Vi nhân giống cây tràm (melaleuca cajuputi powell)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM BỘ MÔN SƯ PHẠM SINH HỌC VI NHÂN GIỐNG CÂY TRÀM (MELALEUCA CAJUPUTI POWELL) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành SƯ PHẠM SINH - KỸ THUẬT NÔNG NGHIỆP Cán hướng dẫn Sinh viên thực PGs Ts NGUYỄN BẢO TOÀN ThS PHÙNG THỊ HẰNG KIÊN THỊ THÚY HOA MSSV: 3072331 DƯƠNG THỊ TUYẾT NGỌC MSSV: 3072345 Lớp: SP Sinh – KTNN K33 NĂM 2011 Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ CẢM TẠ Xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: - Ba mẹ, người hết lòng nuôi dạy, yêu thương động viên để có ngày hôm - Thầy Nguyễn Bảo Toàn cô Phùng Thị Hằng, người tận tình hướng dẫn, gợi ý cho lời khuyên bổ ích suốt trình thực luận văn - Chị Ngô Thảo Trân chị Lê Hồng Giang giúp đỡ đóng góp ý kiến trình thực hoàn tất luận văn - Thầy Nguyễn Trọng Hồng Phúc nhiệt tình giúp đỡ trình học tập truyền đạt kinh nghiệm quý báu để hoàn thành tốt luận văn Xin chân thành cảm ơn: - Thầy cô Bộ môn Sư phạm Sinh học – Trường Đại học Cần Thơ tận tình dạy dỗ truyền đạt kiến thức - Tất anh chị bạn bè Phòng thí nghiệm sản xuất thử ủng hộ, tạo điều kiện cho hoàn thành tốt luận văn Kiên Thị Thúy Hoa Dương Thị Tuyết Ngọc Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp i Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC Đề tài “Vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell)” thực nhằm xác định hiệu phương pháp khử trùng lên mẫu Tràm, xác định nồng độ BA, NAA lên trình nhân chồi tạo rễ vi nhân giống Các thí nghiệm bao gồm: khử trùng mẫu cấy, nhân chồi từ đoạn thân, tạo rễ cho chồi Kết đoạn thân rửa vòi nước khử trùng cồn 700 30 giây, dung dịch Clorox 20% 20 phút, rửa nước cất vô trùng lần, tiếp tục khử trùng HgCl2 0,5 00 20 phút, rửa nước cất vô trùng lần Phương pháp đạt tỉ lệ 40,1%, tỉ lệ tạo chồi đạt 25,4% 15 ngày sau cấy (NSKC) Nhân chồi trực tiếp từ đoạn thân có bổ sung nồng độ BA thích hợp 0,5 mg/l, đạt 11,3 chồi/mẫu 75 NSKC Phát triển chồi môi trường MS không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng tạo rễ cho cụm chồi có bổ sung NAA nồng độ 2,0 mg/l với số rễ tạo trung bình 5,6 rễ 75 NSKC Đề tài thực từ tháng 09/2010 đến tháng 05/2011 phòng thí nghiệm thuộc Trại nghiên cứu Thực nghiệm nông nghiệp, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Từ khóa: vi nhân giống, Tràm Melaleuca cajuputi Powell, khử trùng, nhân chồi Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp ii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC CẢM TẠ i TÓM LƯỢC ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii Chương I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài Chương II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm thực vật Tràm 1.1.1 Nguồn gốc phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật  Thân  Lá  Hoa  Quả 1.1.3 Công dụng 1.2 Sơ lược kỹ thuật vi nhân giống 1.2.1 Giới thiệu  Lợi ích nhân giống phương pháp cấy mô 1.2.2 Vật liệu cấy 1.2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy  Nước  Các nguyên tố khoáng đa lượng Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp iii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ  Các nguyên tố vi lượng  Nguồn cacbohydrate  Vitamin  Chất tạo gel (Agar)  pH  Than hoạt tính  Chất điều hoà sinh trưởng 1.2.4 Các giai đoạn vi nhân giống 1.2.5 Hiện tượng hóa nâu mẫu cấy 1.2.6 Sự thừa nước 10 1.2.7 Vi nhân giống họ Mytaceae 10 Chương III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 12 1.1 Phương tiện 12 1.1.1.Vật liệu thí nghiệm 12 1.1.2 Điều kiện thí nghiệm 12 1.1.3 Môi trường nuôi cấy 12 1.1.4 Địa điểm thời gian thí nghiệm 12 1.2 Phương pháp thí nghiệm 13 1.2.1 Chuẩn bị thí nghiệm 13  Chuẩn bị môi trường 13  Chuẩn bị thí nghiệm 13 1.2.2 Các bước tiến hành thí nghiệm 13  Thí nghiệm khử trùng mẫu cấy 13  Nhân nhanh số lượng 14 1.2.3 Xử lý số liệu 16 Chương IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 1.1 Hiệu phương pháp vô trùng mẫu cấy 17 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp iv Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ  Hiệu phương pháp vô trùng lên sức sống thân Tràm non Tràm già môi trường MS 18  Hiệu phương pháp vô trùng lên sức sống thân Tràm non Tràm già môi trường MS 18 1.2 Hiệu nồng độ BA thích hợp cho phát triển chồi 20  Số chồi gia tăng 20  Chiều cao gia tăng tương đối 23  Số gia tăng 23 1.3 Hiệu nồng độ NAA lên hình thành rễ chồi 25  Số rễ tạo thành 25  Chiều cao gia tăng .28  Số tạo thành 30  Số chồi gia tăng 30 Chương V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32 1.1 Kết luận 32 1.2 Đề nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 PHỤ LỤC 34 BẢNG ANOVA 35 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp v Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ĐBSCL Đồng sông Cửu Long EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid HgCl2 Mercury chloride (thủy ngân clorua) MS Murashige & Skoog (1962) BA – benzyladenine NAA Alpha - napthalenacetic acid IAA Indole acetic acid 2,4 - D 2, – dichlorophenooxyacetic BAP Benzylaminopurine NSKC Ngày sau cấy PP Phương pháp NCVT Nước cất vô trùng Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp vi Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1.Các phương pháp khử trùng mẫu thí nghiệm 14 Bảng 4.1 Tỉ lệ (%) mẫu phương pháp khử trùng theo độ tuổi mẫu cấy 15 ngày sau cấy 17 Bảng 4.2 Tỉ lệ (%) tạo chồi thân Tràm non Tràm già 15 NSKC 19 Bảng 4.3 Số chồi gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 20 Bảng 4.4 Tỉ lệ (%) chiều cao gia tăng tương đối chồi từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 23 Bảng 4.5 Số gia tăng chồi từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 24 Bảng 4.6 Tỉ lệ (%) tạo rễ từ mẫu môi trường MS có bổ sung NAA 45, 60, 75 ngày sau cấy 25 Bảng 4.7 Số chồi gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 27 Bảng 4.8 Tỉ lệ (%) chiều cao gia tăng tương đối chồi từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 29 Bảng 4.9 Số gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy 30 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp vii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình 4.1 Chồi xuất đoạn thân vị trí nách 18 Hình 4.2 Chồi xuất môi trường MS 15 NSKC 1919 Hình 4.3 Hiệu nồng độ BA đến tạo chồi mẫu cấy Tràm 75 ngày sau cấy 22 Hình 4.4 Chồi nghiệm thức 0,5 mg/l BA trước sau chuyển sang môi trường MS 25 Hình 4.5 Hiệu NAA lên hình thành rễ môi trường MS 26 Hình 4.6 Chồi phát triển môi trường MS có bổ sung NAA 28 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp viii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Chương I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Đặt vấn đề Cây Tràm (Melaleuca cajuputi Powell) loại thực vật có khả thích nghi nhiều vùng sinh thái khác đặc biệt vùng đất nghèo dinh dưỡng đất phèn, phèn mặn chứa nhiều độc chất nhôm, sắt giới hạn đến sinh trưởng nhiều loại nông nghiệp Rừng Tràm có vai trò quan trọng việc điều hòa khí hậu, cải tạo đất phèn, chắn sóng gió mùa lũ Ngoài ra, Tràm có giá trị kinh tế sử dụng làm vật liệu xây dựng, sản xuất bột giấy khai thác tinh dầu Trong tinh dầu Tràm loại nguyên liệu có giá trị kinh tế cao sử dụng rộng rãi ngành dược phẩm, hương liệu mỹ phẩm Hiện nay, tinh dầu Tràm tự nhiên với hàm lượng cineole cao (từ 65% trở lên) thị trường có nhu cầu lớn Nguồn cung cấp dạng tinh dầu chưa đủ giống Tràm canh tác có hàm lượng tinh dầu không ổn định Bởi tự nhiên Tràm nở hoa theo mùa thụ phấn chéo nên có phân hóa di truyền, hàm lượng tinh dầu bị biến động Việc chọn giống Tràm có hàm lượng tinh dầu cao cần thiết Để giữ đặc tính Tràm thường nhân giống vô tính Trong phương pháp nhân giống vô tính vi nhân giống phương pháp nhân giống đại sử dụng rộng rãi có nhiều ưu điểm tạo số lượng lớn thời gian ngắn, giữ đặc tính di truyền tốt mẹ Do ưu điểm phương pháp vi nhân giống đề tài: “Vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell)” nghiên cứu 1.2 Mục tiêu đề tài Xác định số giai đoạn vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell), cụ thể là: - Xác định phương pháp khử trùng thích hợp để đưa mẫu cấy vào điều kiện in vitro - Xác định môi trường thích hợp cho phát triển chồi từ mẫu thân - Xác định môi trường thích hợp cho hình thành rễ Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC Phụ bảng Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần môi trường Đa lượng MS FeEDTA Vi lượng MS Vitamin Hóa chất Hàm lượng (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 CaCl2 440 KH2PO4 170 FeSO4 7H2O 2,78 Na2EDTA 2H2O 37,3 H3BO3 6,2 MnSO4 22,3 ZnSO4 7H2O 11,5 Na2MoO4 2H2O 0,25 CuSO4 5H2O 0,025 KI 0,83 CoCl2 0,025 Pyridoxine- HCl 1,0 Nicotinic acid 1,0 Thiamine – HCl 1,0 Riboplavin 1,0 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 35 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ BẢNG ANOVA Thí nghiệm Hiệu phương pháp vô trùng mẫu cấy Phụ bảng Tỉ lệ (%) mẫu phương pháp khử trùng sau 7, 15, 30 ngày sau cấy Tràm non Nguồn biến động Tuổi mẫu cấy (A) Trung bình bình phương Giá trị F 3453,699 23,450 13814,797 443,982 3,015 443,982 18,358 0,125 73,430 147,282 20 2945,638 Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức (B) AxB Sai số Tổng cộng 44657,776 29 CV (%) = 40,17 Phụ bảng Tỉ lệ (%) tạo chồi thân Tràm non Tràm già 15 ngày sau cấy Nguồn biến động Tuổi mẫu cấy (A) Độ tự Nghiệm thức (B) AxB Sai số Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F 429,754 13,084 1719,017 135,639 135,639 32,561 130,244 32,845 4,103 0,991 656,907 20 8608,081 29 Tổng cộng CV (%) = 40,65 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 36 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Thí nghiệm Hiệu nồng độ BA thích hợp cho tạo nhân chồi từ đoạn thân môi trường MS Phụ bảng Số chồi gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 14,776 Sai số 42 104,286 Tổng cộng 48 119,061 Trung bình bình phương Giá trị F 2,463 0,992 2,483 CV (%) = 207,21 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 89,629 Sai số 36 213,348 Tổng cộng 42 302,977 Trung bình bình phương Giá trị F 14,938 2,521 5,926 CV (%) = 120,55 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 150,051 Sai số 36 492,193 Tổng cộng 42 642,244 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 37 Trung bình bình phương Giá trị F 25,009 1,728 14,476 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ CV (%) = 109,03 * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 289,878 Sai số 31 716,464 Tổng cộng 37 1006,342 Trung bình bình phương Giá trị F 48,313 2,090 23,112 CV (%) = 99,71 *75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình Trung bình phương bình phương Nghiệm thức 679,761 Sai số 27 724,857 Tổng cộng 31 1404,618 113,293 Giá trị F 4,220 26,847 CV (%) = 82,77 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 38 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Phụ bảng Tỉ lệ (%) chiều cao gia tăng tương đối chồi từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 12113,579 Sai số 42 171298,357 Tổng cộng 48 183411,936 Trung bình bình phương Giá trị F 2018,930 0,495 4078,532 CV (%) = 101,39 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương Trung bình bình phương 99,962 16,660 35 429,943 12,284 41 529,905 Giá trị F 1,356 CV (%) = 109,88 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 58418,419 Sai số 33 588385,345 Tổng cộng 39 646803,764 Trung bình bình phương Giá trị F 26409,522 0,846 31221,422 CV (%) = 105,68 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 39 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ * 60 NSKC Nguồn biến động Trung bình bình phương Độ tự Tổng bình phương 285557,232 47592,872 30 1606925,852 53564,195 36 1892483,084 Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Giá trị F 0,889 CV (%) = 109,13 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương Trung bình bình phương 344768,075 57461,346 25 1772808,853 70912,354 31 2117576,928 Giá trị F ,810 CV (%) = 104,24 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 40 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Phụ bảng Số gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng BA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 26,408 Sai số 42 146,000 Tổng cộng 48 172,408 Trung bình bình phương Giá trị F 4,401 1,266 3,476 CV (%) = 69,35 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 39,487 Sai số 35 153,257 Tổng cộng 41 192,744 Trung bình bình phương Giá trị F 6,581 1,546 4,257 CV (%) = 59,14 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 71,728 Sai số 33 169,248 Tổng cộng 39 240,976 Trung bình bình phương Giá trị F 11,955 2,402 4,978 CV (%) = 55,51 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 41 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 71,988 Sai số 30 149,486 Tổng cộng 36 221,474 Trung bình bình phương Giá trị F 11,998 2,488 4,822 CV (%) = 48,46 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 30,855 Sai số 25 147,690 Tổng cộng 31 178,545 Trung bình bình phương Giá trị F 5,142 ,905 5,680 CV (%) = 50,39 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 42 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Thí nghiệm Hiệu NAA lên phát triển chồi môi trường MS Phụ bảng 7: Tỉ lệ (%) tạo rễ từ mẫu môi trường MS có bổ sung NAA 45, 60, 75 ngày sau cấy * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 28,743 Sai số 30 35,429 Tổng cộng 34 64,171 Trung bình bình phương Giá trị F 7,186 6,085 1,181 CV (%) = 140,88 * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 83,600 Sai số 30 58,571 Tổng cộng 34 142,171 Trung bình bình phương Giá trị F 20,900 10,705 1,952 CV (%) = 101,88 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 147,029 Sai số 30 133,143 Tổng cộng 34 280,171 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 43 Trung bình bình phương Giá trị F 36,757 8,282 4,438 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ CV (%) = 118,93 Phụ bảng 8: Số chồi gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 15,576 Sai số 28 66,667 Tổng cộng 32 82,242 Trung bình bình phương Giá trị F 3,894 1,635 2,381 CV (%) = 83,48 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 10,777 Sai số 28 64,738 Tổng cộng 32 75,515 Trung bình bình phương Giá trị F 2,694 1,165 2,312 CV (%) = 71,68 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 10,736 Sai số 28 59,810 Tổng cộng 32 70,545 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 44 Trung bình bình phương Giá trị F 2,684 1,257 2,136 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ CV (%) = 64,31 * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 9,037 Sai số 28 61,024 Tổng cộng 32 70,061 Trung bình bình phương Giá trị F 2,259 1,037 2,179 CV (%) = 55,35 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 13,952 Sai số 28 63,381 Tổng cộng 32 77,333 Trung bình bình phương Giá trị F 3,488 1,541 2,264 CV (%) = 58,42 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 45 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Phụ bảng Tỉ lệ (%) chiều cao gia tăng tương đối chồi từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 6317,219 Sai số 28 20518,997 Tổng cộng 32 26836,216 Trung bình bình phương Giá trị F 1579,305 2,155 732,821 CV (%) = 98,98 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 5380,765 Sai số 28 23844,375 Tổng cộng 32 29225,140 Trung bình bình phương Giá trị F 1345,191 1,580 851,585 CV (%) = 190,70 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương Trung bình bình phương 7654,899 14452,683 28 73163,177 14979,866 32 80818,076 Giá trị F 0,965 CV (%) = 68,14 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 46 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương Trung bình bình phương 25726,554 6431,638 28 232179,018 8292,108 32 257905,572 Giá trị F 0,776 CV (%) = 121,76 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức Sai số 28 419436,238 Tổng cộng 32 477246,970 57810,732 Trung bình bình phương Giá trị F 3,488 1,541 2,264 CV (%) = 22,33 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 47 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Phụ bảng 10 Số gia tăng từ đoạn thân môi trường MS ảnh hưởng NAA 15, 30, 45, 60, 75 ngày sau cấy * 15 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 5,449 Sai số 28 121,032 Tổng cộng 32 126,481 Trung bình bình phương Giá trị F 1,362 0,315 4,323 CV (%) = 109,97 * 30 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 13,762 Sai số 28 145,334 Tổng cộng 32 159,096 Trung bình bình phương Giá trị F 3,441 ,663 5,190 CV (%) = 83,44 * 45 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 22,359 Sai số 28 217,925 Tổng cộng 32 240,283 Trung bình bình phương Giá trị F 5,590 0,718 7,783 CV (%) = 83,03 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 48 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ * 60 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 27,847 Sai số 28 372,960 Tổng cộng 32 345,112 Trung bình bình phương Giá trị F 6,962 0,565 12,325 CV (%) = 88,90 * 75 NSKC Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Nghiệm thức 15,848 Sai số 28 377,408 Tổng cộng 32 393,256 Trung bình bình phương Giá trị F 3,962 0,294 13,479 CV (%) = 84,79 Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 49 Bộ môn Sư phạm Sinh học [...]... của vi nhân giống Quy trình vi nhân giống đã được Debergh và Zimmerman (1991) làm 4 giai đoạn (không kể giai đoạn 0), mỗi giai đoạn có một chức năng riêng Sự thành công của vi c vi nhân giống phụ thuộc vào tất cả các giai đoạn In vivo Giai đoạn 0: sự chuẩn bị của cây mẹ In vitro Giai đoạn 1: tiệt trùng mẫu cấy Giai đoạn 2: nhân chồi Giai đoạn 3a: kéo dài Giai đoạn 3b: tạo rễ và tiền thuần dưỡng In vivo... Hiện nay, phương pháp vi nhân giống đã được tiến hành rất thành công trong vi c nhân nhanh các giống cây trồng, cung cấp được số lượng lớn các cây giống đồng đều trong một thời gian ngắn, trong đó có một số cây thuộc họ Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 10 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Mytaceae như cây Tràm chè (Melaleuca Alternifolia... sinh trưởng Nhìn chung các cây thuộc họ Mytaceae có thể được nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy chồi Vi c lựa chọn một phương pháp thích hợp tuỳ vào mục đích và yêu cầu của vi c nuôi cấy mô, vi nhân giống từ chồi bên là phương pháp đơn giản, các cây có nguồn gốc từ chồi bên thường có kiểu di truyền giống cây mẹ nhưng có bất lợi là cho hệ số nhân thấp (Goerge, 1993) Phương pháp nhân chồi bất định thông... với nhau do cây có kích thước nhỏ và không trồng trong đất (Nguyễn Đức Lượng và Lê Thị Thủy Tiên, 2002)  Lợi ích của nhân giống bằng phương pháp cấy mô Theo một số tác giả Nguyễn Bảo Toàn (2010); Nguyễn Đức Lượng và Lê Thị Thủy Tiên (2002); Vũ Văn Vụ (2005) nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô có các lợi ích sau: - Cây con tạo ra có đặc điểm di truyền giống cây mẹ - Nhân giống từ các mẫu cây rất nhỏ... Cần Thơ Sơ lược về kỹ thuật vi nhân giống 1.2.1 Giới thiệu Vi nhân giống là phương pháp nhân đúng kiểu cây của một kiểu gen được tuyển chọn (Nguyễn Bảo Toàn, 2010) Kỹ thuật này tạo được những cây sạch bệnh do có sự lựa chọn các đối tượng sạch bệnh đưa vào nuôi cấy, đồng thời cũng có thể xử lý mẫu cấy của các cây có mang mầm bệnh trước khi đưa vào môi trường nuôi cấy Các cây sạch bệnh này có thể được... TÀI LIỆU Đặc điểm thực vật của cây Tràm 1.1.1 Nguồn gốc và sự phân bố Khóa phân loại: (Phạm Hoàng Hộ, 2000, tập II) Ngành : Angiospermae Lớp : Magnoliopsida Bộ : Myrtales Họ : Myrtaceae Chi : Melaleuca Loài : Melaleuca cajuputi Powell Họ Sim (Myrtaceae) có tới 100 chi và hơn 3000 loài Chi Tràm (Melaleuca) gồm khoảng trên 250 loài trong đó cây Tràm (Melaleuca cajuputi Powell) có nguồn gốc từ châu Úc... thành cây con hoàn chỉnh và được chuyển ra trồng trong đất Chuyên ngành Sư phạm Sinh – Kỹ thuật nông nghiệp 11 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Khóa 33 – 2011 Trường Đại học Cần Thơ Chương III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 1.1 Phương tiện 1.1.1 Vật liệu thí nghiệm Đối tượng nghiên cứu là cây Tràm (Melaleuca cajuputi Powell) 5 - 6 tháng tuổi và các cây Tràm trên 1 năm tuổi được thu nhận từ rừng Tràm. .. Cần Thơ của cây có các túi tiết tinh dầu đặc biệt là ở lá, bộ phận chủ yếu dùng để chưng cất tinh dầu Cây Tràm có một số đặc điểm sau:  Thân Tràm là cây thân gỗ vừa, chiều cao trung bình từ 15 – 20 m, đường kính thân ở chiều cao khoảng 1,2 m (ngang ngực) là 20 – 25 cm Thân tràm thẳng, cành nhánh nhỏ nhưng gỗ thường uốn vặn, gỗ có màu xám pha hồng, gỗ giác và gỗ lõi khó phân biệt  Lá Cây Tràm có lá... nhiệt đới như Vi t Nam, Ấn Độ, Malaysia, Philippin, Indonesia, Australia, Nigieria, Braxin… Ở Vi t Nam chỉ gặp một loại Tràm duy nhất là Melaleuca cajuputi Powell, phân bố rải rác từ Thái Nguyên, Vĩnh Phúc, Nghệ An, Hà Tĩnh và tập trung nhiều ở Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên đặc biệt là ở các tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu, Tây Ninh, Đồng Tháp, Long An, Kiên Giang, Cà Mau Ở Vi t Nam, cây Tràm còn được gọi... các mẫu cây rất nhỏ - Tạo ra cây sạch bệnh - Tạo ra số lượng cây nhiều trong thời gian ngắn - Không lệ thuộc vào thời tiết hay mùa vụ - Mẫu vật có thể dự trữ lâu dài - Không đòi hỏi diện tích nhiều như duy trì cây gốc ngoài đồng ruộng - Không tốn chi phí lao động để chăm sóc cây mẹ - Vi c trao đổi giống dễ dàng - Có thể tạo ra các đột biến điểm trong quá trình nuôi cấy - Tạo cây sạch bệnh do có sự chọn ... điểm phương pháp vi nhân giống đề tài: Vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell) nghiên cứu 1.2 Mục tiêu đề tài Xác định số giai đoạn vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell), cụ thể... LƯỢC Đề tài Vi nhân giống Tràm (Melaleuca cajuputi Powell) thực nhằm xác định hiệu phương pháp khử trùng lên mẫu Tràm, xác định nồng độ BA, NAA lên trình nhân chồi tạo rễ vi nhân giống Các thí... đoạn vi nhân giống Quy trình vi nhân giống Debergh Zimmerman (1991) làm giai đoạn (không kể giai đoạn 0), giai đoạn có chức riêng Sự thành công vi c vi nhân giống phụ thuộc vào tất giai đoạn In vivo