Thực trạng bệnh do streptococcus agalactiae trên cá ro phi tại tỉnh bắc ninh và thử nghiệm điều trị

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGÔ THỊ ÁI THỰC TRẠNG BỆNH DO STREPTOCOCCUS AGALACTIAE TRÊN CÁ RÔ PHI TẠI TỈNH BẮC NINH VÀ THỬ NGHIỆM ðIỀU TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành Mã số : THÚ Y : 60640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS BÙI THỊ THO HÀ NỘI - 2012 LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết ñược nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác ðồng thời tất thơng tin tơi trích dẫn luận văn ñã ñược rõ nguồn gốc Tác giả Ngô Thị Ái Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CẢM ƠN ! ðể hoàn thành nội dung luận văn tốt nghiệp này, nỗ lực cố gắng thân tơi cịn nhận ñược giúp ñỡ không nhỏ nhiều tổ chức, quan cá nhân Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Bùi Thị Tho người định hướng trực tiếp hướng dẫn tơi hồn thành luận văn anh chị cán giáo viên Trường Cao ñẳng Thủy Sản ñã tạo ñiều kiện tốt để tơi thực đề tài Trong suốt năm học ðại học Nông nghiệp I, tơi nhận dạy dỗ, dìu dắt tận tình tình thầy giáo trường, khoa Thú y thầy, cô giáo Bộ môn Nội - Chẩn - Dược - ðộc Chất qua ñây cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn chân thành tới thầy giáo Nhân đây, gửi lời cảm ơn tới tất bạn bè, bạn đồng nghiệp người góp ý chân thành giúp đỡ, động viên tơi suốt thời gian tơi hồn thành luận văn Cuối xin cảm ơn bố mẹ, anh chị ln cổ vũ, động viên lúc khó khăn giúp có thêm nghị lực để có ngày hôm Tác giả Ngô Thị Ái Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ! ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn ñề 1.2 Ý nghĩa khoa học ñề tài 1.3 Ý nghĩa thực tiễn ñề tài TỔNG QUAN TÀI LIỆU 10 2.1 Một số ñặc ñiểm sinh học cá rô phi 10 2.1.1 Nguồn gốc 10 2.1.2 Phân loại 10 2.1.3 ðặc điểm mơi trường sống tập tính dinh dưỡng 10 2.2 Tình hình ni cá rơ phi giới 11 2.3 Tình hình ni cá rơ phi Việt Nam 12 2.4 Kết nghiên cứu bệnh dịch vi khuẩn cá rô phi giới 13 2.5 Nghiên cứu dịch bệnh vi khuẩn gây cá rô phi Việt Nam 18 2.5.1 Bệnh xuất huyết 19 2.5.2 Bệnh viêm ruột 21 2.6 Kháng sinh sử dụng nuôi trồng thuỷ sản 21 2.6.1 Kháng sinh gì? 21 2.6.2 Phân loại kháng sinh theo cơng thức hóa học chế tác dụng 22 2.7 Sự ñề kháng kháng sinh vi khuẩn gây bệnh 22 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii 2.7.1 Thế vi khuẩn kháng kháng sinh? 2.7.2 Tính kháng kháng sinh vi khuẩn nuôi trồng thủy sản giới 2.7.3 22 23 Tính kháng kháng sinh vi khuẩn nuôi trồng thủy sản Việt Nam 25 2.8 Tình hình sử dụng thuốc ni trồng thủy sản 25 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 ðối tượng, thời gian ñịa ñiểm nghiên cứu 29 3.1.1 ðối tượng 29 3.1.2 Thời gian nghiên cứu 29 3.1.3 ðịa ñiểm thu mẫu 29 3.2 Nội dung 29 3.3 Nguyên liệu 29 3.3.1 Mẫu dùng phân lập vi khuẩn 29 3.3.2 Môi trường nuôi cấy phân lập vi khuẩn 30 3.3.3 Môi trường thử phản ứng sinh hóa 30 3.3.3 Các dụng cụ hóa chất máy móc thiết bị phịng thí nghiệm 30 3.3.4 Giấy thử kháng sinh ñồ 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu 30 3.4.1 Thu mẫu 30 3.4.2 Xử lý mẫu phịng thí nghiệm 30 34.3 Ni cấy phân lập vi khuẩn 31 3.4.4 Phương pháp thử phản ứng sinh hố kít API 20 Strep 32 3.4.5 Phương pháp xác ñịnh số lượng tế bào vi khuẩn 34 3.4.6 Phương pháp gây bệnh thực nghiệm cho cá rô phi vi khuẩn Streptococcus agalactiae giám ñịnh, phân lập từ cá bị bệnh 3.4.8 3.4.9 34 Xác định tính mẫn cảm tính kháng thuốc vi khuẩn Streptococcus agalactiae với thuốc kháng sinh hóa trị liệu 36 Phương pháp thử nghiệm điều trị bệnh 38 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 38 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 4.1 Kết thu mẫu 39 4.2 Triệu chứng, bệnh lý cá rô phi bị bệnh Streptococcosis liên cầu Streptococcus sp 40 4.2.1 Triệu chứng 40 4.2.2 Biến ñổi bệnh lý 41 4.3 Kết phân lập vi khuẩn 42 4.3.1 Thành phần lồi vi khuẩn phân lập từ cá rơ phi bình thường 42 4.3.2 Thành phần lồi vi khuẩn phân lập từ cá rơ phi bị bệnh 45 4.3.3 ðặc điểm hình thái, sinh hóa số vi khuẩn phân lập từ cá rơ phi 4.4 Kết ñiều tra tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae theo giai đoạn ni 4.5 53 Kết gây bệnh thực nghiệm vi khuẩn Streptococcus agalactiae cá rô phi 4.7 51 Kết ñiều tra tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae theo mùa vụ 4.6 48 54 Kết kiểm tra tính mẫn cảm, tính kháng thuốc vi khuẩn Streptococcus agalactiae với thuốc hóa học trị liệu thường dùng 58 4.8 Kết ñiều trị thử nghiệm bệnh Streptococcosis cá rô phi 63 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 70 5.1 Kết luận 70 5.2 ðề nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC 79 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v DANH MỤC BẢNG STT 2.1 Tên bảng Trang Danh mục thuốc, hóa chất kháng sinh cấm sử dụng sản xuất kinh doanh thuỷ sản 27 3.2 ðánh giá đường kính vịng vơ khuẩn chuẩn 37 4.1 Kết thu mẫu 39 4.2 Thành phần loài vi khuẩn phân lập từ cá rơ phi khỏe mạnh bình thường 43 4.3 Thành phần loài vi khuẩn phân lập ñược từ cá rô phi bị bệnh 46 4.4 ðặc điểm hình thái, sinh hóa vi khuẩn phân lập từ cá rơ phi 49 4.5 Tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae theo giai đoạn ni 52 4.6 Tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae theo mùa vụ 53 4.7 Kết xác ñịnh LD50 56 4.8 Kết kiểm tra kháng sinh ñồ 12 chủng S agalactiae với 16 loại thuốc thường dùng 59 4.9 Tỉ lệ cá chết lơ điều trị thử nghiệm 65 4.10 Kết thử nghiệm ñiều trị bệnh Streptococcus agalactiae cá rô phi Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………… 67 vi DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Tác nhân gây bệnh cá rơ phi giai đoạn ni 4.2 Cá rơ phi bị bệnh A: cá bơi đầu, đen mình, B: cá ngửa bụng (bên trái), hai mắt lồi ñục (bên phải) 4.3 41 Cá rô phi bị bệnh: gan nhạt mầu, xuất huyết điểm, ruột khơng có thức ăn (bên trái), túi mật căng, xoang bụng tích dịch viêm 4.4 17 41 Khuẩn lạc vi khuẩn Streptococcus agalactieae môi trường Nutrient aga (bên trái) Vi khuẩn S.agalactiae nhuộm Gram soi kính hiển vi 100X dầu 50 4.5 Kết thử kít API 20 Strep định danh Streptococcus agalactiae 50 4.6 Tỉ lệ cá chết theo ngày gây bệnh thực nghiệm 55 4.7 Cá gây bệnh thực nghiệm: có phân dính hậu mơn, bỏ ăn(bên trái), cá bị xuất huyết gốc vây xương nắp mang (bên phải) 57 4.8 Kết thử kháng sinh ñồ Streptococcus agalactiae 61 4.9 Biểu ñồ kết kháng sinh ñồ S.agalactiae với thuốc 4.10 thường dùng 62 Tỉ lệ cá chết công thức thử nghiệm 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn đề Cá rơ phi đối tượng ni nhiều nước giới mặt hàng thực phẩm có giá trị thương mại cao tồn cầu Cá rơ phi lồi cá có tốc độ tăng trưởng nhanh, chúng có khả thích nghi rộng với điều kiện mơi trường nước ngọt, lợ Cá ni phổ biến ruộng, ao, ñầm, lồng sông, hồ chứa ñược nuôi ñơn, ni ghép với lồi cá khác Cá rơ phi có chất lượng thịt ngon, có thị trường tiêu thụ rộng lớn Những năm gần đây, phong trào ni cá rơ phi phát triển mạnh xếp vào danh mục đối tượng cá ni chủ lực chiến lược phát triển nghề nuôi trồng thủy sản nước ta (Phạm Anh Tuấn, 2006) ðây ñối tượng chủ lực chiến lược phát triển thủy sản nước ta nên việc nghiên cứu giống, thức ăn, kỹ thuật ni nghiên cứu bệnh khơng thể thiếu Tác nhân gây bệnh quan trọng cá rô phi thường vi khuẩn, virus protozoa… Trong ñáng ý bệnh vi khuẩn mà ñặc biệt Streptococcus agalactiae ñã gây chết hàng loạt cá nuôi thời gian qua (ðồng Thanh Hà cs, 2010) Việc nghiên cứu bệnh vi khuẩn gây cá rơ phi từ đưa biện pháp phịng trị bệnh thích hợp cần thiết có ý nghĩa quan trọng ni trồng thủy sản, góp phần làm ổn ñịnh nâng cao sản lượng nuôi trồng ðược ñồng ý PGS.TS Bùi Thị Tho, Khoa Thú y, Viện sau ðại học Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, tơi tiến hành thực đề tài: “Thực trạng bệnh Streptococcus agalactiae cá rô phi tỉnh Bắc Ninh thử nghiệm ñiều trị” Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1.2 Ý nghĩa khoa học ñề tài Từ kết ñiều tra thực trạng nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae tuổi cá tình trạng bệnh theo mùa vụ, biết mức độ cá rơ phi mắc bệnh Streptococcosis Bắc Ninh, sở đề biện pháp phịng bệnh tích cực cho cá Xác định khả mẫn cảm, kháng kháng sinh vi khuẩn Streptococcus agalactiae từ có sở khoa học lựa chọn kháng sinh có tính mẫn cảm cao với loại vi khuẩn ñể ñiều trị bệnh Streptococcosis 1.3 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Từ tình hình dịch tễ bệnh Streptococcus agalactiae gây cá rô phi, sở người ni trồng thủy sản ñưa biện pháp phòng chọn thuốc ñiều trị theo ñúng nguyên tắc sử dụng kháng sinh tránh gây dịng vi khuẩn kháng thuốc gây nhiễm mơi trường hạn chế tồn dư kháng sinh cá rơ phi nói riêng thủy sản nói chung, đảm bảo vệ sinh an tồn thực phẩm cho người tiêu dùng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… niloticus) with special referancas to its control 8th intermational Symposium on Tilapia in Aquaculture 1419-1435 45 Musa P.R., K.S Wei, N Musa, R.H Hamdan and L.K Leong et al., 2009 Short communication: Streptococcosis in red tilapia (Oreochromis niloticus) commercial farm in Malaysia Aquac Res., 40: 630-632 46 Nguyen, H.T., Kanai, K 1999 Selective agars for the isolation of Streptococcus iniae from Japanese flounder Paralichthys olivaceus, and its cultural environment.J Appl Microbiol 86, 769-776 47 Nur-Nazifah M, Sabri MY, Zamri-Saad M, Siti-Zahrah A, Kamarzaman A Antibiotic sensitivity of selected Streptococcus agalactiae isolated from disease outbreaks in tilapia (Oreochromis spp) in malaysia Asian-Pacific Aquaculture 2009 - Meeting Abstract 328 https://www.was.org/WasMeetings/meetings/ShowAbstract.aspx?Id= 18581 48 Philipart.J.C.L Ruwet, (1982), Ecolapia, logy and Distrisbution of Tilapia, In: R.S.V Pullin and R.H Lowe-Mc Connell (Eds), Biology and Culture of Tilapia, ICLAM conference Proceedings 7,432 ICLARM, Mamila, Philippines, pp 15-59 49 Phillips Michael (2000), “The use of Chemicals in Carp and Shrimp Aquaculture in Bangladesh, Cambodia, Lao PDR, Nepal, Pakistan, Sri Lanka and Viet Nam”, Use of chemicals in Aquaculture in Asia, pp 75-85 50 Rattanachaikunsopon P and Phumkhachorn P, 2008 Prophylactic effect of Andrographis paniculata extracts against Streptococcus agalactiae effection in Nile tilapia (Oreochromis 51 Reed, L.J and H.A Muench, 1938 A simple method of Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 77 estimating fifty percent and points American J Hygiene, 27: 493-497 52 Suanyuk, N., Kanghear, H., Khongpradit, R., & Supamattaya, K (2005) S agalactiae infection in tilapia (O niloticus) Songklanakarin Journal of Science and Technology in Aquaculture Science, 27, 307-319 53 Supriyadi, H and Rukyani A (2000), “The use of chemicals in Aquaculture in Indonesia”, Use of chemicals in Aquaculture in Asia, pp 166-169 54 Yoshiaki Kawamura,Yoko Itoh, Noriko Mishima, Kiyufumi Ohkusu, Hiroaki Kasai and Takayuki Ezaki, (2005) High genetic similarity of Streptococcus agalactiae and Streptococcus difficilis: S difficilis Eldar et al.1995 is a later synonym of S agalactiae Lehmannand Neumann 1896 pp 55, 961–965 DOI 10.1099/ijs.0.63403-0) 55 Yuasa, Kamaishi, Hatai, Bahnnan and Borisuthpeth, (2005) Two cases of streptococcal infections of cultured tilapia in Asia In: Sixth Symposium on Diseases in Asian Aquaculture (ed Bondad-Reantaso MG, Mohan, C.V., Crumlish, M and Subasinghe, R.P ) Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Colombo - Sri Lanka, pp 259-268 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 78 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết phân tích Tổng hợp Kết cá chết gây bệnh thử nghiệm Bể thí Số cá gây Lần lặp nghiệm bệnh 10^3 10 2 10^4 10 3 10^5 10 3 10^6 10 5 10^7 10 6 10^8 10 10^9 10 10 10 10 0.85% 10 0 ðC - 10 0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 79 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE SL 13/12/12 7: :PAGE VARIATE V003 TLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= LL& 518519 259259 1.19 0.330 261.852 32.7315 150.42 0.000 16 3.48151 217594 TN$ * RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 26 265.852 10.2251 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SL 03/12/12 7: :PAGE MEANS FOR EFFECT LL& - LL& NOS TLC 4.22222 3.88889 4.11111 SE(N= 9) 0.155490 5%LSD 16DF 0.466161 - MEANS FOR EFFECT TN$ - TN$ NOS TLC 10^3 2.00000 10^4 2.66667 10^5 3.33333 10^6 5.33333 10^7 5.66667 10^8 7.33333 10^9 10.0000 0.0085 0.333333 ÐC - 0.000000 SE(N= 3) 0.269317 5%LSD 16DF 0.807415 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SL 03/12/12 7: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 80 VARIATE TLC GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 27) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 3.1977 0.46647 27 4.0741 C OF V |LL& % |TN$ | | | | | | | | | 11.4 0.3301 0.0000 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 81 Bảng theo dõi cá chết thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm Liều n Ngày 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 11 10 12 10 13 10 14 10 15 Tổng số 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 Lần lặp1 0 0 0 0 1 2 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 1 0 0 0 0 1 1 0 0 10 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 Lần lặp 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 2 0 0 0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 0 2 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 Lần lặp ðC- SL 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 10 82 Bảng theo dõi cá chết ñiều trị thử nghiệm với hai loại thuốc cephalexin (Cp) doxycyclline (Dx) Ngày thí nghiệm 10 11 12 13 14 15 Tổng số Số cá chết ðối chứng âm Bể 10 Bể 11 Bể 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ðối chứng dương Bể Bể Bể 0 0 0 0 5 5 4 3 3 1 1 0 0 0 0 28 26 30 Thí nghiệm Cp Bể Bể Bể 0 0 0 0 3 2 1 1 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 9 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………… Thí nghiệm DX Bể Bể Bể 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 83 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCC FILE JJJJ 13/12/12 7: :PAGE VARIATE V003 SCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= LL$ 8.16666 4.08333 2.19 0.192 TN$ 1303.33 434.444 233.43 0.000 * RESIDUAL 11.1666 1.86110 * TOTAL (CORRECTED) 11 1322.67 120.242 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE JJJJ 13/12/12 7: :PAGE VARIATE V004 TLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= LL$ 90.7760 45.3880 2.19 0.192 TN$ 14481.8 4827.25 233.39 0.000 * RESIDUAL 124.099 20.6832 * TOTAL (CORRECTED) 11 14696.6 1336.06 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE JJJJ 13/12/12 7: :PAGE MEANS FOR EFFECT LL$ - LL$ NOS SCC TLC 10.5000 34.9975 9.75000 32.5000 11.7500 39.1675 0.682111 2.27394 2.35953 7.86591 SE(N= 4) 5%LSD 6DF - MEANS FOR EFFECT TN$ - TN$ NOS SCC 0.333333 TLC ÐC âm 1.11000 ÐC duong 28.0000 93.3333 Th? nghi?m c 8.33333 27.7767 Th? nghi?m d 6.00000 20.0000 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 84 SE(N= 3) 5%LSD 6DF 0.787634 2.62572 2.72455 9.08277 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE JJJJ 13/12/12 7: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON C OF V |LL$ % |TN$ | | | | | | | | TOTAL SS RESID SS SCC 12 10.667 10.966 1.3642 12.8 0.1922 0.0000 | TLC 12 35.555 36.552 4.5479 12.8 0.1922 0.0000 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 85 Phụ lục 2: ðiều kiện mơi trường q trình gây bệnh thực nghiệm ñiều trị bệnh thử nghiệm STT Các yếu tố môi trường ðộ biến động Nhiệt độ 26÷33°C O2 4÷6 (mg/l) pH 7÷8 NH3/NH4+ 0.007÷0.009 (mg/l) Kiềm 102÷120 (mg CaCO3/l) Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 86 Phụ lục 3: Kết ñịnh danh vi khuẩn Streptococcus sp kít API 20 Strep số phản ứng phụ Kết Một số chủng vi khuẩn kiểm tra Buller Chỉ tiêu Màu KL/NA Tr Tr Tr Tr Tr Tr Tr Tr Tr Gram + + + + + + + + + + C C Hình dạng C C C C C C C C (2004) Hemolytic - - - - - - - - - Oxidase - - - - - - - - - - Catalase - - - - - - - - - - O/F -/+ -/+ -/+ -/+ -/+ -/+ -/+ -/+ NaCl 6,5% - - - - - - - - - NaCl 1-3% + + + + + + + + + NaCl 0% + + + + + + + + + 37ºC + + + + + + + + + 10ºC + + + + + + + + + 29ºC + + + + + + + + + Di ñộng - - - - - - - - - - VP + + + + + + + + + + HIP + + + + + + + + + + ESC - - - - - - - - - - PYRA - - - - - - - - - - αGAL - - - - - - - - - - β-GUR - - - - - - - - - +/- β-GAL - - - - - - - - - - -/+ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 87 PAL + + + + + + + + + + LAD + + + + + + + + + + ADH - + + - - - + + - -/+ Ribose + - - - - - - - - +s Arabinose - - - - - - - - - - Manitol - - - - - - - - - - Sorbitol + - - - - - - - - - Lactose - - - - - - - - - - Trehalose - - - - - - - - - - Inuline - - - - - - - - + - Raffinose - - - - - - - - - - Amidon - - - - - - - - - - Glycogene - - - - - - - - - + Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 88 Phụ lục Danh mục thuốc, hóa chất KS hạn chế sử dụng sản xuất kinh doanh thuỷ sản (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Tên hoá chất, kháng sinh TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Amoxicillin Ampicillin Benzylpenicillin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Oxolinic Acid Colistin Cypermethrim Deltamethrin Diflubenzuron Teflubenzuron Emamectin Erythromycine Tilmicosin Tylosin Florfenicol Lincomycine Neomycine Paromomycin Spectinomycin Chlortetracycline Oxytetracycline Tetracycline Sulfonamide (các loại) Trimethoprim Ormetoprim Tricainemethanesulfonate Danofloxacin Difloxacin Enrofloxacin + Ciprofloxacin Sarafloxacin Flumequine Dư lượng tối ña cho phép (MRL)(ppb) 50 50 50 300 300 300 100 150 50 10 1000 500 100 200 50 100 1000 100 500 500 300 100 100 100 100 50 50 15-330 100 300 100 30 600 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………… 89 Phụ lục 5: ðường kính vịng vô khuẩn 12 chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae với thuốc kháng sinh thường dùng KS 1 Ax 14.0 14.0 13.7 13.8 13.0 13.5 13.0 13.0 13.5 12.9 12.9 13.5 Am 17.0 17.0 14.5 14.0 13.8 13.7 14.2 14.0 14.0 14.0 13.9 13.8 Cp 16.5 18.6 18.9 18.4 18.7 18,6 18.8 18.7 17.0 16.9 17.8 18.8 Cr 14.9 17.5 17.5 17.8 17,5 14.4 18.0 18.0 18.3 18.0 18.0 18.1 Kn 13.4 13.0 17.6 18.3 16.5 18.5 16.6 18.0 18.3 17.8 17.9 17.0 Ge Sm 15.0 10.5 11.0 11.7 15.3 14.5 14.5 10.9 14.0 15.1 14.5 15.0 Te 11.3 14.0 12.0 11.4 11.0 13.0 11.2 14.0 11.5 11.4 11.5 11.3 Ne 13.5 12.0 14.0 13.9 14.8 11.9 11.8 11.7 12.0 12.3 11.9 11.9 10 11 12 13.4 12.0 14.5 13.0 14.8 14.6 14.3 12.0 14.4 14.4 12.8 13.0 10 Dx 12.3 14.0 12,5 17.0 15.0 13.0 14.0 14.5 14.7 15.0 14.7 13.0 11 Nv 14.8 16.0 14.2 14.0 14.0 15.0 14.0 16.5 16.7 14.2 14.1 14.1 12 Pb 13.7 12.2 13.6 11.5 13.5 10.6 13.4 8.0 8.1 13.5 11.7 13.9 13 Co 14.1 13.9 13.8 13.4 14.0 15.7 17.0 16.9 16.7 14.2 14.4 14.7 14 Nr 12.4 12.0 12.9 12.3 11.9 11.8 12.0 13.5 13.9 13.8 14.0 12.7 15 Pf 15.0 15.0 14.9 14.9 14.5 15.0 15.6 15.4 15.2 14.9 12.3 12.3 16 Of 18.0 16.0 17.5 19.4 18.5 17.0 20.0 19.0 18.0 19.0 19.7 19.0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 90 Phụ lục 6: Một số hình ảnh q trình thực đề tài Thu mẫu, đo cá Mổ khám, cấy khuẩn, soi kính kiêm tra hình thái vi khuẩn Thử phản ứng sinh hóa, catalaza, API, làm kháng sinh ñồ Gây bệnh thực nghiệm, thử nghiệm ñiều trị Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 91 ... học Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, tiến hành thực ñề tài: ? ?Thực trạng bệnh Streptococcus agalactiae cá rô phi tỉnh Bắc Ninh thử nghiệm điều trị? ?? Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn... thực trạng nhiễm vi khuẩn Streptococcus agalactiae tuổi cá tình trạng bệnh theo mùa vụ, biết ñược mức ñộ cá rô phi mắc bệnh Streptococcosis Bắc Ninh, sở đề biện pháp phịng bệnh tích cực cho cá. .. 1984) Bệnh ñã xảy nơi khác Philippines Aeromonas hydrophila (Yambot, 1997) Tại Israel, tác nhân gây bệnh giống với nấm Brachiomyces ñã làm chết 85% cá rô phi ñỏ cá rô phi lai Năm 2009, xuất bệnh