhuộm đơn:

Nhuộm đơn là dùng 1 loại thuốc nhuộm để nhuộm Các loại thuốc nhuộm thường dùng để nhuộm đơn là:

2 Phương pháp nhuộm Gram:

Đây là phương pháp thường được dùng trong thực nghiệm vi sinh vật học Phương pháp nhuộm kép do nhà bác học người Đan mạch Christian Gram

và những người cộng tác đưa ra năm 1884 Với cách nhuộm này ta có thể phân biệt vi sinh vật thành 2 nhóm: Gram dương (G+) và Gram âm (G-)

Vi sinh vật bắt màu xanh tím sau khi nhuộm gọi là vi sinh vật Gram dương (bao gồm hầu hết xạ khuẩn, trực khuẩn sinh bào tử hiếu khí, nấm mốc, nấm men, cầu khuẩn) Còn những vi sinh vật bắt màu hồng gọi là Gram âm như trựckhuẩn sinh bào tử kỵ khí, một số cầu khuẩn như lậu cầu khuẩn, não mô cầu khuẩn,các vi khuẩn đường ruột…)

a Nguyên tắc: Dựa trên khả năng bắt màu của tế bào chất và màng tế bào

với thuốc nhuộm tím kết tinh và iot mà hình thành nên hai loại phức chất khác nhau:

- Loại phức chất thứ nhất vẫn giữ nguyên màu của thuốc nhuộm nên không

bị rửa trôi khi xử lý bằng cồn Vi sinh vật có phức chất này thuộc loại gram dương

- Loại phức chất thứ hai không giữ được màu của thuốc nhuộm nên mất màu khi bị xử lý bằng cồn và bắt màu của thuốc nhuộm bổ sung Vi sinh vật có phức chất này thuộc loại gram âm

b Cách tiến hành:

Vết bôi

Phủ tím kết tinh ( Crystal violet )

15s

Mẫu đã nhuộm Rửa nước

Rửa nước Tẩy cồn Rửa nước Phủ lugol

Fuchsin

1phút

15s

D K t qu thí nghi m quan sát vi khu n b ng ph ả thí nghiệm quan sát vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram ệm quan sát vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram ẩn bằng phương pháp nhuộm Gram ằng phương pháp nhuộm Gram ương pháp nhuộm Gram ng pháp nhu m Gram ộm Gram

đ i v i 3 ch ng vi khu n m u: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas ối với 3 chủng vi khuẩn mẫu: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas ới 3 chủng vi khuẩn mẫu: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas ủng vi khuẩn mẫu: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas ẩn bằng phương pháp nhuộm Gram ẫu: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas.

a Ch ng E.coli b t màu Gram âm.ủng E.coli bắt màu Gram âm ắt màu Gram âm

b Chủng Bacillus bắt màu Gram dương (không rõ lắm do vi khuẩn còn non)

c Chủng Pseudomonas bắt màu Gram âm:

Bài 3 : PHẢN ỨNG SINH HÓA

A MỤC TIÊU:

Nắm được mục đích khảo sát những tính chất sinh hóa của vi khuẩn

Trình bày được nguyên tắc của những phản ứng sinh hóa thông thường

Quan sát các phản ứng sinh hóa và nhận xét kết quả

B THỰC HÀNH:

1 Những phản ứng liên hệ đến nguồn thức ăn có chứa Nitơ.

a Phản ứng Indol:

Nguyên tắc: Phát hiện khả năng oxi hóa tryptophan thành các dạng của indol: Indole,

Skatole (methyl indole) và indole-acetate.Một số vi khuẩn như Ecoli có enzyme

Tryptophanase chuyển Tryptophan thành Indol

Môi trường: Tryptophan hoặc peptone broth.Ta nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường nước

pepton không chứa đường trong 24-48h trong tủ ủ 37oC

Thuốc thử: Kovacs’s

Kết quả :

– Dương tính: xuất hiện vòng màu đỏ trên bề mặt môi trường sau 5 phút

– Âm tính: màu vàng (màu của thuốc thử Kovacs’s)

Hình ảnh thí nghiệm : Indol âm tính.

Kết quả :Dương tính khi làm cho môi trường thạch thành màu đen

c Phản ứng phân giải Urê :

– Dương tính: môi trường có màu hồng

– Âm tính: môi trường không đổi màu (vàng cam)

2 Những phản ứng liên quan tới nguồn thức ăn có Carbon :

a Khả năng lên men đường:

Cấy vi khuẩn vào ống đường chứa pepton,cao thịt,1% đường và chỉ thị màu.Trong quá trình phát triển,vi khuẩn có thể lên men đường tạo thành acid đổi màu phenol đỏ từ màu

đỏ sang màu vàng

Hình ảnh thực hành : cả hai ống nghiệm đều dương tính

ĐỐI VỚI GLUCOSE

2 S.aureus (+) Sinh acid

5 E.coli (+) Sinh acid,gas

Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh hơi

Đối với Lactose

2 S aureus (+) Sinh acid

5 E.coli (+) Sinh acid,gas

Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh hơi

Kết quả, màu đỏ (Dương tính), màu

Methyl

37 o C

Chất chỉ thị pH: methyl red

Cơ chế: một số vi sinh vật có khả năng chuyển hóa Glucose qua quá trình đường phân tạothành acid pyruvic, rồi từ Acid pyruvic chuyển hóa thành acetyl coenzyme A, đi qua chu trình Kreps tạo ra các acid: acid citric, acid succinic, acid fomic, a cid malic, a cid

oxalic… hoặc từ Acid pyruvic chuyển trực tiếp thành các acid lactic, acid fomic,…

Trong môi trường MR-VP có PH= 6.9±0.2 có K2HPO4 (đệm phosphat) giúp ổn định PH,khi có mặt các acid hữu cơ mạnh sẽ tấn công và phá vỡ thế PH ổn định làm cho PH giảm mạnh, PH<4.3, Với sự có mặt của thuốc thử MR (Methyl Red) sẽ làm môi trường chuyểnsang màu đỏ (Phản ứng dương tính)

Ý nghĩa: Định danh vi sinh vật có khả năng chuyển hóa Glucose (thường là gram -)

Kết quả thí nghiệm :

c Phản ứng Voges-Proskauer ( VP).

Nguyên tắc: Xác định khả năng sinh acetylmethylcarbinol (acetoin) trong quá trình lên men glucose của một số vi sinh vật Hợp chất này bị khử oxy cho butylene glycol,thuốc thử VP phát hiện sự hiện diện của acetonin

Môi trường nuôi cấy : Clark-lubs

Thuốc thử :

- Naphtol, (chất tăng cường màu)

- KOH 40%, (chất oxi hóa)

Phản ứng:

Kết quả thí nghiệm : (hình ảnh không được rõ)

Dương tính: Màu đỏ-hồng nhạt trên bề mặt môi trường (có acetoin)

Âm tính: Màu vàng trên bề mặt môi trường (như màu của thuốc thử)

d Khả năng sử dụng Citrat:

Nguyên tắc:

Xác định khả năng sử dụng citrate như là nguồn carbon duy nhất trong quá trình biến dưỡng của vi sinh vật,(các loài Krebsiella và Enterobacter)

Môi trường: Simmons citrate medium,chứa chỉ thị.Ta nuôi cấy VK trong 48h.

Thuốc thử: Bromthymol blue – chất chỉ thị pH

Cơ sở sinh hóa: Môi trường có chứa muối ammonium vô cơ Vi sinh vật có khả năng

sử dụng citrate làm nguồn Carbon duy nhất thì có khả năng sử dụng muối Amonium làm nguồn Nitơ và sinh NH3 làm môi trường trở nên kiềm

Phản ứng :

Kết quả thí nghiệm :

Dương tính: Màu xanh dương đậm (kiềm)

Âm tính: Màu xanh rêu

Ống 1 : Âm tính

Ống 2 : Dương tính

e Khả năng di động : nếu vi khuẩn có hệ thống lông roi thì sẽ di động vào môi trường.

3 Những phản ứng liên hệ đến hệ Enzyme.

a Thử nghiệm Catalase:Phát hiện các vi sinh vật có emzyme Catalase.Phản

ứng dùng phân biệt tụ cầu,liên cầu cũng như những vi khuẩn khác

H2O2 Catalase H2O + ½ O2

Kết quả hình ảnh dương tính Catalase

b Ngoài ra còn các thí nghiệm hóa sinh khác :Thử nghiệm

Coagulase,oxidase,gelatinase…(không được thực hành)

- Nhằm thu thập những thông tin dịch tễ học về sự đề kháng của vi khuẩn gây bệnh quan trọng ở cộng đồng.

2.Kỹ thuật kháng sinh khuếch tán trong thạch.

Đây là phương pháp đơn giản và có thể tiến hành ở các phòng thí nghiệm hàng ngày không cần nhiều trang thiết bị và máy móc

2.1 Nguyên lý: Dùng khoanh giấy có đường kính và độ dày nhất định, vô trùng đã tẩm

sắn kháng sinh với một nồng độ nhất định ( dựa vào hiệu lực của từng kháng sinh ), đặt lên một đĩa môi trường đã nuôi cấy vi khuẩn Nồng độ vi khuẩn cũng đã được qui định trước Để tủ ấm cho vi khuẩn mọc và đo đường kính vòng ức chế vi khuẩn xung quanh khoanh giấy kháng sinh, dựa vào đó xác định mức độ nhạy cảm của vi khuẩn được thử với kháng sinh đó

2.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới kết quả kháng sinh đồ

2.2.1 Môi trường

- Thành phần môi trường:

Môi trường nghèo chất dinh dưỡng sẽ tạo ra vòng ức chế lớn hơn và ngược lại.

- Các chất hữu cơ của môi trường như pepton, cao thịt…làm cho môi trường đủ chất dinhdưỡng nhưng chúng khó đạt tính đồng nhất, ngay cả từ một hãng xuất và ở những lô sản xuất khác nhau

- Đối với một số vi khuẩn khó mọc môi trường cần cho thêm máu chống đông như máu thỏ, cừu , ngựa…các loại máu khác nhau không ảnh hưởng rõ rệt tới kết quả kháng sinh

đồ, trừ máu chống đông bằng Natri citrat đối tetracylin

- Chủng loại thạch: thạch thô có nhiều phụ chất làm cho vòng ức chế nhỏ lại Thạch đã tinh chế không có những yếu tố gắn bám kháng sinh sẽ cho kết quả tốt hơn

- Các Ion trong môi trường như Mg 2+, Ca2+ có ảnh hưởng lớn tới tác dụng của

tetracyclin và aminosid Những ion này có hàm lượng khác nhau trong những lô môi trường khác nhau và mỗi hãng sản xuất khác nhau

- Độ pH: có ảnh hưởng tới sự phát triển của vi khuẩn và tác dụng của kháng sinh, ví dụ: streptomycin, kanamycin, erythromycin, oleandomycin ở pH = 6 và 6,5 giảm tác dụng so với pH= 7,3 độ pH lại phụ thuộc vào nhiệt độ nên khi điều chỉnh phải lưu ý điểm này

- Độ dày của thạch: thạch phải có độ dày nhất định vì quá mỏng vùng ức chế sẽ rộng ra

và ngược lại Tốt nhất là dày 4mm

- Làm khô mặt thạch: làm khô trước khi cấy để vi khuẩn được trãi đều, nếu mặt thạch ướtchúng sẽ mọc thành thảm dày đặc thu hẹp vùng ức chế Sau khi cấy vi khuẩn nếu để khô quá lâu mới đặt khoanh giấy cũng sẽ làm vùng ức chế nhỏ lại

2.2.2.Vi khuẩn.

- Lượng vi khuẩn cấy vào môi trường có ảnh hưởng lớn tới đường kính vùng ức chế: quá nhiều, đặc vùng ức chế thu nhỏ lại và quá ít, mỏng vùng ức chế mở rộng ra Tốt nhất là cấy sao cho các khuẩn lạc mọc sát nhau mà không thành thảm

- Dung dịch vi khuẩn (Inoculum) : là một dung dịch có độ đục nhất định tương ứng 108

vi khuẩn /ml (108 UFC/ml: Colony Forming Unit – đơn vị hình thành khuẩn lạc ), kiểm định bằng độ đục chuẩn Mc Farland 0,5 Độ đục này được pha chế bằng cách lấy 0,5 ml 0,048 M BaCl2 (1,175 % BaCl2.2H2O v/v) cộng với 99,5 ml 0,9 M H2SO4 (1% v/v) , đóng vào các ống nghiệm có độ lớn như nhau, hàn kín và giữ ở nhiệt độ phòng, có thể dùng trong vòng sáu tháng Trước khi sử dụng phải lắc kỹ

2.2.3 Khoanh giấy thấm kháng sinh.