Góp phần xây dựng tiêu chuẩn tinh bột sắn chất lượng cao làm tá dược

BỌ Y T Ẽ TRƯỜNG ĐẠI HỌC ————— Dược HÀ NỘI — GÕP PHÃN XÃY DỰNG TIẼU CHUẨN ■ TINH BỘT S Ắ N c h ấ t l ợ n g c a o LÀM TÁ DƯỢC ■ (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 1995 - 2000) Ngưòi thực : Nguyễn Thị Hường Giáo vỉén hướng dẫn: DS, Nguyễn Thị Thơm TS Phan Tuy Noi thực :Bộ môn Vô co - Hóa lý Tổ môn Vi nấm - Kháng sinli Thòi gian thực : + 5/2000 HÀ NỘI - 5/2000 Ẩ ỉf) '/ e ắ /ti ếừ t Em xin bày tỏ lòiiiị kính irọỉig biết Ơ11 sáu sắc tới Ds Nguyễn Thị Thơm TS Phan Tuý lận lình hướng dần giúp đờ em hoàn thành tốt công Irììih tốt nghiệp Em xin chân thành cảm Ơ11 TS Chu Thị Lộc, cúc lìiíìy cỏ môn vô - ìioá ỉỷ, lổ môn vi nấm - kỉiúiìỊ> sinh giúp đỡ nìùệí tình, tạo điều kiện đ ể em hoàn Ịhành khoú luận thời hạn Nhân dịp em xin cảm ơn gia đình, thảy cô Irnủiiiị toàn thể bạn bè dìu dắt em năm học vừa qua lỉù Nội, ngày 6/6/2000 Sinh viên Nguyễn Thị Hường MỤC LỤC Trang Phần I - Đặt vấn đề Phần II - Tổng quan 2.1 Tinh bột sắn Sư lưực sản xuất sử dụng linh bột sán thị trường 2.1.1 Tinh bột sắn 2.1.2 Sản xuất sử dụng tinh bột sắn Irong ngành dược Việl Nam 2.2 So sánh đánh giá chất lượng tinh bột sắn làm tá dược 2.2.1 So sánh tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng tinh bột làmtá dược theo dược điển số nước 2.2.2 Chất lượng tinh bột sắn dưực dụng sản xuấl nước 2.3 Những nghiên cứu nâng cao chất lưựng linh bộl sắn làm tá dược Việl Nam 2.4 Nội dung thực nghiệm cúa khoá luận 11 Phần III - Thực nghiệm kết 3.1 Nguyên liệu phương pháp thực nghiệm 19 3.1.1 Dụng cụ hoá chất ^ 3.1.2 Phương pháp kiểm tra đánh giá tiêu chuẩn theo chuyên luận dược điên tham khảo 3.2 Kết thực nghiệm nhận xél ^ 3.2.1 Khảo sát số mẫu tinh bột thị trường theo tiêu chuẩn dược điển Việt Nam tập ^ 3.2.2 Tinh chế tinh bột ^ 3.2.3 Tiến hành khảo sát tiêu chuẩn ^ 3.3 Bàn luận chung ^ Phần IV - Kết luận đề xuất ^ CHÚ GIẨI CHỮ VIẾT TẮT BP98 British Pharmacopoeia 1998 CP-97 Pharmacopoeia oílhc peoples republic of China -1997 DĐVN Dược điển Việt Nam EP97 European Pharmacopoeia 1997 IP96 Indian Pharmacopoeia 1996 JP12 Japan Pharmacopoeia -12 1991 p Pure - tinh khiết P.A Pure analysis - tinh khicl phân lích USP-23 The United States Pharmacopoeia 23 1995 PHẦN I - ĐẶT VẤN ĐỂ Tinh bộl lấy từ củ, hạt loài từ lâu đưực sử dụng rộng rãi đời sống hàng ngày người làm thực phẩm, nguyên liệu, phụ gia cho nhiều ngành công nghiệp khác Đặc biệt ngành dược, tinh bột sử dụng với khối lượng lớn đổ làm tá dược Ớ Việt Nam, xí nghiệp dược phẩm nước sử dụng hàng nghìn lấn linh bột loại làm tá dược năm Trong tinh bộl sắn chiếm tỷ lệ cao nhấl Tinh bộl làm dược nước ta chủ yếu lấy từ hai nguồn chính: Nhập lừ nước tinh bột sắn sản xuất Irong nước Nhưng thực lố Việl Nam vãn chưa có sử sản xuất tinh bột sắn phục vụ cho ri,7| roi St> sánh chất lượng với mẫu chưa linh chế dựa theo tiêu chuẩn mộl số nước *Chọn đề nghị tiêu chuẩn kiểm nghiệm tinh bột sắn chất lượng cao Việt Nam PHẦN n - TỔNG QUAN 2.1 Tinh bột sắn Sơ lược sản xuất sử dụng tinh bột sắn tronỊ* ngành dựơc Việt Nam 2.1.1 Tinh bột sắn Tinh bộl sắn đựưc chê' từ rễ cú sắn (Manihol ulilisima Pohl Euphorbiaccae) Hạt tinh bột sắn có nhiều dạng, mộl số hạl tròn, đa số hình chuông, bờ Iròn từ 1/4 đến 3/4 hạt, có cạnh chéo hay thẳng 1/4 hạt Kích thước hạt ihay đổi từ 1,5- 30|um, gần 70% cớ kích thước từ 6-12jim Các hạt tinh bộl đứng riêng lẻ hay tụ tập thành lừng đám, có rốn hạt hình sao, vân tăng trưởng không rõ Như tinh bột khác, tinh bột sắn cấu tạo hai dạng la amylose amylopectin Tỉ lệ hai dạng tinh bột khổng khác nhiều so với loài tinh bột khác.(Bảng 1) + Phân lử amylosc mội mạch gồm hàng nghìn đơn vị a-D-Glucose nôi theo dây nối 1-4, đa số mạch thẳng, phân nhánh Công Ihức cấu íạo amylosc +Amylopectin cấu lạo đưn vị oc-D-Glucose có phân lử lượng lớn hưn, phân nhánh nhiều hưn Các đơn vị a-D-Glucose nòi với theo dây nối 1-4, chỗ phân nhánh nối với theo dây nối 1-6 Mạch bên (mạch hai điểm phân nhánh) có khoảng 5-9 dơn vị Glucose, mạch bên có lừ 10-18 đưn vị [2J Cấu lạo phân tử amylopeclin Bảng 1: Tỷ lệ amylose amvìopectin mộỉ so loài tinìi bộ! Tinh bôl Khoai tây Ngô Gạo Sẩn Amylosc (%) 20 24 18,5 15,7 Amylopccún (%) 80 76 81,5 84,3 •Tinh bột sắn thường không lan nước lạnh cồn 70°, trương nở đun nóng với nước, độ trương nử lớn nhấl 90°c •Thành phần hoá học củ sắn nói chung giống hàm lượng chất củ sắn lại khác loài, ca củ cây, cỏ thỏ nêu số gia trị trung bình sau [5,15] Bảng 2: Thành phần củ sắn (%) Nước TB Ihco khối lượng củ iươi Trung 60-70 22-29 bình Ghi chú: TB - Tinh bội Protein Chất béo Glucose Tro 0,7-1,9 0,1-0,7 1-4,8 0,6-1.2 Ngoài củ sắn có lượng acid Cyanhydric (HCN) cao, sắn Việt Nam [5,15] (Bảng 3) Do tính chất dỗ tan nước nên aciđ dễ dàng bị loại khỏi linh bội trình sản xuất - - Bang 3: Ham h(c/ng acid cyanhydric cu sdn San Indonesia Viet Nam Ham luong FICN (mg/kg) Cu co vo Cu boc vo 86,4 59,4 102,6 64,8 2.1.2 San xuat va sur dung tinh bot sail nganh dime Viet Nam •Trong nganh cong nghiep diroc, tinh bot duoc dung voi khoi lirong lcfn de lam ta dixoc thuoc vien c6 nhieu iru diem: tinh bot khong gay tac dung diroc ly rieng, khong gay kich ling niem mac dufrng tieu hoa, khong co mui vi kho chiu Tinh bot luong doi tro ve mat hoa hoc, khong tac dung vo'i diroc chat, khong lam thay doi tac dung diroc ly cua diroc chat Tinh bot co ban chat on dinh, khong len men moc, ti gan nhir tuong du'o'ng voi diroc chat nen khong bi tach 16p dung lam ta duoc don qua tnnh dap vicn [8]- Do co nhieu dac tinh, ngoai lam ta diroc don tinh bot duoc sir dung cho nhieu muc dich khac a nhirng ly le thich hop: Lam ta diroc v6i ty le 5-10%, co cau true xop nen sau dap vicn tao duoc he thong vi mao quan phan bo kha dong deu vien, giup vicn then co che vi mao quan Lam ta diroc Iron v6i ti le 5-10% co tac dung dieu hoa sir chay Trong vai tro lam la duoc dinh, ho tinh bot de tron deu vefi diroc chat lai ft co xu hudng keo dai thefi gian cua vicn TliUcing dung loai ho tir 5-15% [1] Trong cac loai tinh bot, tinh bot siin la mot la duoc cang duoc sir dung rong rai d nutfc la vi che’ lir cu siin la nguyen lieu re lien, de kiem dac biel la cac tinh mien nui, trung du va cac tinh phia nam • San xuat tinh bot sdn Nganh duoc Viet Nam sir dung nhieu tinh bot san, nhirng chira co co so nao cua nganh san xuat tinh bot s&n dc dung ma phai mua Cac co s& san xuilt tinh bot s^n nircfc ta, luy quy mo, Irang thiet bj ma cho san pham co hicu - - suất chấl lượng khác Nhưng lấl thống mội quy trình eo' theo sơ đồ Sơ đồ ỉ: Quy trình sảĩi xuất tinh bột sắn Bóc hai lớp vỏ, rửa đất cát Nghiổn bàn xát máy xay Lọc vải gạc vải đù Lấy dịch lọc bò hã Phơi ánh mặt irời sây 30-40° Do quy mô sản xuất công nghiệp, trình phơi, lọc chưa đưực tốt nên tinh bột sắn bán thị trường thường lẫn nhiều bụi than, cát Hầu hết xí nghiệp dược phẩm mua tinh bột sắn Ircn thị trường thường đem linh chê lại trước đưa vào sản xuất Quá liình tinh chế thường rấl đơn giản: Hoìi linh bột vào nước, khuấy mạnh Iheo chiều thời gian nhâì định Gại> dịch sang đồ chứa khác đổ loại lạp ciiấl Iiặng láng xuống Dè 1aIH dịch qua đêm, gạn bỏ nước trôn tạp chất nhọ bổ mặl Tinh bột đem vắt sấy khỏ Thực tế trình chí nhằm loại lạp chưa ý đến yếu lố vi lượng Irong tinh bột - - CƯ học Tinh bột mua thị trường hay sau linh chế lại, trước đưa vào làm tá dược đưực kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn DĐVN 2.2 So sánh đánh giá chất lượng tinh bột sắn làm tá dược 2.2.1 So sánh tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng tinh bột làm tá diíực theo dược điển số nước Do tinh bột có vị trí quan trọng ngành công nghiệp dược nôn háu hốt dược điển có chuyên luận riêng tinh bột Tinh bộl sắn sử dụng xí nghiệp dưực phẩm nirớc ta kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn DĐVN II - tập Để đánh giá chất lượng linh bột sắn làm tá tlưực chúng lôi tiến hành so sánh tiêu chuẩn chấl lượng linh bội DĐVN II - tập với số dưực điển giới: (Bảng 4) Dược điển Mỹ 23 (ƯSP-23) Dược điển Anh 98 (BP-98) Dược điển Trung Quốc 97 (CP-97) Dược điển Ấn Độ 96 (IP-96) Dược điển Châu Âu 97 (EP-97) Dược điển Nhậl 12 (JP-12) - - + ống thử: Cân 0,50g tinh bột đcm nung (làm cách xác định tro) Hoà cắn 2ml HC1 loãng, có Ihể đun nóng nhẹ Chuyển toàn hộ dịch vào ông Nesler, thêm nước đốn 47ml Cho vào ống 50mg linh thê Ammonium fersull'al 3ml Ammonium thiocyanal 30% Trộn dem so mầu Mẫu thử đạt yêu cáu liêu mẩu ống Ihử nhại mầu cúa ỏng mẫu ( giớ i hạn 0,002 % ) • Theo CP-97: Nguyên lắc, dung dịch mẫu, ống so máu, uiỏi hạn lươn;ỉ, lự USP-23 cách tiến hành có mộl sô điểm khác sau: - Bước xử lý tinh bột han đẩu: Theo CP- 97 tinh bột đem lắc với nưức VI HC1 loãng phút, lọc lấy dịch đem làm phán ứng so mầu - Sau làm phản ứng so mầu, níu mầu ống Ihử khác mầu ỏng mẫu đem chiết phức mầu 20ml n-bulanol, địch n-bulanol dược chuyển vào ống Nesslcr khác, thêm n-bulanoỉ vừa đủ 25ml, đem so mầu • Do IP-96 quy định giới hạn rộng (0,004 1-ig/g) USP-23 EP-97 quy định giới hạn tạp chất Fe cho tinh bột khoai lây ((),002|iig/g) Vì v(iy chúng lôi chọn khảo sát theo USP 23 CP-97 • Kết khảo sát: Tiến hành mẫu M7 chưa linh chế, làm ống: - Ống thử 1: (theo USP-23) Cân 0,5()g tinh bột đcm nung plurơnu pháp xác định tro Hoà lan cán 2ml HC1 loãng, đun nóng nhẹ, chuyen dung dịch sang ống so mầu Nessler, ihôm nước đến 47ml - Ống thử 2:(CP-97) Cân 0,50g tinh bột cho vào cốc có mỏ, llìêm 4ml HC1 loãng, 16ml nước cấl, khuấy liên lục phiu,lọc rửa, lấy toàn dịch cho vào ống Ncsler Cho vào ống 5()mg ammonium 1ers IIliai 3ml íimmonium Ihiocyanat Thêm nước cho vừa đủ 50ml Lắc dều so máu tliấv ỏnu lliử có mầu đậm mầu ống thử - 20- Tiếp lục làm thứ lăng Ihời gian lắc lên 10 15 pliúi, kết cho ống thử có máu vãn nhạt mầu cúa ống thử Nhân xét: So sánh hai cách làm chúng lôi Ihấy làm iheo USP-23 cho kốl đáng tin cậy CP-97 Để tiết kiệm thời gian nung, theo USP-23 lấy sản phẩm phép thử tro (2.0g linh bột) pha thành lOOml, lấy xác 25ml đcm thử Theo phương pháp ƯSP-23 tiến hành ihử Irên mẫu tinh bột khác Kết cho ống thử có mầu khác khác với máu ống mẫu Đcm lất ống ihử ống mẫu chiốl n-butanol CP-97 Kết cho ống Ihử cỏ màu đồng với màu ỏng mẫu Với kết khảo sát chúng lôi thống chọn làm tlieo USP-2 \ thêm bước chiết n-butanol trước so mầu •Kết kiểm nghiệm tinh bột Iheo USP-23: (giới hạn 0,002%) Bảng 12: Kết ílúìiìi giá liêu chuẩn tạp chất sắt Mẫu M3 M2 M7 • Sau linh chế Chưa tinh chế Lầnl Lẩn2 Lần Kết luân Lầnl Lần2 Lần Kếl luân KĐ KĐ Đ Đ Đ KĐ Đ Đ Đ KĐ Đ KĐ KĐ Đ KĐ Đ Đ KĐ KĐ Nhận xét: Tâì mẫu tinh bột mà mua lrC'11 thị Irường có hàm lượng sắt cao so với liêu chuẩn cúa USP-23 Sau linh chế, l;ú mẫu đạt tiêu chuẩn vổ hàm lưựng sắí theo USP-23 » p H • Theo USP-23: Cân 20,()g ± lOOmg tinh bột, Ihêm 40ml nước lạnh khuấy đều, ihêm 3()0ml nước nóng, đun sôi phút để nguội đến nhiộl (lộ phòng Thêm lOOml nước, khuấy liên lục với tốc độ vừa phải Imny, pliúl Đem đo pH Tinh bột sắn đạt yêu cầu phải có pH nằm khoang 4,5-7,0 • Kết Ihực nghiệm đưực ghi bảng sau -21 - Bảng ¡3: Kếi dáìih giú liêu chuẩn p lỉ M3 M2 M7 Mẫu Chưa TC Sau TC Chưa TC Sau TC Chưa TC Sau TC Lẩn 6,57 5,55 7,05 6,25 5,35 6,35 Lần 6,62 5,64 6,88 6,31 5,31 6,39 Lần 6,56 5,68 6,92 6,21 5,27 6,34 TB 6,58 5,62 6,95 6,26 5,34 6,36 Kết luân Đ Đ Đ Đ Đ Đ 3.2.3.7 Chấl oxy hoá - Nguyên lắc: Theo USP.23 IP-96, chất oxy hoá có linh bột môi Irường acid sc giải I, lừ KI Định lượng 1-, giải phóng bằni’ Na0S,O3 0,002N với thị hồ tinh bột Hàm lưựng chất oxy lioá xác định số mililíi Na^SiO, 0,002N dùng - Tiến hành: (Theo ƯSP-23) Cho 0,4g linh bộl vào bình nón cỏ níil mài 125ml, thêm 50ml nước cất Đậy nắp lắc phút Gạn dung dịch vào cốc ly tâm dung tích 50ml Đcm ly tâm Lấy 30ml dung dịch trong, cho vào bình nón 125ml khác Them lml acid acclic đậm đặc, 0.5-l,0u KI Đậy nap lắc, để vào chõ lối 25-30 phút Thêm lml thuốc thử hồ tinh bột, dem định lượng Na-,s,03 0,002N tới mầu thị Song song liến hành mẫu Irắng Với giới hạn 0,002% Thổ tích NaiS-,0, 0,002N không đưực l,4ml Bảỉig 14: Kếí đánh giá liêu cliỉiẩỉi chất oxy hoá Mẫu chưa TC M3 Sau TC chưa TC M2 Sau TC chưa TC M7 Sau TC Lần 0,6 0,0 0,05 0,05 0,75 0,05 Lẩn 0,65 0,0 (),()() 0,0 0,8 (),() - 22 - Lần 0,7 0,0 0,05 0,05 0,75 (),() TB 0,65 0,0 0,03 0,03 0,77 0.02 Kết luân Đ Đ Đ Đ Đ Đ Nhân xét: Các mẫu trước sau tinh chế đạt chất oxy hoá, kết thực nghiệm cho thấy tinh chế hàm lưựng chất oxy hoá tinh bột giảm nhiều 3.3.2.8.Sulfur dioxyd - Cách liến hành: USP-23 CP-97 tương tự Trộn 20g tinh bột với 200ml nước đốn lan tối đa Lọc, lấy lOOml dịch lọc, thêm 3ml thị hồ tinh bộl đem chuẩn độ với u 0,0IN lới xuál mầu xanh Song song tiến hành mẫu trắng • Kếl - Theo qui định USP-23: thổ lích U 0,()1N không 2,7ml (0,008%) - Theo qui định CP-97: thể lích I2 0,0IN không l,35ml (0,004%) Bảng 15: Kết đánh giá tiêu chuẩn Suỉỷiir dioxyd Mẫu M3 M2 M7 chưa TC Sau TC chưa TC Sau TC chưa TC Sau TC Lầnl Lẩn2 Lần3 TB 0,0 0,0 0,9 0,65 0,0 0,0 0,05 0,0 0,8 0,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,95 0,5 0,0 0,0 0,02 0,0 0,90 0,58 0,0 0,0 Kết ]uân USR.23 CP 97 Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ Đ •Nhận xét: Các mẫu chưa tinh chế tinh chê' đạí liêu chuẩn USP-23 CP-97 qua tinh chế làm giảm đưực khoảng ^0% so voi ban đầu - 23- 3.3.2.9 Giới han vi khẩn ♦ Các môi trường nuôi cấy Môi trường Canh thang- Lactose Cao thịt Peplon 5g Laclosc 5g Nước cất vừa đú lOOOmỉ; Môi trường Tetrathionate Pcpton Muối mâl CaCO, ' Na2S2ỏ Nưức cất vừa đủ pH 6,7-7,1 lüg lüg 30g 1000ml; pH 7,2-7,4 Môi trường Sabouraud + kháng sinh lüg Peplon Glucose 40g Cloramphenicol 5ümg Tliạch 15g Nước cất vừa đủ 1000ml; pH= 5,6- 5,8 Môi trường Mac Conkcy Pcpton NaCl Lactose Đỏ trung tính Muối mật Thạch Nước cất vừa đủ 20g 5g 10g 2,5ml 5g 18fi 1000ml; pH = 7,2 -7,4 Môi trường Brilliant green Pcpton Cao men NaCl Laclose Brilliant green Sucrose Đỏ phenol Thạch Nước cất vừa đủ 10g 3g 5g 10g 12,5mg lüg 8()mg 20mg 1000ml; pH= 6,7-7,1 - 24- Môi trường Ihạch- sắt-3 đường Pepton Cao thit NaCl Lactose Glucose Sucrose Đỏ phenol Thach Na‘S A FeS04 Nước cấl vừa đủ 2()g 5g í IÕg lg lòg 25mg 0,2g 0,2g lOOOml; pH= 7,2-7,4 Môi trường Eosin- Mcthylcn - B!uc (EMB) Peplon l()g Thạch 15g K2H P04 2g Lactose lOg Eosin 2% 2ml Xanh mctylen 0,5% l,3ml Nước cất vừa đủ lOOOml; pH= 7,4-7,6 Hấp tiệt trùng latm 20 phút, Irước dùng đổ nguội môi trườn 45°c cho thêm dung dịch gồm :ỉod 6g; KI 5g; Nước cất vừa đủ 20ml Môi trường Ihạch thưởng Pepton Cao thịt Cao men NaCl Thạch Nước cất vừa đủ lOg 3g 2g 5g 20m g lOOOml; pH = ,4 -7 ,6 ♦ Cách xác định số vi khuẩn hiếu khí vi nấm có Ig tinh bột Cân vô trùng 10,Og linh bột cho vào bình nón vô trùng, thêm nước muôi sinh lý (0,9%) vô trùng cho vừa đú lOOml ta dung dịch chế phẩm có nồng độ pha loãng 10'1 Lắc Irong phút để linh bộl có thổ lan lối (ỉa vSau pha loãng tiếp nồng độ 10 2,10" \ - Đối với vi khuẩn: Cho vào đĩa pelri lml dung dịch Irên nồng độ 10'2 10"' Thêm đĩa 15ml môi trường thạch thường đun chảy đổ nguội 45°c Xoay Iròn nhẹ hộp để Irộn dung dịch thử môi trường (mỗi độ pha loãng làm đĩa Nuôi cấy 30-35°C 2-4 ngày - Đối với vi nấm : Làm tưưng lự với độ pha loãng i 1và 1()'2, môi trường Sabouruud +kháng sinh Nuôi cấy 20-25°C íl nhấl ngày Làm song song đĩa chứng âm tính có môi trường, không cấy chỏ' phẩm - Tính kết quả: Tổng số vi khuẩn hiếu khí, vi nấm lg tinh bột tính theo công thức A\ K \ + A K sí — - Trong đó: Al: Số khuẩn lạc trung bình nồng độ pha loãng K A2: Số khuẩn lạc trung bình nồng độ pha loãng K2 K1,K2 : Độ pha loãng ♦ Cách phân lập xác định Salmonelỉa E.coli - Chuẩn bị mẫu thử Cân 10,Og linh bột cho vào bình nón chứa lOOml môi Irưừng canh lhaii!j, Laclosc, cho ihêm 0,1% lween 80, lắc phút, sau lắc lại (Gọi dung dịch A) Lấy lml dung dịch A cho vào lOOml môi trường thạch lỏnỵ Telralhionate, trộn ủ 37°c 18-24 (Gọi dung dịch B) - Phân lập xác định loài Salmonclla Salmonclla trực khuẩn Gram (-), di dộng, hô liííp kị khí kliỏng h;il buộc, không lên men đường Sucrose, lên mcn Glucose, tạ o H ^ s đặc điểm hình thái, sinh hoá loài dc xác định vi khuẩn - 26- Trên CƯ S(V + Các phản ứng lên men đường Nhũ dịch vi khuẩn từ dung dịch B đưực cấy lên đĩa thạch MacConkey Brilliant green Sau thời gian nuôi cấy khổng có khuẩn lạc cỏ đặc điổin bảng 16 mẫu thử khồng có Salmonella Nếu cỏ khuẩn lạc cỏ đặc điểm bảng 16, chọn khuẩn lạc đicn hình cấy vào ống lhạch-sắt-3đưò'ng Sau 24 nuôi cấy 27°c phẩn ihạeh nghiêng cỏ mầu đỏ, phần thạch đứng chuyển mẩu vàng xung quanh đường cấy sâu cỏ không cỏ mầu đen tạo HiS phản ứng dương tính + Phản ứng Gram Nhuộm Gram: Salmonella bắt mầu đỏ Soi iươi: trực khuẩn di động Bảng ló: Đặc điểm khuẩn lực Salmonella mỏi trường nuôi cấy Môi trường Brilliant green Đặc điểm khuẩn lạc - Khuẩn lạc có mầu Irắng đục đốn hồng, bao quanh khuẩn lạc có quầng mẩu hồng đến đỏ MacConkey - Khuẩn lạc có mầu vàng, có mầu đcn trung tâm khuẩn lạc - Phân lập xác định Escherichia.coli E.coli Irực khuẩn Gram (-), di dộng, có khả chịu nhiệl cao, có thổ phát triển nhiệt độ 42-45°C E.Coli lên men đường lactosc mạnh tạo nhiều khí, đặc tính sinh hoá quan trọng để phát vi khuẩn + Thí nghiệm lên men đường Cấy nhũ dịch từ dung dịch A lên thạch đĩa MacConkcy Sau 24 nuoi cấy 43-45 °c, E.coli phát triển tạo khuẩn lạc mầu hổng đến đỏ có vòng tlỏ bao quanh khuẩn lạc Các khuẩn lạc đưực cấy sang môi trường EMB, nuôi ỏ 42-45°C 24 Trổ 11 môi trường khuan lạc Li.coli có mầu xanh đen, ánh kim + Thí nghiệm xác định hình thái vi khuẩn Tế bào E.Coli hình que ngắn, đầu tròn, bắl mầu đỏ với Ihuốc nhuộm Gram Soi tươi thấy trực khuẩn di động - Có thể tóm tắl qui trình phân lập E.coli Salmonclla theo - Canh thang telralhional: làm SƯ đồ sau - Môi Irường MacConkey: khuẩn phong phú Salmonella lạc mầu hồng đến đỏ, có vòng đỏ - Môi trường Brilliant grecn: khuẩn bao quanh lạc mầu Irắng đục đốn hồng bao -Môi trường EMB: khuẩn lạc cỏ quanh quầng mầu hồng đốn đỏ mầu xanh đen, có ánh kim - Môi trường MacConkey: khuẩn -Trực khuẩn ngắn, hai đầu tròn, lạc mầu vàng có sám đen Gram (-), di động trung tâm - Môi Irường lhạch-sắl-3đường: Phần thạch nghiêng có mẩu đỏ, phần thạch đứng có mầu vàng, xung quanh đường cấy sâu có mầu đcn lạo HiS -Trực khuẩn Gram (-) di dộng Sơ đổ 3: Sơ đồ phán lập Salmonella Escherichia.coỉỉ - 28- ♦ Kết - Tiến hành làm mẫu M2, kốl bảng 17 - Tiêu chuẩn dược điển: Bang Chúng chọn kết luận tlico USP23 (không có E.coli Salmonella) EP-97 (lổng số vi khuẩn không 10',vi nấm không 1()2 lg tinh bột, không đưực có E.coli) Bảng 17: kết đánh giá độ nhiễm khuẩn Lần Chưa linh chế TB TB Sau tinh chế Tổng số vi khuẩn/lg 730 845 785 786.6 450 515 490 485 Tổng sô vi nấm/lg 150 175 125 150 25 25 50 33 Pllân lập E.coli Salmonella Kết luân ƯSP-23 EP-97 Đ Đ KĐ Đ •Nhận xốt: Cả mẫu không bị nhiễm vi khuẩn điểm y tố Mẫu chưa tinh chế không đạt giới hạn vi nấm 3.3 Bàn luận chung Do thời gian có hạn chúng lôi khảo sát so sánh đưực liên mẫu tinh bột Mặc dù vậy, với kốl ihu xin cỏ số bàn luận sau: - Tạp chất lạ mà chúng lòi kháo sát theo DĐVNII- íập qui định tạp chất cư học Cụ thể: có vài liểu phàn lạ nhìn kỹ Ihấv Clnìnu loi đề nghị tiêu chuẩn cho tinh bột chất lưựng cao ''không dược có" Theo qui định dược điển Anh số dược điển khác qui định lại lố bào màng nhầy chất nguyên sinh Thiết nghĩ tinh bột lẫn lạp chất chứng íù trình sản xuííl, linh chê: chưa sạch, đíìy nil lìm; nguyên nhân thuận lợi cho phát Iriển men mốc trình báo quản tinh bột Vì vậy, thấy cẩn nghiên cứu kỹ hưn vấn đề - 29 - - Hàm lượng kim loại nặng trình bày Irên, dược điển qui định giới hạn hàm lượng sắl Theo chúng lôi điều hựp lý sắt mộí xúc tác mạnh mà kết khảo sát, tinh bột hàm lưựng sắt cao hàm lượng chì nhiều lẩn [8] Và Ihực lố cho thấy kiểm tra cliỉ tiêu kim loại nặng theo DĐVNII- iập Ihì mẫu đạl chất lượng (Bảng 8) kiểm tra liêu kim loại nặng theo sắt (Bảng 12) mẫu đcu không đạt - Các tiêu chất oxy hỏa, sulfur dioxyd, tro sau nung, giới hạn vi khuẩn thiết nghĩ nên xem tiêu bắt buộc tinh bộl sắn làm dược Bởi tiêu nói lên độ linh khiốl linh bộl tạp vô (tro sulíal), tính trơ mặt hoá học tá dược ( sulíur dioxyd, chất oxy hoíí) vô khuẩn íhuốc viên Trong điều kiẹn nay, chí tiêu de dàng đạt ý đến khâu xử lý nước sấy tinh bội Irong qui trình sản xuất tinh bột sắn làm dược Tuy cần phải tiếp lục nghiên cứu qua số kết thu được, mạnh dạn đề xuất "Dự thảo liêu chuẩn chất lượng tinh bột sắn chất lượng cao làm tá dược " sau: TINH BỘT SÁN Chế biến từ rễ củ sắn (Manihot Utilísima Pohl Euphorbiaceae) * Đặc điểm thực vật: Hạt tinh bột sắn có nhiều dạnu, mộl số hạt Iròn, đa số hình chuông, bò’ 11'òn từ 1/4 đến 3/4 hạt, có cạnh chéo hay thẳng 1/4 hạt Kích thước hạt Ihav đổi từ 5- 30|im Các hạt tinh bột đứng riêng lẻ hay tụ tập thành từni; đám, có rốn hạt hình sao, vân tăng trưởng không rõ /, Định tính A - Soi kính hiên vi hạt tinh bội phải cỏ đặc điểm nêu - 30- B - Lấy 5g tinh bột cho vào cốc thuỷ tinh thêm 25ml nước, khuấy đều, đun sôi đến chín tinh bộl - 10 phút, đổ nguội đưực khối hồ (gcl) trong, sánh, dính tay c - Lấy bột chín Irên, hoà vào 2-3 ml nước, thèm 1-2 giọt dung dịch Iod 0,1N, có màu xanh Ihẫm 2, Tạp chất lạ Lấy 5g linh bột, hoà vào 50 ml nước cốc thuỷ tinh hình trụ, đường kính khoảng 5cm Khuấy mạnh theo chiều Irong phút, đổ lắng Irong 10 phút Nhìn đáy cốc khổng có tạp chất nặng chụm thành vòng đáy cốc, mặt nước không tạp chất nhẹ 3, pH Chuẩn bị khối hổ với 20,0 + lOOmg íinh hột , cho hồ vào cốc thuỷ tinh thích hợp, thêm lOOml nước Khuấy liên tục phút Đem đo pH pH phải nằm khoảng 4,5- 7,0 4, Mất khôi lượng làm khố Sấy 105°c Khối lượng không 15% 5, Tro sau nung Không 0,5%, khối lượng tinh bột đcm ihử 2,0g 6, Sát Hoà lan cắn thí nghiệm "Tro sau Ịiung " 8ml HC1 loãng, đun nóng nhẹ Chuyển dịch vào bình định mức lOOml Thêm nước cho vừa đủ, lắc Lấy 25ml dung địch đcm làm phản ứng so mẩu Mẩu ốnu thử không đậm mầu ống mẫu chứa ÌƠỊ-Ig Fe (giới hạn 0,002%) 6, Chất oxy hoá Cho 0,4g linh bột vào bình nón có núl mài 125ml thêm 5()ml nước cíú Đậy nắp lắc phúl Gạn dung dịch vào cốc ly lâm dung tích 5()ml Đem ly tâm Lấy 30ml dung dịch trong, cho vào bình nón 125ml khác Thêm lml acid acctic đậm đặc, 0,5-l,0g KI Đậy nắp, lắc, để vào chỗ lối 25-30 phút Thêm lml thuốc thử hồ tinh bộl, đcm định lượng Na-ẴO^ 0,002 N tới mấl mầu Ihị Song song tiến hành mẫu trắng Thể tích Na2S->03 0,002N không l,4ml (0.002%) 7, Sulfur dioxyd Lắc 20g linh bột với 200ml nước đốn tan lối đa Lục, lấy 100ml dịch lọc, thêm 3ml thị hồ tinh bột đcm chuẩn độ với u (),01N tới xuất mầu xanh Song song tiến hành mẫu Irắng Thể tích 1-, 0,0IN không ỉ,35ml (0,004%) 8, Giới hạn vi khuẩn Tổng số vi sinh vật lg tinh bột không 10' vi khuẩn, 102 vi nấm Mẫu thử Salmonella Escherichia.coli PHẨN IV - KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Từ liệu thu được, có thô rút số kết luận sau: 1.Tinh bột sắn thị Irưừng lẫn tap chấl học liên kicỉn tra Iheo tieu chuẩn DĐVNII-tộp lliì sô không đạt chí liêu tạp chất lạ Khi kiểm tra theo lieu chuẩn dược dien tham khảo tấl cá mẫu kháo sát khổnụ, đạl üjó'i hạn sát, mộl mẫu khônụ đạl giới hạn vi nấm qui mô phòng thí nglìịcm cliấl lượnu linh hột sắn náii'j, cao rõ rệl đạl tấl ca liêu cúa dược điên nước linh bộl linh chố Ihco qui U'inh nêu ( qui trình trang 9) Việc tinh chê tinh bột sắn theo qui trình nêu cỏ lliổ liên hành qui mô lớn, việc đánh giá châì lượng tinh bộl sắn làm tá dược theo chí tiêu "dự thảo chất lưựng tinh bột sắn chất lưựng cao làm dược" kha ihi cần thiết * Đề xuất - Tiếp tục nghiên cứu tiêu chuẩn tạp chấl lạ theo dược điển |9,14| - Khảo sát kỹ tiêu chuẩn giới hạn vi khuẩn - Đổ phù hựp với dieu kiện chúng tỏi cho rằngngànhdược nên nghiên cứu xây dựii‘j, liêu ch lia n ehâì lượng cho linh bộl sắn dược dụng Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn bào che Kỳ lliuật bào ehe sình dược học dạng thuốcT /???■ Bộ mỏn dược liệu Bài giảng dược liệu lập 199H (29-30) Dược điển Việt Nam II lẠp Nhà xuấl y học 1994 Trần Thị Hạnh Khảo sát chi tiêu kim loại nặng theo liêu cluiaii dược điển Việl Nam mộl sô dược điển Ihố giới Công trình tốl nghiệp Dược sĩ đại học khoá 46.1996 (15-16) Đặng Thị Tliu Hiền Nghiên cứu chế lạo linh bội biến tính làm dược từ tinh bội sắn Công trình lốt nghiệp Dược sĩ dại học klioá 48 1998 Phan Tuý -Lê Viel Hùng -Nguyễn Thị Ihưm -Hà ngọc Tràm Nghiên cứu loại số kim loại khỏi tá tinh bộl sắn bội lalc.Tạp CỈ1Í Dơọc học số 6/1993 (15) Phan Tuý Khảo sái hàm lượng sắt ,dơng mội số dược , dược chất mội số chế phẩm phương pháp phổ hấp thụ nguyên lử- Thỏnụ báo kiểm nghiệm 1/1997 Kỹ Ihuật bào chế dạng thuốc Nhà xuấl Y hục 1991 British Pharmacopoeia 1998 10 European Pharmacopoeia 1997 11 Indian Pharmacopoeia 1996 12 Japan Pharmacopoeia -12 1991 13 Pharmacopoeia OĨ llie peoples republic oi’ China -1997 14.ÌÌ1C United Stales PhciimacoỊiocia 23 1995 15.Hryen T.T "Hoy^enne cị}n3nK0xmm^niaix CBOÌĨCTI icp;iXMnjTa MnrmoKa n 3G2MOI.-CHOCTŨÈ ero MOUHCDnxanmi" riicccpTannii Ha coucicaHHc vqenoii CTenesn KOHnnnain TexmreeszD: HavK M 1969 CTỌ [...]... Những nghiên cứu nâng cao chất lượng tinh bột làm tá dược ở Việt N am Như đã đề cập ỏ' Irên, chất lượng linh bột sắn dưực dụng sản xuất tron»; nước còn Ihấp chủ yếu do hàm lượng kim loại cỏ trong tinh bộl còn quá cao Trong những năm gần đây mộl số tác giả [6,7] đã nghiên cứu và đưa ra đưực biện pháp thích hựp, khả íhi để giảm hàm lưựng ion kim loại trong lá dược tinh bột sắn Quá trình tinh chê' phải qua... mạnh dạn đề xuất "Dự thảo liêu chuẩn chất lượng tinh bột sắn chất lượng cao làm tá dược " như sau: TINH BỘT SÁN Chế biến từ rễ củ cây sắn (Manihot Utilísima Pohl Euphorbiaceae) * Đặc điểm thực vật: Hạt tinh bột sắn có nhiều dạnu, mộl số hạt Iròn, đa số hình chuông, bò’ 11'òn từ 1/4 đến 3/4 hạt, có cạnh chéo hay thẳng ở 1/4 hạt Kích thước hạt Ihav đổi từ 5- 30|im Các hạt tinh bột đứng riêng lẻ hay đôi khi... siVy tinh bột ở 35-40°C Tiên hành tinh chế 3 mẫu M3, M2, M7, mỗi mẫu 0,5 kg 3.2.3 Khảo sát các tiêu chuẩn 3.2.3.1 Nguyên tác chung - Để xây dựng liêu chuẩn kiểm nghiệm tinh bộl sắn, chúng lôi iham khao cách làm của một số đưực điển [3,9-14] trong đó chọn ƯSP-23 làm chính Với những tiêu chuẩn mà cách làm khác nhau giữa các dược điển, chúng lòi tiến hành khảo sál một số cách liêu biểu trên cùng một mẫu tinh. .. xem là chỉ tiêu bắt buộc đối với tinh bộl sắn làm lá dược Bởi vì các chỉ tiêu này nói lên độ linh khiốl của linh bộl về tạp vô cơ (tro sulíal), tính trơ về mặt hoá học của tá dược ( sulíur dioxyd, chất oxy hoíí) và sự vô khuẩn của íhuốc viên Trong điều kiẹn hiện nay, các chí tiêu này de dàng đạt được nếu chú ý đến khâu xử lý nước và sấy tinh bội Irong qui trình sản xuất tinh bột sắn làm lá dược Tuy còn... Tiên chuẩn dược dụng của tinh bộ í theo một số dược điển Nhân xct: Qua so sánh các liêu chuẩn kiểm nghiệm ở trên chúng tôi thấy: + Tiêu chuẩn chất lưựng linh bột của DĐVN II-tập 3 qui định còn thấp so với tiêu chuẩn của một số nước trên ihố giới + Chỉ tiêu giới hạn kim loại, riêng dưực điển Việt Nam qui định llìử giới hạn chì còn các dược điển [9,14| qui định llìử giới hạn sắl + Tiêu chuẩn tạp chất. .. kim loại trong tinh bột sắn nhưng quy trình tinh chế (sơ đồ 2) đã cho phép tinh chế được linh hột sắn có hàm lượng kim loại đạl tiêu chuẩn ƯSP-23 và một số nước khác liên Ihế giứi (20|ig/g) 2.4 Nội dung thực nghiệm của khoá luận * Khảo sát tinh bột sắn ở một số nơi trên thị trường theo tiêu chuẩn DĐVNII - tập 3 * Chọn lấy 3 mẫu (tốt nhất, trung bình và kém nhất) trong các mẫu trên đem tinh chê' theo... lliuật - Đĩa Petri -Tinh bột sắn trên thị trường - Nước máy, nước cất - NaOH tinh thể , Na^SOj tinh thổ PA - HC1 đặc, H2S04 đặc p - Lò nung Prolab, chén nung - Máy khuấy - Nồi hấp tiệl trùng - n-Buthanol - Phễu lọc nấm, phễu lọc Büchner - Thạch bột, peplon, cao Ihịí, C áu men - Tủ sấy, tủ ấm - 12 - - Máy đo pH 3.1.2 Phương pháp kiểm tra, đánh giá các tiêu chuẩn chất lượng tinh bột theo chuyên luận... dược điển Việl Nam qui định + Một số chỉ tiêu mà nhiều dưực điển qui định thì dưực điển Việl Nam lại không đề cập đến như giới hạn chất oxy hoá, Sulfur dioxyd, tro và giới hạn vi khuẩn + Trong các dược điển Iham kháo thì tiêu chuẩn của USP 23 cao hơn cả 2.2.2 .Chất lượng tinh bột sán dược dụng sản xuất trong nước Theo một số công Irình nghiên cứu đã được công bố, hàm lưựng kim loại nặng trong linh bột. .. sát và so sánh đưực liên 3 mẫu tinh bột Mặc dù vậy, với kốl quả ihu được chúng tôi xin cỏ một số bàn luận như sau: - Tạp chất lạ mà chúng lòi kháo sát theo DĐVNII- íập 3 qui định là các tạp chất cư học Cụ thể: chỉ có vài liểu phàn lạ nhìn kỹ mới Ihấv Clnìnu loi đề nghị tiêu chuẩn này cho tinh bột chất lưựng cao là ''không dược có" Theo qui định của dược điển Anh và một số dược điển khác qui định lại là... trình 2 Tinh chế Iheo quy trình 3 Tinh chế theo quy trình 4 HL Fe'+()Lifí/K) 12Ố.Ố 99.7 79.1 45.2 21.5 55.4 HL Cu2+( ^ /o ) 12.0 10.1 6.95 4.37 2.06 5.57 Cũng trên cơ sở quy irình linh chế Ircn, lác giả |5 | lia linh cliố được linh bột đạt tiêu chuẩn của dược điển Mỹ (Bảng 7) Bảng 7: Hàm lượng kim loại nặng irơtiỊi tinh bột sắn trước và sau linh chế Mẫu TB sắn trên thị trưởng TB sắn sau khi tinh chế ... sử dụng tinh bột sắn Irong ngành dược Việl Nam 2.2 So sánh đánh giá chất lượng tinh bột sắn làm tá dược 2.2.1 So sánh tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng tinh bột làmtá dược theo dược điển số... châì lượng tinh bộl sắn làm tá dược theo chí tiêu "dự thảo chất lưựng tinh bột sắn chất lưựng cao làm dược" kha ihi cần thiết * Đề xuất - Tiếp tục nghiên cứu tiêu chuẩn tạp chấl lạ theo dược. .. vi lượng Irong tinh bột - - CƯ học Tinh bột mua thị trường hay sau linh chế lại, trước đưa vào làm tá dược đưực kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn DĐVN 2.2 So sánh đánh giá chất lượng tinh bột sắn làm