Virus dại: Rabies virus Virus dại: Rabies virus Bởi: Nguyễn Bá Tiếp Đặc điểm rabies virus Virus dại phân loại virus Virus dại (Rabies virus) thuộc giống Lyssavirus, họ Rhabdoviridae (họ có Ephemerovirus Vesiculovirus) Ngoài virus dại, Lyssavirus có Lagos bat, Mokola virus, Duvenhage virus, European bat virus (EBV1), EBV2 Australian bat virus (ABV) Virus dại thuộc nhóm RNA virus dễ phân biệt với virus họ có hình viên đạn quan sát kính hiển vi điện tử Virion hình viên đạn Các phần cấu tạo: lõi virus (ribonucleoprotein), matrix protein, lớp áo (envolop) với "gai" bề mặt glycoprotein tạo thành Cấu tạo virus: Cũng virus khác thuộc họ Rhabdoviridae, rabies virus có kích thước xấp xỉ 180 x 75nm bao gồm hai cấu phần lõi virus (virus core) có cấu trúc ribonucleoprotein xoắn (RNP) lớp vỏ bao (virus envelop) Ribonuceoprotein: bao gồm RNA mang gene virus phần nucleoprotein (N protein) có tác dụng gói RNA 1/8 Virus dại: Rabies virus Sơ đồ cắt ngang virus với phần cấu tạo tương ứng Bộ gene virus (khoảng 12kb) mang leader- sequence (trình tự để trắng hay trình tự; trình tự mở đầu) có kích thước khoảng 50 nucleotide sau gene mã hóa cho loại protein Bộ gene virus dại (12kilobase) với đoạn trình "trắng" đầu 3', gene mã hóa protein N, P, M, G L với kích thước tương ứng Lớp vỏ: Hai loại phosphoprotein (P protein) polymerase (L protein) liên kết với RNP Matrix protein (M protein) bao phần lõi, liên kết với RNP lớp vỏ virus có tác dụng quan trọng trình lắp ráp tạo virion Glycoprotein (G protein) tạo thành khoảng 400 "gai" có kích thước khoảng 10 nm bề mặt virus Quá trình xâm nhập nhân lên Glycoprotein với cấu trúc "gai" bề mặt đóng vai trò quan trọng trình tiếp cận tương tác với tế bào chủ Sau gắn với bề mặt tế bào, virus xâm nhập nhờ "bọng" hình thành từ lớp màng tế bào chủ bao bọc lấy virus để đưa virus vào tế bào chất (pinocytosis) Lớp màng bao virus hợp với màng bào quan dẫn đến trình giải phóng lõi virus nguyên sinh chất tế bào (quá trình cởi áo virus) Sau giải phóng, RNA virus bắt đầu trình tổng hợp mRNA (bước khởi đầu cho trình nhân lên tế bào chủ) 2/8 Virus dại: Rabies virus Polymerase virus tiến hành mã phần leader sequence mRNA loại protein Quá trình giải mã để tổng hợp protein virus tiến hành ribosome tế bào chủ (các glycoproteiin hoàn thiện ty thể mạng lưới golgi nội bào) Tỷ lệ đoạn trình tự lãnh đạo (leader strand) protein N "công tắc" điều khiển trình nhân lên virus Khi "công tắc" bật, gene virus bắt đầu mã (bước khởi đầu tạo toàn gene, "stopcodon" "nonstop-codon" bỏ qua) Polymerase virus tác động từ ví trí đơn đầu 3' bắt đầu cho trình tổng hợp mạch dương Các mạch dương trở thành khuôn cho trình tổng hợp toàn bộ gene Trong trình lắp ráp, phức hợp N-P-L gói lấy RNA virus hình thành "lõi" virus protein M (matrix protein) hình thành lớp bao xung quanh lõi Tiếp theo, cCấu trúc M-RNP kết hợp với glycoprotein tạo virion hoàn chỉnh Các virion thoát khỏi màng tế bào chủ (đặc biệt khả thoát khỏi màng tế bào thần kinh thuộc hệ thần kinh trung ương (central nervous system; CNS) Trong tuyến nước bọt (salivary glands), virion thoát khỏi màng tế bào vào túi tuyến (acinar lumen) Virus có mặt tuyến nước bọt động vật làm tăng nguy lây nhiễm vật trạng thái kích thích cắn vật khác người Virus dại có khả phát triển nhiều hệ thống tế bào nuôi cấy phòng thí nghiệm, tế bào động vật máu nóng (warm blooded animals) mà tế bào động vật biến nhiệt có xương sống (poikilothermic vertbrate) Virus phát triển hệ thống tế bào lưỡng bội người dùng để sản xuất vaccine Virus nuôi cấy thích nghi phôi gia cầm Dơi động vật gặm nhấm cho vật chủ tự nhiên virus dại EBV1 EBV2 phân lập từ dơi châu Âu Virus Duvenhage EBV2 có liên hệ mật thiết với quý trình lây nhiễm người, gây chết với biểu giống bệnh dại (rabies-like illness) Các type huyết thanh: Serotype 1: prototype rabies virus Serotype 2: Logas bat Serotype 3: Mokola Serotype 4: Duvenhage Serotype 5: EBL-1 (European bat lyssavirus) Serotype 6: EBL-2 3/8 Virus dại: Rabies virus Dịch tễ Bệnh dại bệnh chung cho động vật người (zoonosis) Các loài mắc bệnh châu lục khác nhau: Châu Âu: Cáo dơi Trung Đông: Sói, chó Châu Á: Chó Châu Phi: Chó, cầy mangut, linh dương Bắc Mỹ: Cáo, chồn, gấu trúc, dơi ăn sâu bọ Nam Mỹ: Chó, dơi Càng ngày có nhiều chứng cho thấy vai trò quan trọng dơi nguồn bệnh nhiều vùng khác giới Trường hợp người mắc bệnh phát sau bị dơi cắn Cho đến nay, thử nghiệm gây nhiễm virus dại động vật có vú dương tính Chó, mèo đại gia súc nhũng động vật đặc biệt mẫn cảm Chồn, dơi, cáo, sóc, gấu trúc, cầy mangut vật chủ virus tự nhiên Sinh bệnh học Con đường lây nhiễm virus dại phổ biến động vật mang virus cắn người hay vật khác vết thương tiếp xúc với nước bọt vật mắc bệnh Một sô đường khác sảy lây qua niêm mạc miệng, kết mạc, hậu môn , quan sinh dục Động vật thí nghiệm bị nhiễm virus đưa vào hộp nuôi dạng phun sương Người bị nhiễm vào hang dơi bị có virus dại Một số trường hợp đặc biệt phát người cấy gép giác mạc từ người khác bị nhiễm virus Khi xâm nhiễm tế bào trung ương thần kinh, virus thường gây chết vật chủ Sau xâm nhiễm, virus nhân lên mô liên kết vị trí xâm nhập sau vào hệ thần kinh ngoại biên thông qua sinap thần kinh-cơ tới tế bào hệ thần kinh trung ương Tuy vậy, tất tế bào thần kinh nhiễm virus biểu cấu truc bất thường Cơ chế làm biến đổi biểu thần kinh múc độ tế bào phân tử nghiên cứu 4/8 Virus dại: Rabies virus Biểu lâm sàng Giai đoạn ủ bệnh thay đổi lớn, từ vài ngày vài năm phụ thuộc vào yếu tố: - Số lượng virus nhiễm vào vật chủ; - Tình trạng vết thương - Vị trí vết thương (vết thương gần não trình phát bệnh nhanh) Bệnh giai đoạn tiền phát đặc thù Các biểu thường thấy sốt, khó chịu, chán ăn bỏ ăn, viêm họng, đau cơ, đau đầu, dễ bị kích thích, rối loạn cảm giác xung quanh vết thương Căn vào biểu hiện, phân thành hai thể: (1) thể kích thích hay "hung dữ" với biểu trạng thái kích thích, co giật, sợ nước (2) thể ức chế hay "lầm lì" dạng "câm" với biểu tê liệt Thể thường có thời gian sống sau phát bệnh dài Các biến thường gặp rối loạn hoạt động hệ tim mạch, trung ương thần kinh, rối loạn hô hấp, tăng áp lực xoang sọ dẫn đến co giật, rối loạn cảm giác nhiệt độ, rối loạn thần kinh tự chủ Các biêu bệnh dễ gây nhầm lẫn với số bệnh uốn ván (tetanus), viêm tủy (poliomyelitis), hội chứng Guillain-Bare, viêm não virus , ngộ độc Chẩn đoán bệnh Chẩn đoán phòng thí nghiệm: Bao gồm phương pháp: - Phương pháp mô bệnh học (histopathology) - Nuôi cấy mô phân lập virus (tisue culture and virus íolation) - Huyết học (serology) - Phát kháng nguyên virus (viral antigen detection) Mỗi phương pháp có ưu điểm riêng • Phương pháp mô bệnh học tìm thể Thể Negri (là biểu bệnh lý đặc thù virus dại 5/8 Virus dại: Rabies virus Thể Negri tế bào thần kinh nhiễm virus (mũi tên chỉ) Tuy vậy, phát khoảng 70% trường hợp nhiễm virus + Phương pháp nuôi cấy virus: Một số dòng tế bào dùng nuôi cấy phân lập virus bao gồm WI-38 (nguyên bào sợi từ phổi), BHK-21 (tế bào thận chuột), tế bào từ phôi gia cầm (CER) Tìm bệnh tích tế bào (cytopathic effect): Bao gồm thay đổi hình thái (altered shape), bong tách khỏi đĩa cấy (detachted from substrate), làm tan tế bào (lysis), khả gắn kết "lai" với màng tế bào (membrane fusion), thay đổi tính thấm màng (membrane permeability), tạo thể vùi (inclusion body) gây chết (apoptosis) Xác định yếu tố khởi (initiation factor; IF) sử dụng để phát diện kháng nguyên virus môi trường nuôi cấy Phương pháp thường sử dụng chẩn đoán virus dại tiêm dịch mô tuyến nước bọt mô từ não vào não chuột Nếu mô chứa virus dại, chuột biểu triệu chứng liệt chết khoảng 28 ngày sau gây nhiễm Kiểm tra não tìm virus phương pháp miễn dịch huỳnh quang + Chẩn đoán huyết học: Kháng thể virus dại xuất chậm sau thể bị nhiễm thường phát bắt đầu có biểu lâm sàng: Phản ứng trung hòa chuột (mouse infection neutralization test: MNT) phản ứng ức chế điểm huỳng quang tức (rapid fluorescent focus inhibition test: RFFIT) dùng thay phương pháp miễn dịch sử dụng enzyme 6/8 Virus dại: Rabies virus (enzyme immunoassays: EIAs) Chẩn đoán huyết học cho có hiệu chẩn đoán bệnh dại + Phát nhanh kháng nguyên virus: Trong năm gần đây, việc phát cách xác định yếu tố khởi đầu (IF) sử dụng rộng rãi Các mô cần chẩn đoán (thường màng giác mạc hay da cổ) ủ với kháng thể đánh dấu huỳnh quang sau kiểm tra kính hiển vi huỳnh quang tìm thể vùi tế bào chất tế bào thần kinh cảm giác mô Phòng chống bệnh + Đối với người có nguy nhiễm virus cao bác sỹ thú y, nhân viên phòng thí nghiệm, công nhân chăn nuôi, nhà nghiên cứu động vật hoang dã v.v , việc tạo miễn dịch chủ động cách tiêm vaccine quan trọng Miễn dich thiết lập sau liều tiêm Kháng thể xác định gần 100% trường hợp tiêm Tiêm nhắc lại đặn 1-3 năm lần cho người tiếp tục làm việc với đối tượng có nguy Việc xử lý vết thương cần ý (kế người tiêm vaccine) + Khi bị gia súc (đặc biệt chó mèo vùng có dịch) cắn, cần phải theo dõi vật 10 ngày Nếu có biểu nghi bị nhiễm virus dại, cần phải giết vật kiểm tra phòng thí nghiệm + Điều trị vết thương: Loại bỏ tổ chức dập nát, rửa vết thương dung dịch sát trùng, không nên khâu kín vết thương Thực nghiệm cho thấy hạn chế nhiễm virus vết thương xử lý tốt + Tạo miễn dịch bị động: Human rabies immunoglobulin tiêm da xung quanh vết thương tạo khả phòng virus thời gian ngắn Việc tạo miễn dịch chủ động kết hợp với phương pháp có hiệu cao việc dùng đơn tạo miễn dịch chủ động Equine rabies immunoglobulin (dùng tế bào ngựa) sản xuất nhiều nước rẻ Human rabies immunoglobulin (dung tế bào người) + Tạo miễn dịch chủ động: liều vaccine thường đưa vào thể cách tiêm vào vùng delta (vaccine từ nuôi cấy virus tế bào lưỡng bội người ưa thích hơn)!!!!! 7/8 Virus dại: Rabies virus + Tiêm vaccine phòng bệnh cho chó, mèo việc theo dõi phát sớm biểu bệnh quan trọng phòng bệnh dại + Các loại vaccine phòng bệnh dại: Một số loại vaccine nhược độc phòng dại dùng cho động vật không thích hợp cho người Vaccine phòng dại cho người vaccine bất hoạt: - Vaccine tạo mô thần kinh nhiễm virus - Vaccine tạo phôi vịt - Vaccine tạo tế bào lưỡng bội người 8/8 ... phóng lõi virus nguyên sinh chất tế bào (quá trình cởi áo virus) Sau giải phóng, RNA virus bắt đầu trình tổng hợp mRNA (bước khởi đầu cho trình nhân lên tế bào chủ) 2/8 Virus dại: Rabies virus Polymerase.. .Virus dại: Rabies virus Sơ đồ cắt ngang virus với phần cấu tạo tương ứng Bộ gene virus (khoảng 12kb) mang leader- sequence (trình tự để... kháng nguyên virus (viral antigen detection) Mỗi phương pháp có ưu điểm riêng • Phương pháp mô bệnh học tìm thể Thể Negri (là biểu bệnh lý đặc thù virus dại 5/8 Virus dại: Rabies virus Thể Negri