Một vài phương pháp định lượng etoricoxib trong chế phẩm của nước ngoài đã được công bố nhưng việc áp dụng vào điều kiện kiểm nghiệm ở Việt Nam gặp rất nhiều khó khăn [1], [2], vỉ vậy ch
Trang 1Tạp chí NGHIÊN c ứ u D ư ợ c VÀ THÔNG TIN THUỐC S ô '2 năm 2010
XÂY DựNG VÀ THẨM ĐỊN H PHƯƠNG PHÁP HPLC ĐỊNH LƯỢNG ETO R IC O X IB
TRONG CHÊ PHẨM V IÊN NÉN
Vũ Đ ức LỢ i*, Đoàn Cao S ơ n **
* Trường Đại học Dược Hà Nội
* * Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương
Sum m ary
A Sim ple, selective, rapid, p recise and econom ical RP-HPLC m ethod has been developed fo r
estim ation o f etoricoxib in tablets The m ethod was carried out on column N ucteosil C18 (250 X 4
mm, 5 ụm ), with a m obile phase consisting o f M ethanol: w ater (adju sted to pH 3 ,0 with acetic acid)
(7 0 : 30 v/v) a t a flow rate o f 1 m l/ min D etection was carried out a t 234nm The developd m ethod
was validated in term s o f selectivity, accuracy, precision, linearity.
ĐẶT VẤN Đ Ê
Etoricoxib là thuốc thuộc nhóm Coxib, mới
được đưa vào sử dụng từ những năm 2000
Thuốc cũng đang được lưu hành ở khoảng 60
nước trên thế giới trong đó có Việt Nam Hiện
nay, hầu hết Dược điển của các nước như Anh,
Mỹ, Việt Nam chưa có chuyên luận về kiểm tra
chất lượng các chẽ phấm chứa etoricoxib Một
vài phương pháp định lượng etoricoxib trong chế
phẩm của nước ngoài đã được công bố nhưng
việc áp dụng vào điều kiện kiểm nghiệm ở Việt
Nam gặp rất nhiều khó khăn [1], [2], vỉ vậy
chúng tôi tiến hành nghiên cứu định lượng etori-
coxib trong chế phấm bằng phương pháp sắc ký
lỏng hiệu năng cao (HPLC) góp phần nâng cao
công tác kiểm tra bảo đảm chất lượng thuốc
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
CỨU
Nguyên vật liệu
- Chất chuẩn đối chiếu: etoricoxib hàm lượng
98,0% do Viện KNTTW cung cấp
- Mau thử: viên nén Etotab-60, viên nén bao
film chứa 60mg etoricoxib, nhà sản xuất Micro
Labs - Ấn Độ
- Methanol, acetonitril, acid acetic, nước cất 2
lần dùng cho HPLC
Thiết bị
- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao: DIONEX -
detector PDA
- Máy quang phổ UV-VIS Lambda EZ210
- Bình định mức, cốc có mỏ, pipet, đũa thủy
tinh, màng lọc 0,45|jm
Phương pháp nghiên cứu
- Dựa vào công thức cấu tạo, tính chất hóa lý của etoricoxib và bằng thực nghiệm để xây dựng, thẩm định phương pháp định lượng etoricoxib
- Xử lý kết quả bằng phương pháp tính toán thống kê có sự hỗ trợ của phần mềm Microsoft Excel
THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUÀ
1 Xây dựng phướng pháp định lượng etoricoxib bằng HPLC
- Qua tiến hành khảo sát: bước sóng cho hấp thụ cực đại, thành phần và tý lệ pha động, pH dung dịch đệm, tốc độ dòng, nồng độ làm việc chúng tôi đã xây dựng được chương trình sắc ký như sau: Cột sắc ký Nucleosil C18 ( 250x4 mm,5
ụm).
Detector UV: Ả = 234nm; pha động:
methanol: nước (điều chỉnh về pH 3,0 bằng acid acetic) (70 : 30 tt/tt); thể tích tiêm: 20 ụl; tốc độ dòng: l,0ml/phút; nồng độ làm việc 4 g/ml;
nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng thí nghiệm
- Dung dịch chuẩn: cân chính xác khoảng 20,0mg chất chuẩn etoricoxib cho vào bỉnh định mức dung tích 100,Oml, cho methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều Hút chính xác l,0ml dung dịch trên pha loãng với pha động vừa đủ 50,0ml, lắc đều được dung dịch etoricoxib có nồng độ 4|jg/
ml Lọc qua màng lọc 0,45|jm để tiêm sắc ký
- Dung dịch thử: cân xác định khối lượng trung bình của 20 viên chế phẩm, nghiền thành bột mịn Cân chính xác một lượng bột viên đã nghiền mịn tương ứng với khoảng 20,0mg
Trang 2Tạp chí NGHIÊN c ứ u D ư ợ c VÀ THỐNG TIN THUỐC S ô '2 năm 2010
etoricoxib rồi pha như pha dung dịch chuẩn
2 Thẩm định phưdng pháp định lượng
etoricoxib
2.1 Thử độ thích hợp của h ệ thống
Nguyên tắc: Tiến hành sắc ký lặp lại 5 lần
cùng một dung dịch chuẩn etoricoxib có nồng độ
khoảng 4ụg/ml theo chương trình đã chọn Độ
thích hợp của hệ thống HPLC được biểu thị qua
hệ số bất đối xứng, số đĩa lý thuyết, độ lệch chuẩn tương đối RSD (% ) của thời gian lưu và diện tích pic Kết quả khảo sát được trình bày ở bảng 1
Nhận xét: Kết quả khảo sát cho thấy giá trị RSD đều nhỏ hơn 2%, 0,9 <AF< 2 Chứng tỏ hệ thống HPLC mà chúng tôi sử dụng là phù hợp cho phép phân tích định tính và định lượng etori- coxib
STT
Bảng 1 Kết quả khảo sá t độ thích hợp của hệ thõng sắ c ký
Thdi gian lưu (phút) Diện tích pic (mAU.min) Hệ sô' bất đối xứng (AF)
2.2 Độ đặc hiệu
Đế chứng minh sự có mặt của chất khác hay
dung môi pha động không ảnh hưởng đến việc
định lượng etoricoxib Tiến hành sắc ký và ghi
sẳc ký đồ của dung dịch mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn cho kết quả ở các hình sau:
Hình 3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn Hình 4 Sắc ký đõ mẫu thử thêm chuẩn
Trang 3Tạp chí NGHIÊN c ứ u D ư ợ c VÀ THÔNG TIN THUỐC S ố 2 năm 2010
Nhận xét: sắc ký đồ mẫu trắng không xuất
hiện pic trong khoảng thời gian phân tích 10
phút Sắc ký đồ của mẫu chuẩn, mẫu thử có
chứa etoricoxib, mẫu thử có thêm chất chuẩn
etoricoxib đều cho 1 pic ở thời gian lưu tR =5,84
phút Điều này chứng tỏ pic trên sắc ký đồ là của
hoạt chất etoricoxib
2.3 Độ tuyến tính
- Tiến hành khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ với diện tích pic của etoricoxib bằng cách pha một dãy dung dịch chuẩn etori- coxib có nồng độ từ 2,6|jg/ml đến 5,6|jg/ml Kết quả khảo sát độ tuyến tính được trình bày ở bảng 2 và hình 5
Bảng 2 K ết quả khảo sá t độ tuyến tính.
STT _ 1 2 3 4 5
Nồng độ dung dịch etoricoxib (ụg/ml) 2,6 3,2 4,0 4,8 5,6
Diện tích pic (mAU.min) 4,850 5,972 7,474 9,061 10,465
Nồng độ c (mcg/ml)
Hình 5 Đồ th ị biếu diễn s ự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ và diện tích p ic
Nhận xét: Kết quả cho thấy trong khoảng
nồng độ Etoricoxib đã khảo sát (2,6 - 5,6 ụg/ml),
có sự phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ giữa diện
tích pic và nồng độ của chúng với hệ số tương
quan r = 0,9996
2.4 Độ chính xá c
Độ chính xác của phương pháp được đánh giá
bằng độ lệch chuẩn tương đối của 6 phép thử song song Tiến hành sẳc ký và ghi sắc ký đồ của
6 mẫu thử và mẫu chuẩn ở nồng độ 4,0 |jg/ml Kết quả khảo sát độ chính xác được trình bày ở bảng 3
Nhận xét: Kết quả thử độ chính xác của phương pháp cho thấy RSD < 2% Như vậy phương pháp có độ chính xác cao
Bảng 3 K ết quả khảo sá t độ chính xá c
TT Lưdng cân mt (g) Diện tích pic (mAU.min) Hàm lưdng % Số liệu thống kê
99,1
m = 0,2156(g)
sc = 7,521(mAU.min)
ĩ = 99,0
RSD(%) = 0,48
Trang 4Tạp chí NGHIÊN cứu D ư ợ c VÀ THÔNG TIN THUÓC So 2 năm 2010
2.5 Độ đúng chính xác chất chuẩn vào trong mẫu thử sao cho
, - - nồng đô của hoat chất vẫn nằm trong khoảng
Đô đúng của phương pháp được khảo sát y ‘ " , ” , Z
L * u r , 7 ' \ " ¿ I n „ Â n M r t u y ế n tính đã khảo sát Kết quả khảo sát độ
bằng phương pháp thêm chuân: thêm một lượng / - , , r
Bảng 4 Kết quả khảo sắ t độ đúng
TT LƯỢng thêm vào (mg) Diện tích pic thử (mAU.min) Lượng tìm lại (mg) % tìm lại
Kết quả khảo sát cho thấy lượng chất chuẩn
thu hồi lại được nằm trong khoảng 98,3% đến
100,2% và RSD < 2% Chứng tỏ phương pháp
trên có độ đúng cao
KẾT LUẬN
Sau khi thẩm định phương pháp, kết quả cho
thấy chúng tôi đã xây dựng được một phương
pháp HPLC đế định lượng etoricoxib trong chế
phẩm viên nén với cách tiến hành nhanh, đơn
giản, cho kết quả có độ đúng, độ chính xác cao,
phù hợp với điều kiện của đa số phòng thí
nghiệm ở Việt Nam và đã áp dụng phương pháp
để định lượng mẫu chế phẩm viên nén Etotab-60
cho hàm lượng là 99,0% so với hàm lượng ghi
trên nhãn
TÀI LIÊU THAM KHÀO
1 Patel HM, Suhagia BN, Shah SA, Rathod
IS (2007), Determination of etoricoxib in phar
maceutical formulations by HPLC method,
Indian jou rn al o f pharm aceutical scien ces, vol
69, pp 703-705.
2 Shahi S.R., Agrawal G.R., Rathi P.B., Shinde N.V., Somani V.G., Mahamuni S.B and Padalkar A.N (2008), Development and
validation of UV spectrophotometric method for the determination of etoricoxib in bulk and
tablet formulation Journal O f Chem istry, vo l.l,
pp 390-394.
KHÔNG NÊN SỬ DỤNG CÁC THUỐC LONG ĐỜM (tiếp theo trang 72)
TÀI LIỆU THAM KHÀO
5 Mary E Rimsza et al, U nexpected infant deaths associated with use o f cough and cold m edications
Pediatrics 2008; 122: e318 - e322.
6 FDA, CDC, In fa n ts deaths associated with cough and cold m edications - Two sta tes, 2005 MMWR Weekly
Janually 12, 2007/ 56 (01); 1-4.
7 Australia Government, Therapeutic Goods Administration, Sum m ary o f actions taken b y the TGA
and other regulatory agencies regarding cough and cold m edicines in the treatm ent o f children, October
2009.
8 Afssaps, Messages d é s, M ucoiytiques, m ucofluidifiants e t hélicidine Contre-indication chez le nourrisson
de m oins de 2 ans, Avirl 2010.
9 M Chalumeau, et al Mucolytic agents for acute respiratory tract infections in infants: a pharmaco-
epidemiological problem? Archives de Pédiatrie 9 (2002): 1128 - 1136.
10 Duijvestijn YCM et al, A cetyicystein fo r acute upper and low er respiratory tra ct in fection s in paediatric
patien ts w ithout chronic broncho-pulm onary disease (R eview ), The Cochrane Library, 2009, Issue 1.