Nghiên cứu lên men sinh tổng hợp kháng sinh từ streptomyces 35 29

MUC LUC DAT VAN DÊ....................................................................................................1 PHAN1: TONG QUAN..................................................................................2 1.1. Khâng sin h .............................................................................................2 1.1.1. Lich s ir..............................................................................................2 1.1.2. Dinh nghîa khâng sinh .....................................................................2 1.1.3. Don vi khâng sinh.............................................................................2 1.1.4. Phân loai khâng sinh ........................................................................2 1.1.5. ûng dung cüa khâng sinh.................................................................. 3 1.2. Dai cirong vê Streptom yces ................................................................... 3 1.3. Câi tao giong vi sinh v â t....................................................................... 5 1.3.1. Mucdich........................................................................................... 5 1.3.2. Phirong phâp câi tao giong............................................................... 5 1.4. Lên men sinh tong hop khâng s in h .....................................................6 1.4.1. Lên men bè mât.................................................................................6 1.4.2. Lên men chim....................................................................................7 1.5. Chiet tâch-Tinh che ..............................................................................9 1.5.1. Chiê^t xuât..........................................................................................9 1.5.2. Tinh chê' sân phâm.............................................................................9 1.6. Pho phân tuf......................................................................................... 10 1.6.1. Phd tü ngoai khâ kiên (UV-VIS)..................................................... 10 1.6.2. Ph6 hong ngoai (IR).........................................................................11 1.7. Mot so ket quâ moi trong nghiên curu khângsinh .............................11 1.7.1 Phân lâp khâng sinh moi alaremycin cocâu truc tircmg tu acid 5aminolevunic tùr Streptomyces sp. A012304....................................11 1.7.2. Kiêm soât sinh hoc nâm hoaisinh gô voi Streptomyces violaceusninger XL-2..................................................................... 12 1.7.3. Chùm gen chiu trâch nhiêm sinh tong hopvalidamycin trong Streptomyces hygroscopicus subsp. jinggangensis 5008................ 13 PHAN 2. THITC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ................................................. 14 2.1. Nguyên lieu và phmmg phâp thuc nghiêm........................................ 14 2.1.1. Nguyên vât lieu............................................................................... 14 2.1.2. Phuofng phâp nghiên cïru................................................................. 17 2.2. Két quâ thuc nghiêm và nhân xét...................................................... 23 2.2.1. Két quâ chon loc ngâu nhiên...........................................................24 2.2.2. Két quâ dôt bién bàng ânh sâng U V ...............................................24 2.2.3. Két quâ sau dôt bién lân 2 bàng ânh sâng UV................................ 25 2.2.4. Két quâ sau dôt bién lân 3...............................................................26 2.2.5. Két quâ chiét khâng sinh bàng dmhc..............................................28 2.2.6. Két quâ sâc kÿ lôp mông.................................................................29 2.2.7. Két quâ cât cô bot khâng sinh thô................................................... 30 2.2.8. Két quâ thfr hoat tmh chông nâm .................................................... 31 2.2.9. Két quâ sâc kÿ côt........................................................................... 31 2.2.10. Két quâ tinh ché khâng sinh.......................................................... 33 2.2.11. Két quâ do pho hông ngoai (IR), ph6 tir ngoai-khâ kiêh (UV-VIS). 34 2.2.12. Két quâ do nhiêt dô nong chây bôt khâng sinh 35 A .................. 34 2.2.13. Hoat tmh khâng sinh 35A trên mot sô chung VSV kiëm dinh .... 34 2.2.14. Thü hoat tmh khâng sinh à câc nông dô pha loâng.....................35 2.2.15. Sa dô tong quât quy trinh lên men sân xuât, tinh ché khâng sinh 36 PHÂN 3. KÊT LUÂN VÀ DE XUÂT........................................................... 38 3.1. Két luân:............................................................................................... 38 3.2. De xuât:.................................................................................................39 TÀI LIEU THAM KHÂO PHU LUC CHU GIÂI CHÜ VIÊT TÂT ADN Acid deoxyribonucleic ATTC^ American Type Culture Collection (viên bâo tàng giông chuân cüa Mÿ) CWI Cell wall I (thành té bào kiëu I) BV bênh viên D Dufcfng kmh vông vô khuan (vô-nâm) trung bînh D Ducfng kmh vông vô khuanj^û-ûam) dmhc dung môi hûu co DT Dich tê HPLC High performance liquid chromatography (sàc kÿ long hiêu nàng cao) IR Infrared (hong ngoai) ISP International Streptomyces Project (chuong trînh Streptomyces quôc te) L. DAP L-Diaminopimelat MT môi truômg MTdd môi trucfng dung dich NST nhiêm sâc thé s sai sô chuln co hiêu chînh STT Sô thu* tu UV Utra Violet (tir ngoai) V thé tfch VM Viên mât VSV Vi sinh vât —t ’T f DÂT VAN DE • Tir khi khâng sinh duoc tîm ra và dira vào ûng dung, nhiêu bênh nhiêm trùng tùng là nan y mà con nguôi phài bât lire, dâ duoc chîra tri. Nhimg viêc lam dung thuoc khâng sinh dân toi tînh trang rat nguy hiëm là ngày càng co nhiêu vi khuân khâng lai câc khâng sinh sàn cô. De trânh hâu quâ co thé chüng ta bi dua lai tînh trang giong nhu khi chua phât minh ra câc thuoc khâng sinh: nhüng bênh nhiêm trùng don giân nhât cüng không thé dièu tri duoc voi bât kï thuoc khâng sinh nào, thi di kèm vôi viêc sir dung hop lÿ khâng sinh, con nguôi phài tim ra duoc nhüng khâng sinh moi. Cùng viêc tao ra khâng sinh bàng con duông tong hop hoàc bân tong hop, tim ra câc chât khâng sinh moi cô nguôn gôc vi sinh vât vân giü môt vi tri vô cùng quan trong. Trong tong sô hon 10.000 chât khâng sinh dâ duoc phât hiên và công bô, cô toi 66% là do xa khuân sinh ra. Chi Streptomyces gôm nhiêu xa khuân cô khâ nàng sinh tong hop khâng sinh da dang vê câu truc và dàc diêm khâng khuân. Môt sô loài trong chi này côn sinh tong hop câc chât chîra ung thu. Streptomyces 35.29 là chüng xa khuân duoc phân lâp tù dât, bùn... à Viêt Nam, nghiên cuu cho thây cô dàc tinh di truyên on dinh, khâ nàng sinh tong hop khâng sinh pho rông, cô nhiêu tiêm nàng dé tien hành câc nghiên cüu tiép theo. Do dô chüng tôi chon dê tài “ Nghiên cüu lên men sinh tong hop khâng sinh tù Streptomyces 35.29 ” vôi câc mue tiêu: 1. Nàng cao hiêu suât sinh tong hçfp khâng sinh cüa chüng Streptomyces 35.29 bàng dôt biên cài tao giông két hop vôi sàng loc ngâu nhiên. 2. Hoàn thiên hon công doan tâch chiét và tinh chê'. 3. Buôc dàu du kién câc nhôm chü'c co bân cüa sàn phâm khâng sinh duoc sinh tong hçfp. 1 PHAN 1. TÔNG QUAN 1.1. KHÂNG SINH [1], [2], [3], [9], [12], [16] 1.1.1. Lich sur [1], [12], [16] Nâm 1929, Alexander Fleming phât hiên ra khâ nâng khâng S.aureus cua nâm Pénicillium notatum, mô dàu cho kÿ nguyên nghiên cûu và sûr dung khâng sinh. Nâm 1938, Florey và Chain dâ thuc nghiêm penicilin trong dièu tri. Nâm 1941, penicilin duçfc lên men trên quy mô công nghiêp dé phuc vu diêu tri thuong binh. Nâm 1944, Waksman phât hiên ra streptomycin. Hiên nay, dâ co hon 10.000 chât khâng sinh duoc tîm ra, trong do khoàng hon 150 chât duoc dua vào sur dung dâ gôp phân nâng cao tuoi tho và chât luong cuôc sông cüa con ngirôi. 1.1.2. Dinh nghla khâng sinh [1] Co nhiêu dinh nghîa khâc nhau vê khâng sinh, song cô thé nêu lên môt dinh nghîa duoc coi là khâ hoàn chînh: “ Khâng sinh là nhûng sàn phâm dâc biêt nhân duçrc tùr VSV hay câc nguôn tu nhiên khâc, cô hoat tmh sinh hoc cao, cô tâc dung kïm hâm hoâc tiêu diêt mot câch chon loc lên mot nhôm VSV xâc dinh (vi khuân, nâm, nguyên sinh dông vât v.v...) hay té bào ung thu, à nông dô thâp”. 1.1.3. Don vi khâng sinh [7] Là luçfng khâng sinh toi thiëu pha trong mot thé tich quy uôc dung dich cô khâ nâng üc ché hoàn toàn su phât triën cüa chüng VSV kiëm dinh dâ chon. Vi du: Penicilin G 1 don vi = 0,6 (ig (là luong penicilin toi thiëu hoà tan vào 50 ml canh thang cô khâ nâng ûc ché su phât triën cüa S. aureus 209 P). 1.1.4. Phân loai khâng sinh [1], [2], [9] Khâng sinh phân loai theo tmh nhay càm cüa vi khuân vôi khâng sinh (khâng sinh diêt khuân, khâng sinh kim khuân), theo nguôn gôc (do xa khuân, 2 vi khuân, nam...) tao ra, theo co ché tac dung (khâng sinh uc ché tong hçfp vâch té bào vi khuân, khâng sinh üc ché tong hçfp acid nhân...), theo câu truc hoâ hoc. Trong dô phân loai khâng sinh theo câu truc hoâ hoc là khoa hoc nhât. Theo câu truc hoâ hoc, khâng sinh duoc phân loai thành câc nhôm: > Nhôm beta-lactam: penicilin, cephalexin... > Nhôm aminoglycosid (aminosid): streptomycin, gentamicin... > Nhôm macrolid: erythromycin, spiramycin... > Nhôm lincosamid: linomycin, clindamycin... > Nhôm tetracyclin: tetracyclin, doxycyclin... > Nhôm phenicol: cloramphenicol, thiamphenicol... > Nhôm peptid: vancomycin, polymycin... > Nhôm quinolon: acid nalidixic, ciprofloxacin... | > ( Nhôm co-trimoxazol : co-trimoxaroïT^, jk,C=0, -N=0 ...(hâp thu chü yéu büc xa cô buôc sông X = 300 4- 305 nm); câc nhôm -N=N, >C= S-...(chü yéu hâp thu büc xa cô buôc sông X > 190 nm). + Nhôm tâng màu: câc halogenua (CT; Br ; I' ); câc alkyl (-CH3; -QHj), câc amin (-NH-)... chü yéu hâp thu büc xa cô buôc sông À,< 200 nm. 10 1.6.2. Pho hông ngoai (IR) + Dinh nghîa: dirdng cong biëu diën su phu thuôc cüa ctfcmg dô hâp thu birc xa hông ngoai cüa mot chât vào sô sông hoâc buôc sông là pho hâp thu hông ngoai, thuông goi don giân là pho hông ngoai cüa mot chât. + Ca sa lÿ thuyet: Ta cô sô sông:v = — 2 TTC y M R Mr goi là khôi luong rut gon phân tü. Vori phân tu cô hai nguyên tü A va' D B *ta co: 1 1 M , XM R ---= —1 +-------> MD= —B m r m a m b r m a+m b Nhu vây khi M Rcàng lôn thï v càng nhô. + Nguyên tac: trong phân tü khi cô nhom nguyên tü nào dô hâp thu nâng luçmg và thay doi trang thâi dao dông thï tao nên môt dài hâp thu trên pho IR. Cô môi tuofng quan giîra nhom nguyên tü và dài hâp thu nên cô thë dua vào su cô mât cüa dài hâp thu dë nhân biét mot nhom chu’c nào dô. Nhiêu nhom chûc cô câc dài hâp thu dâc trung. Dây là co sôr cüa viêc phân tfch câu truc bang phé IR. 1.7. Mot so két quâ moi trong nghiên cüru khâng sinh [18], [19], [20] 1.7.1 Phân lâp khâng sinh môi alaremycin cô câu truc tuong tu acid 5aminolevunic tùr Streptomyces sp. A012304 Alaremycin là khâng sinh môi cô câu truc tuong tu acid 5-aminolevunic (ALA)-tiên chât tong hop Hem. Phân lâp tü MT lên men chüng xa khuân (phân lâp tü mâu dât à Yokohama-Nhât Bàn). Ki hiêu Streptomyces sp. AO12304. MT nhân giông (glucose 4%, cao thit 1%, bot dâu tuong 0,3%, CaC03 0,3%, pH 7,0), trong bînh lâc vôi toc dô 300 vong/phüt à 30°C trong 4 ngày. MT lên men (dextrin 6%, men khô 2%, NaQ 0,3%, CaC030,3 %, cao thit 0,1% và K2HP04 0,1% ), bînh lên men à 30°C vôi tôc dô quay 220 vông/phüt trong 4 ngày. 11 Xü lf dich lên men vcii Diaion HP-20, sau do chiêt bang ethylacetat pH 2. Lôp dmhc duoc chiét lai voi nuôc à pH 9. Lôp nuôc thu duoc dem sâc kÿ trao dôi ion QMA. Chiét dich rua giài voi ethylacetat à pH 2. Bay hoi lop dmhc dén cân. Tù 21 dich lên men thu duoc 150 mg bot trâng. Câu truc hoâ hoc cüa alaremycin là acid 5-acetamido-4-oxo-5-hexenoic (C8HuN 04) nhc* phép phân tfch phé khoi và công huông tù hat nhân. Câu truc cüa Alaremycin gân giông khâng sinh khâng nam primocarcin phân lâp tù xa khuan Norcadia fukayae. Hoat lue khâng khuan cüa Alaremycin duoc tâng cudng khi cô mât ALA (VSV kiëm dinh là E. Coli), mâc dù bân thân ALA không cô khà nâng khâng khuan ngay cà à nông dô 1000 jug/ml. Chua xâc dinh duoc co ché tac dung. 1.7.2. Kiém soât sinh hoc nam hoai sinh gô voi Streptomyces violaceusninger XL-2 Chüng xa khuan duoc phân lâp tù vô cây rùng Dehradun-An Dô, duoc nhân dang là Streptomyces violaceusninger, dâ cho thây cô su dôi khâng manh më voi nhiêu loai nâm hoai sinh gô nhu: Phanerochaete chrysosporium, Postia placenta, Coriolus versicolor, và Gloeophyllum trabeum. Nhùng nghiên cüu cho thây hop chât hoat dông sinh hoc ngoai bào chiu trâch nhiêm dôi khâng. Diêu kiên sàn xuât tâc nhân kiëm soât sinh hoc duoc toi uu hoâ (Môi trucmg YCED chûa cao nâm men, acid casamino, và dextrose, bo sung 0,3 w/v kitin tinh khiét, pH 5,5 nhiêt dô 28°C, thdi gian 72h). Tinh ché bàng hê thông sâc kÿ trao dôi anion sü dung côt DEAE-cellulose, thu duoc protein don chât trong natri dodecyl sulfat - polyacrylamid gel 10%. Nhân dang protein- tâc nhân chiu trâch nhiêm kiëm soât sinh hoc cüa Streptomyces violaceusninger dôi voi nâm hoai sinh gô này là 28,259 kDa endochitinase. 12 1.7.3. Chùm gen chiu trâch nhiêm sinh tong hop validamycin trong Streptomyces hygroscopicus subsp. jinggangensis 5008 Chùm gen chiu trâch nhiêm sinh tong hop validamycin, mot khâng sinh aminocyclitol duoc sur dung rông râi trong kiëm soât tâc nhân gây bênh khô vàn à lüa, nhân duoc tùr Streptomyces hygroscopicus subsp. jinggangensis 5008, su dung thàm do di thé abcC-gen bao quât su dông vong Dsedoheptulose 7-phosphat thành 2-epi-5-epi-\aliolone trong sinh tong hçfp acarbose tù Actinoplanes sp. chüng SE50/110. Su mât doan 30-kb ADN tü chùm gen trong NST gây hâu quâ mât sân xuât validamycin, chüng tô su liên quan chrnh cüa chùm gen trong sinh tong hop chât bâo vê thuc vât quan trong này. Doan 6-kb chîra valA (gen abcC dông thé mâ hoâ cyclase giâ dinh) nhu hai khung doc mô hoàn chînh bd tro (valB và valC mâ hoâ lân luot adenyltransferase và kinase giâ dinh), duoc to chuc nhu mot operon. Chüc nâng cüa ValA theo tiêu chuân gen duoc chî ra là thiét yéu cho su sân xuât validamycin và vê mât sinh hoâ chiu trâch nhiêm riêng cho su dông vong Dsedoheptulose 7-phosphat thành 2-epi-5-episaliolone mà trong thü nghiêm in vitro dùng ValA di thé sàn xuât du trong E. coli. Thông tin thu duoc là co sô cho nghiên cüu phân tfch chi tiét câch thûc sinh tong hop hoàn chînh, dinh huotig dé hiëu dây dû sinh tong hop validamycin. 13 PHÂN 2. THUC NGHIÊM VÀ KET QUÂ 2.1. NGUYÊN LIÊU VÀ PHUONG PHÂP THlTC NGHIÊM 2.1.1. Nguyên vât lieu ❖ Chüng xa khuân: • Chüng xa khuân Streptomyces 35.29 do phông thi nghiêm vi sinh, bô môn Vi sinh-Sinh hoc, Truông dai hoc Duoc Hà Nôi cung cap. • Giông vi sinh vât kiëm dinh: giông vi sinh vât kiëm dinh do bô môn Vi sinh -Sinh hoc, Trucmg dai hoc Duoc Hà Nôi cung câp. Bâng 2.1: Câc chüng VSV kiëm dinh Chüng VSV kiëm dinh Viét tat Escherichia coli ATTC 25922 Proteus mirabilis BV 108 Shigella flexneri Salmonella typhi E.coli P. mirabilis S.flexneri DT 112 DT 220 S. typhi Pseudomonas aeruginosa VM 201 P. aeruginosa Staphylococcus aureus ATTC 1128 S. aureus Bacillus pumïlus ATTC 10241 B. pumilus Bacillus subtilis ATTC 6633 B. subtilis Bacillus cereus ATTC 9946 B. cereus Sarcina lutea ATTC 9341 S. lutea Candida albicans C. albicans Moc xanh sp. 1 Moc den sp. 1 14 ❖ Thành phân câc môi tnrdng sir dung duoc ghi trong bâng 2.2: Bâng 2.2 : Thành phân câc môi truông sir dung Thành phân Tinh bot MT2 MT2dd MT MT canh thach thang thirông 2 2 KC1 0,05 0,05 NaN03 0,2 0,2 KH2P04 0,1 0,1 MgS04.7H20 0,05 0,05 NaCl 0,5 MT MT Sabouraud Sabouraud long dâc 2,0 2,0 1,0 1,0 0,5 Glucose Pepton 0,5 0,5 Cao thit 0,3 0,3 Thach 2 0 0 1,6 0 1,8 Nuôc 100 100 100 100 100 100 pH 6,i3-7,2 7,0'-7,5 ❖ Vât lieu dùng trong sàc kÿ: - Bân mông sàc kÿ: silicagel 60 F254 Merck, - Dung môi chay sàc kÿ: câc dung môi trong bâng 3, - Binh chay sàc kÿ, - Côt sàc kÿ: ducrng kfnh 1,6 cm, dài 70 cm, - Hat silicagel 60 Merck (0,063-0,2 mm), - Mao quân thfch hop. 15 6,0-6,5 ❖ Câc dung môi dâ sir dung: Bàng 2.3 : Câc dung môi sir dung Dung môi Khoi lirçmg Nhiêt dô soi riêng (g/cm3) (°C) Methanol 0,791-0,793 64,5 Ethylacetat 0,902 77 Ethanol 0,789-0,791 78,3 Cloroform 1,470-1,480 60-62 n-Butanol 0,81 117 Aceton 0,79 56 Triethylamin 0,726-0,728 90 Amoniac 0,91 Dimethylformamid (DMF) 0,946-0,950 153 ❖ Tâc nhân gây dôt bién: Ânh sâng UV (À,=254 nm) nguôn phât Toshiba 60W-220V. ♦♦♦ Mây môc, thiét bi khâc: - Mây lâc Taitec Bio-Shaker BR 300 Lf, - Tü âm Trung Quôc, Binder, Memmert 30°C, 37°C, - Tü lanh, tü lanh sâu - 35°C Sanyo Biomédical Freerer, - Cân kÿ thuât Précisa, Sartorius, cân phân tfch Sartorius BP 121 S, - Tü cây Aura vf 48, Bassaire, Sanyo cleanbench, - Tü sây Shallab model 1350 fx, - Mây cât quay Buchi Waterbath B-480, - Nôi hâp Hirayama Hiclave HEV-25, Hirayama Newclave Mole HL, - Mây do quang pho hông ngoai FT-IR Spectrophometer 1650 Perkin Elmer, - Mây do quang pho tü ngoai UV-VIS Spectrophometer cary 16 ie-varian, - May do nhiêt dô nông chây Gallen-Kamp, - Patuyn, pipet, ong dong, coc cô mô, ong nghiêm, bînh non, dèn côn... 2.1.2. Phirong phâp nghiên cuta A. Phirong phâp gây, giùr giông trong ong thach nghiêng: Mue dich: Bào quàn câc chüng giông thuân khiê't dâ phân lâp, câc dang chüng sau sâng loc ngâu nhiên, câc bién chüng sau dôt bién nhân tao... cho câc nghiên crïu tiép theo. Tien hành: Chuân bi môi trucmg phân lâp (MT2): cân, pha, chînh pH, dun soi, khuây trôn, phân dèu vào câc ô'ng nghiêm, môi ô'ng 5-6 ml, tiêt trùng à latm/20 phüt roi dàt thach nghiêng. Khi môi tnrôrng dâ nguôi, dùng que cây vô trùng cây zigzac câc té bào Strepstomyces 35.29 thuân khiê't lên bê mât thach nghiêng. Dë phât triën à 30°C, sau 6 ngày xa khuân tao bào tü màu vàng, dem cât giù trong tü lanh 2-4°C. Dinh kÿ cây truyên sau 3-6 thâng. B. Dânh giâ hoat tînh khâng sinh bàng phirong phâp khuyéch tân: Nguyên tac: Mâu thü duoc dua lên lôp thach dinh duông dâ cây VSV kiëm dinh, khâng sinh tù mâu thü khuyéch tân vào môi trucmg thach sê üc ché su phât triën cüa VSV kiëm dinh tao thành vông vô khuân. Tien hành: - Chuân bi môi truôrng cây VSV kiëm dinh: VSV kiëm dinh duoc cây vào môi trucmg canh thang (doi voi vi khuân); môi trucmg Sabouraud long (doi vôi nâm men) hoâc dua vào dung dich tween 80 (hoâc dung dich xà phông) 0,1% (doi vôi nâm mô'c). Nuôi cây tao hôn dich VSV kiëm dinh cô nông dô tù 107-108 té bào/ml bàng câch ü trong tü âm ô nhiêt dô 37°C trong 18-24 giô (doi vôi vi khuân), à nhiêt dô 30°C trong 24-48 giô (dô'i vôi vi nâm). Dua hôn dich này vào môi truông thach thucmg (doivoirv khuân), vào môi trucmg Sabouraud dâc (doi vôi vi nâm) à nhiêt dô 45^C -50°C )5/./o/c sau khi dâ hâp tiêt trùng à 1 atm/20 phüt voi tî lê Vgiông/Vthach thucmg =5/200, lâc dë VSV kiëm dinh phân tan dêu trong môi tnrôfng, do vào hôp pétri voi thë tfch 20 ml/hôp. - Dira mâu thir vào hôp pétri co chiîa môi tnrdng VSV kiëm dinh: cô ba câch dira mâu thir vào môi truôrng VSV kiëm dinh: + Khôl thach: dât khôl thach chura VSV sinh khâng sinh lên bê mât môi trucmg VSV kiëm dinh. + Giéng thach: duc câc giêng trên môi trucmg chua VSV kiëm dinh ((j)= 7,0 mm), sau dô cho mâu thir dang dich loc vào, môi giéng 0,05 ml dich loc. + Khoanh giây loc: khoanh giây loc ([...]... NGHIấM V KET QU 2.1 NGUYấN LIấU V PHUONG PHP THlTC NGHIấM 2.1.1 Nguyờn võt lieu Chỹng xa khuõn: Chỹng xa khuõn Streptomyces 35. 29 do phụng thi nghiờm vi sinh, bụ mụn Vi sinh- Sinh hoc, Truụng dai hoc Duoc H Nụi cung cap Giụng vi sinh võt kiởm dinh: giụng vi sinh võt kiởm dinh do bụ mụn Vi sinh -Sinh hoc, Trucmg dai hoc Duoc H Nụi cung cõp Bõng 2.1: Cõc chỹng VSV kiởm dinh Chỹng VSV kiởm dinh Viột tat... khõng sinh do chỹng Streptomyces 35. 29 sinh tong hop, bng phuong phõp khoanh giõy loc VSV kiởm dinh l C albicans, Moc xanh sp.l, Moc den sp.l Kột quõ vong vụ nõm duoc trợnh by trong bõng 2.13 Bõng 2.13: Kột quõ thỹ hoat tinh chụng nõm D ( mm) s 9,27 0,05 Moc den sp.l 17,76 0,74 Moc xanh sp.l 0,00 0,00 Chỹng VSV kiởm dinh C.albicans Nhõn xột : Qua bõng 13 cho thõy khõng sinh do chỹng Streptomyces 35. 29 sinh. .. sinh nụi bo cụ thnh phõn giụng nhau - Kột quõ sõc k cho thõ ụ hờ 1, dich chiột cụ mot vột khõng sinh hiờn hinh bng phuong phõp VSV - Cõc hờ 2, 3 cho hai vột khõng sinh hiờn hinh bng phirong phõp VSV, chỹng tụ khõng sinh do chỹng Streptomyces 35. 29 sinh tong hop cụ ft nhõt 2 thnh phõn cụ hoat tmh 29 - Vờt khõng sinh khụng phõt quang duoi õnh sõng tỹ ngoai v cỹng khụng cho phn ỹng mu voi thuoc thir hoõ hoc... Khõng sinh do chỹng Streptomyces 35. 29 sinh tong hop co ft nhõt ba thnh phõn co hoat tmh Gụp cõc phõn doan cụ hoat tmh giụng nhau dem cụ lõy cõn tinh khiột - Cõc vột khõng sinh trờn khụng phõt quang duụi õnh sõng tỹ ngoai v cỹng khụng cho phõn ỷng mu vụi thuục thỷ ninhydrin dõ sỹ dung 2.2.10.Kột quõ tinh chộ khõng sinh Phõn doan sõc k thỷ 2-5 gụp lai thu duoc 0,1645 g bụt khõng sinh mu dụ vng (35A)... dụ vng (35A) Phõn doan thỷ 8-12 thu duỗfc 0,0471 g chõt nõu sõm thộ chõt du (35B) Phõn doan 14 thu duoc 0,0142 g chõt mu vng nõu (35C) thộ chõt du Hiờu suõt tinh chộ : 0,16 4 1 0,2342g 42Ê x x0o =96,41 % Nhõn xột: - Hiờu suõt tinh chộ khõng sinh bng cụt sõc k khõ cao - 35A l thnh phõn khõng sinh chlnh do Streptomyces 35. 29 sinh tong hỗfp 33 ... kiởm soõt sinh hoc cỹa Streptomyces violaceusninger dụi voi nõm hoai sinh gụ ny l 28,259 kDa endochitinase 12 1.7.3 Chựm gen chiu trõch nhiờm sinh tong hop validamycin trong Streptomyces hygroscopicus subsp jinggangensis 5008 Chựm gen chiu trõch nhiờm sinh tong hop validamycin, mot khõng sinh aminocyclitol duoc sur dung rụng rõi trong kiởm soõt tõc nhõn gõy bờnh khụ vn lỹa, nhõn duoc tựr Streptomyces. .. sinh tong hop khõng sinh cỹa chỹng tõng lờn rụ rờt khụng chợ trong nuụi cõy bờ mõt m cụn cõ trong lờn men chim 2.2.5 Kột quõ chiột khõng sinh bng dmhc p dung kột qu tự cõc nghiờn cỹu truục, sỹ dung dung mụi n-butanol dở chiột khõng sinh (dich loc duoc chợnh pH bõng 3) Kột quõ: Tự 1,25 1 dich loc v 10 g sinh khụl khụ, sau khi chiột mot lõn thu duoc 220 ml dich chiột n-butanol khõng sinh ngoai bo v 35. .. ra sõn phõm trao doi chõt thỷ cõp Do dụ dở nõng cao hiờu suõt lờn men, khi bõt du lờn men, cõc thnh phõn dụ duoc dua vo voi nụng dụ thõp v duoc bo sung vo hờ thụng trong quõ trợnh lờn men 8 1.5 CHIẫT TCH-TINH CHấ [1], [4], [7], [9], [11] Khõng sinh l sn pham trao doi chõt thỷ cõp Kột thỹc quõ trợnh lờn men, khõng sinh cụ thộ nõm trong sinh khụi (vf du: gramicidin, nystatin ) hoõc trong dich loc (vf... tiộp theo bng sõc k cụt 2.2.7 Kột quõ cõt cụ bụt khõng sinh thụ 235 ml dich chiột khõng sinh n-Butanol duoc dem cõt cụ bng mõy cõt quay thu duoc 0,2437 g bụt khõng sinh thụ mu nõu sõm Cõn chrnh xõc mụt luong bụt khõng sinh thụ, ho tan trong dung mụi aceton de duoc dung dich cụ nụng dụ khõng sinh thụ 1 mg/ml Dung dich ny duoc dem thir hoat tmh khõng sinh bng phuong phõp khoanh giõ loc, VSV kiởm dinh B... 22,06 0,47 104,60 % 1.13 22 ,29 0 ,35 108,36 % 22,56 1,21 106,97 % 1.21 22,18 0,56 107,83 % 22,37 0,43 106,07 % 1.24 21,87 0,38 106,32 % 21,99 0,22 104,27 % 1.26 21,72 0,24 105,59 % 21,99 0,28 104,27 % 1.31 21,74 0,54 105,69 % 21,87 0,76 103,70 % Chựng 20,57 0,45 100,00 % 21,09 0,18 100,00 % Nhõn xột: - Sau dụt biờn ln 2, kh nõng sinh tong hop khõng sinh cỹa chỹng Streptomyces 35. 29 dõ tõng lờn dang kở so ... khuõn Streptomyces 35. 29 phụng thi nghiờm vi sinh, bụ mụn Vi sinh- Sinh hoc, Truụng dai hoc Duoc H Nụi cung cap Giụng vi sinh võt kiởm dinh: giụng vi sinh võt kiởm dinh bụ mụn Vi sinh -Sinh hoc,... khõ nng sinh tong hop khõng sinh rụng, cụ nhiờu tiờm nng dộ tien hnh cõc nghiờn cỹu tiộp theo Do dụ chỹng tụi chon dờ ti Nghiờn cỹu lờn men sinh tong hop khõng sinh tự Streptomyces 35. 29 vụi... (35C) thộ chõt du Hiờu suõt tinh chộ : 0,16 0,2342g 42Ê x x0o =96,41 % Nhõn xột: - Hiờu suõt tinh chộ khõng sinh bng cụt sõc k khõ cao - 35A l thnh phõn khõng sinh chlnh Streptomyces 35. 29 sinh