Nghiên cứu tác dụng cầm máu của bẹ cây móc trên động vật thực nghiệm

Tóm tất Tác dụng cầm máu của bẹ cây móc được thực hiện thông qua xác định thời gian chảy máu đuôi chuột, sổ lượng tiểu cầu và một số chỉ sô đông máu cơ bản... Đánh giá tác dụng của bẹ mó

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẦM MÁU CỦA BẸ CÂY MÓC TRÊN

ĐỘNG VẬT THựC NGHIỆM

Đâu Thi Tố Nga‘, Phạm Thị Mai Hưomg^

HDKH: PGS.TS Đào Thị Vui^

’ Sinh viên A4K64 - Trường Đại học Dược Hà Nội

^ Sinh viên NỈK63 - Trường Đại học Dược Hà Nội

^ Bộ môn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội

Từ khóa: bẹ móc, Caryota urens L., cầm máu, chảy máu.

Tóm tất

Tác dụng cầm máu của bẹ cây móc được thực hiện thông qua xác định thời gian chảy máu đuôi chuột, sổ lượng tiểu cầu và một số chỉ sô đông máu cơ bản Kết quả: trên chuột bình thường, thời gian chảy máu ở lô dùng bẹ móc 3 g/kg giảm 37,07% so với lô chứng (p<0,05), lô 6 g/kg bẹ móc giảm 59,09% so với lô chứng (p<0,05), lô 3g/kg và 6g/kg bẹ móc giảm tương đương lô carbazochrom liều 24 mg/kg (p>0,05), bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng đến sổ lượng tiểu cầu và một sổ chỉ sổ đông máu cơ bản Trên các mô hình gây rôi loạn đông máu, thời gian chảy máu của lô dùng asprin - bẹ móc giảm 31,04% so với

lô aspirin (p>0,05), của lô acenocoumarol - bẹ móc giảm 41,54% so với ỉô acenocoumarol (p<0,05), của lô heparin - bẹ móc giảm 38,26% so với lô heparin (p<0,05), bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng đến sổ lượng tiểu cầu và môt sổ chỉ số đông máu cơ bản trên chuột sử dụng aspirin, acenocoumarol, heparin.

Đặt vấn đề

Chảy máu là hiện tượng hay gặp và có thể xảy ra ở mọi cơ quan trong cơ thể, tùy mức độ chảy máu mà gây hậu quả nặng nhẹ, thậm chí ảnh hưởng đến tính mạng Tuy nhiên, thuốc điều trị các bệnh chảy máu còn ít và còn nhiều tác dụng không muốn, đồng thời là những nội dung nghiên cứu còn ít được quan tâm gần đây Trong khi đó nền y học cổ truyền Việt Nam tò lâu đã biết dùng nhiều dược liệu để chữa các bệnh chảy máu như: hòe hoa, trắc bách diệp, tông lư, cỏ nhọ nồi Vị thuốc bẹ móc (tông lư) đã được dân gian ta dùng để chữa các bệnh chảy máu như: đái ra máu, lỵ ra máu, bạch đới, rong kinh, rong huyết, ho ra máu, chảy máu chân răng cho kết quả tốt [1], Tuy nhiên cho tới nay vẫn chưa có một nghiên cứu nào đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên thực nghiệm cũng như trên lâm sàng Để chứng minh tác dụng của bẹ móc và hướng tới tạo ra

sản phẩm thuốc cầm máu, chúng tôi thực hiện đề tài "Nghiên cứu tác dụng cầm

máu của bẹ cây móc trên động vật thực nghiệm" với các mục tiêu chính: (1)

Đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên chuột bình thường; (2) Đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên các mô hình chuột bị rối loạn đông máu

Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu

Động vật thí nghiệm

Chuột nhắt trắng, 2 giống, trọng lượng 22 - 25 g khỏe mạnh

Nguyên liệu

Bẹ cây móc {Caryota urens L., Arecaceae) được rửa sạch, thái nhỏ, phơi

se và sấy ở 60 - 70°c, tiến hành điều chế cao lỏng theo phương pháp ghi trong Dược Điển Việt Nam III và cô đến cao 6:1 để bảo quản Khi sử dụng, cao được pha loãng với nước cất đến tỉ lệ thích hợp để cho chuột uống, liều dùng tính theo

số gam dược liệu khô fren kilogam cân nặng chuột

Phương pháp nghiên cứu

Đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên chuột bình thường

- Tác dụng trên thời gian chảy máu: thí nghiệm được tiến hành trên 5 lô chuột:

Lô chứng uống nước, lô carbazochrom uống carbazochrom liều 24 mg/kg và các

lô bẹ móc được uống cao bẹ móc 3 mức liều; 1,5 g/kg; 3 g/kg; 6 g/kg, trong 5 ngày liên tục Đến ngày thứ 5 sau khi uống ửiuốc 2 giờ thì xác định thời gian chảy máu

- Ảnh hưỏng của bẹ móc đến số lượng tiểu cầu và một số chỉ số đông máu cơ bản; tiến hành trên 2 lô; lô chứng uống nước và lô thử uống cao bẹ móc 5 ngày, xác thời gian đông máu, số lượng tiểu cầu và các chỉ số PT, APTT, fibrinogen

Đánh giá tác dụng cầm máu của bẹ móc trên các mô hình gây rối loạn đông máu.

- Trên mô hình gây rối loạn đông máu bằng aspirin; Chuột được chia thành 3 lô;

lô chứng nước uống nước, lô aspirin uống aspirin 26 mg/kg, lô thử uống aspirin

26 mg/kg và cao bẹ móc 6 g/kg Dùng liên tục trong 5 ngày Đến này thứ 5 sau khi cho uống thuốc 2 giờ thì xác định thời gian chảy máu Sau đó các lô chuột trên tiếp tục được nuôi và uống thuốc trong 2 ngày, lấy máu xác định số lượng tiểu cầu và các chỉ số đông máu

- Trên mô hình gây rối loạn đông máu bằng acenocoumarol; Chuột được chia thành 3 lô; lô chứng nước uống nước, lô acenocoumarol uống acenocoumarol 2 mg/kg, lô thử uống acenocoumarol 2 mg/kg và cao bẹ 6 g/kg Cách thức tiến hành và thông số nghiên cứu tương tự như mô hình aspirin ở trên

- Trên mô hình gây rối loạn đông máu bằng heparin: Chuột được chia thành 3 lô:

lô chứng nước uống nước, lô heparin tiêm dưới da (TDD) heparin 1200 Iư/kg X

2 lần/ngày, lô thử TDD heparin 1200 lU/kg X 2 lần/ngày và uống cao bẹ móc 6 g/kg Cách thức tiến hành và thông số nghiên cứu tương tự như mô hình aspirin ở ừên

Cách xác định thời gian chảy máu: tiến hành cắt đuôi chuột 2 - 4 mm kể từ chóp đuôi, nhúng ngay đuôi chuột vào cốc nước 37°c, tính thời gian máu chảy từ lúc có giọt máu đầu tiên đến khi máu ngừng chảy [4] Cách xác định số lượng tiểu cầu và các chỉ số đông máu trên máy xét nghiệm đông máu bán tự động Kết quả

Tác dụng của bẹ móc trên chuột bình thường

Tác dụng trên thời gian chảy máu

Chúng tôi tiến hành kliảo sát tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu

ở các mức liều được trình bày trong bảng 2.1

Bảng 2.1 Tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu của chuột bình thường

(pi); so với lô chứng, (pa): so với lô carbazochrom Bảng 2.1 cho thấy, trong các mức liều được khảo sát, thời gian chảy máu của lô chuột được dùng cao bẹ móc liều 3 g/kg giảm 37,67%, liều 6 g/kg giảm 59,09%

có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p<0,05) và tương đương so với lô carbazochrom liều 24 mg/kg (p>0,05)

Tác dụng trên tiểu cầu và các chỉ sổ đông máu

Để sơ bộ đánh giá ảnh hưởng của bẹ móc lên tiểu cầu và đông máu, đề tài tiếp tục thí nghiệm xác định số lưọmg tiểu cầu và một số chỉ số đông máu cơ bản, kết quả được trình bày tại bảng 2.2

Bảng 2.2 Ảnh hưởng của cao bẹ móc đến số lưạng tiểu cầu và 1 số chỉ số đông

máu cơ bản trên chuột bình thường

máu (s)

(g/1)

Số lưọng tiểu cầu (lO-'Wl)

Bẹ móc

6g/kg

(p>0,05)

8,63±0,24 (p>0,05)

3,1±0,3 (p>0,05)

3,78±0,26 (p>0,05)

844±59,47 (p>0,05)

thời gian đông máu, PT, APTT, fibrinogen trên chuột bình thường (p>0,05)

Đánh giá tác dụng của bẹ móc trên các mô hình gây rối loạn đông máu

Tác dụng của hẹ móc trên mô hình gây roi loạn đông máu bằng aspirin

Aspừin là thuốc ức chế kết tập tiểu cầu, ngăn cản quá trình cầm máu ở giai đoạn đầu tạo đinh cầm máu [2], gây kéo dài thời gian chảy máu Đánh giá tác

dụng của bẹ móc thông qua xác định thời gian chảy máu, thời gian đông máu và

số lượng tiểu cầu Ket quả được trình bày trong bảng 2.3 và 2.4

Bảng 2.3 Tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu của mô hình aspirin

máu (s)

% giảm so vói lô aspirin

P 2 I : so với chứng, P ì 2 : so với aspirin

Kết quả bảng 2.3 cho thấy aspirin liều 26 mg/kg gây kéo dài thời gian chảy máu

có ý nghĩa thống kê so với lô chứng nước, thời gian chảy máu của lô được dùng thêm cao bẹ móc 6 g/kg giảm 31,04% so với lô aspirin, tuy nhiên sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p>0,05)

Bảng 2.4 Ảnh hưởng của cao bẹ móc đến số lượng tiểu cầu và 1 số chỉ số đông

máu cơ bản trên mô hình aspirin

P2, i <0,05

614,8 ± 44,2

P2,I > 0,05

P3,2>0,05

675,7 ± 54,6

P3.2>0,05 P21: so với chứng, P3 2: so với aspirin

Kết quả ở bảng 2.4 cho thấy aspirin liều 26 mg/kg kéo dài thòd gian đông máu có

ý nghĩa so với lô chứng (p<0,05), lô uống aspirin kết họp với cao bẹ móc liều 6 g/kg không ảnh hưcmg đến số lượng tiểu cầu và thời gian đông máu (p>0,05)

Tác dụng của bẹ móc trên mô hình gây roi loạn đông máu bằng acenocoumarol

Acenocoumarol ức chế sự hoạt hóa các yếu tố đông máu nên kéo dài thời gian chảy máu và đông máu [2], Kết quả tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu và đông máu trên mô hình acenocoumarol được trình bày ở bảng 2.5 và 2.6 Bảng 2.5 Tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu của mô hình

acenocoumarol

(s)

% g i ả m s o v ó i lô

acenocoumarol

p

bẹ móc

P2,1: so với chứng, P3 2 : so với acenocoiưnarol

Từ bảng 2.5 thấy acenocoumarol liều 2 mg/kg gây kéo dài thời gian chảy máu có

ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p<0,05) Thòi gian chảy máu của lô được dùng acenocoumarol kết họfp thêm cao bẹ móc 6 g/kg giảm 41,54% so với lô acenocoumarol có ý nghĩa (p<0,05)

Bảng 2.6 Ảnh hưởng cao bẹ móc đến một số chỉ số đông máu cơ bản trên mô

hình acenocoumarol

P 2 ,i< 0 , 0 5 P 2 ,i< 0 , 0 5 P 2 ,i< 0 , 0 5

Từ bảng 2.6 cho thấy: Acenocoumarol 2 mg/kg làm kéo dài thời gian đông máu, các thông số PT và APTT có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p>0,05) Lô uống acenocoumarol kết họp với cao bẹ móc liều 6 g/kg không ảnh hưởng đến các chỉ

số thời gian đông máu, PT, APTT (p>0,05)

Tác dụng của bẹ móc trên mô hĩnh gây roi loạn đông máu bằng heparin

Heparin làm bất hoạt thrombin và một số yếu tố đông máu do đó ức chế quá trình đông máu [2], kéo dài thời gian chảy máu Đe tài thực hiện đánh giá tác dụng của

bẹ móc trên mô hình heparin, các kết quả như bảng 2.7 và 2,8

Bảng 2.7 Tác dụng của bẹ móc trên thời gian chảy máu của mô hình heparin

máu (s)

% giảm so vói lô heparin

p

Bảng 2.7 cho thấy heparin liều TDD 1200 lU/kg X 2 lần/ngày kéo dài thời gian chảy máu có ý nghĩa so với lô chứng (p<0,05), thời gian chảy máu của lô được dùng thêm cao bẹ móc 6 g/kg giảm 38,26% so với lô heparin có ý nghĩa

(p<0,05).

Bảng 2.8 Ảnh hưỏfng của bẹ móc đến một số chỉ số đông máu cơ bản mô hìiửi heparin

P 2 ,i< 0 , 0 5 P2, i <0,05

P 3 , 2 > 0 , 0 5 P 3 , 2 > 0 , 0 5

Bảng 2.8 cho thây heparin liêu TDD 1200 lU/kg X 2 lân/ngày kéo dài thời gian đông máu, PT có ý nghĩa so với lô chứng (p<0,05), lô TDD heparin kết họp uống cao bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng đến thời gian đông máu, PT (p>0,05)

Bàn luận

Quá trình cầm máu diễn ra qua năm giai đoạn: co mạch, hình thành nút tiểu cầu, đông máu, co cục máu đông và tan cục máu đông Co mạch, hình thành nút tiểu cầu và đông máu là 3 giai đoạn để hình thành cục máu đông bịt kín vết thương, do đó là 3 giai đoạn quan trọng nhất của cầm máu Thời gian chảy máu

là thông số chung nhất đánh giá quá trình cầm máu, bao gồm cả thành mạch, tiểu cầu và đông máu Thời gian chảy máu đuôi chuột là phưcmg pháp đơn giản được

sử dụng nhiều ừong các nghiên cứu cầm máu do đó chúng tôi đã tiến hành thí nghiệm xác định thời gian chảy máu đuôi chuột cho nghiên cứu [4]

Trên chuột bình thường, thời gian chảy máu ỉô bẹ móc 3 g/kg và 6 g/kg giảm có ý nghĩa so với chứng và tưofng đương với lô carbazochrom liều 24 mg/kg, cho thấy cao bẹ móc có tác dụng cầm máu ở chuột bình thường với liều 3 g/kg và 6 g/kg Điều này chứng minh tác dụng cầm máu của bẹ móc mà trong dân gian vẫn dùng Neu xét về tỉ lệ giảm thời gian chảy máu so với lô chứng thì

lô bẹ 6 g/kg giảm nhiều hơn (59,09%) so với lô bẹ 3 g/kg (37,67%) do đó trong các thí nghiệm tiếp theo chúng tôi chọn mức liều bẹ móc 6 g/kg để tiến hành Nhằm tìm hiểu tác dụng cầm máu của bẹ móc liệu có ảnh hưởng lên tiểu cầu và giai đoạn đông máu không, đề tài đã nghiên cứu ảnh hưởng của bẹ móc lên số lượng tiểu cầu và một số chỉ số đông máu: thời gian đông máu, PT, APTT, fibrinogen, kết quả cho thấy cao bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu và đông máu, điều này gợi mở cơ chế cầm máu của bẹ móc ít ảnh hưỏng lên sự đông máu và số lượng tiểu cầu Tuy nhiên, các kết quả đó thực hiện trên đối tượng bình thường, liệu khi các giai đoạn này bị ức chế, thuốc có tác động tới? Vậy nên trong các mô hình gây rối loạn đông máu chúng tôi cũng đã tiến hành các xét nghiệm tiểu cầu và các chỉ số đông máu

Sự chảy máu sẽ nghiêm trọng hon nếu sự cầm máu bị rối loạn, để huQfiig tới sản phẩm cầm máu cho các đối tượng này, đề tài đã tiến hành đánh giá tác dụng của cao bẹ móc trên các mô hình gây rối loạn cầm máu Tương ứng với các giai đoạn cầm máu sẽ có nhiều mô hình khác nhau Trong điều kiện hiện có, đề tài sử dụng mô hình gây rối loạn đông máu bằng aspirin, heparin, acenocoumarol

Trên mô hình aspirin: Các tiểu cầu ngưng tập để tạo thành đinh cầm máu

và tham gia 1 số giai đoạn của đông máu, aspirin là thuốc ức chế kết tập tiểu cầu nên ảnh hưởng đến giai đoạn tiểu cầu và đông máu.Thời gian chảy máu của lô

dùng kèm aspirin và bẹ móc 6 g/kg giảm không có ý nghĩa so với lô aspirin cho thấy bẹ móc 6 g/kg không có tác dụng cầm máu trên chuột bị ức chế kết tập tiểu cầu Để xem xét sự ảnh hưỏfng của bẹ móc đến tiểu cầu và đông máu khi bị ức chế bởi aspirin, đề tài tiến hành xác định số lưọfng tiểu cầu và thời gian đông máu

và nhận thấy bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưỏng đến các chỉ số này, điều này càng định hướng bẹ móc không ảnh hưởng lên số lượng tiểu cầu và đông máu

Trên mô hình acenocoumarol: Acenocoumarol là dẫn xuất dicoumarol kháng vitamin K nên ức chế sự chuyển hóa tại gan các tiền yếu tố đông máu II, VII, EX, X thành dạng hoạt hóa, do đó ức chế sự đông máu Kết quả thời gian chảy máu của lô dùng acenocoumarol kèm cao bẹ móc 6 g/kg giảm 41,54% có ý nghĩa so với lô acenocoumarol cho thấy cao bẹ móc 6 g/kg có tác dụng câm máu trên mô hình ức chế đông máu bằng acenocoumarol, như vậy bẹ móc 6 g/kg có khả năng cầm máu cho các đối tượng bị rối loạn đông máu như khi dùng acenocoumarol Đề tài cũng đã tiến hành nghiên cứu sự ảnh hưởng của cao bẹ móc đến sự đông máu trên các chỉ số thời gian đông máu, PT, APTT trên chuột

bị ức chế đông máu bằng acenocoumarol, kết quả bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng tới các chỉ số này lại càng làm rõ tác dụng cầm máu của bẹ móc không ảnh hưởng đến sự đông máu

Trên mô hình heparin: heparin tạo phức với antithrombin III (AT III) làm tăng cường tác dụng của AT III gấp nhiều lần nên làm mất hiệu lực của thrombin, đồng thời ức chế các yếu tố đông máu IX, X, XI, XII đã hoạt hóa do

đó có tác dụng chống đông Thời gian chảy máu của lô được dùng thêm bẹ móc 6 g/kg giảm 38,26% có ý nghĩa so với lô chỉ dùng heparin, vậy cao bẹ 6 g/kg có tác dụng cầm máu trên mô hình heparin, sẽ có khả năng cầm máu cho các đối tượng

bị ức chế đông máu như khi dùng heparin Đánh giá tác động của bẹ móc đến sự đông máu trên các chuột bị ức chế đông máu bằng heparin trên chỉ sổ thời gian đông máu và PT cho thấy cao bẹ 6 g/kg không ảnh hưởng đến các chỉ số này, càng chắc chắn về cơ chế cầm máu của bẹ móc không ảnh hưởng đến sự đông máu

Các kết quả qua các mô hình dần làm rõ cơ chế cầm máu của bẹ móc không ảnh hưỏng đến số lượng tiểu cầu và đông máu, đó sẽ là ưu điểm của bẹ móc khi cầm máu cho các đối tượng chảy máu có nguy cơ tăng đông như các bệnh nhân bị chảy máu khi điều trị thuốc chống đông cho các tình trạng tăng đông

Kết luận

Trên mô hình chuột bình thường: cao bẹ móc 3 g/kg và 6 g/kg làm giảm thời gian chảy máu có ý nghĩa so với lô chứng (p<0,05), giảm tương đương lô

carbazochrom liều 24 mg/kg (p>0,05), bẹ móc 6 g/kg không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu và các chỉ số đông máu: thời gian đông máu,PT, APTT, fibrinogen

Trên các mô hình gây rối loạn đông máu:

- Mô hình aspirin: cao bẹ móc 6 g/kg làm giảm thời gian chảy máu không có ý nghĩa thống kê so với lô aspirin (p>0,05), không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu

và thời gian đông máu

- Mô hình acenocoumarol; cao bẹ móc 6 g/kg làm giảm thời gian chảy máu có ý nghĩa thống kê so với lô acenocoumarol (p<0,05) và không ảnh hưởng đến thời gian đông máu, PT, APTT

- Mô hình heparin: cao bẹ móc 6 g/kg làm giảm thời gian chảy máu có ý nghĩa

so với lô heparin (p<0,05), không ảnh hưởng đến thời gian đông máu và PT Tài liệu tham khảo

1 Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuổc Việt Nam, NXB Y học, tr 752.

2 Bộ Y tế (2007), Dược lí, tập II, NXB Y học, tr 113-125

3 Nguyễn Anh Trí (2008), Đông máu và ứng dụng trong lâm sàng, NXB Y học,

tr 12-215

4 Gerhand H et al (2002), Drug discovery and evaluation-pharmacological assay, pp 1053-1092