4 Htfp chất triterpenoid từ Lá móng (Lawsonia inermis L.) Trần Thị Oanh CụcKhoa học Công nghệ &Đào tạo, Bộ Ytế SUMMARY Twotriterpenoids,pentacydicnamed2lì,3lì-clihydroxy-12-oleanen-28-oicacid(augusticacid, ĩ)a nd 1lì,2a,3a,19a-tetrahydroxyurs12-ene-28-oic acid (2) were isolated from the ethanol extract o f the leaves ofLawsonia inermis L The chemical structure o f these compounds were elucidated based on the 1D ond 2D NMR, ESI mass, uv, IR spectra and by comparision to those o f published data T khóa: /.d móng, Lawsonia inermis L , triterpenoid, add augustic Đặt van đề Cây Lá móng, gọi Lá móng tay, Móng tay nhuộm, Chỉ hoa tiên có tên khoa học Lơvvsonia inermis L, thuộc họ Tử vi (Lythraceae) Theo kinh nghiệm dân gian Lá móng dùng để chữa vấp ngã tổn thương, chảy máu, ứ máu, phụ nữ kinh nguyệt không đểu, bụng to, da vàng, phù thũng, phong thấp, nhức mỏi, tê bại [1] Kết nghiên cứu tácgiả nước cho thấy Lá móng có: acid lawnermis, isoplumbagin, lawsonadeem, lawsonicin, wallichianol, 3-methyl-1-nonacosanol, 1,2,4-naphthalenetriol 4-0-ß-D-glucopyranosid, laliosid, lawsoniasid, lawsaritol A, ß-rosasterol, laxanthon II, laxanthon III, laxanthon I Chúng công bố hợp chất catechin, rubinaphthin B từ rẽ Lá móng [2], 3-0-a-L-rhamnopyranosyl 5,7,4'-trihydroxỵflavon từ Lá móng [3] Bài báo thông báo kết phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất triterpen từ acid 2ß,3ßdihỵdroxy-12-oleanen-28-oic (acid augustic) acid 1ß,2a,3a,19a-tetrahỵdroxyurs-12-ene-28-oic Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu: Cây Lá móng thu hái làng Ngọc Trục, xã Từ Mỗ, Từ Liêm, Hà Nội vào tháng 3/2008 Mẫu tiêu lưu phòng tiêu Bộ môn Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội (mã số tiêu HNIP/16698/08) PGS TS Trẩn Văn ơn xác định tên khoa học Lơvvsonia inermis L Hóa chất Bản sắc ký lớp mỏng silica gel (Merck, Đức) Chất hấp phụ silica gel (0,040-0,063 mm, Merck, Đức), silica gel pha đảo YMC (30-50 mesh, Fujisilica Chemical Ltd., Nhật) dùng cho sắc ký cột Methanol, ethanol, n-hexan, ethỵlacetat, cloroform đạt tiêu chuẩn công nghiệp Thiết bị Phổ khối lượng (ESI-MS) đo máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap, Mỹ Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) đo máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Đức Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất phân lập: Bột khô (5kg) chiết ngấm kiệt với ethanol 85%, rút dịch chiết sau 24 X lẩn Các dịch chiết sau gộp lại, cất thu hổi dung môi áp suất giảm thu cao đặc (31 g) Cao đặc phân tán vào nước, rổi lẩn lượt chiết với n-hexan, cloroform ethylacetat Các dịch chiết cất thu hổi dung môi áp suất giảm, thu cắn theo thứtự: cắn n-hexan (14 g), cắn cloroform (7g), cắn ethylacetat (5,4 g) Cắn cloroform (7 g) phân lập sắc ký cột với chất hấp phụ Silicagel rửa giải hệ dung môi cloroform/ methanol gradient nổng độ Cất thu hồi dung môi áp suất giảm, thu phân đoạn tương ứng LIC1 (1,2 g), LIC2 (0,2 g), LIC3 (3,1 g) LIC4 (1,5 g) Phân đoạn LIC1 (1,2 g) tiếp tục phân lập sắc ký cột với chất hấp phụ silicagel hệ dung môi cloroform/methanol ( 10/ ), thu hợp chất, kí hiệu LIC1A(chất , lOmg) Phân đoạn LIC2B (0,2 g) tiếp tục phân lập sắc ký cột với chất hấp phụ YMC RP-18 hệ dung môi rửa giải methanol/nước/aceton (1/1/0,5), thu hợp chất LIC2B (chất , 11 mg) hoá học hợp chất với hợp chất acid 2|3,3Pdihydroxỵ-12-oleanen-28-oic thấy phù hợp hoàn toàn [4], Ngoài ra, phổ hai chiểu HSQC HMBC thực để xác định xác giá trị độ dịch chuyển hóa học proton carbon Các tương tác chủ yếu phổ HMBC trình bày bảng Kết bàn luận HỢp chất bột màu trắng, có nhiệt độ nóng chảy 259-260°C Phổ uv có X : 201 ,4nm Phổ IR có đỉnh hấp thụ mạnh 3426,17(vOH); 2931,23; 1629,97 (v-C=0), 1435,05, 1376,58; 1025,72 cm ' Phổ 'H-NMR (500 MHz, pyridin-dj) xuất dạng phổ hợp chất triterpen năm vòng sáu cạnh với tín hiệu đặc trưng cho nhóm methyl bậc bốn 1,04 (3H, s, H-23), 0,77 (3H, s, H-24), 0,78 (3H, s, H-25), 0,86 (3H, s, H-26), 1,03 (3H, s, H-27), 0,84 (3H, s, H-29) 0,87 (3H, s, H-30); hai proton methyl gắn vào hai carbon có nối với nguyên tử oxy cộng hưởng õ 3,93 (m, H-2) 3,22 (d, J = 4,5 Hz, H-3); tín hiệu proton olefin d 5,26 (m, H-12) chứng tỏ có mặt nối đôi ba lẩn Ngoài có tín hiệu khác nhóm methyl methylen 1,08 2,05 (m, H-1), 0,75 (m, H-5), 1,31 1,14 (m, H-6), 1,11 0,82 (m, H-7), 1,53 (m, H-9), 1,92 1,78 (m, H-11), 1,14 1,06 (m, H-15), 1,91 1,77 (m, H-16), 3,04 (m, H-18), 1,60 1,07 (m, H-19), 1,63 1,25 (m, H-21), 1,60 1,77 (m, H-22) Phổ '^C-NMR (125MHz, đo pyridin-d5) xuất tín hiệu 30 carbon phù hợp với hợp chất triterpen năm vòng sáu cạnh, tín hiệu carbon carboxylic nhận biết d 178,20 (C-28), nối đôi d 121,79 (C-12 ), 144,09 (C13), hai carbon nối với nguyên tử Oxy có độ dịch chuyển hóa học 68,03 (C-2), 82,91 (C-3), bảy nhóm methyl d 28,50 (C-23), 16,74 (C-24), 15,94 (C-25), 16,82 (C-26), 25,48 (C-27), 32,67 (C-29) 23,15 (C30) Phổ DEPT 135, DEPT 90 cho thấy số 30 carbon, có carbon CH3, carbon CHj, carbon CH carbon bậc Khi so sánh giá trị độ dịch chuyển -0 Kết trên, với việc xuất pic ion m/z 473 [M+H]^ 454 [M-Hp+H]" (positive) m/z 471 [M-H]' (negative) phổ ESI-MS tương ứng với công thức phân tử kết luận cấu trúc hoá học acid 2p,3P-dihỵdroxy-12-oleanen28-oic (acid augustic) Bàng ID ữliệuphổm ứohợpchổt (LIŨA) Vi trí c dP[4] (ppm) dCa,b (ppm) DEPT dHa,c (J,Hz) HMBC (H->C) C-2,3,5 46,52 46,65 CH^ 1,08/2,05 (m) 67,15 68,03 CH 3,93 (m) 82,23 82,91 CH 3,22 (d, 4.5) 41,44 41,30 c 54,84 55,07 CH 0,75 (m) 18,11 18,07 CH, 1,31/1,14 (m) 32,41 32,46 CH, 1,11/0,82 (m) 47,14 38,99 c 47,14 47,35 CH 10 37,72 37,67 c 11 22,66 22,9 r CH, 1,92/1,78 m 12 121,54 121,79 CH 5,26 m 13 143,95 144,09 c 14 41,44 39,10 c 15 27,44 27,52 CH, 1,14/1,06 m 16 23,08 22,91^ CH, 1,91/1,77 m 1,53 m C-2,4,5,23 C-5 C-9,11,14 - 17 45,76 46,32 c 18 40,88 41,47 CH 3,04 (m) 19 45,52 45,95 CH, 1,60/1,07 m 20 30,44 30,20 21 33,40 33,44 CH 1,63/1,25 (m) 22 32,17 32,36 CH 1,60/1,77 m 23 28,85 28,50 CH, 1,04 (3H,s) C-3,4 24 16,94 16,74 CH, 0,77 (3H,S) C-4,23 25 16,34 15,94 CH, 0,78 (3H,s) C-1,5,9,10 26 17,14 16,82 CH, 0,86 (3H,s) C-7,8,9,14 27 25,69 25,48 CH3 103 (3H,S) C-8,13,14,15 28 178,51 178,20 29 32,89 32,67 CH, 0,84 (3H,S) C-19,20,30 30 23,42 23,15 CH, 0,87 (3H,s) C-20,21 C-13 °đotrongpỵnổin-d^^l25MHz, '500 MHz 0^""Số liệu phổ củũ odd 2p,3|ỉ-dillỵdíoxỵ^2-oleơnen-28-oic (Qddũugusỉic) I4 ị * tín hiệu bị che lốp Hợp chất ( LIC2B) bột màu trắng Nhiệt độ nóng chảy 234-235°C Phổ uv có X max: 207,4nm Phổ IR có đỉnh hấp thụ mạnh 3427,58 (v-OH), 2936,86; 1630,47 (v-C=0), 1466,18,1029,00 cm \ Phổ ^H-NMR (500 MHz, đo DMSO-d^) xuất dạng phổ hợp chất triterpen vòng sáu cạnh gần tương tự hợp chất Trong có ba tín hiệu tương ứng với proton nhóm oximethyl ỗ 3,30 ( í J = 9,5 Hz, H-1), 3,48 (dd, J = 9,5, 3,0 Hz, H-2) 3,22 (m, H-3), proton olefin ỗ 5,16 (br t, H-12) chứng tỏ có mặt nối đôi bị ba lần, nhóm methyl có nhóm xuất dạng pic đơn (singlet) 0,88 (3H, s, H-23), 0,80 (3H, s, H-24), 0,91 (3H, s, H-25),0,71 (3H,s,H-26)J,30(3H,s,H-27)vàl,07 (3H, s, H-29) tín hiệu xuất dạng doublet 0,85 (3H,d,J = 6*5 Hz, H-30) Điều chứng tỏ hợp chất có khung ursan khác với khung olean hợp chất [4] Các tín hiệu proton khác xuất 1,36 (m, H-6), 1,22 1,44 (m, H-7), 1,82 (m, H-9), 2,00 2,52 (m, H-11), 0,90 1,66 (m, H-15), 1,38 2,47 (m, H-16), 2,37 (br s, H-18), 1,27 (m, H-20), 1,14 1,62 (m, H-21), 1,51 1,58 (m, H-22) Dựa vào phổ ’^C-NMR (125MHz, đo DMSO-dj) phổ DEPT cho thấy có mặt của 30 carbon, có carbon CHj, carbon CHj, carbon CH carbon bậc 4.3 nhóm CH nối với nguyên tử oxi 78,98 (C-1), 69,83 (C-2) 78,26 (C-3), tín hiệu carbon bậc ba nối với oxi 71,57 (C-19).Tín hiệu nhóm cacboxylic xác định ỏ 178,61 (C-28), nối đôi 128,14 (C-12), 137,21 (C-13), nhóm methyl ỗ 28,50 (C-23), 21,68 (C-24), 12,03 (C-25), 16,79 (C-26), 23,93 (C-27), 26,25 (C-29) 16,02 (C-30) Ngoài ra, tín hiệu carbon khác xác định ỏ 37,39 (C-4), 47,16 (C-5), 17,77 (C-6), 32,77 (C-7), 42,51 (C-8), 47,36 (C-9), 37,39 (C-10), 26,64 (C-11), 40,95 (C-14), 27,97 (C-15), 25J6 (C-16), 46,82 (C-17), 53,04 (C-18), 41,21 (C-20), 25,84 (C-21) 37,03 (C-22) Tất liệu phổ hợp chất xác định thông qua phổ HSQC HMBC, thời dựa so sánh liệu phổ NMR hợp chất với hợp chất có cấu trúc tương tự (bảng bảng 3) Kết so sánh bảng cho Hintì Các tương tác ưén phổHMBC ứa (LIC2B) thấy hợp chất khác hợp chất 1a,2a,3P,19atetrahydroxyurs-12-ene-28-oic acid [6] vể hoá học lập thể C1, C2 C3 nhóm hydroxy với cấu hình xác định cho hợp chất 1(3,2a,3a Hóa học lập thể C19 nhóm hydroxyl xác định 19a-0H phù hợp hoàn toàn vể giá trị phổ hợp chất với hợp chất tương tự [5], [6], [7] Phổ khối lượng xuất pic ion m/z 505 [M+H]^ 487.2 [M+H46^2 [M+H-2HjO]+, 451.2 [M+H-3HjO]" phổ positive ESI-MS tương ứng với công thức phân tử C3gH^0g (M=504) Từ kết nêu trên, hợp chất khẳng định acid 1ỊỈ,2a,3a,19atetrahỵdroxyurs-12-ene-28-oic BỏngS.Sosónh giá fíị phổ củũ hợp chót tợi c vị trí ũ - O Tên hợp chất ôn ôp ôr Tài liệu 1p,2a,3a,19a-tetrahỵdroxyurs12-ene-28-oỉc acid methyl ester 74,9 74,6 79,9 [7] 1p,2p,3a,19a-tetrahỵdroxỵurs12-ene-28-oỉc add methyl ester 77,0 74,7 79,9 [5] 1a,2a,3p,19a-tetrahydroxỵurs12-ene-28-oicacỉd 71,2 78,9 80,0 [6] 1p,2a,3a,19a-tetrahydroxyurs12-ene-28-oicacid (2) 78,98 69,83 78,26 Báng 2: Dữliệu phổ HMR rà /ỉọp chót có khung cáu trúc tương tự Vị tríc Kết luận ỗ, (500 MHz) ( I hz) ỏc [6]" 0^(125 MHz) 1p,2a,3a DEPT 71,2 78,98 CH 3,30, d, 9,5 Hz 78,9 69,83 CH 3,48,dd,9,5,3,0Hz 80,7 78,26 CH 3,22^ c 1,22 40,6 37,39 53,1 47,16 CH 18,3 17,77 CH^ 1,36 32,6 32,77 CH, 1,22/1,44 42,9 42,51 c - 47,8 47,36 CH 1,82 10 37,7 37,39 c - 11 25,5 26,64 CH^ 2,00/2,52 12 129,8 128,14 CH 5,16 brt 13 Từ dịch chiết ethanol Lá móng (Lawsonia inermis L.) phương pháp chiết phân đoạn sắc ký cột nhiểu lẩn phân lập chất LICIA (1) LIC2B (2) Dựa vào số liệu phổ khối lượng phổ cộng hưởng từ hạt nhân nhận dạng chất acid 2ỊỈ,3Mihydroxy12-oleanen-28-oic (augustic acid) chất acid 1p,2a,3a,19a-tetrahydroxỵurs-12-ene-28-oic Hai dẫn chất triterpenoid pentacyclic tổn thiên nhiên, phân lập xác định cấu trúc từ số loài Ambroma augusta, Agrimonia pilosa, Rubusxanthocarpus Rosa sterilis [4], [5], [6], [7], nhiên lần đẩu tiên phân lập từ Lá móng trổng Việt Nam 137,3 137,21 41,1 40,95 c c - 14 15 28,2 27,97 CH^ 0,90/1,66 16 26,0 25,16 17 47,9 46,82 c - 18 53,1 53,04 CH 2,37, brs 19 73,2 71,57 c - 20 21 41,1 41,21 CH 1,27 27,3 25,84 CH^ 1,14/1,62 22 37,4 37,03 CH^ 1,51/1,58 23 28,2 28,50 CH^ 0,88 (3H,s) 24 16,1 21,68 25 12,03 CH^ CH^ 0,80 (3H,s) 12,0 26 16,6 16,79 CH^ 0,71 (3H,s) Alam, M.S., Chopra, N., Ali, M and Niwa M., (1996), 27 24,6 23,93 CH^ 130(3H,S) Phytochemistry, Vol 41 (4), pp.l 197-1200 28 178,4 178.61 c - - 1,38/2,47 0,91 (3H,S) 29 27,4 26,25 CH^ 1,07 (3H,s) 30 17,1 16,02 CH^ 0,85 (3H,d,6,5 Hz) *&^cüü lũ,2ữ,ìị ỉ9a-tetrahỵdroxyurs-ỉ2-em-28-oicơciá[6Ị Tài liệu tham khảo Viện Dược liệu (2008), Cây thuốc vờ động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tập 2, tr 130 Nguyễn Thị Bình, Phạm Thanh Kỳ, Trần Thị Oanh, Nguyễn Phương Thảo, Phan Văn Kiệm (2008), Tạp chí Dược học, 8/2008, tr 22-24 Nguyễn Thị Bình, Phạm Thanh Kỳ, Trần Thị Oanh, Phan Văn Kiệm (2008), Tạp chí Dược học, 9/2008, tr 20-21 Isao K., Naosuki B., Yumiko o and Nobusuke K (1998), PhytochemistryVol 27(1), pp 297-299 Wang B.G and Jia J (1998), Phytochemistry Vo\ 49(8), pp.2477-2481 Liang G.Y., Alexander I.G and Peter G.w (1989), Nat Prod Vol.52(1), pp.162-166 ... brt 13 Từ dịch chiết ethanol L móng (Lawsonia inermis L. ) phương pháp chiết phân đoạn sắc ký cột nhiểu l n phân l p chất LICIA ( 1) LIC2B ( 2) Dựa vào số liệu phổ khối l ợng phổ cộng hưởng từ hạt...(1,5 g) Phân đoạn LIC1 (1,2 g) tiếp tục phân l p sắc ký cột với chất hấp phụ silicagel hệ dung môi cloroform/methanol ( 10/ ), thu hợp chất, kí hiệu LIC1A (chất , lOmg) Phân đoạn LIC2B (0,2 g) tiếp... phân l p sắc ký cột với chất hấp phụ YMC RP-18 hệ dung môi rửa giải methanol/nước/aceton (1/1/0, 5), thu hợp chất LIC2B (chất , 11 mg) hoá học hợp chất với hợp chất acid 2|3,3Pdihydroxỵ-12-oleanen-28-oic