Nghiên cứu khả năng gây bệnh hoại tử gan tụy cấp của một số loài vi khuẩn vibrio trên tôm nuôi nước lợ tại một số tỉnh phía bắc

TRẦN ANH TUẤN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TÔM NUÔI NƯỚC LỢ TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC... TRẦN ANH TUẤN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM



TRẦN ANH TUẤN

NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH

HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LOÀI

VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TÔM NUÔI NƯỚC LỢ

TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC

LUẬN VĂN THẠC SĨ

HÀ NỘI - 2014

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM



TRẦN ANH TUẤN

NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH

HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TÔM NUÔI NƯỚC LỢ TẠI

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan rằng số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này

là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Tôi xin cam đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả luận văn

Trần Anh Tuấn

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, tôi xin chân thành cảm ơn đến Ban lãnh đạo, Phòng Hợp tác Quốc tế và Đào tạo - Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1, Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội và Cơ quan Thú y vùng III đã ủng

hộ, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành tốt khóa học này

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới cô giáo hướng dẫn, TS Phan Thị Vân, người đã tận tình định hướng, chỉ bảo và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn

Qua đây, tôi xin cảm ơn Ban giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Quan trắc cảnh báo môi trường và Phòng ngừa dịch bệnh khu vực phía Bắc – Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản 1 và các cán bộ thuộc đề tài “Tôm khẩn cấp năm 2013” đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi thực hiện đề tài

Lời cảm ơn chân thành xin gửi tới gia đình, bạn bè và đồng nghiệp, những người đã giúp đỡ và động viên tôi trong học tập cũng như trong cuộc sống

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC BẢNG v

DANH MỤC HÌNH vi

DANH MỤC VIẾT TẮT vii

MỞ ĐẦU 1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu nghiên cứu 2

3 Nội dung nghiên cứu 2

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Một số đặc điểm về đối tượng nghiên cứu 3

1.1.1 Đặc điểm phân loại và hình thái vi khuẩnVibrio 3

1.1.2 Đặc tính phân bố và nuôi cấy 4

1.1.3 Đặc tính sinh hóa 5

1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh do vi khuẩn Vibrio spp trên tôm 8

1.2.1 Trên thế giới 8

1.2.2 Ở Việt Nam 15

1.3 Tình hình hội chứng gan tụy cấp trên tôm nuôi nước lợ 18

1.3.1 Tình hình hội chứng gan tụy cấp trên thế giới 18

1.3.2 Tình hình hội chứng hoại tử gan tụy cấp ở Việt Nam 18

1.4 Các nghiên cứu liên quan đến hiện tượng hoại tử gan tụy ở tôm nuôi 20

1.4.1 Hoại tử gan tụy tôm do MBV và HPV 20

1.4.2 Hoại tử gan tụy tôm do vi khuẩn ký sinh nội bào (Necrotizing Hepatopancreatitic, NHP) 20

1.4.3 Hoại tử gan tụy do vi bào tử trùng 21

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv

1.4.4 Hoại tử gan tụy do độc chất 21

1.4.5 Bệnh hoại tử gan tụy cấp 23

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng và nội dung nghiên cứu 27

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27

2.1.2 Nội dung nghiên cứu 27

2.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 27

2.2.1 Thời gian nghiên cứu 27

2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 27

2.3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 27

2.3.1 Xác định AHPND 27

2.3.2 Phân lập và định danh vi khuẩn (Frerichs và Millar (1983, 1993) 30

2.3.3 Xác định độc lực của vi khuẩn: 33

2.3.4 Thử kháng sinh đồ (Kibry-Bauer) 36

2.4 Phương pháp xử lí số liệu 36

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37

3.1 Xác định sự có mặt của vi khuẩn trên tôm bị AHPND 37

3.2 Xác định các chủng vi khuẩn Vibrio độc lực 40

3.3 Thử kháng sinh đồ đối với các chủng Vibrio độc lực xác định được 46

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 51

1 Kết luận 51

2 Đề xuất 51

TÀI LIỆU THAM KHẢO 52

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v

DANH MỤC BẢNG

STT TÊN BẢNG TRANG

Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá của một số loài vi khuẩn Vibrio spp là tác

nhân gây bệnh ở động vật thuỷ sản (Buller, 2004) 7

Bảng 2.1 Cách thực hiện và đọc các phản ứng sinh hóa 32

Bảng 3.1 Kết quả phân lập vi khuẩn 37

Bảng 3.2 Kết quả phân tích mẫu theo phương pháp mô 39

Bảng 3.3 Kết quả tái phân lập vi khuẩn và phân tích mô học thí nghiệm 1 41

Bảng 3.4 Kết quả tái phân lập vi khuẩn và phân tích mô học thí nghiệm 2 42

Bảng 3.5 Kết quả tái phân lập vi khuẩn thí nghiệm 3 44

Bảng 3.6 Kết quả phân tích mô bệnh học thí nghiệm 3 45

Bảng 3.7 Tính nhạy, trung bình của một số loài vi khuẩn đối với một số loại kháng sinh 47

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi

DANH MỤC HÌNH

STT TÊN HÌNH TRANG

Hình 1.1:Vi khuẩn V parahaemolyticus 3

Hình 1.2: Vi khuẩn V vulnificus 3

Hình 1.3: Vi khuẩn V harveyi 4

Hình 1.4: Vi khuẩn V alginolyticus 4

Hình 1.5: Khuẩn lạc vi khuẩn V harveyi 5

Hình 1.6: Khuẩn lạc vi khuẩn V Parahaemolyticus 5

Hình 1.7: Nhuộm gram vi khuẩn V.Vulnificus 5

Hình 1.8: Phản ứng Indol trên V parahaemolyticus 5

Hình 1.9: Dấu hiệu nhận biết AHPND theo phương pháp mô bệnh học 24

Hình 2.1: Bố trí thí nghiệm 36

Hình 3.1: Tỷ lệ phận lập các loài Vibrio ở Nghệ An 38

Hình 3.2: Tỷ lệ phận lập các loài Vibrio ở Nam Định Hình 3.3: Hình ảnh soi vi khuẩn trên kính hiển vi 39

Hình 3.4: Thử sinh hóa V paraheamolyticus tái phân được 45

Hình 3.5: Tổ chức mô của tôm bị AHPND 46

Hình 3.6: Kháng sinh đồ V.paraheamolyticus (12.020) 49

Hình 3.7: Kháng sinh đồ V vulnificus và V.paraheamolyticus (13.014) 49

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii

DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT

AHPND: Acute Hepatopancreatic Necrosis Dsease

Thuốc BVTV: Thuốc Bảo vệ thực vật

Viện NCNTTS: Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Nuôi tôm nước lợ là một hình thức nuôi quan trọng đem lại giá trị kinh

tế cao, chiếm hơn 40% tổng giá trị sản phẩm nuôi trồng thủy sản ở nước ta Trong các loài được nuôi ở nước lợ, tôm sú và tôm thẻ chân trắng là những loài được nuôi phổ biến trên địa bàn cả nước ta với gần 80% tổng diện tích nuôi trồng nước lợ (FAO, 2012) Hình thức nuôi này đóng một vai trò to lớn trong tổng giá trị nuôi trồng thủy sản tiêu thụ trong nước cũng như giá trị xuất khẩu sang nhiều nước trên thế giới

Tuy nhiên, người nuôi tôm nước lợ đang phải đối mặt với nhiều loại dịch bệnh nguy hiểm gây thiệt hại lớn, trong đó phải kể đến bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) Đây là một loại dịch bệnh mới xuất hiện ở nước ta từ giữa năm 2010, gây chết tôm sú và tôm thẻ chân trắng hàng loạt trên địa bàn Đồng bằng song Cửu Long Trong 2 năm tiếp theo, 2011 và 2012, dịch bệnh tiếp tục lan rộng ra nhiều tỉnh khác, tập trung tại Trà Vinh, Sóc trăng, Kiên Giang và ở một số tỉnh ven biển phía Bắc: Hải Phòng và Quảng Ninh, Bắc Trung bộ: Thanh Hóa và Nghệ An, Nam Trung bộ: Quảng Ngãi, Bình Định, Khánh Hòa, Ninh Thuận và Bình Thuận Do diện tích tôm mắc bệnh rất lớn

và tôm chết tập trung chủ yếu ở giai đoạn 20 - 30 ngày tuổi, đây là cỡ tôm khi phát hiện bệnh người nuôi thường xử lý và xả bỏ nên gây thiệt hại rất lớn Đặc biệt trong năm 2012, cả nước có khoảng 100.776 ha diện tích nuôi tôm nước lợ bị thiệt hại do dịch bệnh thì có tới 46.093 ha diện tích nuôi tôm nước lợ được xác định là bị chết do hội chứng hoại tử gan tụy (Tổng cục Thủy sản, 2012)

Trong thời gian qua, đã có nhiều nghiên cứu được thực hiện nhằm xác định nguyên nhân gây dịch bệnh Một số nghiên cứu chỉ ra rằng hội chứng

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2

này có liên quan trực tiếp đến thuốc bảo vệ thực vật và tảo độc, trong khi đó, một số nghiên cứu khác lại cho rằng có mối quan hệ chặt chẽ giữa việc sử dụng thức ăn và các chế phẩm sinh học trong nuôi trổng thủy sản với hội chứng hoại tử gan tụy Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu gần đây tìm thấy nhiều loại vi khuẩn ở tôm bị hội chứng hoại tử gan tụy cấp ở tất cả các vùng nuôi

tôm trong đó vi khuẩn Vibrio chiếm thành phần chủ yếu và phổ biến nhất là các loài V parahaemolyticus, V vulnificus,V harveyi Cụ thể là, một nghiên cứu của giáo sư Lightner và cộng sự (2013) đã chỉ ra một chủng vi khuẩn V

parahaemolyticus là tác nhân gây ra hội chứng này

Với mục đích làm rõ sự liên quan của nhóm vi khuẩn Vibrio đến bệnh

hoại tử gan tụy cấp, chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả năng gây

bệnh hoại tử gan tụy cấp của một số loài vi khuẩn vibrio trên tôm nuôi nước lợ tại một số tỉnh phía Bắc” Đây là một đề tài nhỏ thuộc đề tàii

“Nghiên cứu nguyên nhân, tác nhân gây hội chứng hoại tử gan tụy trên tôm sú

và tôm thẻ chân trắng và biện pháp khắc phục” của Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn giao cho Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1 chủ trì trong

năm 2013

2 Mục tiêu nghiên cứu

Xác định các loài vi khuẩn Vibrio độc lực trên tôm sú, tôm thẻ chân

trắng bị AHPND

3 Nội dung nghiên cứu

- Xác định sự có mặt của vi khuẩn trên tôm bị AHPND

- Xác định các chủng vi khuẩn Vibrio độc lực

- Thử kháng sinh đồ đối với các chủng Vibrio độc lực xác định được

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 3

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Một số đặc điểm về đối tượng nghiên cứu

1.1.1 Đặc điểm phân loại và hình thái vi khuẩnVibrio

Hệ thống phân loại (Ackermann, 1984):

Đặc điểm chung của các loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio: Gram âm,

hình que thẳng hoặc hơi uốn cong, kích thước 0,3-0,5x1,4-2,6 µm; chúng không hình thành bào tử và chuyển động nhờ một tiêm mao hoặc nhiều tiêm mao mảnh

Hình 1.1:Vi khuẩn V parahaemolyticus Hình 1.2: Vi khuẩn V vulnificus

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 4

1.1.2 Đặc tính phân bố và nuôi cấy

Ngoài tự nhiên vi khuẩn Vibrio phân bố rất phổ biến trong môi trường

nước biển và vùng nước lợ ven biển; có thể tìm thấy chúng trong các tầng nước, vùi trong trầm tích đáy hoặc bám trên bề mặt của các sinh vật sống

trong vùng nước đó Vibrio là vi khuẩn đặc trưng cho vùng nước biển ấm,

phát triển mạnh ở nhiệt độ 20-300C (Bùi Quang Tề và cộng sự, 2004)

Trong môi trường nuôi cấy tất cả các loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio

đều cần muối NaCl để phát triển, nồng độ muối cho phép trong môi trường nuôi cấy thường là 1-2 %

TCBS là môi trường chọn lọc của các loài vi khuẩn Vibrio, sau 18-24h

nuôi cấy hình thành khuẩn lạc với kích thước khoảng 2–5mm, có màu vàng

(V cholerae, V alginolyticus, V fluvialis) hoặc xanh (V parahaemolyticus,

V harveyi , V vulnificus)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 5

Các loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio đều yếm khí tuỳ tiện, hầu hết là

oxy hoá và lên men trong môi trường O/F Glucose, không có khả năng sinh

H2S và mẫn cảm với Vibriostat (0/129) (Bùi Quang Tề và cộng sự, 2004)

Hình 1.7: Nhuộm gram vi khuẩn

V.Vulnificus (Buller, 2004)

Hình 1.8: Phản ứng Indol trên

V parahaemolyticus (Buller, 2004)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 6

Bên trái: (-); Bên phải: (+)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 7

Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá của một số loài vi khuẩn Vibrio spp là tác

nhân gây bệnh ở động vật thuỷ sản (Buller, 2004)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 8

Chú thích:

1 - Vibrio parahaemolyticus 4 - Vibrio anguillarum

2 - Vibrio harveyi 5 - Vibrio vulnificus

3 - Vibrio alginolyticus 6 - Vibrio salmonicida

Dịch bệnh xảy ra và những thiệt hại to lớn của nó là động lực thúc đẩy

sự quan tâm nghiên cứu của nhiều nhà khoa học và cùng với nhu cầu cấp thiết của nền sản xuất mà trong một thời gian ngắn, hàng loạt các thành tựu nghiên cứu bệnh tôm đã được công bố và áp dụng Dựa vào tác nhân gây bệnh, các nhà khoa học chia bệnh thủy sản ra thành những bệnh chủ yếu sau: Bệnh do virus, bệnh do vi khuẩn, bệnh do nấm, bệnh do ký sinh trùng và một số bệnh

do các yếu tố vô sinh gây ra ở tôm

Trong số các tác nhân gây bệnh ở tôm nuôi thì vi khuẩn là một trong những tác nhân thường gặp, được coi là có ảnh hưởng kinh tế rất lớn tới các trang trại nuôi tôm trên toàn thế giới (Venkateswara Rao và cộng sự, 2010) Trong điều kiện ao nuôi có mật độ cao, đầu tư thức ăn lớn, hiện tượng ô nhiễm thường xuyên xảy ra tạo điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn phát triển và gây tác hại Theo thống kê của Sindermann và Lighter (1988), các bệnh ở tôm

do vi khuẩn gây ra chiếm 45,5% trong tổng số các loại bệnh, trong khi virus

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 9

chỉ chiếm 25,3%, nấm chiếm 2,7%, ký sinh trùng chiếm 26,5% Bệnh do vi

khuẩn chủ yếu là các bệnh do Vibrio gây ra, chúng được báo cáo trong các hệ

thống nuôi tôm trên toàn thế giới gồm có ít nhất 14 loài: Vibrio harveyi, V

splendidus, V parahaemolyticus, V alginolyticus, V anguillarum, V vulnificus, V campbelli, V fischeri, V damsella, V pelagicus, V orientalis,

V ordalii, V mediterrani và V logei

Theo Venkateswara Rao và cộng sự, 2010, Vibriosis là bệnh vi khuẩn

có liên quan đến tỉ lệ chết ở tôm nuôi trên toàn thế giới Sự nhiễm vi khuẩn

Vibrio thường xuất hiện trong các trại sản xuất giống, nhưng dịch bệnh lại hay xảy ra ở ao nuôi tôm Sự bùng phát dịch bệnh có thể xảy ra khi các yếu tố môi trường gây nên sự nhân lên nhanh chóng mật độ vi khuẩn đã nhiễm ở mức thấp trong máu tôm hoặc do sự xâm nhập của vi khuẩn vào rào cản vật chủ (Sizemore và Davis, 1985)

Nghiên cứu về tác nhân gây bệnh Vibrio ở tôm sú (P monodon),

Jiravanichpaisal (1995) cho rằng có 2 con đường xâm nhập của vi khuẩn là xâm nhập vào gan tụy và xâm nhập vào biểu mô phụ Sự xâm nhập theo con đường gan tụy lại rất mạnh và thường xảy ra ở giai đoạn ấu trùng và tôm giống, trong khi đó sự xâm nhập theo đường biểu mô phụ xảy ra chủ yếu trên tôm trưởng thành Điều này là bởi vì ở giai đoạn tôm trưởng thành, hoạt động kháng khuẩn có thể mạnh ở ống gan tụy (Stewart, 1980) Theo Anderson (1988), khi bề mặt cơ thể tôm bị tổn thương sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho vi

khuẩn Vibrio xâm nhập qua con đường này

Khi nghiên cứu về bệnh do Vibrio trong các trại sản xuất tôm giống,

Adam (1991) và nhiều tác giả khác cho rằng: Tôm ấu trùng và hậu ấu trùng khi bị nhiễm khuẩn nặng có thể gây hiện tượng phát sáng và chết hàng loạt Lightner và cộng sự (1996) cũng đã thông báo, trong số các bệnh gây ra ở ấu trùng tôm, bệnh phát sáng là bệnh nhiễm trùng toàn thân và gây thiệt hại lớn

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 10

nhất, hiện tượng phát sáng trong bóng tối là dấu hiệu đặc thù của bệnh này Ngoài ra, theo Tonguthai (1995), ấu trùng tôm bị bệnh phát sáng thì cơ thể trở nên yếu ớt, chuyển màu trắng nhợt và lắng xuống đáy, tỷ lệ chết có thể lên tới 100% trong 1 đến 2 ngày, khi bệnh phát sáng xuất hiện trong trại sản xuất thì việc ngăn ngừa giữa các bể ương nuôi là rất khó khăn và có thể đợt sản xuất

đó bị thất bại hoàn toàn Tiến hành giải phẫu ấu trùng tôm bị nhiễm bệnh phát sáng và quan sát dưới kính hiển vi cho thấy vi khuẩn nhiễm dày đặc trong khoang máu của ấu trùng phát quang đã gần chết (Pitogo, 1995)

Nghiên cứu về tác nhân gây bệnh phát sáng trên ấu trùng tôm sú,

Baticados (1988) và nhiều tác giả khác đều có chung nhận định: V harveyi được coi là vi khuẩn chủ yếu gây ra bệnh phát sáng Tác nhân gây bệnh V

harveyi tồn tại tự nhiên trong môi trường nước biển, ở đó có thể tìm thấy chúng trong những thành viên bậc thấp (Ruby and Nealson, 1978) Khi bệnh

phát sáng xảy ra trong bể ương ấu trùng tôm, số lượng vi khuẩn Vibrio tăng

dần theo thời gian Tuy vậy, Lightner (1996) cho rằng ấu trùng tôm sú có thể

bị phát sáng khi nhiễm ở mật độ cao các loại vi khuẩn V harveyi, V

parahaemolyticus và V vulnificus Theo Pẽna và cộng sự (2001), vi khuẩn gây bệnh phát sáng V harveyi đã gây ra tỉ lệ chết cao trên tôm sú (Penaeus

monodon) nuôi ở Philippin và là loài hiện diện trong ao nuôi với tỷ lệ rất cao,

chiếm 65,5% Liên quan tới tần số xuất hiện Vibriosis trên tôm nuôi tại một

số trang trại ở Ấn Độ, theo Otta và cộng sự (2000) thì V alginolyticus chiếm

tỉ lệ cao nhất từ 7,8% đến 50%, sau đó là V harveyi 13% - 23%, V

parahaemolyticus 6,6% - 11,5% và một số loài khác

Khi nghiên cứu về khả năng gây bệnh do vi khuẩn Vibrio trên tôm, nhiều tác giả đã khẳng định hầu hết vi khuẩn Vibrio là tác nhân gây bệnh

thứ cấp Theo Lightner (1998), cơ thể tôm có khả năng đề kháng với vi

khuẩn Vibrio, cho nên ngay cả trên tôm khỏe vẫn tồn tại một lượng vi

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 11

khuẩn này, chúng chờ cơ hội để tăng số lượng và độc lực gây bệnh cho tôm Các nghiên cứu về bệnh tôm ở Châu Á cho thấy có sự kết hợp giữa vi

khuẩn Vibrio với các tác nhân khác như virus, ký sinh trùng gây tác hại tổng hợp trên tôm Theo Chanratchakool (1995), vi khuẩn Vibrio là tác

nhân cơ hội tấn công vào tôm nuôi khi tôm bị nhiễm virus đốm trắng, nghiên cứu mẫu bệnh phẩm thì ngoài việc tìm thấy các tiểu thể virus còn có

một số lượng lớn vi khuẩn Vibrio

Theo nhiều báo cáo nghiên cứu về bệnh do vi khuẩn Vibrio nhiễm trên

tôm ở Châu Á thì dịch bệnh ngày càng trở nên phổ biến ở các trang trại nuôi tôm thuộc các quốc gia này; Theo Daud (1992), mầm bệnh vi khuẩn phổ biến

nhất trên tôm he ở Philippine là V ordalii, V anguillarum, V vulnificus, V

harveyi và V splendilus Theo Kou và cộng sự (1998) ở Đài Loan những loài

vi khuẩn Vibrio được tìm thấy gồm: V tubiashii, V anguillarum, V harveyi,

V mereis hoặc V damsela Ruangpan và Kitao (1991) đã phân lập và xác định được 5 loài Vibrio (V parahaemolyticus, V alginolyticus, V vulnificus,

V fluvialis và Vibrio spp) từ tôm sú bị bệnh nuôi ở Thái Lan

Nghiên cứu sự phân bố của vi khuẩn Vibrio trong tự nhiên cho thấy, một lượng đáng kể vi khuẩn Vibrio tồn tại trong nước biển, trong các bể ương

ấp và đặc biệt là trong ruột tôm bố mẹ Trong ruột tôm bố mẹ, vi khuẩn Vibrio

có thể nhiễm với mật độ 2x109 cfu/g, chiếm từ 63 - 67% và khoảng 16 - 18%

trong tổng số vi khuẩn Vibrio là tác nhân gây bệnh phát sáng (Pitogo, 1998) Ruangpan (1995) cho rằng, số lượng vi khuẩn Vibrio tồn tại và phát triển

trong bể ấp và ao nuôi phụ thuộc vào mật độ nuôi, ao nuôi tôm mật độ cao thì

số lượng vi khuẩn này luôn cao hơn so với ao nuôi mật độ thấp

Một số loài vi khuẩn Vibrio là tác nhân gây bệnh nguy hiểm cho tôm

nuôi, chúng là vi khuẩn cơ hội vì bình thường chúng luôn tồn tại trong môi trường ương nuôi Khi điều kiện sống có những thay đổi bất lợi như các yếu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 12

tố về khí hậu, môi trường, dinh dưỡng hoặc do mắc các bệnh gây trạng thái

“stress” làm giảm sức đề kháng của tôm nuôi, lúc đó chúng mới tấn công gây nên bệnh Theo Pitogo (1995), bệnh vi khuẩn ở tôm nuôi luôn xuất hiện cùng với những quá trình bệnh lý khác hoặc phản ánh hậu quả của việc phá vỡ cân bằng sinh thái trong bể hoặc ao nuôi Theo Chanratchakool (1995), tôm nuôi

trước khi cảm nhiễm bệnh vi khuẩn Vibrio đã có sự thay đổi màu sắc tự nhiên

sang màu đỏ, điều đó chứng tỏ là tôm nuôi bị “stress” Sự suy giảm môi trường ao nuôi đóng một vai trò quan trọng trong việc gây stress này của tôm,

dẫn đến vi khuẩn Vibrio nhiễm thứ phát

Để giảm thiểu tác hại của các bệnh do vi khuẩn Vibrio gây ra trên tôm

nuôi, người ta đã sử dụng một số loại hóa chất và thuốc kháng sinh trong công tác phòng trị bệnh Hóa chất thường được sử dụng rộng rãi là Chlorin A, tuy nhiên chúng luôn có tác dụng hai mặt; theo Pitogo (1995) Chlorin chỉ có tác dụng kìm hãm vi khuẩn ở nồng độ 15 - 30 ppm và vi khuẩn xuất hiện lại trong

12 giờ sau khi ngừng khử trùng bằng hóa chất này; ngoài ra khi sử dụng Chlorin còn kích thích sự phát triển của gen kháng kháng sinh ở vi khuẩn và tiêu diệt tảo(David, 1999)

Một số loại kháng sinh đã được sử dụng nhiều trong các trại nuôi tôm trên thế giới như Chloramphenicol, Furazolidone, Oxytetracycline và Streptomycin Tuy nhiên việc sử dụng thuốc kháng sinh chỉ có hiệu quả trước mắt nhưng để lại hậu quả về hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn, đồng thời thị trường tiêu thụ của một số nước nhập khẩu không chấp nhận do sự tồn

dư thuốc trong sản phẩm dẫn đến sự ảnh hưởng tới sức khỏe người sử dụng Nhằm hạn chế nhược điểm của thuốc kháng sinh, đã có một số nghiên cứu với nhiều giải pháp thay thế như: Dùng chế phẩm sinh học để bổ sung vào ao nuôi hoặc vào thức ăn cho tôm được cho là rất an toàn và có hiệu quả Theo David (1999), tôm nuôi ở một số nông trại thuộc Negros – Philippines

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 13

đã bị bệnh do vi khuẩn phát sáng Vibrio, thay vì sử dụng kháng sinh người ta

đã bổ sung vi khuẩn có ích vào ao nuôi tôm và kết quả cho thấy số lượng lớn

vi khuẩn phát sáng giảm khi bổ sung dòng chọn lọc Bacillus Thử nghiệm bổ sung probiotic Arthrobacter XE – 7 vào thức ăn cho tôm chân trắng (Penaeus

vannamei ), sau đó cảm nhiễm V parahaemolyticus bằng cách tắm, kết quả

cho thấy tỉ lệ chết của tôm giảm đáng kể so với lô đối chứng (Li và cộng sự, 2008) Hiện nay một số nước Châu Á như Philippin, Trung Quốc, Việt Nam

đã sử dụng chế phẩm sinh học như một chất không thể thiếu để bổ sung vào

thức ăn hoặc cho vào môi trường ao nuôi nhằm phòng và trị bệnh do Vibrio

gây ra trên tôm, hiệu quả là giảm thiểu bệnh xảy ra và tăng tỉ lệ sống cho tôm, một số chế phẩm sinh học được sử dụng: ES 2A Aquakit, EMS và Bio – DW Việc nghiên cứu sử dụng các chất kích thích hệ miễn dịch cho tôm cũng đã được quan tâm như: Felix và cộng sự (2004), thử nghiệm nâng cao

khả năng miễn dịch của tôm sú (P monodon) đối với vi khuẩn V

parahaemolyticus bằng cách sử dụng các hợp chất chiết xuất từ một loại tảo

biển (Sargassum wightii) phối hợp vào thức ăn cho tôm, kết quả cho thấy tôm

có khả năng miễn dịch cao (tỉ lệ sống 83%), đây là nghiên cứu mở đầu để sử dụng nguồn thực vật tự nhiên dồi dào ở biển thay thế cho một số chất kích thích miễn dịch được lấy từ động vật Chen (2008) đã thử nghiệm dùng các

hợp chất chiết xuất từ cây cỏ biển (Chondrus crispus) để tiêm cho tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei), sau đó cảm nhiễm V alginolyticus lên tôm, kết

quả cho thấy tôm có khả năng miễn dịch với loại vi khuẩn này

Ngoài ra, người ta cũng đã nghiên cứu các hình thức nuôi ghép để hạn

chế mật độ vi khuẩn Vibrio trong ao nuôi tôm như: Eleonor (2007) nuôi ghép tôm sú (P monodon) với vẹm hoặc hầu đã làm giảm mật độ vi khuẩn phát sáng V harveyi; thí nghiệm của ông chỉ ra rằng khi nuôi ghép vẹm xanh (Perna viridis), vẹm nâu (Perna indica) hoặc hàu (Crassostrea sp) với tôm sú

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 14

theo mật độ phù hợp đã làm giảm mật độ vi khuẩn phát sáng trong ao từ 104cfu/ml xuống còn 101 cfu/ml, ngoài ra động vật thân mềm còn góp phần làm sạch môi trường ao nuôi

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 15

Lý Thị Thanh Loan (2003), đã nghiên cứu một cách có hệ thống các vi

sinh vật gây bệnh quan trọng như nhóm Vibrio, MBV, WSSV trên tôm sú

nuôi ở các mô hình khác nhau tại các tỉnh ĐBSCL Khi xác định tần số xuất

hiện của Vibriosis trong các hệ thống nuôi, kết quả cho thấy các loài gây bệnh thường gặp gồm: V parahaemolyticus, V harveyi và V alginolyticus chiếm tỉ

lệ cao hơn hẳn những loài khác trong các mẫu phân tích

Nghiên cứu về bệnh Vibriosis ở tôm thì theo một số tác giả, những loài gây bệnh cho tôm là: Vibrio parahaemolyticus, V harveyi, V vulnificus, V

splendidus, V alginolyticus, V anguilarum và V damsela gây bệnh phát

sáng, đỏ thân và ăn mòn vỏ ki tin Những loài này thường là tác nhân cơ hội; khi tôm bị sốc do môi trường biến đổi xấu hoặc bị nhiễm các bệnh khác như virus, nấm, ký sinh trùng thì chúng sẽ tấn công gây bệnh, làm tôm chết rải rác tới hàng loạt Tôm bị bệnh phát sáng thường biểu hiện yếu, lờ đờ, kém bắt mồi, nặng có thể bỏ ăn, trong bóng tối phát ra ánh sáng xanh liên tục; bệnh xảy ra ở trong các trại giống tác hại thường lớn, đặc biệt ở các giai đoạn tiền

ấu trùng như Zoea, Mysis Nếu bệnh xảy ra ở dạng cấp tính, có thể làm tôm

ấu trùng chết hàng loạt, tỷ lệ chết có thể lên đến 100% trong bể ấp do sự nhiễm khuẩn toàn thân; đặt ấu trùng bị phát sáng lên kính hiển vi ở độ phóng đại > 400X có thể quan sát thấy từng đám vi khuẩn đang họat động chiếm chỗ

ở một số nội quan như: máu, gan tụy, mang Bệnh phát sáng thường gây tác hại lớn ở giai đoạn ấu trùng và hậu ấu trùng, giai đoạn ấu niên trong ao nuôi

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 16

thịt cũng có thể bị ảnh hưởng nhưng tác hại thấp hơn Từ mẫu tôm bị phát

sáng, người ta đã phân lập được V harveyi, V vulnificus, và V

Parahaemolyticus (Bùi Quang Tề và cộng sự, 2004)

Theo Bùi Quang Tề và cộng sự (2004), tôm nuôi ngoài ao khi bị bệnh do

Vibrio thì có hiện tượng: Nổi lên mặt ao, dạt bờ, kéo đàn bơi lòng vòng Tôm

ở trạng thái hôn mê, lờ đờ, kém ăn hoặc bỏ ăn Có sự biến đổi màu đỏ hay màu xanh, vỏ mềm và xuất hiện các vết hoại tử, ăn mòn trên vỏ, các phần phụ

bị mòn gẫy hoặc cụt dần; ông cho rằng tác nhân gây ra là do các loài V

parahaemolyticus , V harveyi, V Vulnificu và V anguillarum Còn ở tôm sú

ấu trùng V alginolyticus gây ra bệnh đỏ thân, với các dấu hiệu xuất hiện các

điểm đỏ ở gốc râu, vùng đầu ngực, thân và các phần phụ của ấu trùng

Trong các hệ thống nuôi thủy sản, vi khuẩn Vibrio xâm nhập vào ao, bể

theo một số con đường bao gồm nguồn nước, dụng cụ dùng, tôm mẹ, tôm giống và thức ăn tươi sống; hoặc chúng có thể nằm sẵn trên thành bể, dưới

đáy ao Trong bể ương ấu trùng thì mật độ Vibrio tăng theo thời gian nuôi,

tầng đáy cao hơn tầng mặt, do đó khi xiphông tầng đáy có tác dụng giảm mật

độ Vibrio trong bể ương

Xác định mức độ nhiễm bệnh do vi khuẩn Vibrio trên tôm thông qua

định lượng, Đỗ Thị Hòa và cộng sự (1994) đưa ra các thông số:

Tôm ấu trùng: Tôm khỏe trung bình nhiễm 358 khuẩn lạc/cá thể, tôm bệnh trung bình nhiễm 3.255 khuẩn lạc/cá thể

Tôm giống: Tôm khỏe trung bình nhiễm 3.008 khuẩn lạc/cá thể, tôm bệnh trung bình nhiễm 14.450 khuẩn lạc/cá thể

Nhằm hạn chế tác hại của bệnh do vi khuẩn Vibrio gây ra trên tôm nuôi,

các tác giả đã khuyến cáo việc áp dụng các biện pháp phòng trị thích hợp như:

Để phòng bệnh, cần áp dụng biện pháp phòng bệnh tổng hợp như sát trùng ao

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 17

bể, dụng cụ, nguồn nước, tôm bố mẹ, rửa trứng hoặc rửa Nauplius, thức ăn tươi sống bằng các thuốc diệt khuẩn như: Benzalkonium chloride (BKC), Iodine và Formalin Ngoài ra cần thường xuyên xiphông, thay nước để loại bỏ các chất hữu cơ trong ao bể nuôi, quản lý thức ăn tốt, dùng chế phẩm vi sinh

(Probiotic), bổ sung các loại vitamin để tăng cường khả năng miễn dịch của tôm Để trị bệnh do Vibrio gây ra trên tôm thì các tác giả đã đưa ra 2 giải

pháp: (1) Dùng thuốc kháng sinh thuộc nhóm Sulphamid, Oxytetracyline, Erythromycin trộn vào thức ăn để diệt vi khuẩn cảm nhiễm bên trong cơ thể tôm (2) Giảm mật độ vi khuẩn trong nước và cải thiện điều kiện môi trường bằng một số biện pháp kỹ thuật như xiphông và thay nước đáy, dùng một số loại thuốc diệt khuẩn như trên, sau đó thay một phần nước trong ao, gây lại màu nước Tuy nhiên, họ cũng cho rằng, ở giai đoạn tôm tiền ấu trùng và hậu

ấu trùng, do sức chịu đựng của chúng với thuốc rất kém và khi bệnh đã xảy

ra cấp tính, phần lớn tôm trong bể ấp đã bỏ ăn, do vậy dùng thuốc khó khăn

và ít có hiệu quả; ngoài ra việc sử dụng thuốc kháng sinh hiện nay đã bộc lộ nhiều nhược điểm, đó là tạo sự kháng thuốc và tồn dư thuốc trong sản phẩm

Để hạn chế việc sử dụng kháng sinh trong công tác phòng trị bệnh cho tôm nuôi, đã có nhiều công trình nghiên cứu tạo ra các sản phẩm thay thế: như

sử dụng Ozon giúp làm giảm mật độ vi khuẩn Vibrio trong bể ương nuôi ấu

trùng và tăng tỷ lệ sống cho tôm (Trần Thị Kiều Trang, 2004).Phòng và trị

bệnh Vibrio spp bằng thảo dược cho tôm được coi là một cách an toàn và hiệu

quả có thể thay thế kháng sinh như: Ekavari và Microcin Dùng dịch chiết từ

lá trầu không, với tên thương mại là chế phẩm sinh học Bokashi để phòng và

trị một số bệnh do vi khuẩn gây ra trên tôm, trong đó có vi khuẩn Vibrio spp

cho hiệu quả tốt (Nguyễn Quang Linh, 2010)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 18

1.3 Tình hình hội chứng gan tụy cấp trên tôm nuôi nước lợ

1.3.1 Tình hình hội chứng gan tụy cấp trên thế giới

Vào khoảng cuối năm 2009, hội chứng hoại tử gan tụy cấp tính (AHPND) hay hội chứng chết sớm (EMS) đã bắt đầu gây thiệt hại nghiêm trọng đến sản lượng tôm ở phía Nam Trung Quốc Đến giữa năm 2010, dịch bệnh bắt đầu được ghi nhận có xảy ra ở Việt Nam Sau đó, năm 2011, dịch bệnh tương tự cũng được báo cáo ở Malaysia và từ đầu năm 2012 cũng được thông báo ở Thái Lan (Flegel, 2012)

Ở Trung Quốc, sự xuất hiện của EMS/AHPND được thông báo đầu tiên

ở Hainan năm 2009 nhưng lúc đó đã không được quan tâm Đến năm 2011 sự xuất hiện của dịch bệnh đã trở nên trầm trọng đặc biệt đối với những trang trại

đã từng nuôi tôm trên 5 năm và đối với những trang trại nằm gần biển do sử dụng nước nuôi cá độ mặn cao hơn (độ mặn trên 20ppt) Trong 6 tháng đầu năm 2011, khoảng 80% sản lượng tôm đã bị thiệt hại ở các trang trại nuôi tôm thuộc Hainan, Guangdong, Fujian và Guangxi

Ở Malaysia, EMS/AHPND được thông báo lần đầu tiên vào cuối năm

2010 ở Johor, sau đó tiếp tục xuất hiện ở Pahang, Perak và Penang trong năm

2011 EMS/AHPND đã gây ra sự suy giảm đáng kể sản lượng tôm thẻ chân trắng, từ 87,000 triệu tấn năm 2010 xuống còn 67,000 triệu tấn năm 2011

Ở Thái Lan, đến năm 2012 khoảng 0,7% tổng số ao nuôi tôm đã bị nhiễm bởi EMS/AHPND, hầu hết xảy ra ở vùng bờ biển thuộc các tỉnh Rayong, Chantaburi, Trat và Chacheongsao (Flegel, 2012)

1.3.2 Tình hình hội chứng hoại tử gan tụy cấp ở Việt Nam

Ở Việt Nam, hiện tượng tôm chết với các biểu hiện bất thường trên gan tụy đã được thông báo chính thức bằng văn bản tại tỉnh Sóc Trăng tháng 5 năm 2011, mặc dù hiện tượng tôm chết tương tự đã được ghi nhận tại một số tỉnh ĐBSCL như Sóc Trăng, Bạc Liêu từ cuối năm 2010 Từ đó đến nay dịch

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 19

bệnh tiếp tục xảy ra trên diện rộng ở cả mức độ nông hộ và trang trại với mức

độ thiệt hại cao Dịch bệnh xảy ra trên cả tôm sú và tôm thẻ chân trắng

Theo báo cáo “Tình hình nuôi tôm nước lợ năm 2012 và giải pháp thực hiện kế hoạch năm 2013” của Tổng cục Thủy sản ngày 12 tháng 12 năm

2012 Năm 2012 cả nước có khoảng 100.776 ha diện tích tôm nước lợ bị thiệt hại do dịch bệnh (trong đó 91.174 ha nuôi tôm sú và 7.068 ha nuôi tôm thẻ) bao gồm dịch bệnh đốm trắng, đầu vàng và dịch bệnh gan tụy chưa rõ nguyên nhân mà sau này được gọi là dịch bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) Các tỉnh bị thiệt hại nhiều nhất là: Sóc Trăng thiệt hại 23.371,5 ha (chiếm 56,6% diện tích thả); Bạc Liêu thiệt hại 16.919 ha (chiếm 41,9% diện tích thả); Bến Tre thiệt hại 2.237 ha (chiếm 29,06% diện tích thả); Trà Vinh thiệt hại 12.200

ha tôm sú (chiếm 49,3% diện tích thả) và 24,2 ha tôm thẻ chân trắng; Cà Mau diện tích tôm nuôi công nghiệp bị bệnh là 958,58 ha, tăng nhiều hơn so với năm 2011 là 420,02 ha

Cũng theo báo cáo này, trong 100.776 ha nuôi tôm bị dịch bệnh, tổng diện tích bị hội chứng hoại tử gan tụy ở tôm nuôi xảy ra ở 19 tỉnh thành ven biển miền Bắc, miền Trung và Nam Bộ là 46.093 ha (chiếm 45,7%) Các tỉnh

bị bệnh nặng nhất là Trà Vinh, Sóc Trăng, Bạc Liệu, Cà Mau, Bến Tre và Kiên Giang Tuy nhiên diện tích nuôi tôm báo cáo bị AHPND này chủ yếu mới chỉ được căn cứ vào dấu hiệu hình thái bệnh, phần lớn chưa được kiểm chứng bằng phương pháp mô học đặc trưng Do vậy, diện tích tôm nuôi ở nước ta bị AHPND có thể sẽ ít hơn (46.093 ha) số liệu đã được báo cáo Hội chứng hoại tử gan tụy cấp (AHPND) xảy ra ở cả tôm sú và tôm thẻ chân trắng, chủ yếu ở các vùng nuôi tôm thâm canh và bán thâm canh ở giai đoạn 15-45 ngày sau khi thả nuôi Tôm bệnh có biểu hiện ngừng ăn, bơi chậm, vỏ mỏng, màu tôm nhợt nhạt, gan tụy có biểu hiện sưng, nhũn, teo và dịch bệnh xảy ra ở hầu hết các tháng trong năm

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 20

1.4 Các nghiên cứu liên quan đến hiện tượng hoại tử gan tụy ở tôm nuôi

Các bệnh do vi khuẩn và vi rút gây ảnh hưởng đến gan tụy của tôm như bệnh còi do MBV, bệnh gan tụy do HPV hay bệnh hoại tử gan tụy NHP và gần đây nữa là dịch bệnh hoại tử gan tụy cấp chưa rõ nguyên nhân Ngoài ra độc chất cũng làm ảnh hưởng đến hệ thống gan tụy trên tôm, đặc biệt là hiện tượng hoại tử gan tụy

1.4.1 Hoại tử gan tụy tôm do MBV và HPV

MBV và HPV ký sinh trong tổ chức mô gan tụy làm ảnh hưởng đến hệ thống gan tụy, gây hội chứng chậm lớn mà không gây chết tôm hàng loạt Theo Đỗ Thị Hòa và cộng sự (2004), tôm bị nhiễm MBV trong nhân gan tụy thường có màu đen tối, kém ăn, còi cọc, chậm lớn Tôm nhiễm bệnh sau 3-4 tháng nuôi vẫn có kích thước rất nhỏ còn gọi là “tôm kim” Cũng theo tác giả này, HPV kí sinh trong nhân tế bào gan tụy làm cho gan tụy teo và có màu trắng nhạt, tôm nhiễm bệnh sinh trưởng chậm, kém ăn và tăng sinh vật cơ hội bám trên mang và cơ thể tôm

1.4.2 Hoại tử gan tụy tôm do vi khuẩn ký sinh nội bào (Necrotizing Hepatopancreatitic, NHP)

NHP là bệnh nhiễm khuẩn cấp tính trên họ tôm he gây chết đến 95%,

đã gây chết tôm hàng loạt ở nhiều nước như Mỹ, Peru, Ecuador, Colombia, Brazil, Panama và Mexico (Loy và cộng sự, 1996; Aranguren và cộng sự, 2006; del Rio-Rodriguez và cộng sự, 2006; Ibarra-Gamez và cộng sự, 2007) Dấu hiệu trên tôm bệnh như giảm ăn, mềm vỏ, thịt mềm nhũn, mang đen sậm màu và gan tụy bị teo (Lightner, 1996)

Tác nhân gây bệnh là vi khuẩn thuộc lớp alpha-proteobacteria, gram

âm, ký sinh nội bào bắt buộc thuộc nhóm Rickettsia Vi khuẩn gây bệnh có 2

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 21

hình thái khác nhau: dạng trực khuẩn (0,25 x 0,9 µm) và dạng sợi xoắn (0,25

x 2-3,5 µm) (Frelier và cộng sự, 1992; Lightner và cộng sự, 1992)

1.4.3 Hoại tử gan tụy do vi bào tử trùng

Vi bào tử trùng Microsporidia là ký sinh trùng nội bào bắt buộc lây nhiễm trên nhiều ký chủ khác nhau Có rất nhiều Microsporidia được cho

là lây nhiễm trên giáp xác bao gồm Agmasoma, Amecon, Nosema,

Pleistophora, Tuzetia, Thelohania, Flabelliforma, Glugoides, Ordospora, Nadelspora và Enterospora (Lightner, 1996; Refardt và cộng sự., 2002; Amogan và cộng sự, 2006)

Vi bào tử trùng Enterocytozoan hepatopenaei ký sinh trong tế bào của

mô gan tụy được báo cáo có liên quan đến bệnh tôm sú ở Việt Nam (Nguyễn Thị Hà và cộng sự, 2011) và tôm thẻ chân trắng ở Thái Lan (Flegel, 2012) Theo Flegel (2012), nhu cầu năng lượng cung cấp cho sự phát triển của vi bào

tử trùng trong gan tụy làm tôm chậm lớn và dẫn đến tình trạng nhiễm vi khuẩn thứ cấp, đặc biệt khi tôm bị sốc do môi trường nuôi không thuận lợi

1.4.4 Hoại tử gan tụy do độc chất

Điều kiện môi trường có tác động đến sức khỏe tôm một cách trực tiếp hoặc gián tiếp Trong nuôi tôm, cùng với các yếu tố gây ô nhiễm môi trường không tránh khỏi do các hoạt động sinh hoạt và sản xuất của con người tạo ra, các yếu tố kỹ thuật như xử lý, cải tạo trước khi nuôi, chăm sóc sức khỏe cho tôm trong quá trình nuôi cũng góp phần vào việc đưa vào ao nuôi các yếu tố bất lợi

Vấn đề tồn lưu và thời gian phân hủy của các độc tố và các chất gây ô nhiễm môi trường cần được quan tâm trong nuôi trồng thủy sản nói chung và đặc biệt quan trọng trong mô hình nuôi thâm canh và bán thâm canh Hiện tại

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 22

việc sử dụng các thuốc bảo vệ thực vật được gọi là thuốc diệt giáp xác trong

xử lý ao nuôi tôm là phổ biến

Trong số các loại thuốc bảo vệ thực vật (BVTV), nhóm pyrethroid có cấu trúc hóa học giống với pyrethrins, hợp chất diệt côn trùng tự nhiên có nguồn gốc từ những cây thuộc họ cúc Perythrins là các hợp chất không bền trong môi trường, không tồn tại đủ lâu để tiêu diệt côn trùng nhưng các hợp chất pyrethroid tổng hợp có tính bền hơn, tồn tại trong nhiều ngày hoặc trong nhiều tuần đủ để tiêu diệt côn trùng (Brown, 2006; Cox, 1996)

Cypermethrin nằm trong nhóm perythroid tổng hợp, giống với các hợp chất pyrethroid khác, tiêu diệt côn trùng bằng cách phá vỡ chức năng bình thường của hệ thần kinh Ở côn trùng cũng như các động vật khác, xung thần kinh di chuyển dọc theo dây thần kinh khi dây thần kinh thẩm thấu với các nguyên tử natri cho natri chạy dọc dây thần kinh Các hợp chất pyrethroid làm chậm quá trình đóng cửa kênh natri Kết quả là có nhiều xung thần kinh thay

vì thông thường chỉ có một xung thần kinh được kích thích Các xung thần kinh này khiến cho dây thần kinh phóng thích chất dẫn truyền thần kinh acetylcholine và kích thích các dây thần kinh khác, từ đó dẫn đến chấn động

và cuối cùng là chết (Brown, 2006; Cox, 1996)

Nghiên cứu của Cox (1996) cũng chỉ ra rằng các thuốc trừ sâu pyrethroid bị phá vỡ bởi các enzyme gọi là esterase Tuy nhiên các enzyme này lại bị ức chế bởi các thuốc trừ sâu nhóm Organophosphate Vì vậy, nếu hai loại thuốc trừ sâu này cùng có mặt một lúc, chúng có tính hỗ trợ nhau và độc tính sẽ trở nên lớn hơn độc tính của từng loại thuốc trừ sâu riêng lẻ Đối với động vật thủy sản, cụ thể là giáp xác, Cypermethrin đã được chứng minh là chất cực độc đối với tôm sú thông qua các thí nghiệm của Flegel và cộng sự, (1992) Các triệu chứng ghi nhận được gồm tôm hoạt động

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 23

không ngừng, xoay vòng không định hướng, bơi gần mặt nước rồi chìm xuống đáy, thân co cứng và chết (Flegel và cộng sự, 1992)

Trong báo cáo “Kết quả nghiên cứu xác định nguyên nhân và đề xuất các biện pháp khắc phục trong chương trình khẩn cấp phòng chống dịch bệnh trên tôm sú và tôm thẻ chân trắng nuôi ở đồng bằng sông Cửu Long” tại hội nghị giao ban phòng chống dịch bệnh tôm tại Bạc Liêu đã khẳng định Cypermethrin là một trong những nguyên nhân gây ra hội chứng gan tụy (Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản 2, 2011)

1.4.5 Bệnh hoại tử gan tụy cấp

Trước tình hình diễn biến dịch bệnh phức tạp và chưa xác định rõ nguyên nhân, định nghĩa về bệnh đã được xây dựng và ở Việt Nam định nghĩa này đã chính thức được ban hành bởi Cục Thú y làm cơ sở cho việc xác định chính xác bệnh và phân biệt với các hiện tượng bệnh ảnh hưởng đến gan tụy khác (Cuc Thú y, 2012)

Định nghĩa hội chứng hoại tử gan tụy cấp (AHPND) bao gồm các tiêu chí như sau:

- Hội chứng gan tụy cấp gây chết tôm sú và tôm thẻ chân trắng ở giai đoạn 15-45 ngày tuổi sau khi thả nuôi

- Tôm bệnh biểu hiện các dấu hiệu như ngừng ăn, bơi chậm, vỏ mỏng, màu tôm nhợt nhạt, và gan tụy có biểu hiện sưng, nhũn, teo

- Dựa trên biến đổi cấu trúc mô học, các tiêu chí để xác định AHPND: 1) Thoái hóa cấp gan tụy; 2) Thiếu hoạt động phân bào đẳng nhiễm của tế bào

có nguồn gốc từ mô phôi (tế bào E, Embryonalzellen); 3) Rối loạn chức năng các tế bào trung tâm tổ chức gan tụy: tế bào tiết B (Basenzellen), tế bào xơ F (Fibrillenzellen), tế bào dự trữ R (Restzellen); 4) Các tế bào gan tụy có nhân