SẮC ký lớp MỎNG TLC Thin layer chromatography

SẮC KÝ LỚP MỎNG – TLC THIN LAYER CHROMATOGRAPHY I- LỊCH SỬ- ĐỊNH NGHĨA A. LỊCH SỬ Thời gian 1938 1958 1965 Nhân vật Sự kiện Izmailov và Schraiber  SKLM (Al2O3, bản thủy tinh)  hoàn thiện và chuẩn hóa phƣơng pháp SKLM (silicagel, CaSO4, Stahl 0.25mm, cách phát hiện)  điều chế thành công bản mỏng tráng sẵn… hãng Merck  chuẩn hóa bản mỏng sắc ký. B. ĐỊNH NGHĨA  SKLM là một phƣơng pháp sắc ký mà trong đó một dung dịch mẫu thử được chấm trên một lớp mỏng chất hấp phụ (silica gel, nhôm oxyt) tráng trên nền phẳng (kính, kim loại, chất dẻo) đóng vai trò là pha tĩnh.  Một dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo bản mỏng sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử theo một vận tốc khác nhau do sự hấp phụ, phân bố … tạo thành một sắc ký đồ gồm nhiều vết có Rf khác nhau. II- CƠ CHẾ TÁCH  Các chất cần tách trong SKLM có thể khuếch tán theo cả chiều dọc và chiều ngang. 1- Hấp phụ (NP-TLC) – cơ chế chính  Sự tách chủ yếu dựa vào ái lực hấp phụ khác nhau của các chất đối với chất hấp phụ rắn (pha tĩnh) và đƣợc biểu thị thông qua hằng số hấp phụ. 2- Phân bố (RP-TLC)  Dựa trên sự phân bố khác nhau của mỗi chất với pha động và pha tĩnh thông qua hệ số phân bố.  Trong SKLM, pha tĩnh của sắc ký phân bố là chất lỏng được tẩm trong giá mang (chất rắn tạo lớp mỏng). 3- Trao đổi ion 4- Rây phân tử  Trong loại sắc ký này, chất rắn làm pha tĩnh là nhựa trao đổi ion.  Sự phân tách xảy ra do ái lực khác nhau của các ion trong dung dịch cần tách với các gốc ion có trong pha tĩnh.  Sự trao đổi ion đƣợc đặc trƣng bằng hằng số trao đổi ion.  Sự tách dựa trên kích thước phân tử chất tan để lọt sâu vào trong các hốc của pha tĩnh và bị giữ lại đó sẽ ra sau.  Các chất có kích thước phân tử lớn sẽ nằm ngoài các hốc và ra trước. Hóa phân tích 2 Trần Trung Trực 1 III- PHA TĨNH TRONG SKLM  Pha tĩnh hay sử dụng trong SKLM là chất hấp phụ rất mịn.  Các chất hấp phụ có trộn thêm chất kết dính như CaSO4 5-15%, tinh bột 2-5%, dextrin, … hay không dùng chất kết dính. A. SKLM PHA THUẬN (NORMAL PHASE-TLC) 1- Silicagel= Kieselgel= Gel của acid silicic (SiO2 .nH2O ) 90% a. Tính chất  Chất hấp phụ đƣợc sử dụng rộng rãi nhất hiện nay.  Kích thƣớc hạt 10-40m, đƣợc loại Fe bằng cách đun HCl đậm đặc, dùng nƣớc rửa sạch ion clorid và lắng gạn loại các hạt nhỏ lơ lửng, sấy ở 120o C trong 48h. Hoạt hóa trong 2h ở 105oC.  Hoạt tính do các nhóm OH trên bề mặt quyết định. Hàm ẩm tăng làm giảm hoạt độ.  Chất phân cực, trung tâm hấp phụ là các nhóm -OH silanol (-Si-OH, HO-Si-OH, -Sitrihydroxyl) có tính acid. -OH silanol có Pka 9,5 và pH 5 -7  MP: pH < 8.5 (dùng 5Ethanol >Isopropanol >Pyridine >Acetonitrile >Nitromethan >Diethylamine >Aniline >Dimethylsulfoxide >Ethylacetate >Dioxane >Acetone >Dichloroethane >Tetrahydrofuran >Dichloromathane >Chloroform >Diethylether >Benzene >Toluene >Xylene >Carbontetrachloride >Cyclohexane >Petroleum ether >Hexane >Pentane: Non-polar. Nhiệt độ sôi Boiling point Tỉ trọng Density P’ (dãy Snyder) F (dãy Halpaap) 69 °C 80 °C 111 °C 35 °C 61 °C 40 °C 0.655 g/ml 0.879 g/ml 0.867 g/ml 0.713 g/ml 1.498 g/ml 1.3266 g/ml 0.1 2.4 2.7 2.8 4.1 3.1 01 29 32 38 40 42 101 °C 56 °C 77 °C 82 °C 1.033 g/ml 0.786 g/ml 0.894 g/ml 0.786 g/ml 4.8 5.1 4.4 5.8 5.6 56 58 65 118 °C 82 °C 97 °C 66 °C 0.810 g/ml 0.785 g/ml 0.803 g/ml 0.886 g/ml 3.9 3.9 4.0 4.0 70 82 82 82 0.789 g/ml 0.791 g/ml 1.049 g/ml 1.21 g/ml 1.000 g/ml 0.944 g/ml 4.3 5.1 6.0 88 95 Lớn H-O-H H-C(=O)N(CH3)2 79 °C 65 °C 118 °C 101 °C 100 °C 153 °C 10.2 Rất lớn CH3-S(=O)-CH3 189 °C 1.092 g/ml Dung môi CTCT Hexane Toluene Benzene Diethyl ether Chloroform Dichloromethane (DCM) 1,4-Dioxane Acetone Ethyl acetate Acetonitrile (MeCN) n-Butanol Isopropanol (IPA) n-Propanol Tetrahydrofuran (THF) Ethanol Methanol Acetic acid Formic acid Water Dimethylformamide (DMF) Dimethyl sulfoxide (DMSO) CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3 C6H6 C6H5-CH3 CH3CH2-O-CH2-CH3 CHCl3 CHCl3 CH2Cl2 /-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-\ CH3-C(=O)-CH3 CH3-C(=O)-O-CH2-CH3 CH3-C≡N CH3-CH2-CH2-CH2-OH CH3-CH(-OH)-CH3 CH3-CH2-CH2-OH /-CH2-CH2-O-CH2-CH2-\ CH3-CH2-OH CH3-OH CH3-C(=O)OH H-C(=O)OH  Độ phân cực (polarity) của một số dung môi hữu cơ thường gặp: PE[...]... 14 VI- TIẾN HÀNH TLC 15 CÁC BƢỚC THỰC HIỆN 15 A 1- Bão hòa hệ dung môi 15 2- Chuẩn bị bản mỏng Silica gel 15 a Chuẩn bị bản mỏng phân tích 15 b Chuẩn bị bản mỏng chế hóa 15 c Chuẩn bị lớp mỏng hiệu năng cao, lớp mỏng pha đảo 15 -i- Lớp mỏng pha đảo 15 -ii- Lớp mỏng hiệu năng cao... SKLM A KỸ THUẬT SẮC KÝ MỘT CHIỀU  Dùng dung môi chạy cùng chiều từ đầu dƣới lên đầu trên bản mỏng B KỸ THUẬT SẮC KÝ HAI CHIỀU   Trong trƣờng hợp mẫu phân tích có nhiều chất nếu sự tách kỹ thuật sắc ký một chiều không đủ độ tin cậy thì tiến hành thêm kỹ thuật sắc ký hai chiều để kết quả tách đƣợc rõ ràng hơn  Dùng loại kình 20x20cm Chấm chất phân tích ở góc kính, cho vào bình sắc ký chạy hệ dung... bản mỏng Silica gel a Chuẩn bị bản mỏng phân tích b Chuẩn bị bản mỏng chế hóa  Dày: 0.1-0.25mm  Dày 0.5-2mm (đến 10mm)  Phân tích các thành phần của hỗn hợp  Tách lƣợng nhỏ đơn chất (mg) c Chuẩn bị lớp mỏng hiệu năng cao, lớp mỏng pha đảo -i- Lớp mỏng pha đảo  Hay gặp loại silicagel RP18, khai triển ngắn = 1cm  Chấm không làm thủng lớp mỏng, vết chấm gọn, nhỏ chứa lƣợng chất thử khoảng... Trực Khắc phục  Loại tạp kỹ hơn trƣớc khi tiến hành TLC  Thăm dó lại hệ  Chọn DM chiết mẫu chuyên biệt hơn   Thay bản mỏng khác Thay bình sắc ký khác  Chấm nhỏ hơn với nồng độ cao hơn hoặc chấm vạch  Chấm khoảng cách vết theo đúng qui định  Chấm kỹ lại trên bản mỏng khác  Vẽ, chụp hình ngay sau khi hiện màu xong 19 VII- CÁC THÔNG SỐ SẮC KÝ ĐẶC TRƯNG 1- Hệ số lưu giữ Rf ( Retardation factor)... RỬA GIẢI CỦA DUNG MÔI 11 C YÊU CẦU CHO MỘT DUNG MÔI SẮC KÝ TỐT 12 D LỰA CHỌN DUNG MÔI CHO SKLM 12 E MỘT SỐ YẾU TỐ GIÚP LỰA CHỌN PHA TĨNH VÀ PHA ĐỘNG CHO TLC 13 V- DỤNG CỤ CHO TLC 14 1- Bình triển khai 14 2- Bản mỏng tráng sẵn (precoated TLC plate) 14 a Bản mỏng dính chắc 14 b Bản mòng không dính chắc ... dày lớp mỏng, quảng đƣờng chạy sắc ký, lƣợng chất chấm  Vị trí số lƣợng chất cần tách mỏng  Thành phần độ tinh khiết pha động  Phƣơng pháp khai triển sắc ký  Độ bão hòa dung môi bình sắc ký. .. bị mỏng Silica gel 15 a Chuẩn bị mỏng phân tích 15 b Chuẩn bị mỏng chế hóa 15 c Chuẩn bị lớp mỏng hiệu cao, lớp mỏng pha đảo 15 -i- Lớp mỏng. .. Chuẩn bị lớp mỏng hiệu cao, lớp mỏng pha đảo -i- Lớp mỏng pha đảo  Hay gặp loại silicagel RP18, khai triển ngắn