khảo sát khả năng sinh tổng hợp và đặc điểm chất kháng sinh của chủng trichoderma cf aureoviride sau đột biến

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Phan Văn Giác KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP VÀ ĐẶC ĐIỂM CHẤT KHÁNG SINH CỦA CHỦNG TRICHODERMA CF.AUREOVIRIDE SAU ĐỘT BIẾN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Phan Văn Giác KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP VÀ ĐẶC ĐIỂM CHẤT KHÁNG SINH CỦA CHỦNG TRICHODERMA CF.AUREOVIRIDE SAU ĐỘT BIẾN Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THANH THỦY Thành phố Hồ Chí Minh - 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn kết nghiên cứu riêng tôi; số liệu luận văn trung thực, chưa công bố kết thể qua thí nghiệm Tác giả luận văn Phan Văn Giác LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành lận văn này, xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thanh Thủy – Người trực tiếp định hướng, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài Xin ghi nhớ công ơn tất Thầy, Cô khoa Sinh học-Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh truyền đạt kiến thức cho suốt trình học tập Xin chân thành cảm ơn bạn học viên cao học khóa 19 20, đặc biệt bạn Trần Thị Minh Định, Nguyễn Xuân Đức, Trần Thị Ái Liên, Nguyễn Thị Thu Nga nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới Sở Giáo dục Đào tạo Tây Ninh, đồng nghiệp Trường THPT Lộc Hưng, THPT Nguyễn Trãi giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học Cuối xin gửi lòng biết ơn đến người thân gia đình yêu thương ủng hộ vượt qua khó khăn trình học tập thực luận văn Tháng 10 năm 2011 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG 11 PHẦN I MỞ ĐẦU 13 1.Lý chọn đề tài 13 Mục đích nghiên cứu 14 Nhiệm vụ nghiên cứu 14 Thời gian địa điểm nghiên cứu 14 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 15 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÁC CHẤT KHÁNG SINH 15 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu chất kháng sinh [9],[20] 15 1.1.2 Đặc điểm chất kháng sinh [7],[21] 16 1.1.3 CKS từ nấm sợi 18 1.1.4 Cơ chế tác động CKS [4], [9], [20] 19 1.1.5 Ứng dụng chất kháng sinh 20 1.2 VI NẤM TRICHODERMA VÀ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP CHẤT KHÁNG SINH 22 1.2.1 Phân loại vi nấm Trichoderma [6],[7],[13] 22 1.2.2 Phân bố chi Trichoderma 22 1.2.3 Đặc điểm hình thái 23 1.2.4 Các chất có hoạt tính sinh học từ Trichoderma 24 1.2.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng CKS Trichoderma nông nghiệp giới Việt Nam 27 1.3 GÂY ĐỘT BIẾN Ở VI NẤM BẰNG TIA UV 28 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 ĐỐI TƯỢNG 31 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 31 2.3 CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG 32 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 3.1 Khảo sát đặc điểm chủng Trichoderma cf.aureoviride kết gây đột biến chủng T cf.aureoviride tia tử ngoại (tia UV) 41 3.1.1 Đặc điểm chủng Trichoderma cf.aureoviride 41 3.1.2 Kết gây đột biến chủng T cf.aureoviride tia tử ngoại .42 3.2 Khảo sát điều kiện MT ảnh hưởng đến hoạt tính kháng sinh chủng 48 3.3 Động học trình lên men sinh tổng hợp CKS chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 62 3.4 Khảo sát đặc điểm dịch KS thô 65 3.4.1 Độ bền nhiệt .65 3.4.2 Độ bền pH 66 3.4.3 Độ bền thời gian 68 3.4.4 Tách chiết CKS dung môi hữu 69 3.5 Tác dụng dịch chiết KS thô với VSV kiểm định 73 3.5.1 Tác dụng dịch chiết KS thô với nấm gây bệnh trồng 73 3.5.2 Tác dụng dịch chiết KS thô với tác nhân gây bệnh cho người 73 PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 76 I KẾT LUẬN: 76 II ĐỀ NGHỊ: 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO 78 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CKS chất kháng sinh G (+) Gram dương G (-) Gram âm KL khuẩn lạc MT môi trường NS nấm sợi VSV vi sinh vật VK vi khuẩn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Đặc điểm hình thái T viride 14 Hình 1.2 Tác động tia tử ngoại tạo dimer thimine 20 Hình 3.1 Hình thái đại thể chủng T cf.aureoviride 34 Hình 3.2 Hình thái vi thể chủng T cf.aureoviride 35 Hình 3.3 Hoạt tính ĐK với B subtilis chủng gốc T cf.aureoviride 35 Hình 3.4 Hình thái đại thể chủng ĐB108 38 Hình 3.5 Hình thái vi thể chủng ĐB108 39 Hình 3.6 Hình thái đại thể chủng ĐB2.23 40 Hình 3.7 Hình thái vi thể chủng ĐB2.23 40 Hình 3.8 Hình thái đại thể chủng ĐB283 41 Hình 3.9 Hình thái vi thể chủng ĐB283 41 Hình 3.10 Ảnh hưởng MT đến hoạt tính KS chủng T cf.aureoviride 43 Hình 3.11 Ảnh hưởng MT đến hoạt tính KS chủng ĐB108 43 Hình 3.12 Biểu đồ ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 44 Hình 3.13 Biểu đồ ảnh hưởng môi trường đến hoạt tính ĐK chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 45 Hình 3.14 Biểu đồ ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 46 Hình 3.15 Đồ thị ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả sinh tổng hợp CKS chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 49 Hình 3.16 Biểu đồ ảnh hưởng độ mặn môi trường đến khả sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 49 Hình 3.18 Biểu đồ ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 51 Hình 3.19 Đồ thị ảnh hưởng nguồn ni tơ đến khả hình thành CKS chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 52 Hình 3.20 Biểu đồ ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 54 Hình 3.21 Đồ thị ảnh hưởng pH đến khả sinh tổng hợp CKS chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 54 Hình 3.22 Biểu đồ ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 56 Hình 3.23 Đồ thị ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh tổng hợp CKS chủng T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 56 Hình 3.24 Đồ thị động thái lên men chủng T cf.aureoviride 59 Hình 3.25 Đồ thị động thái lên men chủng đột biến ĐB108 59 Hình 3.26 Đồ thị ảnh hưởng pH đến độ bền KS dịch lên men chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 63 Hình 3.27 Đồ thị ảnh hưởng thời gian đến độ bền dịch KS thô chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 64 Hình 3.28 Độ bền thời gian dịch KS thô chủng T cf.aureoviride 64 Hình 3.29 Độ bền thời gian dịch KS thô chủng ĐB108 64 Hình 3.30 Đồ thị thể hoạt tính KS dung môi dịch lên men sau lắc chủng T cf.aureoviride 66 Hình 3.31 Đồ thị thể hoạt tính KS dung môi dịch lên men sau lắc chủng đột biến ĐB108 66 Hình 3.32 Hoạt tính KS dung môi ethyl acetate dịch lên men sau lắc chủng T cf.aureoviride 67 Hình 3.33 Hoạt tính KS dung môi diethyl ether dịch lên men sau lắc chủng ĐB108 67 Hình 3.34 Khả kháng Candida albicans dịch lên men chủng T cf.aureoviride 70 Hình 3.35 Khả kháng Staphylococcus aureus kháng KS chủng ĐB108 chủng T cf.aureoviride 70 Hình 3.36 Khả kháng Klesbsia sp chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 71 ngày 21 ngày 42 ngày Hình 28 Độ bền thời gian dịch KS thô chủng T cf.aureoviride ngày 21 ngày 42 ngày Hình 29 Độ bền thời gian dịch KS thô chủng ĐB108 Qua kết trên, ta thấy dịch lên men hai chủng NS nghiên cứu có hoạt tính ĐK cao tuần đầu, từ tuần thứ trở hoạt tính KS hai dịch lên men giảm Tuy nhiên, đồ thị ta thấy hoạt tính dịch lên men mức sau tuần, điều chứng tỏ CKS có dịch lên men bền với thời gian Đây đặc tính giúp bảo quản sử dụng CKS thuận lợi hoạt tích KS dịch lên men bền thời gian dài (42 ngày thể hoạt tính KS) 3.4.4 Tách chiết CKS dung môi hữu Các chủng nấm nghiên cứu nuôi điều kiện tối ưu Sau đó, tiến hành lọc để loại bỏ sinh khối thu dịch lên men Bổ sung thêm loại dung môi Ehtyl acetate, Cloroform, Diethyl ether, n-Hexan, n-Butanol theo tỉ lệ : Lắc bình tam giác 200 vòng/phút để CKS hòa tan vào dung môi Kiểm tra hoạt tính KS dung môi dịch lên men sau lắc phương pháp đục lổ Kết trình bày bảng 3.14 Bảng 3.14 Hoạt tính dung môi dịch lên men sau lắc Loại dung môi sử dụng Hoạt tính ĐK (D-d,mm) ĐB108 T cf.aureoviride Dung môi sau lắc Đối chứng Dịch lên men sau lắc 21,0 Dung môi Dịch lên sau men sau lắc lắc 27,02 Ethyl acetate 23,67 0,00 24,50 26,83 Cloroform 17,00 19,83 18,67 27,33 Diethyl ether 11,33 17,33 2.950 16,50 n-Hexan 0,00 19,17 0,00 26,50 n-Butanol 16,67 14,50 27,83 26,83 Hình 3.30 Đồ thị thể hoạt tính KS dung môi dịch lên men sau lắc chủng T cf.aureoviride Hình 3.31 Đồ thị thể hoạt tính KS dung môi dịch lên men sau lắc chủng đột biến ĐB108 Dung dịch Dung môi Hình 3.32 Hoạt tính KS dung môi ethyl acetate dịch lên men sau lắc chủng T cf.aureoviride Dung môi Dung dịch Hình 3.33 Hoạt tính KS dung môi diethyl ether dịch lên men sau lắc chủng đột biến ĐB108 (tỉ lệ : 1) Sau kiểm tra kết tạo vòng vô khuẩn dung môi dịch lên men sau lắc thời giờ, nhận thấy: - Đối với chủng T cf.aureoviride, sử dụng ethylacetate toàn KS có dịch lên men hòa tan dung môi, dịch lên men sau lắc với dung môi không cò hoạt tính kháng sinh Như vậy, KS dịch lên men chủng ban đầu T cf.aureoviride sử dụng ethylacetate làm dung môi tách chiết - Đối với chủng đột biến ĐB108, loại dung môi có khả hòa tan CKS dịch lên men, trừ n–hexan, dietyl ether sau lắc với dịch lên men có khả hình thành vòng vô khuẩn lớn với VSV kiểm định Tuy nhiên, dung dịch lên men sau lắc có khả hình thành vòng vô khuẩn, điều chứng tỏ dịch lên men CKS Do đó, tiến hành thử tỉ lệ thể tích dung môi/dịch lên men khác Kết trình bày bảng 3.16 Từ bảng này, so sánh hoạt tính ĐK tỉ lệ dung môi dịch lên men khác nhau, nhận thấy tỉ lệ dung môi diethyl ether : dịch lên men = : có khả hòa tan chất KS có dịch lên men tốt giấy lọc tẩm dung môi tạo vòng vô khuẩn lớn Tỉ lệ phù hợp để thực việc tách chiết CKS có dịch lên men dung môi hữu Kết thể bàng 3.15 Bảng 3.15 Hoạt tính kháng sinh dung môi dịch lên men sau lắc chủng ĐB108 Tỉ lệ (dung môi: dịch lên men) Hoạt tính KS chủng ĐB108 (D-d,mm) Dịch lên men sau lắc 1:1 Dung môi sau lắc 38,52 2:1 39,83 10,58 3:1 39,33 6,33 4:1 39,78 0,00 18,53 3.5 Tác dụng dịch chiết KS thô với VSV kiểm định 3.5.1 Tác dụng dịch chiết KS thô với nấm gây bệnh trồng Dịch lọc nuôi cấy điều kiện tối ưu lọc để loại bỏ sinh khối, thu dịch lên men, điều chỉnh pH tới 7.0 – 7.5 sử dụng phương pháp 2.4.6 để thử tác dụng dịch chiết KS thô với nấm gây bệnh trồng Kết trình bày bảng sau: Bảng 3.16 Hoạt tính đối kháng dịch KS thô với nấm gây bệnh trồng Nấm gây bệnh trồng Khả ĐK dịch KS thô T cf.aureoviride ĐB108 Fusarium oxysporum - - Phythophthora sp - - Sclerotium sp - - Rhizoctonia sp - - Dịch chiết KS thô hai chủng nghiên cứu khả kháng loại nấm gây bệnh trồng thí nghiệm Điều giải thích chất KS hai chủng tác dụng đối kháng với chủng nấm gây bệnh trồng Nguyên nhân chế đối kháng hai chủng Trichoderma tác nhân gây bệnh trồng tổng hợp nhiều chế khác nhau, có tác động dịch lên men không đủ yếu tố ngăn chặn phát triển nấm gây bệnh trồng 3.5.2 Tác dụng dịch chiết KS thô với tác nhân gây bệnh cho người Các chủng nấm nghiên cứu nuôi điều kiện tối ưu Sau đó, tiến hành lọc để loại bỏ sinh khối thu dịch lên men Sử dụng phương pháp 2.4.6 để xác định hoạt tính đối kháng dịch KS thô số chủng nấm gây bệnh cho người Bảng 3.17 Hoạt tính đối kháng dịch KS thô với tác nhân gây bệnh cho người VSV gây bệnh cho người Khả ĐK dịch KS thô (D-d,mm) T cf.aureoviride ĐB108 Candida albicans 20,15 24,30 Staphylococcus aureus 14,50 24,70 Pseudomonas aeoginosa - - Klesbsia sp 20,20 22,5 Từ kết bảng 3.17 cho thấy dịch KS thô có khả ức chế số chủng VSV gây bệnh người Dịch lên men chủng nghiên cứu có khả ức chế tác nhân gây bệnh kháng KS Đây đặc điểm quý chủng NS nghiên cứu đó, khả kháng S aureus chủng ĐB108 tăng lên nhiều so với chủng ban đầu (24,7mm so với 14,5mm), khả kháng C.albicans chủng ĐB108 tăng cao so với chủng ban đầu Từ đó, ứng dụng CKS từ dịch lên men để ức chế VSV gây bệnh Hình 3.34 Khả kháng Candida albicans dịch lên men chủng T cf.aureoviride A B Hình 3.35 Khả kháng Staphylococcus aureus kháng KS chủng ĐB108 (A) chủng T cf.aureoviride (B) A B Hình 3.36 Khả kháng Klesbsia sp chủng T cf.aureoviride (A) chủng ĐB108 (B) PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ I KẾT LUẬN: Khảo sát đặc điểm hình thái chủng gốc ban đầu Trichoderma cf.aureoviride khảo sát khả sinh CKS nó, chủng có khả sinh CKS mạnh (D-d = 27mm) Gây đột biến chủng Trichoderma cf.aureoviride tia UV thu 75 chủng sau đột biến Kết khảo sát khả sinh CKS chủng sau đột biến sau: có 9/75 chủng có hoạt tính KS tăng (chiếm 12%), 31/75 chủng có hoạt tính giảm (chiếm 41,3%) có 35/75 chủng khả sinh CKS (chiếm 46,7%) Như vậy, tia UV có tác động đến khả sinh CKS chủng ban đầu, chiều hướng chung làm giảm làm khả sinh CKS chủng ban đầu Qua khảo sát chọn lọc chủng nấm sợi đột biến có khả tổng hợp chất kháng sinh cao chủng ban đầu chọn chủng ĐB108 có khả sinh tổng hợp CKS cao chủng ban đầu từ 14,8% chọn để nghiên cứu tiếp Đã khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường khả tổng hợp chất kháng sinh chủng chọn lọc: − Chủng T cf.aureoviride: môi trường MEA, nồng độ muối NaCl 3.0%, nguồn cacbon galactose, nguồn nitơ bột đậu nành, độ pH 6,0, nhiệt độ 29oC − Chủng đột biến ĐB108: môi trường PGA, nồng độ muối NaCl 0.0%, nguồn cacbon rỉ đường, nguồn nitơ cao thịt, độ pH 7,0, nhiệt độ 26oC Dung môi ethyl acetate tỉ lệ dung môi: dịch lên men = : đảm bảo hòa tan hầu hết CKS dịch lên men chủng T cf.aureoviride, chủng đột biến ĐB108 dung môi thích hợp diethyl erther tỉ lệ dung môi: dịch lên men = : Đã khảo sát tính chất dịch KS thô từ môi trường lên men chủng, kết sau: − Dịch lên men hai chủng, chủng ban đầu T cf.aureoviride chủng đột biến ĐB108 bền với nhiệt độ, pH đảm bảo hoạt tính dịch lên men không thay đổi từ 4,0 – 8,0, sau thời gian 14 ngày hoạt tính dịch lên men bắt đầu giảm đến ngày 42 hoạt tính mạnh (D-d > 20,0mm) − Dịch lên men thô chủng T cf.aureoviride chủng ĐB108 không ức chế phát triển nấm gây bệnh trồng đĩa petri Chúng có khả ức chế, tạo vòng vô khuẩn Candida albicans, Staphylococcus aureus Klesbsia sp điều kiện thí nghiệm Trong đó, hoạt tính dịch lên men Candida albicans hai chủng mạnh II ĐỀ NGHỊ: Tiếp tục thử nghiệm tác dụng dịch lên men CKS với Candida albicans thực tiễn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Khưu Phương Yến Anh (2007), Nghiên cứu khả sinh enzyme cellulase số chủng nấm sợi phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm TP HCM Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB Khoa học kỹ thuật Nguyễn Lân Dũng (1983), Một số sản phẩm vi nấm, NXB Khoa học kỹ thuật Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2007), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Thạch, Phạm Văn Ty (1978), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật (tập 3), NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 356-369 Hồ Huỳnh Thùy Dương (2000), Sinh học phân tử, NXB Giáo dục Nguyễn Thành Đạt (2005), Cơ sở sinh học vi sinh vật-tập 1,2, Nhà xuất Đại học Sư phạm Hà nội, trang 196-203, 270 Bùi Xuân Đồng, Hà Huy Kế (1999), Nấm mốc phương pháp phòng chống, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Thành Đạt (2005), Cơ sở sinh học vi sinh vật, NXB Giáo dục 10 Đỗ Thu Hà (2004), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Quảng Nam-Đà Nẵng, Luận án Tiến sĩ chuyên ngành Vi sinh học, trang 15-26, 45-50 11 Bùi Việt Hà (2006), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học, trang 66-68, 113-115 12 Trương Phước Thiên Hoàng (2007), Khảo sát số hệ enzyme thủy phân amylase, cellulose, pectinase thu từ ba chủng Trichoderma phân lập từ miền Đông Nam Bộ, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường đại học KHTN-Đại học Quốc gia TP HCM, trang 13 Đinh Minh Hiệp (2010), Nghiên cứu enzyme chitinase β-glucanase từ vi nấm Trichoderma spp khả kiểm soát sinh học nấm gây bệnh thực vật, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Sinh học nhiệt đới-Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, trang 3-19 14 Đinh Minh Hiệp, Phạm Thị Ánh Hồng, Nguyễn Tiến Thắng, Ngô Kế Sương (2008), Khảo sát khả đối kháng in vitro Chủng nấm Trichoderma loài nấm gây bệnh trồng (Rhizotocnia solani, Sclerotium rolfsii, Phytophthora palmivora), Tạp chí Khoa học Công nghệ, trang 93-99 15 Đinh Minh Hiệp, Lê Đình Đôn, Nguyễn Tiến thắng, Ngô Kế Sương (2007), Khảo sát hoạt tính enzyme chitinase, -glucanase, cellulase, pectinase, amylase, protease chủng Trichoderma phân lập Việt Nam, Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc 2007, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 708-710 16 Đinh Minh Hiệp, Phạm Nguyễn Thanh Thảo, Nguyễn Văn Thanh, Nguyễn Tiến Thắng, Ngô Kế Sương (2008), Thu nhận chitinase từ chủng Trichoderma TĐ14 khảo sát khả kháng vi nấm Camdida albicans, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ IV, trang 48-51 17 Nguyễn Đức Lượng (CB), Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết (2006), Thí nghiệm công nghệ sinh học – Tập (Thí nghiệm vi sinh vật học), NXB Đại học Quốc gia 18 Nguyễn Đức Lượng (2004), Công nghệ vi sinh vật – Tập 2, NXB Đại học Quốc gia TP HCM 19 Trần Thị Thanh (2007), Công nghệ vi sinh, NXB Giáo dục, trang 20 Trần Thanh Thủy (1998), Hướng dẫn thực hành vi sinh vật học, NXB Giáo dục 21 Trần Thanh Thủy (2009), Khảo sát khả sinh kháng sinh số chủng nấm sợi phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp sở-Trường Đại học Sư phạm TP Hồ Chí Minh 22 Trần Linh Thước, Phạm Phú Phùng, Lê Duy Thắng (2000), Thực tập vi sinh vật, Tủ sách Đại học KHTN-ĐH Quốc gia TP Hồ Chí Minh 23 Phan Thanh Phương (2007), Khảo sát khả sinh kháng sinh chủng nấm sợi phân lập từ rừng ngập mặn huyện Cần Giờ TP HCM, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm TP HCM 24 Nguyễn Thị Nhã Vy (2009), Nghiên cứu khả sinh hoạt chất đối VSV gây bệnh cho trồng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm TP HCM Tài liệu tiếng Anh 25 Agarwal and al (2011), Isolation of seed borne mycoflora of chickpea and its in vitro evaluation by some known bioagents, International journal of pharmacy & life sciences, Vol 2, Issue 7: July: 2011, pp.899-902 26 Biljana Gveroska, Jugolslav Ziberoski (2011), The influence of Trichoderma harzianum on reducing root rot disease in tobacco seedling caused by Rhizoctonia solani, International Journal of Pure and Applied Sciences and Technology, 2(2), pp.1-11 27 Claydon N., Allan M., Hanson J.R and Avent A.G (1987), Antifungal alkyl pyrones of Trichoderma harzianum, Trans Br Mycol Soc 88: pp.503-513 28 Dennis C., Webster J (1971), Antagonistic properties of species-group of Trichoderma II: production of volatile antibiotics, Trans Br Mycol Soc 57: pp.4148 29 Di Pietro A., Lorito M., Hayes C.K., Broadway R.M and Harman G.E., (1993), Endochitinase from Gliocladium virens: isolation, characterization and synergistic antifungal activity in combination with gliotoxin, Phytopathology 83: pp.308-313 30 Druzhinina S.I., Kubicek P.C (2005), Species concepts and biodiversity in Trichoderma and Hypocrea: from species aggregates to species clusters? Invited Review, Journal Zeihjang universite Science Biology 6: pp.100-112 31 Druzhinina S.I., Kopchinskiy G.A., Kubicek P.C (2006), The first 100 Trichoderma species characterized by molecular data, Mycoscience 47: pp.55-64 32 Flatch J., Pilet P.E., Jolles P (1992), What’s new in chitinase research? Experientiel 48: pp 701-716 33 Ghisalberti E.L and Sivasithamparam K (1991), Antifungal antibiotics produced by Trichoderma spp., Soil Biol Biochem 23: pp 1011-1020 34 Grondona I., Hermosa R., Jejeda M., Gomis M.D., Mateos P.F., Bridge P.I., Monte E and Garcia-Acha I (1997), Physiologycal and biochemical characterization of Trichoderma harzianum, a biocontrol agent against soilborne fungal plant pathogenst, Appl Environ microbial 63 (8): pp.3189-3198 35 Howell C.R and Stipanovic R.D (1995), Mechanisms in the biocontrol of Rhizoctonia solani – induced cotton seedling disease by Gliocladium virens: antibiotics, Phytopathology 85: pp.469-472 36 Hye Min Lee, Zakaullah Khan, Sang Gyu Kim, Nam-In Beak and Young Ho Kim (2011), Evaluation of the Biocontrol potential of some medicinal plant materials alone and in combination with Trichoderma harzianum against Rhizotocnia solani AG 2-1, plant pathology journal, 27(1): pp 68-77 37 Itamar soares de Melo, Jane L.Faull (2000), Parasitism of Rhizotocnia solani by strains of Trichoderma spp., Scientia Agricola, vol 57, No.1, pp.67-78 38 Katsuhiko Ando and al (2004), Sampling and isolation methods of fungi, Department of biotechnology, National Institute of Technology and Evaluation 39 Kullnig C., Mach R., Lorito M., Kubicek C (2000), Enzyme diffusion from Trichoderma atroviride (T harzianum P1) to Rhizotocnia solani is a prerequisite for triggering of Trichoderma ech24 gene expression before mycoparasitic contact, Appl Environ Microbiol 66: pp.2232-2234 40 Lorito M., Hayes C.K., Di Pietro A., Woo S.L., Harman G.E (1994), Purification, characterization and synergistic activity of a glucan 1,3-glucosidase and an Nacetyl-β-glucosaminidase from Trichoderma harzianum, Phytopathology 84: pp.398405 41 Mahendra Rai and Paul Dennis Bridge, Applied Mycology, CABI North American Office, pp.216-233 42 Maoa W., Lewisa J.A., Lumsdena R.D., Hebbara K.P (2000), Biocontrol of selected soilborne diseases of tomato and pepper plants, Crop Protect 17: pp.535-542 43 Marija Avramović (2010), Analysis of the genetic potential of the spongederived fungus Penicillium chrysogenum E01-10/3 for polyketide production, Bonn 2010 44 Mohammad Akrami, Hadi Golzary and Masoud Ahmadzadeh (2011), Evaluation of different combinations of Trichoderma species for controlling Fusarium rot of lentil, African Jounal of Biotechnology Vol.10 (14), pp.2653-2658 45 Monteiro V.N., Nascimento Silva R., Steindrorff A.S., Costa F.T., Noronha E.F., Ricart C.A., de Sousa M.V., Vainstein M.H., Ulhoa C.J (2010), New insights in trichoderma harzianum antagonism of fungal plant pathogens by secreted protein analysis, Curr Microbiol 61 (4): pp.298-305 46 Pan S.Q., Ye S.X., Kue J (1991), A technique for detection of chitinase, β-1,3glucanase and protein patterns after a single separation using polyacrylamide gel electrophoresis or isoelectrofocusing, Phytopathology 81: pp.43-50 47 Papavizas G.C (1985), Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology and potential for biocontrol, Annu Rev Phytopathol 26: pp.23-54 48 Patamaporn Pruksakorn, Masayoshi Arai, Liu Liu and al (2009), Action-mechanism of trichoderin A, an anti-dormant mycobacterial aminolipopeptide from marine sponge-derived Trichoderma sp., Biological and Pharmaceutical bulletin 49 Petr Karlovsky (2008) The effect of fungal secondary metabolites, Springer-verlag Berlin Heidelberg, pp 129-133 50 Prasun K.M and Kanthadai R (1997), Effect of temperature on antagonistic and biocontrol potential of shape Trichoderma sp on Scerotium rolfsii, Mycopathologia 139 (3): pp.151-255 51 Robert A Samson and al (1984), Introduction food-borne fungi, CBS, Institute of the Royal Nerlands Academy of Art and Sciences 52 Samuel G.J (2006), Trichoderma : systematic, the sexual state and ecology, Phytopathology 96: pp 195-206 53 Samuel G.J., Suarez C., Solis K., Holmes K.A., Thomas S.E., Ismaiel A and Evans H.C (2006), Trichoderma theobromicola and T paucisporum: two new spiecies isolate from cacao in South America, Mycological research 110: pp.381-392 54 Sheila A.Okoth, Jane A.Otadoh, James O.Ochanda (2011), Improved seedling emergence and growth of maize and beans by Trichoderma harzium, Tropical and Subtropical Agroecosystems, vol 13(2011): pp 65-71 55 Vipin Kumar, Akhtar Haseeb and R U Khan (2011), Comparative Efficacy of Bioinoculents, Organic mendments and Pesticides Against Rhizoctonia solani Alone on Tomato CV K-25 under Pot Conditions, World Journal of Agricultural Sciences (6): pp.648-652 56 Wang Tianhong, Long Hao, Zhang Yingkuan (2010), Isolation of Trichoderma reesei PyrG negative Mutant by UV mutagenesis and its application in transformation (http://www.paper.edu.cn) Tài liệu từ Internet 57 http://vietsciences.org 58 http://vietsciences.free.fr 59 http://www.fao.org/inpho/ 60 http://www.uniprot.org/taxonomy/5544 61 http://phanbondientrang.vn/cong-nghe-sinh-hoc/vi-sinh-vat/nam.html 62 http://khuyennongvn.gov.vn [...]... khả năng sinh tổng hợp CKS cao làm cơ sở cho việc ứng dụng 3 Nhiệm vụ nghiên cứu − Khảo sát đặc điểm của chủng gốc Trichoderma cf. aureoviride − Gây đột biến chủng Trichoderma cf. aureoviride bằng tia UV − Chọn lọc các chủng nấm sợi đột biến có khả năng tổng hợp chất kháng sinh cao hơn chủng ban đầu − Xác định điều kiện môi trường tối ưu cho quá trình tổng hợp chất kháng sinh của chủng gốc và chủng đột. .. và chủng đột biến ĐB108 46 Bảng 3.5 Khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp CKS ở các độ mặn khác nhau 48 Bảng 3.6 Ảnh hưởng của nguồn nitơ khác nhau đến khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp CKS của chủng T cf. aureoviride và chủng đột biến ĐB108 51 Bảng 3.7 Ảnh hưởng của pH đến khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp CKS của chủng T cf. aureoviride và chủng đột biến ĐB108 ... gây đột biến các chủng hiện có để tạo ra các chủng có năng suất sinh tổng hợp các sản phẩm cao hơn Đây là việc làm rất cần thiết và có ý nghĩa thực tiễn cao Vì những lí do như trên, chúng tôi chọn đề tài Khảo sát khả năng sinh tổng hợp và đặc điểm chất kháng sinh của các chủng Trichoderma cf. aureoviride sau đột biến 2 Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu chọn lọc chủng Trichoderma cf. aureoviride đột biến. .. hưởng của nhiệt độ khác nhau đến khả năng sinh trưởng của chủng T cf. aureoviride và chủng đột biến ĐB108 55 Bảng 3.9 Động thái lên men của chủng T cf. aureoviride và chủng đột biến ĐB108 58 Bảng 3.10 So sánh khả năng sinh tổng hợp CKS của hai chủng nghiên cứu trước và sau khi tối ưu 60 Bảng 3.11 Độ bền nhiệt của KS trong dịch lên men của chủng T cf. aureoviride và chủng ĐB108... 3.1 Tổng hợp ảnh hưởng của tia tử ngoại đến hoạt tính kháng sinh của các chủng 36 Bảng 3.2 Khả năng đối kháng VSV kiểm định của các chủng đột biến và chủng gốc 37 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt tính kháng sinh của chủng T cf. aureoviride và chủng ĐB108 42 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của nguồn cacbon khác nhau đến sinh trưởng và sinh CKS của T cf. aureoviride và chủng đột. .. Trichoderma sinh ra Việc nghiên cứu và nâng cao năng suất sinh tổng hợp CKS của chủng ban đầu là một yêu cầu quan trọng khi muốn đưa các chủng giống này vào thực tiễn sản xuất Trong các nhân tố gây đột biến, tia UV là tác nhân phù hợp để xử lý và gây đột biến chủng gốc Trichoderma nhằm thu được các chủng đột biến có năng suất sinh tổng hợp CKS cao hơn CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP... bền pH của KS trong dịch lên men của chủng T cf. aureoviride và chủng ĐB108 62 Bảng 3.13 Độ bền thời gian của KS trong dịch lên men của chủng T cf. aureoviride và chủng ĐB108 63 Bảng 3.14 Hoạt tính của dung môi và dịch lên men sau khi lắc 6 giờ 65 Bảng 3.15 Hoạt tính đối kháng của dung môi và dịch lên men sau khi lắc của chủng ĐB108 68 Bảng 3.16 Hoạt tính đối kháng của dịch... gen pyrG đột biến mã hóa enzymes phân giải uridine [56] Theo tác giả Phương Phú Công (2004), chủng Apergillus Gm56 sau khi được xử lý bằng tia UV đã thu được 30 chủng đột biến sống sót có một số đặc điểm hình thái và sinh lí khác nhau Trong đó 29/30 chủng đột biến vẫn giữ được đặc điểm ban đầu của chủng là khả năng sinh xylansae, nhưng đều yếu so với chủng gốc, chỉ duy nhất một chủng thu được sau khi... chế sinh tổng hợp CKS Quá trình sinh tổng hợp CKS ở nấm sợi thường cần cả hai nguồn nitơ hữu cơ và nitơ vô cơ trong môi trường - Nhiệt độ tối ưu cho sinh tổng hợp CKS thường nằm trong khoảng từ 28 – 300C - Sinh tổng hợp CKS phụ thuộc đáng kể vào pH môi trường, pH thích hợp cho việc tổng hợp CKS là trung tính, môi trường hợp ngả về acid, pH acid hay kiềm đều ức chế quá trình tổng hợp CKS Vai trò của. .. gliotoxin, viridin và gliovirin ( Howell và Stipanovic, 1983) Chất có mùi dừa 6-n-pentyl-2H-pyran-2-one được tìm thấy ở một số chủng Trichoderma Các chủng Trichoderma sản xuất nhiều loại kháng sinh khác nhau, môi trường cũng ảnh hưởng đến cả sản lượng và chất lượng kháng sinh tạo ra Hơn nữa, các chất kháng sinh cũng tác động đặc hiệu vào các tác nhân gây bệnh khác nhau (Claydon và cs, 1987; Dennis và Webster, ... VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Phan Văn Giác KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP VÀ ĐẶC ĐIỂM CHẤT KHÁNG SINH CỦA CHỦNG TRICHODERMA CF.AUREOVIRIDE SAU ĐỘT BIẾN Chuyên ngành: Vi sinh. .. tạo chủng có suất sinh tổng hợp sản phẩm cao Đây việc làm cần thiết có ý nghĩa thực tiễn cao Vì lí trên, chọn đề tài Khảo sát khả sinh tổng hợp đặc điểm chất kháng sinh chủng Trichoderma cf.aureoviride. .. 25,0mm) Sau khảo sát đặc điểm hình thái hoạt tính ĐK chủng Chủng ĐB108 có thay đổi khả sinh CKS theo chiều dương, chủng chọn chủng đột biến để khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường đến khả sinh