Phân lập cornin, 3 0 β d glucopyranosyl β sitosterol và 3α, 24 dihydroxy urs 12 en 28 oic acid từ lá cây bọ mẩy (clerodendrum cyrtophyllium turcz )

Phân lập cornin, 3-0-P-D-glucopyranosyl -p-sitosterol 3a, 24-dihydroxy-urs12-en-28-oic acid từ Bọ mẩy (Clerodendrum cyrtophỵlium Turcz.) Trần Thị Thanh Huyền*, Nguyễn Thái An*, Thái Nguyễn Hùng Thu*, Hó Mai Anh** *Trường Đại học Dược Hà Nội, **SỞ Y tế Hà Nội SUMMARY From the leaves o f Clerodendrum cyrtophyllum Turcz., three compounds - cornin (1), add 3a,24-dihydroxy-urs-12-en-28-oic (2) va 3-0~li-D-glucopyrar)osyl-P-sitosterol (3) - were isolated by various chromatography methods Their chemical structures were elucidated by means of ESI-mass, 'H-NMR, '^C-NMR, HSQC, HMBC spectra This is the first report of ( 1) and (3) compounds from the leaves of Clerodendrum cyrtophyllum Turcz Đặt vấn đề Bọ mẩy loài có diện tích phân bố rộng số 30 loài thuộc chi Clerodendrum L có Việt Nam Theo kinh nghiệm dân gian, tất phận Bọ mẩy đểu nhân dân ta sử dụng với mục đích khác Lá non Bọ mẩy có tác dụng lợi tiêu hóa, dùng nấu nước tắm trị ghẻ lở Rễ Bọ mẩy chữa viêm ruột, lỵ, viêm họng, viêm amidan, viêm tuyến nước bọt, cảm mạo phát sốt [2], Nguyên liệu, phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu Mẫu nghiên cứu Bọ mẩy thu hái vào tháng 8/2011 Thái Nguyên, giám định tên khoa học là: Clerodendrum cyrtophyllunn Turcz họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) Mẫu tiêu lưu Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Phương pháp phương tiện nghiên cứu Sử dụng phương pháp sắc ký thông dụng để Các tài liệu tham khảo cho thấy có số phân lập chất Cấu trúc hợp chất phân hợp chất phân lập từ Bọ mẩy xác định cấu trúc [3], [4], [5], Tuy nhiên chưa có lập nhận dạng dựa iiệu phổ MS NMR[1] nghiên cứu đẩy đủ toàn diện dược liệu - Sắc ký lớp mỏng (SKLM) thực Trong khuôn khổ nghiên cứu loài thuộc chi mỏng tráng sẵn Silicagel Clerodendrum, phân lập hợp chất đèn tử ngoại bước sóng 254nm (Merck) Phát chất từ thân loài Clerodendrum cyrtophylum 366nm màu dung dịch H^so^ 10%, Turcz Bài báo mồ tả trình chiết xuất, phân sấy n o “C phút lập nhận dạng số hợp chất từ phân đoạn cloroform ethỵl acetat chiết xuất từ Bọ mẩy thu hái Thái Nguyên - Sắc ký cột với chất hấp phụ silicagel có cỡ hạt 40-63|jm (230 - 400 mesh) - Điểm chảy đo máy Kofler micro- hotstage Viện Hóa học hợp chất thiên (2) (lOmg) Phân đoạn LC2B tiếp tục phân nhiên - Phổ khối lượng (ESI-MS) đo máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên - Các phổ 'H-NMR, '^C-NMR, DEPT, HSQC, lập với hệ dung môi rửa giải cloroform:methanol (9;1), thu LC2B1, LC2B2 Phân đoạn LC2B2 tiếp tục phân lập với hệ dung môi rửa giải cloroform:methanol (6:1), thu TA03 (3) (15mg) HMBC đo máy Bruker AM500 FT-NMR SKLM Xác định cấu trúc chất phân lộp Spectrometer Viện Khoa học Công nghệ Việt Các chất phân lập kiểm tra độ tinh khiết Hợp chất TA01 (1) (1 ) chất bột không màu, nhiệt độ nóng chảy Nam Kết bàn luận Chiết xuất phân lập hỢp chất Bột thô mẫu nghiên cứu cho vào bình chiết inox, sử dụng dung môi methanol, chiết nhiều lắn phương pháp ngâm nhiệt độ phòng (25“C) 182°-183°c Tan nước, ethanol, aceton, ethyl acetat Phổ khối lượng ESI-MS: m/z = 389 [M+H]", 411 [M+Na]+, tương ứng công thức phân tử M=388 Phổ 'H-NMR xuất tín hiệu doublet Dịch chiết cất thu hổi dung môi áp suất proton olefin 7,49 (J= 2,0 Hz) chứng giảm đến cắn Hòa cắn với lượng vừa đủ nước nóng, sử dụng phương pháp chiết lỏng lỏng với tỏ có mặt nối đôi ba lần (>C=CH-), tín hiệu proton nhóm dioximetin dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexan, ô 5,25 xuất dạng doublet (J= 6,0 Hz), tín cloroform, ethyl acetat thu phân đoạn dịch hiệu methyl 3,75 có tích phân tương ứng với proton lại xuất dạng singlet phù hợp cho nhóm metoxi Sự có mặt phân tử chiết Cất thu hổi dung môi áp suất giảm để thu cắn phân đoạn, Cắn ethyl acetat (35g) phân lập cột Silicagel, rửa giải gradient dung môi với hệ cloroform:methanol (100:0-> 100:20) thu đường glucose nhận biết tín hiệu doublet 4,68 - 8,0 Hz) proton gắn với carbon anome, tín hiệu nhóm oximetin khác hệ rửa giải hỗn hợp ethyl acetat:methanol (14:1), 3,25 (1H, dd, J= 8,0; 9,0Hz); 3,4 (1H, d, J=9,0 Hz); 3,31 (1 H, H-4'); 3,32 (1 H, H-5') hai tín hiệu nhóm oximethylen õ 3,91 (1H, dd, J=2,0; 12,0); 3,66 (1H, thu phân đoạn LE2A (0,3g), LE2B (0,1 g) LE2C (0,5g) Phân đoạn LE2B tiếp tục phân dd, J-6,0; 12,0) Những kiện phổ nêu phù hợp với có mật khung iridoid lập với hệ dung môi rửa giải ethỵl acetat:methanol (14:1), thu đượcTA01 (l)(13m g) Cắn cloroform (50g) phân lập cột Silicagel, rửa giải gradient dung môi với hệ cloroform : methanol (100:0->0:100) thu phân đoạn ký hiệu LC1 (25g) LC2 (14g) Phân đoạn LC2 tiếp loài chi Verbena, có mặt thêm nhóm acetyl phân tử đường glucose phân đoạn ký hiệu LEI (15g) LE2 (17g) Phân đoạn LE2 tiếp tục phân lập sắc ký cột với tục phân lập sắc ký cột với hệ rửa giải hỗn hợp cloroform:aceton (3,5:1), thu phân Bỏng Dữliệu phổ NMR củũ(1) DEPT SH = 'm ult,(y= H z) 97,10 CH 5,25 d (7,0) 153,77 153,79 CH 7,49 d (2,0) 105,43 105,52 c - 43,52 43,74 CH 3,53 brd (7,5) 215,78 215,82 c c #6, 97,07 đoạn LC2A (0,3g), LC2B (0,15g) LC2C (1,2g) Phân đoạn LC2A tiếp tục phân lập với hệ dung môi rửa giải n-hexan;ethyl acetat (3:1), thu LC2A1 (0,1 g), LC2A2 (20mg) LC2A3 (80mg) Phân đoạn LC2A2 tiếp tục phân lập với hệ dung môi rửa giải cloroform:methanol (6:1), thu TA02 43,69 43,58 CH, 29,85 29,92 CH HMBC (H C ) ,5 ,1 ' ,4 ,5 , 11 ,3 , ,6 ,8 , 9,11 - 2,04 dd (4,5; 18,5) 2,57 dd (9,0-19,0) 2,51 m ,1 10 11 OMe 45,45 20,57 168,77 51,97 100,54 74,60 77,90 CH CH, 2,24 m 1,24 d (7,0) 78,29 45,55 20,58 168,85 51,97 100,60 74,68 77,99 71,61 78,38 CH, CH CH CH CH CH 62,71 62,76 CH, 3,75 s 4,68 d (8,0) 3,25 dd (8 ,0 ,9,0 ) 3,4 d (9,0) 3,31* 3,32* 3,66 dd (6,0; 12,0) 3,91 dd (2,0; 12,0) 7i !s3 1,6 ,8 ,9 11 5', 6' aáo tm g CD30D, b ỉ25MHz, ứOOMHĩ, ỂỖCSỗ liệu phổ Cornln theo tòi liệu [71 * oveílop Từ kiện phổ so sánh phổ TA01 với cornin nêu tài liệu [7], hợp chất nhận định cornin Hợp chất TA02 (2) (2 ) tinh thể màu trắng, tan aceton, cloroíorm, methanol, không tan nước Nhiệt độ nóng chảy 239°c Phổ khối lượng ESI-MS m/z; 473 [M+H]+, tương ứng công thức phân tử C3J,H^0 ^, M=472 Báng Dữ liệu p h ỗ H M cùa (2) ỗ mult (J=Hz) c % #5„ 5^ Phổ '^C-NMRxuất tín hiệu õ 215,82 thuộc 33,5 33,7 34,39 1,39* carbon ceton, cặp tín hiệu õ 168,85 (C11) 51,97 (OMe) phù hợp hoàn toàn với nhóm - 22,6 24,46 1,94 m 70,3 73,5 71,31 3,78 s acetỵl Tín hiệu õ 153,79 (CH); 105,52 (C) - 42,4 44,00 - tín hiệu ô 97,10 đặc trưng khung iridoid với - 50,8 50,63 1,41 nối đôi C-3/C-4 vị trí carbon C-1 nối với nguyên - 18,3 19,46 1,55*71,39* tử oxy Tín hiệu õ 100,60 carbon anomeric tín hiệu đặc trưng carbon nối với nguyên - 33,5 34,63 1,58* - 40,0 40,91 - - 47,5 48,00 1,73 m 10 - 37,1 37,96 1,63 m 11 - 23,4 25,34 1,66 m thực nhằm kiểm tra lại toàn tương 12 125,9 125,8 126,91 ,2 t (3,0) tác phân tử hợp chất TA01 13 138,6 138,3 139,59 - 14 - 42,6 43,33 - 28,1 29,20 1,9 m /1 ,10 d (7,5) tửoxy (4xCH-0), (Ix C H p H ) hoàn toàn phù hợp với phân tử đường glucose Các giá trị độ dịch chuyển hóa học proton carbon tương ứng đểu xác định phổ HSQC Ngoài ra, phổ HMBC 15 0H Mn/i Cóc tương tác HMBC ủ yẽ u CÙQ í ]) COOCH3 16 - 24,1 26,12 1,57 m 17 - 48,3 48,00 - 18 53,4 52,7 54,40 2,21 d (16,5) HMBC (H ^ C) ,1 ,2 , 26 12,13, 7,2 19 - 39,2 40,45 0,99 s 20 - 39,0 40,91 1,43 m 21 - 30,7 31,78 1,58*/1,38* 22 - 36,7 38,11 1,73 m 22,1 22,78 1,06 s ,5 ,2 ,5 ,2 23 24 65,3 66,8 66,34 3,69 d ( l1,5) 3 d ( ll,5 ) 25 - 15,8 16,29 0,95 s ,5 ,9 ,1 26 - 17,0 17,61 0,85 s ,8 ,9 ,1 27 - 23,8 24,12 l,1 s 28 180,6 182,3 181,62 - HO^r^3N 29 17,5 17,1 17,68 0,91 d (6,5) ,1 ,2 ỒH /Ín/ì2 CấutrứchóohọccÙQÍI) 30 21,0 21,2 21,55 0,99 s 20,21 ề “ đo CDj 00, ‘ U5MHz, ‘ 500MHz, Ểỗ Sỗ liệu phố theo chốt ũtíd jfl, 24-dihỵdroxy-urs- ỉ2-en-2S-oic ( ũ ) ; ’H đo ttonq C IX ự tâ n s ố m M H ỉ, ’ĩđ o trongC D pD ồtán số50M H z[6l iô^^Sổ liệu phổ theo chót diacetat cùa C l: 'K đotm gCDCIjởtổnsỗ75MHz[61 Phổ 'H-NMR (2) đặc trưng cho hợp chất dạng tritecpen, xuất tín hiệu 283-284°C Tan methanol nóng, cloroform, không tan ether Phổ khối lượng ESI-MS m/z: 577 [M+H]% tương ứng công thức phân tử M=576 Phổ ’H-NMR hợp chất (3) đặc trưng cho sterol có đính đường với tín hiệu anomer đường đặc trưng vị trí cộng hưởng 4,40 (1H, d, J = 8,0 Hz, 0,95 (3H, s); 0,99 (3H, s); 1,06 (3H, s); 1,17 (3H, s); tín H-1') Bên cạnh có tín hiệu cộng hưởng đặc trưng nối đôi lấn 5,37 (1H, brs, hiệu proton olefin vị trí cộng hưởng 5,25 (1H, t, J= 3,0 Hz); tín hiệu proton nhóm oximetin ỗ 3,78 tín hiệu nhóm methyl vị trí 0,68 (3H, s, (1 H, s), tín hiệu nhóm oximetilen vị C H 3-I7); trí cộng hưởng 3,69 (1H, d, J=11,5Hz) s,CH3-19) nhóm methyl ỗ 0,85 (3H, s); 0,91 (3H, d, J=6,5 Hz); 11,5 Hz); 3,34 Phổ '^C-NMR xuất tín hiệu đặc trưng tritecpen với 30 tín hiệu carbon gồm có tín hiệu carbon bậc bốn, tín hiệu carbon imetin, 10 tín hiệu carbon metilen tín hiệu carbon methyl Một tín hiệu nối đòi lần xác định vị trí cộng hưởng õ 139,59 126,91; tín hiệu carbon bậc bốn đặc trưng cho nhóm carbony acid xác định vị trí 181,62; tín hiệu carbon H-6), nhóm oximetin 3,58 (1H, m, H-3) 0,79 (3H, s, CH3-29); 0,84 (3H, m, CH3-26); 0,93 (6H, d, J = 6,5 Hz, CH3-2 I CH3-27); 1,00 (3H, Phổ '^C-NMR hợp chất (3) xuất 35 tín hiệu carbon, 29 tín hiệu xác định thuộc vào khung sterol, tín hiệu lại đường glucose với tín hiệu đặc trưng carbon anomerictại õ 100,99 (C-1').Trên phổ carbon xuất tín hiệu oximetin tín hiệu oximetilen vị trí cộng hưởng khoảng 61,86 - 79,11 (C-6', C-5', C-4', C-3', C-2', C-3) Bên cạnh oximetin vị trí cộng hưởng ô 71,31 tín hiệu carbon oximetilen vị trí cộng hưởng õ 66,34 Các giá trị độ dịch chuyển hóa học proton carbon có tín hiệu cộng hưởng nối đôi vị tương ứng xác định dựa kết phân (C-18); 11,80 (C-29); 18,62 (C-21); 18,87 (C-27); 19J6 tích phổ HSQC (bảng 2) Từ kiện phổ kết (C-19) v i 9,62 (C-26) hợp so sánh phổ (2) với phổ hợp chất acid 3a, 24-dihydroxy-urs-12-en-28-oic (C1) hợp chất diacetat (C2) thấy có tương đương vị trí tương ứng Kết phân tích phổ HMBC (H^C) cho phép khẳng định vị trí liên kết Từ kết luận hợp chất (2) hợp chất acid 3a, 24-dihydroxy-urs-12-en-28-oic Hình Cấu trúc hóũ học cùa hợp chất (2) HợpchấtTA03[3) (3) dạng bột màu trắng Điểm nóng chảy trí cộng hưởng 122,07 (C-6), 140,15(C-5) tín hiệu nhóm methyl vị trí cộng hưởng 11,69 Bàng l DữliệuphổNMRcủũ iỉ) c 'ỖC1 ‘ỖC2 ỖCa,b 37,0 37,3 37,14 31,6 31,9 29,53 78,9 79,6 79,11 39,5 39,8 39,65 141,6 140,3 140,15 121,9 122,1 122,07 31,6 31,9 31,78 31,7 31,9 31,81 50,0 50,2 50,09 10 11 12 36,5 36,7 36,61 20,8 21,1 20,95 38,5 38,9 38,64 13 42,1 42,3 42,22 14 56,5 56,8 56,65 15 24,5 24,4 24,15 16 28,7 28,2 28,10 17 55,8 56,1 55,97 3,58 (lH ,m ) 5,37 (IH , brs) 18 12,0 11,9 11,69 0,68 (3H ,s) 19 19,0 19,3 19,16 1,00 (3H ,s) 20 36,0 36,1 36,02 [8] thấy có tương đương vị trí tương ứng Sự khác biệt xuất vị trí carbon-23 26,03 (C-23) so với 28,0 (C1) lại tương tự 0,93 (3 H ,d ,6 ,5 ) (C2) 26,1 Từ kết có 21 18,5 18,8 18,62 22 34,0 34,0 33,85 23 28,0 26,1 26,03 24 4S,7 45,8 45,77 25 28,9 29,2 29,08 khẳng định hợp chất (3) 3-0-ß-D-glucopyranosylß-sitosterol 26 19,5 19,8 19,62 0,84 (3 H, m) 27 18,7 19,0 18,87 0,93 {3 H ,d ,6 ,5 ) 28 22,8 23,1 22,97 29 12,0 12,0 11,80 0,79 (3H ,m ) 100,9 101,1 100,99 4,40 (lH ,d , 8,0) 73,2 73,5 73,45 3,27 (m) 76,2 76,0 76,26 3,44 (m) 70,0 70,1 70,08 3,44 (m) 75,4 73,9 75,56 3,37 (m) 61,7 63,2 61,86 3,77 (d,4,5) 3,85 (d, 3,0) ‘đo CDQ^+CDpO, " U S MHz, ‘500MHz #ỗf, dũucosíerol đo CDCIj [81, #(5^^ 6'-steümyl-]-0-ß-[)-glucopyrüno5yl-ßsitosteroldotrongCHCI/8] M Cáu trúc hóa học cùa hợp chất (3) Kết luận Từ Bọ mẩy, phân lập hợp chất cornin (1), acid 3a,24-dihydroxy-urs-12-en- Các tín hiệu proton gán với tín hiệu carbon tương ứng dựa kết phân tích phổ 28-oic (2 ) 3-0-ß-D-glucopyranosyl-ß-sitosterol (3) Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập chiểu HSQC (bảng 3) Các liệu cho thấy xác định phương pháp phổ khối lượng hợp chất daucosterol ß-sitosterol glycoside (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiểu hai Kết hợp so sánh liệu phổ hợp chất (3) với liệu phổ hợp chất daucosterol (C1) [8] chiểu (1D - 2D - NMR) Theo tài liệu tham khảo lắn đáu tiên hợp chất (1) (3) phân lập từ Bọ mẩy 6'-stearoyl-3-0-ß-D-glucopyranosyl-ß-sitosterol (C2) TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Văn Đàn, Nguyên Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, NXB Y học Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuổc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 545-546 Cheng HH, Wang HK, Ito J, Bastow KF, Tachibana Y, Nakanishi Y, Xu z , Luo TY, Lee KH (2001), "Cytotoxic pheophorbide-related compounds from ũerodendrum calamitosum andc cyrtophyllum", Journal of natural products, Vol 64, 915-919 Li Yan, Zhao Qui-chun, et al (2008), "Chemical constituents of Clerodenron cyrtophyllumTurcz." Chinesejournal of medicinal chemistry, Vol 18,371 Xiao-drong, Zhi-da Min, Ning Xie, et al (1993), "Abietane diterpenes from Clerodendron cyrtophyllum", Chemical and pharmaceutical b u lle tin (8 ),U 'i5 - :A '\ Mundkinajeddu Deepak, Sukhdev s Handa (1998), "3a, 24-dihydroxy-urs-12-en-28-oic acid from Verbena officinalis", Phytochemistry, 49(1), 259-271 Dirk Teborg, Peter Junior (1991), “Iridoid Glucoside from Penstemon nitidus", Planta Medica, Vol 57 (2), 184-6 Laurence Voutquenne, Catherine Lavaud, et al (1999), "Cytotoxic isoprenes and glycosides of long-chain fatty alcohols from Dimocarpus fumatus", Phytochemistry, 50 (1), 63-69  ... (lH ,d , 8 , 0) 73, 2 73, 5 73, 45 3, 27 (m) 76,2 76 ,0 76,26 3, 44 (m) 70, 0 70, 1 70, 08 3, 44 (m) 75,4 73, 9 75,56 3, 37 (m) 61,7 63, 2 61,86 3, 77 (d, 4, 5) 3, 85 (d, 3, 0) ‘đo CDQ^+CDpO, " U S MHz, ‘ 500 MHz... 29, 53 78,9 79,6 79,11 39 ,5 39 ,8 39 ,65 141,6 1 40 ,3 1 40, 15 121 ,9 122 ,1 122 ,07 31 ,6 31 ,9 31 ,78 31 ,7 31 ,9 31 ,81 50, 0 50, 2 50, 09 10 11 12 36 ,5 36 ,7 36 ,61 20, 8 21,1 20, 95 38 ,5 38 ,9 38 ,64 13 42,1 42 ,3. .. chất ( 3) 3- 0- ß -D- glucopyranosyl -sitosterol 26 19,5 19,8 19,62 0, 84 (3 H, m) 27 18,7 19 ,0 18,87 0, 93 {3 H ,d ,6 ,5 ) 28 22,8 23, 1 22,97 29 12 ,0 12 ,0 11, 80 0,79 (3H ,m ) 100 ,9 101 ,1 100 ,99 4, 40 (lH