Ứng dụng của enzym trong phân tích

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁN CÔNG TÔN ĐỨC THANG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC —ỈO*C3— Cùng với phát triển mạnh mẽ công nghệ thông tin, năm gần CNSH đạt tiến vượt bậc mà đỉnh cao thành tựu giải mã toàn hệ gen người Thành công cung cấp nguồn thông tin vô giá cho nghiên cứu sinh học, đặc biệt lĩnh vực chế tạo dược phẩm đặc trị, chẩn đoán bệnh xác cho người hiểu rõ tác động gen đôi với phát triển bệnh tật, sở góp phần tìm phương pháp chữa trị Trong tiến trình đó, Sinh học phân tử đạt thành tựu rực rỡ lĩnh vực nghiên cứu tính đa dạng di truyền vi sinh vật, ứng dụng enzyme y học phân tích Bên cạnh sản xuất enzyme, nguyên liệu thường sử Seminar: dụng có nguồn góc từ vi sinh vật Mỗi nguyên liệu thành phẩm chức chất, hợp phần tế bào, đặc biệt enzyme Do đó, phản ứng hóa học xảy nguyên liệu trình sản xuất, thực chất phản ứng enzyme Do phản ứng enzyme mà chất lượng nguyên liệu trình bảo quản cất giữ bị tổn thất, giảm sút Và nhờ phản ứng enzyme mà tân tạo trạng thái, kết cấu hương vị đặc thù cho sản phẩm ỨNG DỤNG CỦA ENZYM TRONG PHÂN TÍCH Đề tài nhằm cung cấp cho có kiến thức sở chủ yếu việc sử dụng enzyme y học phân tích: GVHD :Nguyễn Thị Thu Sang SVTH : Nguyễn Thị Thắm TP.HCM 2005-2006 1.1 Khái niệm Enzyme: Enzyme chất xúc tác có chất Protein thể sông tổng hợp nên Từ lâu người ta biết thể sông có trình hữu phúc tạp có liên quan mật thiết đến trình không xúc tác Enzyme Do nói:” Không có Enzyme sông “ trình xúc tác Enzyme trình đặc hiệu, nghĩa Enzyme có tác dụng xúc tác chọn lọc vào chất đặc hiệu định loại phản ứng định Tác 1.2 Một sô" châ"t xúc tác Sinh Học khác: Hầu hết chất xúc tác sinh học enzyme có chất Protein Tuy nhiên bên cạnh có sô chất xúc tác sinh học khác có chất ARN mà điển hình Ribonucleazase p có chức biến đổi tiền ARN vận chuyển thành ARN vận chuyển, có ARN khác có hoạt tính xúc tác cho trình chuyển hóa tiền hóa chất ARN thông tin thành ARN thông tin, ARN gọi Bên cạnh sô kháng thể có hoạt tính xúc tác gọi kháng thể xúc tác Kháng thể Glubolin miễn dịch, chất then chôt đáp ứng miễn dịch Người ta thấy rằng, chất tương tự với chất trạng thái chuyển tiếp (trong trình xúc tác) sử dụng làm chất kháng nguyên để kích thích sinh sản kháng thể kháng thể sinh kết hợp với kháng nguyên có khả xúc tác phản ứng tương ứng Vân đề phát thực kỹ thuật để sản xuât kháng thể đơn dòng phân lập sô kháng thể đơn dòng xúc tác cho phản ứng thủy phân este carbonat 1.3.1 Động vật: Enzyme thu nhận từ nguồn nguyên liệu • Pepsin từ dày • Trypsin từ tụy tạng • Renin từ ngăn thứ dày bê • Catalase từ gan bò • Glutamic-Oxaloacetic transminase từ tim heo I ứng dụng Enzyme phân tích y học : 1.1 Điện cực Urea có mang enzyme cô" định: Điện cực cho phép kiểm tra hên tục hàm lượng nhỏ chất Trong điện cực Urea, Urease cô" định phân hủy Urea thành lon mà dò nhờ kỹ thuật điện hóa chuẩn học Urease gắn vi tiểu cầu sử dụng có kết để loại ure máu thận nhân tạo Điện cực urease cô" định, dùng để xác định ure dòng liên tục (Hình 1) 1.2 Phân tích Glucose Lactate tự động : sử dụng điện cực có mang enzyme cô định, phản ứng sinh hóa tự động hóa Khi sử dụng hệ thông cho phép xác định nồng độ Glucose hay Lactate nhờ enzyme cô định điện cực Glucose hay Lactate dehydrogenase (HÌNH 2.) sơ đồ hệ thông phân tích glucose lactate tự động nhờ enzym cô" định glucose oxidase lactate dehydrogenase Khi sử dụng hệ thông cho phép xác định nồng độ Glucose hay - Phương pháp đo tốc độ phản ứng ( measurement of reaction rate L3.1.1.Phương pháp xác đinh điếm cuối: > Nguyên tắc phương pháp sau : cho Enzyme tác động vào chất giảm sản phẩm cuối tăng lên Ta xác định sô" Đôi với nồng độ châ"t thấp giá trị sô" ( Km ) Michaelis, tốc độ phản ứng tuân theo phương trình sau : V = es X v/Km Glucose + 02 + H20 == > gluconate + H202 Trong phản ứng thứ hai peroxide hydro , tác dụng Enzyme horse - Horse radish peroxidase Trong phân tích , 2.2 - azino - bis ( -thyl 2.3 - dihydrobenzothiazol sulíonate ( ABTS ) sử dụng nhưchoromogen Phương pháp xác định urea ĩ.3.1.2 Phương pháp đông hoc Phương pháp xác định nồng độ chất giá trị Km • Phương pháp xác đinh glucose Phản ứng xảy phương trình sau : D-glucose + ATP === > D-glucose-6-phosphate + ADP D-glucose-6-phosphate + NAD.P+ == > D-glucose-^ - lactone -phosphate + NADPH + H+ phản ứng đầu , glucose phosphoryl hoá hexokinase (EC.2.7.1.1 ) Sau , glucose-6-phosphate bị hyđrogen hoá tác động glucose-6phosphate dehydrogenase (EC 1.1.1.49).Sự tạo thành NADPH xác định máy quang điện • Xác đinh triglyceride Chất béo phân huỷ lipase (EC.3.1.1.3) carboxylesterase ( EC.3.1.1.1) Glycerol sau phosphoryl hoá glycerol kinase (EC.2.7.1.30) ADP tạo thành tiếp tục phosphoryl hoá đến ATP với phospho enol pyruvate pyruvate kinase (EC.2.7.1.40) Cuối pyruvate hydrogen hoá L - lactate dehydrogenase ( EC 1.1.1.27) NADH giảm dần Triglyceride + 3H2O == > glycerol + 3acid béo Glycerol + ATP == > glycerol -3- phosphate + ADP ADP + phosphoenol pyruvate === > ATP + pyruvate Pyruvate + NADH + H+ ==== > L - lactate + NAD+ Enzyme ứng dụng phản ứng miễn dịch Người ta thường sử dụng Enzyme có hoạt tính 2500ƯI/mg , nhiệt độ 37°c Để xác định hoạt tính alkaline phosphatase sử dụng máy huỳnh quang với - methylumbelliferyphosphate làm chất b p -galactosidase ( EC.3.2.1.23 ) Người ta thường sử dụng Enzyme có hoạt tính riêng lớn 250ƯI/mg với chất 4-nitrophenyl-^-D-galactosidase 37°c Hoạt tính ^-galactosidase đo máy quang điện với 4- II ỨNG DỤNG ENZYME TRONG PHÂN TÍCH THựC PHAM Giữa kỷ 19 , nhà khoa học sử dụng Enzyme phân tích Tuy nhiên , sử dụng Enzyme phân tích thực phẩm áp dụng khoảng 20-25năm trước ĩĩ.l xác định carbohydrate Trong thực phẩm , carbohydrate chiếm khôi lượng lớn đóng vai trò quan trọng dinh dữơng Các loại đường đôi tượng phân tích thường D-glucose + ATP ADP + glucose 6-phosphate hexokinase Glucose-6-phosphate + phosphate + NADPH + H+ glu cos e6-phophate-dehydrogenase NADP ^ D-gluconate -6- Enzyme hexokinase tác động lên íructose Ta xác định íructose sau xác định glucose ♦> Galactose xác định theo phản ứng sau : galactose-dehydrogemse v D-galactonic acid + NADH + H+ * D- galactose + NAD+ ❖ Manose Xác định mannose tự theo phương trình phản ứng sau : hexokinase v Xác định theo phương trình sau : Maltose + H20 Lactose + H20 a-glu cos idase ■ ^ 2-D - glucose D- galactose + D-glucose ❖ Rafinose Rarìnose có củ cải đường Xác định rarìnose theo phương trình phản a - gulactosid ase + saccharose RaíìnoseD-galactose + H20 ❖ Tinh bột Tinh bột có nhiều thực vật có sô" loài vsv Xác định tinh bột theo phản ứng sau ; ĨI.2 xác đinh acid hữu : Acid hữu muôi chúng có nhiều nguyên liệu sản phẩm thực phẩm Chúng đóng vai trò quan trọng sinh lý người , động vật , thực vật vsv Chúng tạo trình lên men l.Acetic acid Acetic acid thuộc nhóm acid bay Người ta thường sử dụng enzyme để nhưAscorbic Giông vitamin ,acid ascorbic acid đóng vai tro sinh học lớn sinh lí người động vật Chúng sử dụng chất phụ gia thực phẩm Người ta sử dụng enzyme để xác định ascorbic acid theo phương trình sau : PMS L - ascorbic acid ( XH2 ) + MTT * dehydro ascorbic acid ( X) + fomazan' + H+ Trong : PMS : 5- methylphenazinium sulíate ; MTT : - ( 4.5 dimethylthiazolyl Ascobacte oxy hoá tiếp : -2 )-2.5-diphenyltetrazolium bromide GOT L-Aspartate + a - oxoglutarate * Oxaloacetate + L-glutamate LMDH Oxaloacetate + NADH + H+ ^ L-malate + NAD+ Citric acid: Citric acid đóng vai trò trao đổi chất vi sinh vật Chúng có nhiều trái , sữa Xác định citric acid theo phương trình sau : Citrate citrate-(pro-35)-lyase ' Oxaloacetate + acetate Formic acid : Acid Formic sản phẩm trao đổi chất vi khuẩn nấm sợi Acid xem chất bảo quản nhiều thực phẩm Tuy nhiên , việc sử dụng acid bảo quản thực phẩm phải tuân theo luật an toàn vệ sinh thực phẩm Người ta xác định nồng độ lượng acid formic theo phương trình sau : Formate + NAD+ + H2O ýbrmate — dehydrogen ase v * Hydrogencarbonate + NADH + H+ ó.Glucomic acid Người ta thường sử dụng enzyme gluconate kinase để xác định acid glucomic phản ứng xảy sau : D-gluconate + ATP gluconate -kinase v D-gluconate 6- phosphate + NADP+ ' D-gluconate 6- phosphate + ADP > D-ribulose-5-phosphate + NADPH+ + H+ a - oxoglutarate isocitratedehydrogenase ^ a - Oxoglutarate + NADPH + D-isocitrate + NADP+ CƠ2 +H+ Acid 11 AcidLactic Oxalic Acid Oxalic Acid Lactic , đóng vai tròtạo quan nhiều trọngtrong trongquá hấptrình thụ calcium lên men.ở Người thể ta người xác định lactic acid Người ta sửbằng dụnglactate enzyme dehydrogenase oxalate dehydrogenase Phản ứng xảy để xác địnhsau oxalic : acid Phản ứng xảy sau : L-ìactate-dehydrogenase L -lactate + NAD+ + oxalate-dehvdrogenase v ' Pyruvate + NADH + H Oxalate L-lactate-dehydrogenase ' formate + CO4 D - lactate + NAD+ ' Pyruvate + NADH + H+ 10 Acid Malic Acid Malic có nhiều nho , rau , khác Người ta xác định Malic acid malate dehydrogenase NAD+ , phản ứng xảy sau : 12 Acid Pyruvic Pyruvic acid acid chu trình chuyển hóa thể Acid Succinic acid quan trọng chu trình tricarboxylic acid Người ta xác định succinic acid enzym succinyl -CoA-synthetase Phản ứng xảy sau : II.4 Xác ethanol đỉnh II.3 xác đinh alcohol Ethanol sản phẩm lên men đường nấm men Ngoài phương pháp bình thường , ngừơi ta sử dụng enzyme để xác định ethanol Phản ứng xảy sau : ADH v Ethanol + NAD a > + Acetaldehyde + NADH + H+ Xác định glycerol gỉycerol-kinase Glycerol + ATP ' glycerol-3-phosphate + ADP pyruvate-kinase ADP + PEP ' ATP + Pyruvate b Xác định alcohol đường Người ta xác định sorbitol enzyme sorbitol dehydrogenase phản ứng xảy sau : sorbitol-dehydrogenase v D - Sorbitol + NAD > + D-fructose + NADH + H+ IIAXác định thành phẩn khác Xác định cholesterol Cholesterol steroid có ý nghĩa lớn sinh lí người động vật Người ta xác định cholesterol enzyme cholesterol oxidase catalase Phản ứng xảy sau : choìesterol-oxidase sau : esterase- va-l ipase Triglyceride + 3H20 glycerol + acid béo Xác định acetaldehyde Đây chất taoi mùi cho bia yauort loại nước giải khát Người ta xác định acetaldehyde enzyme acetaìdehyde dehydrogenase Phản ứng xảy sau : Xac định amonỉac Đây chất chứa nitrogen đơn giản Người ta sử dụng enzyme glutamate dehydrogenase để xác định amoniac Phản ứng xảy sau : «-oxoglutarate + NADH + H+ + NH4 > L_ glutamate + NAD+ + H20 Xác định nitrate Lần sử dụng enzyme để xác định nitrate Enzyme sử dụng để xác định nitrate nitrate reductate Phản ứng xảy sau : Nitrate-reductase v + Nitrate + NADPH + H > Nitrite + NADP+ + H20 ó.Xác định sulfite Xác định sulíite enzyme năm 1983 enzyme ứng dụng để xác định sulfite sulíite oxidase Phản ứng xảy sau : Lecithin + H20 SO3'2 + 02 + H20 suỉfìte —oxỉdase v > ' SO4'2 + H2O2 1.2diglyceride + phosphorylcholine Trọng lượng Điểm Y>\joÁb\i«ụuCs Phosphorylcholine + H20 choline + Pj choline-kinase v động vật Adenyiate Kinese thủy ( Cơ giải myokinase ) acid (■=> cô" định) 21 sử dụng enzym -4 7,5 Choline + ATP 6,1 AMP ' phosphoryicholine + ADP Khi sử dụngđịnh enzym tránh vân đề mà phương pháp acid thường S.Xác urea gặp phảiNấm men màu đậm, hiệu suất đổi tương đôi 141 nồng độ muôi 5.4-chuyển Alcohol đehdrogenase Ethanol 1,3 Xvà lo'2tro cao,9,0 ( EC.1.1.1.1 )thấp Nếu Invertase tự sử dụng (thời gian phản ứng khoảng ngày) ( ethanol) việc sử dụngNgười enzym cô" định (thời gian phản ứng khoảng ngày) chosau qui: trình ta sử dụng urase để xác định urea Phản15 ứng xảy làm sản xuất trở nên cạnh tranh sản xuất 16 Sirô nghịch đảo cách sử Nấm men hạt.207 9,3 Aldehyde Acetaldehy -6 dụng lít enzym Urea + H20 — đehdrogenase ( EC 1.2.1.5 ) > 2NH3 + C02 de , ethanol III.MỘT SỐ ỨNG DỤNG TIÊU BIÊU TRONG CHUAN ĐOÁN BỆNH : 100 Amyloglucosida.se ( Penicllin 1.8 X 10’3 (D -alanine) III ứng dụng enzym Raffinase cô" định: 5,65,0- hợp với ứng Sự phát triển enzym Raffinase Galactosidase) phù dụng thương mại thành công lĩnh vực công nghệ enzym Bothropsatro Batroxobin (Serineproteinase , 7.4- Chủng sinh vật có khả sản xuất a - Galactosidase: chủng nấm mốc Mortierella vinacea var: Raffinoseutilizer, đáp ứng yêu cầu Chủng nấm mốc nuôi cấy dạng hạt, thu nhận dạng hạt 7.3- cô" định Cholesterol này, sấy khô sử dụng tiực tiếp Chế phẩm X 10 '5 loại enzym khuấy trộn với nước chiết củ cải đường Reactor có cánh khuấy theo mẻ Khi trình loại bỏ Raffinase hoàn tất, ngừng khuấy bơm nước chiết củ cải đường khỏi hệ enzym lắng đáy enzym bị bù thêm vào để tiếp Nocardiaeryt tục tiến hành phản ứng với mẻ điều kiện Bazơ giai đoạn đầu trình tinh nước củ cải đường không gây bất kỳ8.0trở ngại suốt trình Sucrose tái tạo Quá trình làm tăng thêm 3% hiệu suất làm giảm đáng kể việc gây ô nhiễm thải bỏ rác ủ đường •=> Raffinase cô định sử dụng để loại bỏ Raffinose Stachyose từ 84 hay 71 Cholin oxidase sữaArthorobacte đậu nành loại (EC 1.1.3.17) r globiformis 1.2 X 10'3 7.5 4.5Phospholipi sữa thay chế độ ăn kiêng đặc biệt ( cholin ) Pseudomona X 10'2 Pseudomona X 10'2 (Creatinine) (corynebacte X 10'3 Dihydrolipoamide dehydrogennase (diaphorase ) (EC 1.8.1.4 ) Tim lợn 141 Estenase Gan lợn 168 X 10'3 lipoamide X 10'3 (lipoate ) -4 4.8 5.97.2 NADH 8.6- 5.0Triglyceride 7.8 5.25 Fromaldehy -4 Factor xa (thromobo Pseudomona Formaldehyde dehydrogennase (EC 1.2.1.46) 150 6.7 X l o ' (íornaldehyde ) 1.3 X 10’2 (íormate Candida 7.5- 3.4- 4.02- - D -Galactose dehydrogenase (EC.3.2.1.22) Pseudomona s íluorescens 64 X 10'4 (D -alactose ) 2.4x10'4 (NAD+ ) 9.1 9.5 5.13 Galactose raffinose D7 X 10 '5 Bacillus Lenconostoc 6.4 X 10 ( glucose 6- phosphate ) 5.0- 5.6- ÍY Amylodalac CK 4.41.8 xlO'3 ( L - glutamate ) 8.5- Glutamate , 2- 2200 3.2 X 10'3 (amonia ) 7x10 (NAD+) 4.7 X 10'4 ( NADP+) 8.0- Glutamic pyruvic transaminase (alanine aminotr - ansfera.se ) (EC.2.6.1.2 ) Glycerol Tim heo 115 Enterobacter 340 2.5 xlO’2 ( L - glutamate ) 3xl0’4 (L-alnine ) 1.4 xio (glucerol ) aerogenes 8.08.5 ’2 9.0 Lactate Glycerol trigilyceride dehydrogennase 1.3 X 10 '3 10.0- Glycerol 3- phosphate dehydrogenase (EC 1.1.1.8 ) Cơ thỏ 78 1.1 xio Glycerol 3phosphate 3.8 xlO’4 7.88.6 Glycerol 6.45 Glycerol trigilyceride Hexokinase (EC.2.7.1.1 ) Nấm men 104 ( D - glucose 8.0- 4.1 xlO"4 (D - 3- 6.2- Phodopseud Isocitrate dehydrogenase (EC 1.1.1.42 ) Tim lợn 60 4.7Triglyceride Cilucose , ímctose manose 3- 7.0 -7.5 ĩsocitrate 2.6 X o " ( isocitrate ) D.lactate Lactobacillu đehyđrogenase s leichmanii (EC.1JJ.28 ) L lactate dehydrogenase (Ec.LlJ.27 ) 8.09.0 1.0 xio-4 Tim lợn 68 hay 807 D.lactate 1.2 Pruvate 140 10'2 X xlO' 7.0 D.lactate Glutamic Oxaloacetic glutamic lxlO’5 1.5xl0’4 Pruvate 3.3 xlO'3 ( L - lactate ) l.lxlO’5 NADH ) Pseudomona 7.0 L - lactate Pymvatase pyruvate c ị tra te ADP 7.0- Lipase Luciíerese Vi khuan (Alkanai Luciferase Photobacteri um fischeri 80 4.8xl0’7 6.8 Photimus NADH 6.2- 7.0- 1.7xl0’5 (NADH) 1.6 xio-4 Phospholipase D (EC.3.1.4.4) Streptomyce 5.7 8.0 1.43xl0’3 (phosphati dylcholine ) 5.1 Triglyceride az _ Pyruvate oxidase (EC.l.2.3.3 ) pediococcus 150 sp Bacillus Pyruvate kinase (EC.2.7.1.40) Cơ thỏ 1.7xl0"3 ( pymvate) 5x10‘4 ( phosphate) 4.0 6.5 7.5 ADP glutamic oxaloaaxeti c va 2xl0’2 237 7.0 7.0 xlO' (phosphoenol) 5.98 Pseudomona 174 4xl0'3 ADP, IDP 7.8 Creatine kinase, phosphoenol pyruvate l.OxlO"3 Sarcosine oxidase (EC.1.5.3.1) Pyruvate 8.0 Sarcosine , creatine sp (sarcosine) Sorbitol Dahydrogenase (L-iditol Succinyl-CoA Gan cừu 115 Tim lợn 75 Synthetase Thrombin (EC.3.4.21.5) Plasma bò 39([...]... sử dụng urase để xác định urea Phản15 ứng xảy làm ra như sản xuất trở nên cạnh tranh hơn có thể sản xuất 16 tấn Sirô nghịch đảo bằng cách sử Nấm men hạt.207 9,3 Aldehyde Acetaldehy -6 dụng 1 lít enzym Urea + H20 — đehdrogenase ( EC 1.2.1.5 ) > 2NH3 + C02 de , ethanol III.MỘT SỐ ỨNG DỤNG TIÊU BIÊU TRONG CHUAN ĐOÁN BỆNH : 100 Amyloglucosida.se ( Penicllin 1.8 X 10’3 (D -alanine) III 1 ứng dụng của enzym. .. Và Kỹ Thuật Hà Nội Mổ Đầu Chương I I Kháỉ Niệm Enzym II Chất xúc tác sinh học III Nguôn thu nhận Enzym Chương II I .ứng dụng của Enzym trong Phân tích y học 1.1 điện cực Ưrea có mang enzym côT định 1.2 phân tích Glucose tự động và Lactate II 1 Xác định carbohydrate 11.2 Xác định acid hữu cơ 11.3 Xác định alcohol 11.4 Xác dịnh các thành phần... định: 5,65,0- hợp với các ứng Sự phát triển của enzym Raffinase Galactosidase) phù dụng thương mại là một thành công trong lĩnh vực công nghệ enzym Bothropsatro Batroxobin (Serineproteinase , 7.4- Chủng sinh vật có khả năng sản xuất a - Galactosidase: là chủng nấm mốc Mortierella vinacea var: Raffinoseutilizer, có thể đáp ứng được các yêu cầu này Chủng nấm mốc này được nuôi cấy trong những dạng hạt, thu... khô và sử dụng tiực tiếp như một Chế phẩm này được 7 X 10 '5 loại enzym khuấy trộn với nước chiết củ cải đường trong một Reactor có cánh khuấy theo từng mẻ Khi quá trình loại bỏ Raffinase hoàn tất, ngừng khuấy và bơm nước chiết củ cải đường ra khỏi các hệ enzym lắng ở đáy enzym bị mất đi sẽ được bù thêm vào để tiếp Nocardiaeryt tục tiến hành phản ứng với mẻ ở điều kiện Bazơ trong giai đoạn đầu của quá... định amonỉac Đây là chất chứa nitrogen đơn giản nhất Người ta sử dụng enzyme glutamate dehydrogenase để xác định amoniac Phản ứng xảy ra như sau : «-oxoglutarate + NADH + H+ + NH4 > L_ glutamate + NAD+ + H20 5 Xác định nitrate Lần đầu tiên sử dụng enzyme để xác định nitrate Enzyme được sử dụng để xác định nitrate là nitrate reductate Phản ứng xảy ra như sau : Nitrate-reductase v + Nitrate + NADPH + H... bằng enzyme được bắt đầu từ năm 1983 enzyme được ứng dụng để xác định sulfite là sulíite oxidase Phản ứng xảy ra như sau : Lecithin + H20 SO3'2 + 02 + H20 suỉfìte —oxỉdase v > ' SO4'2 + H2O2 1.2diglyceride + phosphorylcholine Trọng lượng Điểm Y>\joÁb\i«ụuCs Phosphorylcholine + H20 choline + Pj choline-kinase v bằng động vật Adenyiate Kinese thủy ( Cơ giải myokinase ) acid (■=> cô" định) 21 sử dụng enzym. .. + ADP Khi sử dụng ịnh enzym sẽ tránh được những vân đề mà phương pháp acid thường S.Xác urea gặp phảiNấm đó men là màu đậm, hiệu suất đổi tương đôi 141 nồng độ muôi 5.4-chuyển Alcohol đehdrogenase Ethanol 1,3 Xvà lo'2tro cao,9,0 ( EC.1.1.1.1 )thấp Nếu Invertase tự do có thể được sử dụng (thời gian phản ứng khoảng 1 ngày) thì ( ethanol) việc sử dụngNgười enzym cô" định (thời gian phản ứng khoảng ngày)... Acid Malic có nhiều trong nho , trong rau , quả khác Người ta xác định Malic acid bằng malate dehydrogenase và NAD+ , phản ứng xảy ra như sau : 12 Acid Pyruvic Pyruvic acid là một acid cơ bản trong chu trình chuyển hóa ở mọi cơ thể Acid Succinic cũng là một acid quan trọng trong chu trình tricarboxylic acid Người ta xác định succinic acid bằng enzym succinyl -CoA-synthetase Phản ứng xảy ra như sau :... 9 Acid 11 AcidLactic Oxalic Acid Oxalic Acid Lactic , đóng được vai tròtạo quan ra nhiều trọngtrong trongquá hấptrình thụ calcium lên men.ở Người cơ thể ta người xác định lactic acid Người ta sửbằng dụnglactate enzyme dehydrogenase oxalate dehydrogenase Phản ứng xảy để xác ra như địnhsau oxalic : acid Phản ứng xảy ra như sau : L-ìactate-dehydrogenase L -lactate + NAD+ + oxalate-dehvdrogenase v ' Pyruvate... rất lớn trong sinh lí người và động vật Người ta xác định cholesterol bằng enzyme cholesterol oxidase và catalase Phản ứng xảy ra như sau : choìesterol-oxidase sau : esterase- va-l ipase Triglyceride + 3H20 glycerol + 3 acid béo 3 Xác định acetaldehyde Đây là chất taoi mùi cho bia và yauort và các loại nước giải khát Người ta xác định acetaldehyde bằng enzyme acetaìdehyde dehydrogenase Phản ứng xảy ... PHAM Giữa kỷ 19 , nhà khoa học sử dụng Enzyme phân tích Tuy nhiên , sử dụng Enzyme phân tích thực phẩm áp dụng khoảng 20-25năm trước ĩĩ.l xác định carbohydrate Trong thực phẩm , carbohydrate chiếm... Niệm Enzym II Chất xúc tác sinh học III Nguôn thu nhận Enzym Chương II I .ứng dụng Enzym Phân tích y học 1.1 điện cực Ưrea có mang enzym côT định 1.2 phân tích Glucose... thường sử dụng Enzyme có hoạt tính riêng lớn 250ƯI/mg với chất 4-nitrophenyl-^-D-galactosidase 37°c Hoạt tính ^-galactosidase đo máy quang điện với 4- II ỨNG DỤNG ENZYME TRONG PHÂN TÍCH THựC