- Thiết lập quần thể tại vùng rễ cây: Trichoderma đã được phân lập từ rễ cây và cĩ kha năng dùng vào việc phịng trừ sinh học tại vùng rễ cây bị bệnh Hiệu
CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM
THỰC NGHIỆM
3.1. Mục đích
• Khảo sát hoạt tính đối kháng của Trichoderma spp. giống gốc • Sản xuất bào tử bằng phương pháp lên men thể rắn
• Khảo sát hoạt tính đối kháng của bảo tử Trichoderma sản xuất bằng phương pháp lên men thể rắn
3.2 Vật liệu và phương pháp
3.2.1 Vật liệu
3.2.1.1 Các chủng vi sinh vật dùng trong nghiên cứu
3.2.1.1.1 Các chủng nấm mốc Trichoderma @ Trichoderma harzianum @ Trichoderma reesei 3.2.1.1.2 Các chủng nấm bệnh cây @ Fusarium spp. @ Phytophthora sp.
Các chủng nấm do viện sinh học nhiệt đới cung cấp
3.2.1.2 Dụng cụ và thiết bị
3.2.1.2.1 Dụng cụ
Các dụng cụ thủy tinh thường sử dụng trong phân tích của phịng thí nghiệm
3.2.1.2.2 Thiết bị
Nồi hấp Tommy-SS-325-, Nhật Bản Tủ sấy Binder, Đức
Tủ cấy Telstar AV30/70 Tủ ấm
3.2.1.3 Mơi trường nuơi cấy
3.2.1.3.1 Mơi trường nuơi cấy nấm bệnh, Trichoderma và khảo sát khả năng đối kháng giữa nấm Trichoderma với nấm gây bệnh : mơi trường PGA ( Potatoes kháng giữa nấm Trichoderma với nấm gây bệnh : mơi trường PGA ( Potatoes Giucose Agar )
Glucose 20g Agar 20g Nước cất 1000ml
b. Cách tiến hành
Khoai tây gọt vỏ, cắt nhỏ, nấu chín. Chiết dịch khoai tây và lọc bỏ tinh bột. Sau đĩ cho glucose vào dịch khoai tây từ từ và khuấy liên tục trên bếp cho mau tan, sau đĩ cho agar vào và tiếp tục khuấy. Khử trùng ở 1210C trong 15 phút.
3.2.1.3.2 Mơi trường khảo sát khả năng đối kháng giữa chế phẩm Trichoderma và nấm bệnh a. Thành phần mơi trường Giá đỗ 200g Saccharose 30g Pepton 2g MgSO4 0.5g KH2PO4 1g Nước cất 1000ml Agar 20g pH 5-5.5 b. Cách tiến hành
Giá đỗ rửa sạch, nấu trong nước cất 30 phút, lọc lất nước. Cho saccharose và các thành phần khác vào và khuấy đều trên bếp cho tan hết. Tiếp tục cho agar vào khuấy đều. Đem khử trùng ở 1210C trong 15 phút.
3.2.1.3.3 Khống Crapek
NaNO3 3.5g
K2HPO4 1.5g MgSO4.7H20 0.5g
Saccharose 30g
KCI 0.5g
Nước cất 1000 ml
3.2.1.3.4 Mơi trường lên men xốp
(thành phần cho 1 bình mơi trường lên men xốp ) cám gạo 10g trấu 5g cám mì 5g khống Crapek 10ml độ ẩm 55% hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút
3.2.1.3.5 mơi trường nhân giống
a.thành phần mơi trường
Thĩc 20g
Khống crapek 20ml
Độ ẩm 55%
hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút
b.cách tiến hành
Cho thĩc vào bình tam giác 250 ml, thêm khống crapek vào và đem hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút. Sau đĩ cấy Trichoderma vào và nuơi ở nhiệt độ 30- 320C trong 5-7 ngày.
3.2.2 PHƯƠNG PHÁP
3.2.2.1 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA NẤM