SẢN XUẤT BÀO TỬ NẤM TRICHODERMA SPP. LÀM THUỐC TRỪ NẤM BỆNH CÂY TRỒNG

SẢN XUẤT BÀO TỬ NẤM TRICHODERMA SPP. LÀM THUỐC TRỪ NẤM BỆNH CÂY TRỒNG

http://www.ebook.edu.vn 1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP.HCM KHOA MÔI TRƯỜNG VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC W  X KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH : C73 GVHD : TS. NGUYỄN HOÀI HƯƠNG CN. ĐỖ THỊ TUYẾN SVTH : HỨA VÕ THÀNH LONG LỚP : 07CSH1 MSSV : 207111025 TP.HCM năm 2010 http://www.ebook.edu.vn 2 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, em xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô khoa Môi Trường và Công Nghệ Sinh Học đã giảng dạy và truyền đạt kiến thức cho em trong suốt những năm vừa qua để em làm tốt bài luận văn này. Em xin chân thành cảm ơn viện Sinh Học Nhiệt Đới đã giúp và tạo điều kiện cho em được học hỏi, trao đồi các kỹ năng, thao tác và tích lũy nhiều kinh nghiệm quý báu cho công việc sau này của em. Đặc biệt xinh chân thành cảm ơn cô Đỗ Thò Tuyến và cô Nguyễn Hoài Hương đã hết lòng quan tâm, chỉ bảo và hướng dẫn tận tình để em hoàn thành tốt luận văn. Xin cảm ơn các anh chò và các bạn trong viện Sinh Học Nhiệt Đới đã giúp đỡ trong suốt quá trình làm luận. Cuối cùng xin cảm ơn gia đình đã động viên, quan tâm, hỗ trợ trong quá trình làm luận văn tốt nghiệp. Trong suốt quá trình làm luận văn, em đã được tiếp cận với môi trường làm việc mới, có thêm được nhiều kiến thức, được áp dụng thực tế những gì em đã học, rèn luyện thêm về thao tác, kỹ thuật và kỹ năng làm việc để em có thể thực hiện tốt hơn trong công việc sau này. Em xin chân thành cảm ơn. http://www.ebook.edu.vn 3 MỤC LỤC TRANG LỜI CẢM ƠN 2 CHƯƠNG I : GIỚI THIỆU 9 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 10 1.2 MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI 11 1.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 11 1.4 PHẠM VI NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI 11 CHƯƠNG II : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 2.1 KHÁI NIỆM KIỂM SOÁT SINH HỌC 13 2.1.1 THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT 13 2.1.1.1 THUỐC TRỪ SÂU 13 2.1.1.2 THUỐC TRỪ NẤM 13 2.1.1.2.1 CƠ CHẾ DIỆT NẤM 14 2.1.1.2.2 ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC TRỪ NẤM 14 2.1.1.3 THUỐC TRỪ CỎ HÓA HỌC 14 2.1.1.3.1 SỰ XÂM NHẬP CỦA THUỐC VÀO CỎ 15 2.1.1.3.2 CƠ CHẾ DIỆT CỎ 15 2.1.1.3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC TRỪ CỎ 16 2.1.2 KIỂM SOÁT SINH HỌC 16 2.1.3 ĐỐI TƯNG CỦA KIỂM SOÁT SINH HỌC 14 2.1.4 PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC 31 2.1.4.1 VIRUS 31 2.1.4.1.1 TRIỆU CHỨNG NHIỄM VIRUS 32 2.1.4.1.2 CƠ CHẾ DIỆT SÂU 32 2.1.4.2 VI KHUẨN BACILLUS THURINGIENSIS (BT) 33 http://www.ebook.edu.vn 4 2.1.4.2.1 GIỚI THIỆU 33 2.1.4.2.2 CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG 34 2.1.4.3 VI NẤM 34 2.1.4.3.1 HIỆU LỰC TRÙ SÂU CỦA BEAUVERIA & METARHIZIUM 34 2.1.4.3.2 HOẠT TÍNH DIỆT SÂU 34 2.1.4.4 SINH VẬT KHÁC 35 2.1.4.4.1 ONG MẮT ĐỎ 35 2.1.4.4.2 ONG VÀNG 36 2.1.4.5 NGUYÊN TẮC CỦA KIỂM SOÁT SINH HỌC 37 2.2 TRỪ NẤM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC 38 2.2.1 CÁC BỆNH CÂY THƯỜNG GẶP DO NẤM GÂY RA 38 2.2.2 TỔNG QUAN VỀ CHẤT TRỪ NẤM SINH HỌC 43 2.3 TỔNG QUAN VỀ TRICHODERMA SPP. LÀM CHẤT TRỪ NẤM SINH HỌC 45 2.3.1 PHÂN LOẠI 45 2.3.2 ĐẶC ĐIỂM GIỐNG NẤM TRICHODERMA SPP. 46 2.3.2.1 ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, SINH TRƯỞNG CỦA TRICHODERMA SPP. 46 2.3.2.2 SINH THÁI HỌC 48 2.3.3 CƠ CHẾ HOẠT ĐỘNG CỦA TRICHODERMA SPP. 50 2.3.3.1 HIỆN TƯNG GIAO THOA 51 2.3.3.2 HOẠT ĐỘNG TIẾT ENZYME 53 1 HỆ ENZYME THỦY PHÂN CHITIN 53 2 HỆ ENZYME THỦY PHÂN CELLULOSE 54 3 CÁC HP CHẤT KHÁNG NẤM 55 http://www.ebook.edu.vn 5 2.3.4 ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY CỦA TRICHODERMA SPP. 56 2.3.4.1 NHIỆT ĐỘ 56 2.3.4.2 ÁNH SÁNG 56 2.3.5 CÁC NƠI SẢN XUẤT CHẾ PHẨM TRICHODERMA SPP. 56 CHƯƠNG III : THỰC NGHIỆM 61 3.1 MỤC ĐÍCH 3.2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 62 3.2.1 VẬT LIỆU 62 3.2.1.1 CÁC CHỦNG VI SINH VẬT DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU 62 3.2.1.2 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ 62 3.2.1.3 MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY 62 3.2.1.3.1 MÔI TRƯỜNG PGA 63 3.2.1.3.2 MT KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG GIỮA CHẾ PHẨM TRICHODERMA SPP.VÀ NẤM BỆNH 63 3.2.1.3.3 KHOÁNG CRAPEK 64 3.2.1.3.4 MÔI TRƯỜNG LÊN MEN XỐP 64 3.2.1.3.5 MÔI TRƯỜNG NHÂN GIỐNG 64 3.2.2 PHƯƠNG PHÁP 65 3.2.2.1 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG GIỮA NẤM TRICHODERMA SPP. VỚI NẤM BỆNH 65 3.2.2.2 PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN XỐP 66 3.2.2.3 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG GIỮA CHẾ PHẨM TRICHODERMA SPP. VỚI NẤM BỆNH 67 3.3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 68 3.3.1 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG GIỮA NẤM http://www.ebook.edu.vn 6 TRICHODERMA SPP. VỚI NẤM BỆNH 68 3.3.2 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG GIỮA CHẾ PHẨM TRICHODERMA SPP. VỚI NẤM BỆNH 76 3.3.3 PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN XỐP 83 3.4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 86 http://www.ebook.edu.vn 7 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 : sơ đồ kiểm soát sinh học 17 Hình 2.2 : vi khuẩn Bacillus thuringiensis 33 Hình 2.3 : chu trình phát triển của ong mắt đỏ 35 Hình 2.4 : chu trình phát triển của ong vàng 36 Hình 2.5 : nấm T. harzianum 45 Hình 2.6 : bào tử của T. reesei 47 Hình 2.7 : nấm T.viridae 48 Hình 2.8 : nấm T.reesei 49 Hình 2.9 : sự ức chế của Trichoderma đối với nấm bệnh Pythium 50 Hình 2.10 : T,harzianum quấn quanh Rhizoctonia solani 51 Hình 2.11 : Rhizoctonia aolani dưới KHV sau khi T. mycoparasitic được gỡ bỏ 52 Hình 3.1 : phương pháp lên men xốp 67 Hình 3.2 : sự ức chế của T.harzianum đối với nấm bệnh Fusarium 69 Hình 3.3 : sự ức chế của T.harzianum đối với nấm bệnh Phytophthora 70 Hình 3.4 : sự ức chế của T.reesei đối với nấm bệnh Phytophthora 72 Hình 3.5 : sự ức chế của T. reesei đối với nấm bệnh Fusarium 73 Hình 3.6 : sự ức chế của chế phẩm T.harzianum đối với Fusarium 77 Hình 3.7 : sự ức chế của chế phẩm T.harzianum đối với nấm bệnh Phytophthora 78 Hình 3.8 : sự ức chế của chế phẩm T. reesei đối với nấm bệnh Fusarium 80 Hình 3.9 : sự ức chế của chế phẩm T. reesei đối với nấm bệnh Phytophthora 81 Hình 4.0 : chế phẩm nấm T.reesei 84 Hình 4.1 : chế phẩm nấm T.harzianum 84 http://www.ebook.edu.vn 8 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 : Các tác nhân gây hại của cây trồng 18 Bảng 2.2 : các bệnh cây thường gặp do nấm gây ra 38 Bảng 2.3 : Hiệu lực của Saccharomyces và Zygosaccharomyces ức chế các nấm gây bệnh hại cây trồng 44 Bảng 2.4 : các nơi sản xuất chế phẩm Trichoderma spp. trừ nấm bệnh hại cây trồng 57 Bảng bố trí thí nghiệm 66 Bảng 3.1 : Đường kính khuẩn lạc khi có Trichoderma spp. 74 Bảng 3.2 : Đường kính khuẩn lạc Fusarium sau khi rắc chế phẩm Trichoderma harzianum và Trichoderma reesei 82 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1 : Tiến hành thí nghiệm đối kháng trực tiếp 65 Sơ đồ quy trình thực hiện phương pháp lên men xốp 66 Sơ đồ 3.2 : Tiến hành khảo sát sự ức chế của chế phẩm với nấm bệnh 68 http://www.ebook.edu.vn 9 CHÖÔNG I GIÔÙI THIEÄU http://www.ebook.edu.vn 10 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Sự tăng trưởng của hóa học hóa nông nghiệp và thâm canh sản xuất đang thay đổi rất nhiều hoàn cảnh sinh thái và môi trường chúng ta đang sống. nó đang chuyển dòch về phía tiêu cực. Số lượng thuốc hóa học trừ sâu có độ độc cao ngày càng lớn, nhưng hiệu quả lại thấp. Phần lớn thuốc tỏa rộng ra không mục đích gây ô nhiễm môi trường nghiêm trọng. trong bất cứ quần lạc nông nghiệp nào. Chính vì thế, chiến lược mới phòng trừ các loài gây hại cho hệ sinh thái nông nghiệp được thực hiện trên cơ sở tổng hợp, phối hợp các hoạt động của các quần thể kí sinh và các loài có ích cho nông nghiệp, thuốc bảo vệ thực vật hiệu quả cao và thuốc trừ sâu sinh học trên nền móng thâm canh cao. Một trong những hướng cơ bản của phương pháp sinh học là tăng cường sản xuất các chế phẩm sinh học. Trên cơ sở sinh học và di truyền học, sẽ làm cho các chế phẩm sinh học có phổ tác động rộng hơn bằng con đường đưa vào vi sinh vật những gen bổ sung, tổ hợp chúng, khuếch đại và tạo các dòng vô tính độc tố cao. Hiện nay, phòng trừ dòch hại cây trồng bằng biện pháp sinh học được đẩy mạnh nghiên cứu ở nhiều nước, được coi như là một lónh vực quan trọng. Phòng trừ bằng sinh học đối với bệnh hại chủ yếu là khai thác và sử dụng khả năng đối kháng của một số loại nấm đối với các loại nấm gây hại cây trồng. Nhiều công trình nghiên cứu về nấm Trichoderma và sản xuất chế phẩm để hạn chế những nấm gây hại cho cây trồng như nấm Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium, Pythium, Verticillium và Botrytis gây bệnh trên lúa, ngô, và một số cây trồng khác đã thu được những kết quả rất khả quan. Tuy nhiên, nấm đối kháng là một tác nhân sinh học, nó có những điều kiện sống nhất đònh và chỉ phát huy được hiệu quả phòng trừ bệnh ở những điều kiện nhất đònh. Trong khi đó, thường do khả năng thích [...]... nâm Trichoderma spp vào lónh vực nông nghiệp, tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài : “ sản xuất bào tử nấm Trichoderma spp làm thuốc trừ nấm bệnh cây trồng 1.2 Mục đích của đề tài Tìm hiểu việc ứng dụng bào tử Trichoderma trừ nấm hại cây trồng và phương pháp sản xuất bào tử bằng lên men thể rắn 1.3 Nội dung nghiên cứu • Tổng quan về kiểm soát sinh học và sử dụng bào tử Trichoderma trừ nấm bệnh cây trồng. .. rắn sản xuất bào tử Trichoderma • Khảo sát hoạt tính trừ nấm bệnh của bào tử Trichoderma invitro 1.4 Phạm vi nghiên cứu của đề tài • Các chủng nấm đối kháng Trichoderma spp • Các chủng nấm bệnh gây hại cây trồng http://www.ebook.edu.vn 11 CHƯƠNG II TỔNG QUAN TÀI LIỆU http://www.ebook.edu.vn 12 2.1 KHÁI NIỆM KIỂM SOÁT SINH HỌC 2.1.1 THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT 2.1.1.1 THUỐC TRỪ SÂU Thuốc trừ sâu là 1 loại thuốc. .. chống lại các trường hợp nhiễm nấm Thuốc diệt nấm có 2 loại là tiếp xúc và hấp thụ Thuốc diệt nấm tiếp xúc giết chết nấm khi được phun trên bề mặt bò nhiễm nấm Loại hấp thụ phìa được nấm hấp thụ trước khi có tác động làm chết nấm 2.1.1.2.1 CƠ CHẾ DIỆT NẤM BỆNH • Thuốc diệt nấm khi tiếp xúc với nấm gây bệnh, nó phá vỡ tế bào nấm bệnh, giết chết chúng Thuốc diệt nấm được nấm bệnh hấp thụ thì khi vào trong... ngăn Sợi nấm và bào tử qua đông trên xác cây bệnh, mùa xuân năm sau vỏ bào tử mở miệng, các bào tử bay ra ngoài, lây lan nhờ gió Cuống bào tử mọc chùm Đốm nâu màu nâu nhạt, không Bệnh thường phân nhánh, bào tử dạng phát sinh vào đuôi, không mang nhiều Cercospora brunkii tháng 5-10 vách ngăn Nấm bệnh qua đông trong mô bệnh bằng sợi nấm, năm sau bào tử lây lan và xâm nhiễm Actinonema rosae Đóa bào tử mọc... thành phân m sinh bào tử Phân sinh bào tử đơn bào không b màu hình trứng, có 1 núm ệ nhỏ ở đầu Trong nước n phân sinh bào tử tạo h thành các du động bào tử hoặc nảy mầm trực tiếp xâm nhiễm gây bệnh Lớp : bào tử xoang, http://www.ebook.edu.vn 18 Septoria Bộ : bào tử cầu chrysanthemella Khô héo Vỏ bào tử hình cầu đỉnh có miệng, đường kính 70130 μm, màu nâu đến đen Cuống bào tử ngắn, bào tử hình sợi không... gây hại cây trồng, vật nuôi và truyền bệnh cho người Phá hoại môi trường sống xung quanh Chúng làm giảm năng suất, phẩm chất nông sản Thuốc trừ sâu hóa học là các loại hợp chất hóa học được dùng để tiêu diệt các loại sâu bệnh, côn trùng gây hại cho cây trồng Thuốc trừ sâu sinh học là loại thuốc trử sâu dựa trên cơ sở vi khuẩn, virus hay vi nấm để diệt trừ sâu bệnh, côn trùng gây hại cho cây trồng CƠ... cho cây trồng thay vì sử dụng các loại thuốc trừ sâu hóa học làm ảnh hưởng tới môi trường KSSH được trình bày tóm tắt theo sơ đồ trên hình 2.1 http://www.ebook.edu.vn 16 Thuốc BVTV Thuốc thuốc trừ sâu thuốc trừ nấm thuốc trừ cỏ trừ dòch hại khác Thảo sinh sinh sinh thảo mộc học học học mộc học vi nấm chất vi độc khuẩn chất độc vi virus khuẩn vi vi vi nấm khuẩn hạt Bt NPV, GV xạ củ khuẩn Metarhizium nấm. .. giết chết sâu 2.1.1.2 THUỐC TRỪ NẤM http://www.ebook.edu.vn 13 Thuốc trừ nấm là 1 trong 3 phương pháp chính để kiểm soát dòch hại – trong trường hợp này là kiểm soát nấm trong nông nghiệp Nó có thể là thuốc trừ nấm sinh học trên cơ sở dùng vi nấm diệt nấm bệnh, hay nó có thể là các lọai hợp chất hóa học được sử dụng để ngăn chặn sự phát triển của các loại nấm bệnh Thuốc diệt nấm cũng được dùng để chống... trong lá bệnh, xác cây hàng năm bệnh bằng sợi nấm Bào tử nảy mầm nhờ gió, nước mưa, xuyên mô lá, Oidium chrysanthemi Nấm kí sinh trên là dùng Phấn trắng vòi hút chất dinh dưỡng trong tế bào là, sau đó mọc cuống bào tử và bào tử Bào tử hình bầu dục, hình trứng, không màu Giới : nấm Thối rễ vàng Lớp : nấm bất toàn Fusarium oxysporum lá Bộ : moniliales Họ : Tuberculariaceae Loài Fusarium oxysporum Là nấm sợi... oxysporum Là nấm sợi đa bào, màu trắng, sinh sản vô tính, http://www.ebook.edu.vn 20 tạo ra 2 loại bào tử : lớn và nhỏ Bào tử lớn hình thành từ cành bào tử phân nhiều nhánh xếp thành tầng Bào tử nhỏ hình trứng, bầu dục, dài hay hình quả thận, hình thành trong bọc giả trên cành bào tử không phân hánh trên sợi nấm Nấm phát triển ở nhiệt độ 25-300C, là loại nấm sống trong đất Loài nấm này gồm trên 100 chủng . nâm Trichoderma spp. vào lónh vực nông nghiệp, tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài : “ sản xuất bào tử nấm Trichoderma spp. làm thuốc trừ nấm bệnh cây trồng. dụng bào tử Trichoderma trừ nấm bệnh cây trồng • Thực nghiệm về quy trình lên men thể rắn sản xuất bào tử Trichoderma • Khảo sát hoạt tính trừ nấm bệnh