Nghiên cứu một số chỉ tiêu lâm sàng, huyết học và hàm lượng kháng thể sau khi tiêm vacxin vô hoạt chủng CDV–768 phòng bệnh Care ở chó”.

Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài, để hoàn thành báo cáo tốt nghiệp, nỗ nực thân em nhận giúp đỡ tận tình thầy cô giáo, gia đình bạn bè Nhân dịp cho phép em gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới: PGS.TS Nguyễn Thị Lan tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trình nghiên cứu hoàn thành khóa luận Các anh chị phòng thí nghiệm trung tâm khoa Thú Y- Học viện Nông Nghiệp Việt Nam Cùng toàn thể thầy cô giáo, cán công nhân viên môn Bệnh lý thú y toàn thể thầy cô giáo khoa Thú Y, Học viện Nông Nghiệp Việt Nam Sự động viên tạo điều kiện tốt gia đình, bạn bè góp phần giúp đỡ em suốt trình học tập hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ tất người Hà Nội, ngày 30 tháng 11 năm 2014 Sinh viên Bùi Thị Lan Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam i Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan MỤC LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.2 Bảng bố trí lô thí nghiệm sử dụng chủng vacxin CDV vô hoạt cho chó Error: Reference source not found Bảng 4.2 Kết xét nghiệm có mặt virus Care số virus khác phương pháp RT – PCR .Error: Reference source not found Bảng 4.4 Triệu chứng lâm sàng Chó trước tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Error: Reference source not found Bảng 4.5 Thân nhiệt chó tiêm vacxin CDV-768 (0C) Error: Reference source not found Bảng 4.6 Biến động tần số hô hấp chó trước sau tiêm vacxin Error: Reference source not found Bảng 4.7 Biến động tần số tim mạch chó trước sau tiêm vacxin CDV-768 (lần/phút) Error: Reference source not found Bảng 4.8 Triệu chứng lâm sàng chó sau tiêm vacxin CDV-768.Error: Reference source not found Bảng 4.9 Số lượng hồng cầu chó trước sau tiêm vacxin (x106 µl) Error: Reference source not found Bảng 4.10 Kết khảo sát số tiêu hồng cầu chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 .Error: Reference source not found Bảng 4.11 Số lượng bạch cầu chó trước sau tiêm vacxin (x103 /µl) Error: Reference source not found Bảng 4.12 Kết khảo sát tiêu bạch cầu Chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Error: Reference source not found Bảng 4.13 Kết xét nghiệm kháng thể sau tiêm vacxin vô hoạt kháng CDV phương pháp ELISA Error: Reference source not found Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam ii Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Bùi Thị Lan iii Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình thái virus Care Error: Reference source not found Hình 2.2 Cấu trúc virus Care chụp kính hiển vi Error: Reference source not found Hình 4.1 Biểu đồ thân nhiệt chó trước tiêm vacxin CDV-768 .Error: Reference source not found Hình 4.2 Biểu đồ thể thân nhiệt chó sau tiêm vacxin CDV-768 Error: Reference source not found Hình 4.3 Biểu đồ thể số hô hấp chó trước .Error: Reference source not found tiêm vacxin CDV-768 Error: Reference source not found Hình 4.4 Biểu đồ thể số hô hấp chó sau tiêm vacxin CDV768 Error: Reference source not found Hình 4.5 Biểu đồ thể tần số tim mạch chó trước Error: Reference source not found tiêm vacxin CDV-768 Error: Reference source not found Hình 4.6 Biểu đồ thể tần số tim mạch chó sau tiêm vacxin CDV-768 Error: Reference source not found Hình 4.7 Biểu đồ thể biến động số lượng hồng cầu chó trước tiêm vacxin ( x106 µl) theo thời gian (ngày).Error: Reference source not found Hình 4.8 Biểu đồ thể biến động số lượng hồng cầu chó sau tiêm vacxin ( x106 µl) theo thời gian (ngày) .Error: Reference source not found Hình 4.9 Biểu đồ thể biến động số lượng bạch cầu chó trước tiêm vacxin (x103 /µl) theo thời gian (ngày).Error: Reference source not found Hình 4.10 Biểu đồ thể biến động số lượng bạch cầu chó trước tiêm vacxin (x103 /µl) theo thời gian (ngày) Error: Reference source not found Hình 4.11 Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng Error: Reference source not found Hình 4.12 Vacxin vô hoạt Error: Reference source not found Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam iv Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Hình 4.13 Lấy máu xét nghiệm Error: Reference source not found Hình 4.14 Đo nhiệt độ .Error: Reference source not found Hình 4.16 Lấy dử mắt Error: Reference source not found Hình 4.15 Lấy dịch ngoáy mũi Error: Reference source not found Hình 4.17 Mẫu máu dịch Error: Reference source not found Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam v Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CDV TN ĐC Cs Tr Hb TBĐC ELISA NXB PCR RNA RT – PCR OD CPV PVD IHC CEF RT ASAT ALAT Canine Distemper Virus Thí nghiệm Đối chứng Cộng Trang Hemoglobin Trung bình đối chứng Enzyme Linked Immunosorbent Assay Nhà xuất Polymerase Chain Reaction Ribonucleic Acid Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction Optical Dentisy Canine Parvovirus Phocin Distemper Virus Immunohistochemistry Cyto Pathogenic Effect Reverse Transcriptase Aspartate Aminotranferase Alanin Aminotranferase Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam vi Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan PHẦN I: MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Chó loài động vật gần gũi thân thiết với người Từ xa xưa chó người dưỡng, nuôi với nhiều mục đích khác như: làm cảnh, trông nhà, chăn gia súc, bảo vệ, kéo xe tham gia công tác săn bắt tội phạm bảo vệ an ninh quốc phòng Đặc biệt nước Âu Mỹ người già sống độc thân không sống chung với chó nuôi nhà động vật gần gũi với họ Ngày nay, đời sống người ngày nâng cao, nuôi chó không với mục đích thông thường mà chó trở thành vật cưng nhiều người yêu thích Hiện nay, Việt Nam hòa vào kính tế thị trường đà phát triển, thu nhập người ngày nâng cao Song song ngành nuôi chó cảnh trở nên phổ biến phát triển mạnh Nhiều giống chó nhập từ nhiều nơi giới ngày phong phú chủng loại chất lượng Ngoài ra, Việt Nam chó nuôi với mục đích thương mại, cung cấp thực phẩm thịt chó thơm ngon mà giàu dinh dưỡng đặc sản tiếng số địa phương Cũng loài động vật khác, tình hình bệnh tật đàn chó diễn biến phức tạp gây thiệt hại lớn Chó mắc nhiều loại bệnh khác nội khoa, ngoại khoa, ký sinh trùng, truyền nhiễm, sản khoa Đặc biệt bệnh đường tiêu hoá chiếm tỷ lệ cao Trong bệnh đường tiêu hoá, bệnh Care xảy phổ biến đàn chó đặc biệt chó nhập ngoại chó nghiệp vụ gây thiệt hại lớn cho người nuôi chó Đây bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm loài chó, virus Care (Canine Distemper Virus – CDV) gây Bệnh Care xảy khắp nơi giới, chó nuôi mà nhiều quần thể động vật hoang dã Ở Việt Nam, bệnh Care phát từ năm 1920 Đến nay, bệnh xảy hầu hết tỉnh gây thiệt hại lớn chó mắc bệnh có tỷ lệ tử vong cao (90– 100%) Để đối phó với bệnh này, nhiều nước giới có Việt Nam sử dụng vacxin nhằm khống chế bệnh Tuy nhiên, Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan bệnh Care xảy gia tăng nhiều nước Nguyên nhân có thể là chủng virus gây bệnh và chủng virus chể tạo vacxin chưa phù hợp Vấn đề đặt là sử dụng các chủng virus phân lập được tại chỗ để chế vacxin có thể sẽ cho hiệu quả phòng bệnh tốt Việc tạo loại vacxin phòng bệnh Care chó từ chủng virus phân lập Việt Nam việc cần thiết mang tính thời Bộ môn Bệnh lý Thú y, khoa Thú y - Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam đã sử dụng chủng virus CDV-768 phân lập từ chó mắc bệnh Care tại khu vực Hà Nội để chế vacxin vô hoạt phòng bệnh Care Tuy nhiên để có thể sử dụng vacxin này cần theo dõi các chỉ tiêu lâm sàng, huyết học và hàm lượng kháng thể là điều cần thiết Xuất phát từ thực tế đó tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu một số chỉ tiêu lâm sàng, huyết học và hàm lượng kháng thể sau tiêm vacxin vô hoạt chủng CDV–768 phòng bệnh Care ở chó” 1.2 MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI Đánh giá số tiêu lâm sàng, huyết học chó sau tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Đánh giá diễn biến hàm lượng kháng thể có thể chó sau tiêm vacxin vô hoạt chế từ chủng virus CDV-768 Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 NHỮNG HIỂU BIẾT CƠ BẢN VỀ BỆNH CARE 2.1.1 Sơ lược bệnh Care Bệnh Care bệnh truyền nhiễm lây lan mạnh, chủ yếu chó non với triệu chứng sốt, viêm phổi, viêm ruột, viêm da, niêm mạc nốt sài chỗ da lông Cuối thời kỳ bệnh thường có triệu chứng thần kinh Sự kế phát vi khuẩn ký sinh sẵn đường tiêu hoá, hô hấp thường làm bệnh trầm trọng thêm, lúc bệnh thể chủ yếu hai dạng: viêm phổi viêm ruột (Trích theo Vương Đức Chất Lê Thị Tài, 2004) Virus Care chó phát từ kỷ XVIII tìm thấy Peru thuộc Châu Á Bệnh phân bố khắp giới, nhiều năm nguyên nhân bệnh gán cho nhiều loại vi khuẩn Năm 1905, bác sỹ thú y người Pháp tên Care trình nghiên cứu ông lấy nước mũi chó bệnh lọc qua lọc gây bệnh thực nghiệm cho chó, gây bệnh ông cho nguyên nhân bệnh Virus Vì bệnh gọi bệnh Care, David T Swith (1979) Care bệnh lây nhiễm cao chó, chó mắc bệnh gây tổn thương lớn hệ tiêu hoá dày, ruột, hệ thận kinh trung ương hệ hô hấp (Brigte Smith) Sau năm 1923, Putoni lần chế vacxin sống biến đổi, nhiên virus vacxin độc lực virus cao Từ năm 1948 sau với phát triển mạnh mẽ virus học nhiều vacxin phòng bệnh Care có hiệu đời Virus Care giống virus sởi hình thái cấu trúc Celiker Gilespie dùng virus Care thích nghi phôi thử tác dụng độ pH hoá chất độ nóng thấy rằng: Để phơi nhiễm 50 0C 60 phút hay 55 phút phá huỷ tính gây nhiễm virus, 250C virus bị vô hoạt chết – ngày, 40C virus bị vô hoạt chết 7-8 tuần Tài liệu khác lại cho virus Care có quan hệ gần với virus gây bệnh sởi người, Rinder pest gia súc virus Distemper hải cẩu Các công trình nghiên cứu liên quan kháng nguyên virus Care virus sởi, virus Care virus dịch tả trâu bò J.M Dams Pgoret mở rộng Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan nhiều triển vọng cho việc phòng bệnh Care cách dùng virus dịch tả trâu bò virus sởi 2.1.2 Nguyên nhân bệnh 2.1.2.1 Hình thái, cấu tạo virus CDV thuộc họ paramixoviridae có mối liên quan gần gũi tính kháng nguyên sinh lý với virus sởi người virus dịch tả trâu bò loài nhai lại Ba virus nhóm với gen Morbillivirus Morbillivorus virus tương đối lớn (đường kính 150 – 250nm) với xoắn ốc, chúng có lớp vỏ lipoprotein Virus tương đối không ổn định dễ bị tính gây nhiễm nhiệt độ cao, thời tiết khô, hoá chất tẩy rửa, dung môi hoà tan mỡ thuốc sát trùng Hình thái virus quan sát thấy có hình vòng tròn, hình bán nguyệt sợi cuộn quanh tròn mà thành Dạng tròn có đường kính đo 115nm đến 230nm Màng cuộn kép có độ dày 75 đến 85 A o với bề mặt phủ sợi xoắn ốc từ bên ra, không gây ngưng kết hồng cầu Hình 2.1 Hình thái virus Care Cấu trúc: Nucleocapside chứa ARN sợi không phân đoạn gần 1600 nuleotide mã hoá thành protein cấu trúc protein không cấu trúc N: Nucleoprotein, khối lượng phân tử 60 – 62 Kda bao quanh phòng vệ cho hệ gen virus, nhạy cảm với chất phân giải Protein P: Polymerase, khối lượng phân tử 73 – 80 Kda nhạy cảm với yếu tố phân giải protein, đóng vai trò quan trọng chép RNA Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Hình 4.7 Biểu đồ thể biến động số lượng hồng cầu chó trước tiêm vacxin ( x106 µl) theo thời gian (ngày) Qua kết thu bảng 4.9 biểu đồ 4.7 thấy số lượng hồng cầu chó thí nghiệm trước tiêm vacxin nằm phạm vi sinh lý bình thường Hình 4.8 Biểu đồ thể biến động số lượng hồng cầu chó sau tiêm vacxin ( x106 µl) theo thời gian (ngày) Qua kết thu bảng 4.9 biểu đồ 4.8 thấy: Số lượng hồng cầu chó sau tiêm vacxin tăng lên so với trước tiêm vacxin cao chó đối chứng, dao động từ 6,10(x10 6/µl)±0,2– Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 43 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan 6,85(x106/µl)±0,4 Như chó tiêm vacxin số lượng hồng cầu tăng lên so với trước tiêm vacxin so với chó không tiêm vacxin Theo chúng tôi, nguyên nhân làm số lượng hồng cầu tăng thể chó tiếp nhận vật chất lạ từ vào làm cho thể chó tự sinh đáp ứng miễn dịch làm thể huy động lượng số lượng hồng cầu, dẫn tới số lượng hồng cầu tăng nhẹ Để khẳng định tiến hành khảo sát số tiêu hệ hồng cầu chó Chúng thu bảng kết sau: Bảng 4.10 Kết khảo sát số tiêu hồng cầu chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 STT Chỉ tiêu Chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 (n = 9) X ± mx Đối chứng (n = 9) X ± mx Số lượng Hồng cầu (triệu/µl) 6,72 ± 0,08 Hàm lượng Hb (g/l) 135,32 ± 0,2 Tỷ khối huyết cầu (%) 46,82 ± 0,06 41,52 ± 0,02 69,67 ± 0,11 67,18 ± 0,04 Thể tích bình quân hồng cầu (fl) MCV Nồng độ huyết sắc tố bình quân (%) MCH 201,36 ± 0,04 6,18 ±0,04 123,07 ± 0,11 199,14 ± 0,13 Qua bảng 4.10 cho thấy số lượng hồng cầu chó đối chứng trung bình 6,18 ± 0,02 triệu/µl, dao động khoảng 6,10 – 6,20 triệu/µl Theo Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch,1997, hồng cầu chó khỏe dao động từ 5-8 triệu/mm3 Qua bảng 4.10 thấy sau chó tiêm vacxin CDV-768 tiêu hệ hồng cầu có thay đổi, cụ thể là: Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 44 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Trung bình số lượng hồng cầu chó tiêm vacxin có sai khác so với chó đối chứng hay nói cách khác chó tiêm vacxin vô hoạt, số lượng hồng cầu tăng lên so với chó không tiêm vacxin Trung bình hàm lượng Hemoglobin chó tiêm vacxin có sai khác so với chó đối chứng hay nói cách khác chó tiêm vacxin vô hoạt hàm lượng Hemoglobin tăng lên so với chó không tiêm vacxin Trung bình tỷ khối huyết cầu của chó tiêm vacxin sai khác so với chó không tiêm vacxin hay chó tiêm vacxin tỷ khối huyết cầu không thay đổi so với chó đối chứng Trung bình thể tích bình quân hồng cầu của chó tiêm vacxin sai khác so với chó không tiêm vacxin hay chó tiêm vacxin thể tích bình quân hồng cầu thay đổi so với chó đối chứng Nồng độ huyết sắc tố bình quân chó tiêm vacxin có thay đổi so với chó không tiêm vacxin hay chó tiêm vacxin nồng độ huyết sắc tố bình quân chó tiêm vacxin tăng lên so với chó không tiêm vacxin Trung bình lượng huyết sắc tố bình quân hồng cầu chó tiêm vacxin có thay đổi so với chó không tiêm vacxin hay nói cách khác chó tiêm vacxin trung bình lượng huyết sắc tố bình quân hồng cầu chó tiêm vacxin tăng lên so với chó không tiêm vacxin 4.3.2 Kết khảo sát tiêu bạch cầu Chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Bạch cầu tế bào hoàn chỉnh Mỗi loài có số lượng bạch cầu định lại dễ bị thay đổi dao động phụ thuộc vào trạng thái sinh lý, bệnh lý thể, phản ánh khả bảo vệ thể hoạt động thực bàovà tham gia trình đáp ứng miễn dịch Ở loại động vật khác số lượng bạch cầu khác Ở trạng thái sinh lý bình thường bạch cầu thường tăng sau vận động, có thai Giảm già, đặc biệt thể lâm vào tình trạng bệnh lý, số lượng bạch cầu thường tăng lên bị viêm nhiễm có xâm nhập kháng nguyên lạ vào thể Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 45 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Số lượng bạch cầu tính theo công thức bạch cầu Là tỷ lệ phần trăm loại bạch cầu bao gồm bạch cầu toan, bạch cầu kiềm, bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân, lâm ba cầu - Bạch cầu toan (Eosinophil): Trong nguyên sinh chất có hạt toan bắt màu đỏ Eosin Tế bào hình trứng nguyên sinh chất không bắt màu bắt màu nhạt - Bạch cầu kiềm (Basophil): Hình tròn hình lê nhân đa dạng, nguyên sinh chất sáng Những kiềm to nhỏ không nhuộm màu tím đen - Bạch cầu trung tính (Neutrophil): Trong nguyên sinh chất có hạt trung tính, chia làm nhiều loại bao gồm: Tủy cầu, ấu cầu, bạch cầu nhân gậy, bạch cầu nhân đốt - Lâm ba cầu(Lymphocyte): Nguyên sinh chất nhuộm màu xanh đậm, nhân tròn hình hạt dâu, nhân tím sẫm chiếm gần hết tế bào Kết khảo sát tiêu bạch cầu chó tiêm vacxin trình bày bảng 4.11 Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 46 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Bảng 4.11 Số lượng bạch cầu chó trước sau tiêm vacxin (x103 /µl) Chó Trước tiêm vacxin Sau tiêm vacxin 7 11 13 15 17 19 21 Lô thí nghiệm (n=3) TN1 TN2 TN3 10,15±0,12 9,5±0,22 9,15±0,3 9,95±0,35 9,61±0,06 9,13±0,2 10,05±0,15 9,75±0,25 8,98±0,5 10,5±0,6 9,52±0,33 9,29±0,6 11,0±0,23 10,3±0,17 9,35±0,3 11,9±0,13 11,0±0,04 10,40±0,2 12,2±0,41 11,8±0,13 11,65±0,2 12,3±0,4 12,0±0,21 11,8±0,1 11,5±0,24 11,91±0,41 10,65±0,4 11,9±0,05 10,9±0,32 10,4±0,3 11,8±0,36 9,87±0,17 9,36±0,1 11,6±0,6 9,75±0,6 9,22±0,3 10,3±0,7 9,90±0,6 9,13±0,4 10,2±015 9,10±0,21 8,10±0,1 10,5±0,6 9,00±0,2 9,21±0,5 Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Trung bình 9,6±0,3 9,56±0,2 9,59±0,5 9,77±0,6 10,22±0,3 11,1±0,2 11,88±0,41 12,03±0,4 11,35±0,41 11,08±0,36 10,34±0,6 10,19±0,6 9,78±0,7 9,13±0,21 9,57±0,6 Lô đối chứng (n=3) ĐC1 ĐC2 ĐC3 9,20±0,7 8,25±0,6 6,10±0,6 9,18±0,71 8,15±0,3 6,23±0,5 9,20±0,29 7,90±0,5 715±0,3 8,94±0,8 7,20±0,5 7,00±0,11 8,92±0,5 7,95±0,17 6,95±0,4 9,10±0,3 6,90±0,24 6,98±0,4 9,50±0,4 6,85±0,5 8,93±0,5 8,80±0,5 7,36±0,1 7,91±0,3 8,70±0,2 7,90±0,5 7,13±0,5 8,63±0,6 7,92±0,5 7,10±0,6 8,50±0,5 7,11±0,6 6,88±0,4 8,38±0,6 7,95±0,3 5,90±0,4 8,30±0,5 7,96±0,4 6,77±0,7 7,10±0,06 8,12±0,6 6,91±0,16 8,06±0,4 8,15±0,5 6,82±0,7 Trung bình SLBC 7,85±0,7 7,85±0,71 8,08±0,5 7,71±0,8 7,94±0,5 7,66±0,4 8,43±0,5 8,02±0,5 7,91±0,5 7,88±0,6 7,5±0,6 7,4±0,6 7,68±0,7 7,38±0,6 7,68±0,7 47 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Hình 4.9 Biểu đồ thể biến động số lượng bạch cầu chó trước tiêm vacxin (x103 /µl) theo thời gian (ngày) Dựa vào bảng 4.11 biểu đồ 4.9 thấy số lượng bạch cầu chó trước tiêm vacxin nằm phạm vi sinh lý bình thường, dao động từ 9,56±0,2 đến 9,77±0,6 (x103 /µl) Hình 4.10 Biểu đồ thể biến động số lượng bạch cầu chó trước tiêm vacxin (x103 /µl) theo thời gian (ngày) Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 48 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Dựa vào bảng 4.11 biểu đồ 4.10 thấy: Sau chó tiêm vacxin CDV-768 số lượng bạch cầu tăng lên so với trước tiêm vacxin so với lô chó không tiêm vacxin, điều giải thích lượng vacxin đưa vào thể vật làm vật đáp trả lại kích thích sinh lượng bạch cầu định với chế miễn dịch thể bảo vệ thể khỏi tác động lạ từ môi trường Để khẳng định điều tiến hành kiểm tra tiêu bạch cầu công thức bạch cầu, thu bảng sau: Bảng 4.12 Kết khảo sát tiêu bạch cầu Chó tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Chó tiêm vacxin Đối chứng (n = 9) (n = 9) X ± mx X ± mx 10,59 ± 0,15 7,50 ± 1,5 Bạch cầu đa nhân trung tính (%) 63,24 ± 0,21 60,17 ± 0,11 Bạch cầu toan (%) 7,10 ± 0,04 6,05 ± 0,04 thức Bạch cầu kiềm (%) 0,71 ± 0,16 0,69 ± 0,18 bạch Bạch cầu đơn nhân lớn (%) 63,07 ± 0,02 60,57 ± 0,28 cầu Tế bào Lympho (%) 6,02 ± 0,02 5,03 ± 0,04 Chỉ tiêu Số lượng Bạch cầu (nghìn/µl) Công Qua bảng 4.12 thấy sau tiêm vacxin tiêu hệ bạch cầu có thay đổi, cụ thể là: Số lượng bạch cầu chó đối chứng trung bình 7,5±1,5 nghìn/µl Khi chó tiêm vacxin số lượng bạch cầu tăng tới 10,59 ± 0,15 nghìn/ µl Trung bình số lượng bạch cầu chó tiêm vacxin cao chó đối chứng hay chó tiêm vacxin số lượng bạch cầu tăng cao chó không tiêm Theo chúng tôi, số lượng bạch cầu lợn bệnh tăng cao để bảo vệ thể hoạt động thực bào, đáp ứng miễn dịch tạo interferon chống lại xâm nhập vật chất lạ Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 49 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Trung bình bạch cầu đa nhân trung tính chó tiêm vacxin không thay đổi nhiều so với chó đối chứng hay chó tiêm vacxin bạch cầu đa nhân trung tính chênh lệch so với chó không tiêm Trung bình bạch cầu toan chó tiêm vacxin có thay đổi so với trung bình bạch cầu toan chó đối chứng hay chó tiêm vacxin bạch cầu toan tăng nhẹ so với bình thường Trung bình bạch cầu ái kiềm chó tiêm vacxin không thay đổi so với chó đối chứng hay chó tiêm vacxin bạch cầu ái kiềm chênh lệch so với chó không tiêm Trung bình bạch cầu đơn nhân lớn của chó tiêm vacxin không thay đổi so với chó đối chứng hay chó tiêm vacxin bạch cầu đơn nhân lớn chênh lệch so với chó không tiêm Trung bình tế báo lympho ở chó tiêm vacxin có thay đổi so với tế bào lympho chó đối chứng hay chó tiêm vacxin tế bào lympho tăng nhẹ so với bình thường 4.4 Kết xét nghiệm kháng thể kháng CDV chó sau tiêm vacxin CDV-768 Sau tiêm vacxin CDV-768 cho chó thí nghiệm tiến hành lấy máu để xét nghiệm hàm lượng kháng thể có thể chó thí nghiệm Kết biểu diễn bảng sau: Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 50 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Bảng 4.13 Kết xét nghiệm kháng thể sau tiêm vacxin vô hoạt kháng CDV phương pháp ELISA Trước Chó C tiêm vacxin Sau ngày Sau ngày Sau 15 ngày ngày OD KQ OD KQ OD KQ OD KQ Sau 21 ngày OD 0,530 Sau 28 ngày Sau 35 ngày KQ OD KQ OD KQ + 0,557 + 0,571 + TN1 0,124 - 0,128 - 0,251 + 0,480 + TN2 TN3 TB HLKT 0,191 0,17 - 0,195 0,181 - 0,243 0,325 + + 0,511 0,480 + + 0,561 0,520 + + 0,562 0,521 + + 0,611 0,550 + + 0,162 - 0,168 - 0,273 + 0,28 + 0,49 + 0,55 + 0,58 + chóTN TB HLKT chó 0,23 0,163 - 0,158 - 0,180 - 0,17 - 0,165 - 0,151 - 0,149 - ĐC Ghi chú: V ới Cut – off = 0,23 Nếu OD > Cut – off: dương tính Nếu OD < Cut – off: âm tính + Dương tính; - Âm tính TBHLKT: trung bình hàm lượng kháng thể TN: thí nghiệm ĐC: đối chứng Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 51 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Hình 4.11 Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng Dựa vào bảng 4.13 hình 4.11 thấy: Ba ngày sau tiêm vacxin hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng chênh lệch đáng kể Từ ngày thứ đến ngày thứ 35 sau tiêm vacxin thấy sai khác rõ rệt hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm chó đối chứng Cụ thể hàm lượng kháng thể chó thí nghiệm tăng lên nhiều so với hàm lượng kháng thể chó đối chứng so với trước tiêm vacxin Hàm lượng kháng thể chó lô thí nghiệm tăng lên theo ngày thời gian nghiên cứu đạt giá trị dương tính (tức > 0,23) Chứng tỏ vacxin vô hoạt CDV-768 tiêm vào thể chó thí nghiệm sinh kháng thể giúp thể chống lại virus Care có hội xâm nhập Điều khẳng định vacxin có tác dụng kích thích sinh kháng thể tính đến thời điểm 35 ngày sau tiêm Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 52 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu thu được, có số kết luận sau: Thân nhiệt chó sau tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 có tăng nhẹ không đáng kể Tần số hô hấp tần số nhịp tim chó sau tiêm vacxin tăng không ảnh hưởng tới sức khỏe vật Số lượng hồng cầu, hàm lượng Hb, tỷ khối huyết cầu tăng lên sau tiêm vacxin tăng lên so với chó đối chứng Có tăng lên số lượng bạch cầu bạch cầu toan tế bào lympho tăng nhẹ bạch cầu kiềm, bạch cầu đa nhân trung tính bạch cầu đơn nhân lớn không thay đổi nhiều Hàm lượng kháng thể có máu chó sau tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 cao so với chó không tiêm vacxin Hàm lượng kháng thể tăng lên sau tiêm vacxin ngày tiếp tục tăng vào ngày thời gian nghiên cứu Chứng tỏ thể vật tồn miễn dịch chống lại virus Care sau tiêm vacxin vô hoạt 5.2 Đề nghị Bệnh Care là một bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm ở loài chó Hiện tại bệnh vẫn chưa có thuốc điều trị đặc hiệu Đặc biệt virus Care ngày biến đổi, việc sử dụng các chủng virus phân lập được tại chỗ để chế vacxin có thể sẽ cho hiệu quả phòng bệnh tốt chính vì vậy đề tài chúng nghiên cứu ngày càng trở nên cấp thiết bao giờ hết Tuy nhiên, điều kiện không cho phép nên chúng chỉ nghiên cứu được chủng vacxin là CDV-768 Để nghiên cứu hoàn thiện chúng đưa kiến nghị : - Tiếp tục nghiên cứu thêm biểu lâm sàng, tiêu huyết học hàm lượng kháng thể chó tiêm thử nghiệm vacxin nhiều lứa tuổi, nhiều giống chó khác - Nghiên cứu thêm loại vacxin Care chế từ chủng virus phân lập Việt Nam có ghép với vacxin phòng bệnh khác cho chó Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 53 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU - Hình 4.12 Vacxin vô hoạt Hình 4.13 Lấy máu xét nghiệm Hình 4.14 Đo nhiệt độ Hình 4.15 Lấy dịch ngoáy mũi Hình 4.16 Lấy dử mắt Hình 4.17 Mẫu máu dịch TÀI LIỆU THAM KHẢO Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 54 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan A.TÀI LIỆU TRONG NƯỚC Vương Đức Chất – Lê Thị Tài (2004) Bệnh thường gặp chó, mèo cách phòng trị NXB Nông nghiệp Hồ Đình Chúc (1993) Bệnh Care đàn chó Việt Nam kinh nghiệm điều trị Công trình nghiên cứu, Hội thú y Việt Nam Đặng Văn Chung, Vũ Văn Đính, Phạm Khuê (1977) Bệnh học nội khoa tập 1, NXB Y học Hà Nội, Hà Nội, tr 58-62 Tô Du, Xuân Giao (2006) Kỹ thuật nuôi chó mèo phòng trị bệnh thường gặp, NXB Lao động xã hội Nguyễn Thị Huyền (2006) Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lí chủ yếu bệnh Care chó phương pháp phòng trị Phạm Sỹ Lăng, Trần Minh Châu, Hồ Đình Chúc, Lê Thanh Hải, Đào Hữu Thanh, Dương Công Thận (1988) Bệnh thường thấy chó biện pháp phòng trị, NXB nông nghiệp, Hà Nội Trần Thanh Phong (1996) Một số bệnh truyền nhiễm chó Tủ sách trường Đại học Nông lâm Nguyễn Vĩnh Phước (1978) Giáo trình Bệnh Truyền nhiễm gia súc NXB Nông nghiệp Nguyễn Như Thanh(1974) Giáo trình thực tập vi sinh vật thú y 10 Nguyễn Như Thanh - Nguyễn Bá Hiên - Trần Thị Lan Hương (2006) Giáo trình vi sinh vật đại cương NXB Nông nghiệp 11 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch , 1997 Giáo trình chẩn đoán lâm sàng thú y NXB Nông nghiệp Hà Nội B TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI Kai, C., Ochikubo, F., Okita, M., Iinuma, T., Mikami, T., Kobune, F and Yamanouchi, K.1993 Use of B95a cells for isolation of canine distemper virus from clinical cases J Vet Med Sci 55: 1067-1070 Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 55 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan Whetstone, C.A., Bunn T.O and Gourlay J.A.1981 Canine distemper virus titration in ferret peritonneal macrophages Cornell Vet 71: 144- 148 D Carlson Jame (2000) Dogowner’s Home veterinaryhand books Craig E.Greene and Max J Appel Canine distemper Seki, F., Ono, N., Yamaguchi, R and Yanagi, Y 2003 Efficient isolation of wild strains of canine distemper virus in Vero cells expressing canine SLAM ( CD150 ) and their adaptability to marrmoset B95a cells J Virol., 77: 9943 – 9950 Lednicky, J A., Meehan, T.P., Kinsel, Dubach… 2004 Effective primary isolation of wild- type Canine distemper virus in MDCK, MV1 Lu and Vero cells without nucleotide sequene changes within the entire haemagglutinin protein gene and in subgenomic sections of the fusion and phospho protein genes J Virol Method 118: 147 – 157 Simpson K.W., Maskell I.E., Mark well P.J (1994), Use of a restricted antigen diet in the management of idiopathic canine Colitis, Journal of small Animal practice 35, p.233-238 Robert M Jacobs, Jonh H Lumsden and Villiam (1996) Canine and feline reference values Appel, M.J., Pearce- Kelling, S and Summer B.A.1992 Dog lymphocyte facilitate the isolation and grow ò virulent canine distemper virus J Vet Diagn Invest 4: 258-263 10 Blixenkrone- Moller, M., V., Have, P., Orvell, C., Appel, M., Pedersen, I.R 1993 Studies on manifes-tations of canine distemper virus infection in an urban dog population Vet Microbiol 37, 163-173 11 Lan, N.T et al 2005.‘‘A canine distemper virus isolated from an autopsied dog in Hanoi, Vietnam’’ 12 Lan, N.T., Yamaguchi, R., Uchida, K., Sugano, S and Tateyama,S 2005 Growth Profiles of Recent Canine distemper Issolates on Vero Cells Expressing canine signalling lymphocyte activation molecule ( SLAM ) J Comp Pathol 133, 77-81 Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 56 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bùi Thị Lan 13 David T.Smith, Donald S.Martin (1979), Zinser’s Text book of Bacteriology, p.808-810 14 Brigitte.Smith(2005),HealthyHappyDog,http://en.Wkipedia.org/wiki/canine distemper 15 Sidery W B., Macdonald I A, Blackshaw P.E (1996), superior mesenteric artery blood flow and gastric emptying in humans and the differential effects of high fat and carbohydrate meal, Gut 35, p.186.190 16 Auburn University-College of Veternairy Medicine, //F\MISC\Canine Distemper Virus Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam 57 [...]... gian nghiên cứu: bắt đầu từ tháng 7/2014 đến tháng 11/2014 3.3 Nội dung nghiên cứu Theo dõi một số chỉ tiêu lâm sàng của chó trước và sau khi được tiêm vacxin CDV-768 Theo dõi một số chỉ tiêu sinh lý máu chó trước và sau khi được tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Theo dõi hàm lượng kháng thể kháng virus Care của chó trước và sau khi được tiêm vacxin CDV-768 3.4 Nguyên liệu 3.4.1 Vacxin. .. Thị Lan Tần số tim: dùng ống nghe nghe vùng tim trái trong vòng một phút, nghe lại hai lần và lấy kết quả trung bình ba lần nghe 3.5.3 Lấy mẫu máu và kiểm tra các chỉ tiêu huyết học Cứ hai ngày chúng tôi lấy máu chó vào các ngày 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21 sau khi tiêm vacxin để kiểm tra các chỉ tiêu huyết học bằng cách dùng kim tiêm vô trùng lấy 2ml máu ở tĩnh mạch... nghiệm đều cho kết quả âm tính với virus: Care, Parvo, viêm gan, Lepto và dại Thân nhiệt của 6 chó hoàn toàn bình thường và không có triệu chứng gì đặc biệt Từ những kết quả trên cho thấy cả 6 chó đều đạt yêu cầu thí nghiệm 4.2 Kết quả theo dõi các chỉ tiêu lâm sàng của chó sau khi tiêm vacxin vô hoạt Care chủng CDV–768 4.2.1 Thân nhiệt của chó sau khi tiêm vacxin Kiểm tra thân nhiệt là một trong... tiêm vacxin CDV-768 cho lô chó thí nghiệm với các liều lượng khác nhau theo đường tiêm dưới da cổ (bảng 3.2) Lô đối chứng không tiêm vacxin Bảng 3.2 Bảng bố trí các lô thí nghiệm và sử dụng chủng vacxin CDV vô hoạt cho từng chó Vacxin Liều Đường đưa Thí nghiệm TN1 TN2 TN3 CDV-768 CDV-768 CDV-768 2.3ml 2.5ml 2.6ml Tiêm dưới Tiêm dưới Tiêm dưới da cổ da cổ ĐC1 Đối chứng ĐC2 Không tiêm ĐC3 da cổ Sau khi. .. tiêm ĐC3 da cổ Sau khi tiêm vacxin chúng tôi tiến hành theo dõi, ghi chép về: thân nhiệt, tần số hô hấp, tần số nhịp tim và các triệu chứng lâm sàng của chó thí nghiệm Lấy máu vào các ngày 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21 sau khi tiêm vacxin để kiểm tra sự thay đổi các chỉ tiêu huyết học và diễn biến hàm lượng kháng thể của chó thí nghiệm 3.5.2 Quan sát sau tiêm Sau khi tiêm vacxin thành công chúng... theo dõi 10 ngày, nếu không thấy có biểu hiện của bệnh mới cho nhập đàn Phòng bệnh bằng tiêm phòng vacxin Tiêm vacxin là biện pháp phòng bệnh hiệu quả nhất đối với các bệnh do virus gây ra nói chung, trong đó có bệnh Care Vacxin phòng bệnh Care được tiêm lần đầu khi chó được 60 ngày tuổi, sau đó tiêm nhắc lại mũi 2 sau 21 ngày Định kỳ tái chủng mỗi năm một lần để đảm bảo khả năng bảo hộ 2.2 MỘT SỐ ĐẶC... ... Nghiên cứu một số chỉ tiêu lâm sàng, huyết học và hàm lượng kháng thể sau tiêm vacxin vô hoạt chủng CDV–768 phòng bệnh Care ở chó” 1.2 MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI Đánh giá số tiêu lâm. .. chó mắc bệnh Care tại khu vực Hà Nội để chế vacxin vô hoạt phòng bệnh Care Tuy nhiên để có thể sử dụng vacxin này cần theo dõi các chỉ tiêu lâm sàng, huyết học và hàm... trước sau được tiêm vacxin vô hoạt CDV-768 Theo dõi hàm lượng kháng thể kháng virus Care của chó trước sau được tiêm vacxin CDV-768 3.4 Nguyên liệu 3.4.1 Vacxin Vacxin sử dụng vacxin vô