Định lượng crom trong dầu nang mềm bằng phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử

B ộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI oOo NGUYỄN THỊ NGUYỆT Đ IN CRÔM TRONG DẦU • H IAMiXG • M K G MỀM b ằ n g IMIƯƠACi P H Á P ĐO P H Ổ H Ấ P THỤ XT( ilT ll\ TỬ (Khoá luận tốt nghiệp Dược sỹ khoá 1998- 2003) Người hướng dẫn: PGS. TSKH. Lê Thành Phước ThS. B ù i Thị H oà Nơi thực hiện: Viện kiểm nghiệm- Bộ Y tế. Thời gian thực hiện: 2-5/2003. Hà Nôi 5/2003 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TSKH Lê Thành Phước ThS. Bùi Thị Hoà tận tình hướng dẫn giúp đỡ hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này. Tôi xin chân thành cảm ơn DS. Nguyễn Văn Hà anh chị phòng kiểm nghiệm Mỹ phẩm-viện kiểm nghiệm Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện cho hoàn thành khóa luận tốt nghiệp thời hạn. Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể thầy cô giáo cán trường giúp đỡ suốt năm học vừa qua. Hà Nội ngày 10 tháng năm 2003. Sinh viên. Nguyễn Thị Nguyệt MỤC LỤC ĐẶT VÂN ĐỂ PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1. Đại cương vê crôm 1.2. Chức sinh học crôm .2.1. Crôm đối vói bệnh tiểu đường 1.2.2. Crôm đối vvói bệnh xơ vữa động mạch 1.2.3. Crôm số bệng lý khác 1.3. Sự hấp thu crôm thể 1.4. Nguồn cung cấp nhu cầu thể 1.4.1. Nguồn cung cấp 1.4.2. Nhu cầu thể 1.5. Độc tính crôm 1.6. Một số chế phẩm có chứa crôm thị trường 1.7. Các phương pháp định lượng crôm 1.7.1. Phương pháp chuẩn độ thể tích 1.7.2. Phương pháp đo màu 1.7.3. Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử Phần II THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12 2.1. Nguyên yật liệu phương pháp 12 2.1.1. Nguyên vật liệu phương tiện nghiên cứu 13 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 13 2.2. Thực nghiệm kết 13 2.2.1. Điều kiện phân tích 13 2.2.2. Xây dựng đường chuẩn 14 2.2.3. Chuẩn bị mẫu thử 16 2.2.4. Tiến hành định lượng 17 2.2.5. Kết định lượng 17 2.2.6. Khảo sát độ phương pháp 19 2.2.7. So sánh phương pháp đường chuẩn phương pháp thêm 20 đường chuẩn định lượng crôm phổ hấp thụ tử ngoại PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 23 1. Kết luận 23 2. Đề xuất 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 ĐẶT VẤN ĐỂ Crôm 10 nguyên tố vi lượng cần thiết cho người khẳng định. Crôm với Se, Si, Zn có chức bảo vệ nguyên tố khác, phục hồi tổ chức tế bào bị hư hỏng đánh lạc hướng nguyên tố độc hại khỏi địa bàn hoạt động chúng [7]. Hiện nay, thị trường thuốc nước ta lưu hành nhiều loại thuốc hỗn hợp vitamin chất khoáng gọi thuốc bổ. Các mặt hàng đa dạng, phong phú nhiều chủng loại. Trong đó, việc kiểm soát vấn đề khó khăn, mặt khác Việt Nam chưa có tài liệu pháp quy quy định phương pháp định lượng crôm. Trong Dược điển Việt Nam III đưa tiêu chuẩn định lượng cho vitamin số chất khoáng dạng đơn chất, dạng thuốc đa thành phần đặc biệt dạng thuốc nang mềm chưa đề cập đến. Xuất phát từ nhu cầu thực tế kết hợp với trang thiết bị có viện kiểm nghiệm tiến hành đề tài “Định lượng crôm nang mềm phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử “ với mục tiêu sau: - Xây dựng phương pháp định lượng crôm đo phổ hấp thụ nguyên tử. - Áp dụng phương pháp khảo sát để định lượng crôm viên nang mềm. PHẦN I-TổNG QUAN 1.1. Đại cương nguyên tố crôm[ 10],[15] Crôm có ký hiệu Cr, tên quốc tế Chromium - nguyên tố nhà hóa học người Pháp N.Vauquelin tìm năm 1797 từ mẫu khoáng chì. Nó sử dụng công nghiệp trước gây ý nhà sinh học bác sỹ. Cho tới năm 1955, nhà hóa học Alter Mertz & Klaus Schwars Mỹ mô tả triệu chứng thiếu crôm chuột thí nghiệm. Trong bảng hệ thống tuần hoàn nguyên tố hóa học, crôm nhóm VIB với Mo, w, Cr có số thứ tự 24, nguyên tử khối 51,996, cấu hình electron ls 2s 2p 3s 3p 4s 3d5, số ôxy hóa bền là: +2, +3, + . Các hợp chất ứng với trạng thái ôxy hóa có màu sắc đặc trưng, nên nguồn gốc từ crôm theo tiếng Hy Lạp croma nghĩa “Màu sắc Crôm có 10 đồng vị, đồng vị tồn tự nhiên 4,31%; Cr: 83,76%; Cr: 9,55% ; Cr: Cr: 2,38%. Trong đồng vị phóng xạ đồng vị 51Cr có chu kì bán hủy 28 ngày đêm, bền 47Cr có chu kỳ bán hủy 0,4 giây. Một số số vật lý crôm: Khối lượng riêng:7,2 g/cm Độ âm điện: Nhiệt độ nóng chảy: 1875°c . Độ dẫn điện: Nhiệt độ sôi: 2430°c Sự tồn tai crôm tự nhiên: - Trong vỏ đất khoáng vật chủ yếu crôm quặng sắt cromit: FeCr hay Fe .Cr cromat: PbCr0 3, Fe(Cr0 ) quặng croisit chì - Crôm tồn chủ yếu thực vật khoảng 10 % (tính theo khối '4 lượng). - Trong đại dương có 5.10'5mg crôm 1L nước biển. - Trong mẫu đá mặt trăng, crôm có khoảng 2,1.10' g/g mẫu đá. 1.2. Chức sinh học crôm [3],[4],[13],[6],[5] Để có hoạt tính sinh học, crôm phải có hóa trị III. Dạng cấu trúc có hoạt tính crôm dạng liên hợp với hợp chất hữu phân tử nhỏ nằm nhiều loại thức ăn. Những hợp chất gọi “Nhân tố dung nạp glucose” - glucose tolerance factor (GTF). GTF có vai trò đồng hormon insulin, kích thích trình oxy hoá glucose tế bào, giúp tăng sử dụng glucid, tăng chuyển hoá lipid protein, hạn chế tích luỹ mỡ, điều hoà cholesteron, tăng tỉ lệ HDL- Cholesteron. Crôm giúp hạn chế nguy vữa xơ động mạch cao huyết áp, tránh béo phì, góp phần cải thiện bệnh đái tháo đường suy dinh dưỡng. Ngoài ra, nhà khoa học phát crôm thành phần acid ribonucleic vài enzym chưa rõ vai trò sinh học. 1.2.1. Crôm đổi với bệnh tiểu đường Crôm nguyên tố vi lượng cần thiết có tham gia trình chuyển hóa glucid lipid. Trong thể, crôm làm tăng khả liên kết insulin với tế bào, tăng thụ thể với insulin khả hoạt động thụ thể insulinkinase. Kết crôm làm tăng tính nhạy cảm với insulin. Do vậy, crôm có ích việc điều hòa glucose hai trường hợp tăng đường huyết hạ đường huyết. Sự thiếu hụt nghiêm trọng crôm phần ăn ngày nguy bệnh tiểu đường, người bị tiểu đường thiếu hụt hormon insulin, gây nên tượng đường huyết cao lại cao hơn. Tình trạng bệnh cải thiện bổ sung crôm nấm men có chứa nguyên tố này. Mối liên hệ Cr - niệu Cr cung cấp theo thức ăn không rõ rệt. Song Cr - niệu vói việc chuyển hoá đường thể lại có mối liên hệ chặt chẽ. Do vậy, crôm niệu dấu hiệu đánh giá bệnh tiểu đường. 1.2.2. Crôm bệnh vữa xơ động mạch Crôm ảnh hưởng đến chuyển hóa lipid. Do vậy, thể bổ sung crôm vừa làm giảm tổng tỷ số cholesteron vừa làm tăng tỷ số HDL- Cholesteron. Hiệu ứng có liên quan đến hiệu ứng insulin với tư cách hormon điều tiết hình thành cholesteron. Trong đó, crôm tỷ số lipid tuần hoàn, tỷ số insulin tuần hoàn yếu tố nguy gây bệnh vữa xơ động mạch. 1.2.3. Crôm số bệnh lý khác Nghiên cứu tiến sỹ Malcolm Cleod đồng cho thấy việc sử dụng crôm cải thiện rõ ràng bệnh nhân trầm cảm. Trong số bệnh nhân mắc bệnh trầm cảm mãn tính (Dysthymia) bệnh nhân phản hồi sử dụng thuốc trầm cảm loại Prozac, sử dụng thêm crôm vào đơn thuốc vài ngày sau triệu chứng bệnh cải thiện rõ rệt. Các nhà khoa học cho thiếu hụt crôm đồng nghĩa với việc tăng nhãn áp giảm lực quy tụ mắt. Bệnh glaucom góc mở nguyên phát thường liên quan tới việc giảm crôm hồng cầu. Thực tế cho thấy lượng crôm hồng cầu số hóa sinh khác biệt cá thể bình thường cá thể glaucom góc mở nguyên phát. 1.3. Sự hấp thu crôm thể [3],[4],[6] Trong thể, crôm hấp thu dạng crôm hữu cơ. Do vậy, crôm vô thể phải sau chuyển thành crôm hữu hấp thu được. Ngoài xâm nhập vào thể qua đường thức ăn, crốm vào thể qua đường hô hấp qua da người tiếp xúc thường xuyên. Crôm đưa vào thể dạng phức gọi 1ầ“Nhân tố dung nạp g l u c o s e GTF. Trong phức GTF, crôm có hoạt tính sinh học cao. Trong thể, crôm hoạt động thông qua tricarboxylic acid để thúc đẩy việc oxy hóa succinate, nâng cao tỉ lệ tận dụng glucose hạ thấp đường huyết. Ngoài ra, hạ thấp mức triglycerid cholesterol. Qua đường hô hấp, dẫn chất crôm hoà tan chuyển qua thành phế nang, chất không tan bị giữ lại mô phổi tích trữ đó. Khi tiếp xúc qua da crôm không vượt qua hàng rào thượng bì, hình thành phân tử bền vững với protein lớp bề mặt da. Crôm hấp thu đoạn ruột non vận chuyển đến quan chủ yếu nhờ albumin (60 - 70%), vận chuyển nhờ globulin transferin vị trí Fe (30 - 40%). Crôm có mặt tất phận thể, hàm lượng crôm cao acid nucleic. Nhưng hàm lượng crôm thể giảm dần theo tăng lên độ tuổi: thể trẻ nhỏ cao người lớn. Sự hấp thụ crôm thường bị ức chế kim loại khác như: thiếu Fe lượng crôm hấp thu tăng lên, Cr V có tác dụng đối kháng. Muối oxalat làm tăng vận chuyển Cr(III), tác động acid thực vật ngược lại. Đối với Cr(III) sau kết hợp với / -globulin huyết tương vào mô chuyển sang kết hợp với transferin protein chuyển tải Fe, hấp thu crôm mô tương đối nhanh. Crôm sau hấp thu vận chuyển máu lắng đọng phần gan, thận. Crôm thải trừ chủ yếu qua đường nước tiểu, phần nhỏ qua đường mật đường ruột. 1.4. Nguồn cung cấp nhu cầu thể [3],[4],[8] 1.4.1. Nguồn cung cấp Crôm có loại thực phẩm như: gan, lòng đỏ trứng, bồ đào, mỡ động vật, bơ, gia vị nhiều loại sản phẩm không tinh chế. Đặc biệt có nhiều nấm men bia. Các thực phẩm tinh chế trước sử dụng làm lượng lớn crôm dẫn đến tình trạng thiếu crôm. Do vậy, nguy thiếu crôm nghiêm trọng, với người già. Trong thực phẩm, crôm dạng có hoạt tính sinh học hấp thu cách trực tiếp vào thể. Quá trình chuyển hóa thể từ muối crôm sang crôm hoạt tính sinh học diễn với hiệu suất thấp. Bảng 1: Nguồn thực phẩm cố chứa crôrn Thực phẩm Thực phẩm Hàm lượng (mg/ Hàm lượng (mg/ g) Lòng đỏ trứng 183 Mật ong 29 Mật đường Khoai tây 27 Men bia 117 Mầm lúa mì 23 Thịt bò 57 Đùi gà 18 Dịch nho 47 Chuối Bánh mì, bột thô 42 Sữa loại chất béo 1.4.2. Nhu cầu thể. Mức bổ sung đầy đủ an toàn hàng ngày khoảng 25-200|j.g. Hàm lượng khuyên dùng hàng ngày là: > Với trẻ em từ 1-3 tuổi: 75|Lig/ngày. > Với người lớn trẻ em tuổi: 125|j.g/ngày. g) (L=const). Do vậy, D phụ thuộc vào số nguyên tử N môi trường hấp thụ. D = KịN. (3) Kịilà hệ số thực nghiệm phụ thuộc vào yếu tố: hệ số hấp thụ nguyên tử Kx vạch phổ hấp thụ nguyên tử, nhiệt độ môi trường hấp thụ, bề dày môi trường hấp thụ. Theo biểu thức Winerfordner Vicker cho thấy mối quan hệ nồng độ đám nguyên tử N nồng độ c mẫu: N = 3.102ì F W 'SMro £ h (4) Q.T.n, Trong đó: F; Tốc độ dẫn vào hệ thống nguyên tử hóa mẫu. W: Hiệu suất aerosol hóa mẫu. S: Hiệu suất nguyên tử hóa mẫu. NRo: Số phân tử khí nhiệt độ ban đầu T (°K) lửa nguyên tử hóa. Nt : Số phân tử nhiệt độ T (°K) lửa nguyên tử hoá Q: Tốc độ dòng khí mang mẫu vào buồng aerosol hóa(l/phút). C: Nồng độ nguyên tố phân tích có dung dịch mẫu T: Nhiệt độ lửa. Mối quan hệ c N; N c (phương trình 4) phức tạp phụ thuộc vào tất điều kiện nguyên tử hóa mẫu, thành phần vật lý, thành phần hóa học, trạng thái tồn nguyên tố mẫu. Trong giới hạn định nồng độ mối quan hệ N c biểu thị theo công thức. N = K2.ơ (5) Trong : K2: Là số thực nghiệm, phụ thuộc vào điều kiện hóa 10 nguyên tử hóa mẫu. b: Là số chất, phụ thuộc vào vạch phổ nguyên tố. Từ (3) (5) suy ra: D = a.ơ (6) a = k tk2: hệ số thực nghiệm phụ thuộc vào điều kiện hóa nguyên tử hóa mẫu phân tích điều kiện định số. Phương trình ( ) sở cho phép định lượng nguyên tố theo phổ hấp thụ nó. Đó mối quan hệ D c. 1.7.3.3. Các phương pháp xử lý mẫu trước phân tích - Phương pháp vô hóa ướt - Phương pháp vô hóa khô - Phương pháp vô hoá mẫu lò vi sóng. 11 PHẦN II- THỰC NGHIỆM VÀ KẾT q u ả 2.1. Nguyên vật liệu phương pháp 2.1.1. Nguyên yật liệu phương tiện nghiên cứu 2.1.1.1. Mẫu thử Tiến hành hai loại viên nang mềm Prucell (SDK: VN-5502-00) Silvicom (SDK: VN-6700-01) Hàn Quốc có công thức viên: Men khô chứa selen (Korean FDA) 92,6mg (Tương đương với 50 jug selen) Men khô chứa crôm (Korean FDA) . lOOmg (Tương đương với 50|ug crôm) Ascorbic acid (KP) 50mg 2.1.12. Mẫu chuẩn Sử dụng dung dịch crôm chuẩn 1000 |ig/ml hãng Hitachi để khảo sát, đánh giá trình định lượng. 2.1.13. Trang thiết bị, dụng cụ y Thiết bi: - Hệ thống máy đo AAS-Z5000: Hitachi - Máy nén khí: Hitachi - Cân phân tích(độ xác 0,0001g): Satorius - Nồi cách thủy > Dung cu: - Bình định mức: 10, 20, 25, ,100ml - Pipet định mức: 1, 3, 5,10 ml - Bình có nắp đậy - Phễu, giấy lọc . 2.1.1.4. Hoá chất - Dung dịch chromium chuẩn 1000 |ig/ml (Hitachi) - Acid H N 03(65%) đạt tiêu chuẩn AAS (Merk) - Nước trao đổi ion - Tween 80 đạt tiêu chuẩn AAS 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 2.1.2.1. Phương pháp xử lý mẫu phân tích: áp dụng phương pháp vô hoá ướt để xử lý mẫu. > Nguyện tắc: Oxy hoá chất hữu mẫu phân tích acid vô hỗn hợp acid vô hay hỗn hợp acid vô với chất oxy hoá. Bằng thực nghiệm chọn acid H N 2% để vô hoá mẫu. > Đăc điểm: • Vô hoá mẫu triệt không cần sử dụng nhiệt độ cao. • Thực đơn giản, nhanh. • Bảo toàn chất phân tích. • Nhưng cần acid có độ tinh khiết cao. 2.1.2.2. Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp định lượng crôm phương pháp hấp thụ nguyên tử: áp dụng kỹ thuật nguyên tử hóa lửa. - Xác định hàm lượng crôm dựa phương pháp đường chuẩn. 2.2. Thực nghiệm kết 2.2.1. Điều kiện phân tích Qua trình khảo sát máy quang phổ hấp thụ nguyên tử cho định lượng crôm, chọn điều kiện phân tích sau: 13 Bảng 3: Các thông s ố máy Điều kiện Thông số Đèn Đèn cathod rỗng Crôm Cường độ đèn mA Bước sóng 359,3 nm Áp lực không khí 160 kPa Tốc độ khí acetylen , /phút Độ rộng khe sáng 1,3 nm Chiều cao đầu đốt 7,5 mm Ngọn lửa Không khí nén-acetylen Thể tích mẫu ml Với kỹ thuật nguyên tử hoá lửa máy Hitachi- Z5000 cho độ nhạy cỡ lppm (lịig/ml) cho đường chuẩn tuyến tính khoảng , |ig/ml. - 2.2.2. Xây dựng đường chuẩn Để định lượng crôm phương pháp đường chuẩn tiến hành pha dung dịch thử sau: từ dung dịch chuẩn gốc crôm |ig/ml, tiến hành pha dung dịch chuẩn crôm có nồng độ: l|j,g/ml, |ig/ml, 3|ig/ml, 4|ig/ml. - Pha dung dịch gốc 10|j.g/ml: hút lm l dung dịch crôm chuẩn |ig/ml vào bình định mức 0 ml thêm nước cất vừa đủ. - Pha dung dịch l|xg/ml: hút 5ml dung dịch chuẩn crôm 10|!g/ml vào bình định mức 50ml thêm acid HNO 2% vừa đủ. - Pha dung dịch 2|ig/ml: hút 10ml dung dịch chuẩn crôm 10jxg/ml vào bình định mức 50ml thêm acid HNO 2% vừa đủ. - Pha dung dịch 3|j.g/ml: hút 15ml dung dịch chuẩn crôm 10|Lig/ml vào bình định mức 50ml thêm acid HNO 2% vừa đủ. 14 - Pha dung dịch |ig/ml: hút lOml dung dịch chuẩn crôm 10|ig/ml vào bình định mức 25ml thêm acid HNO 2% vừa đủ. Tiến hành đo độ hấp thụ mẫu 1, 2, 3, |J.g/ml dung dịch chuẩn theo thứ tự nồng độ tăng dần, với thông số máy mục . . thu kết bảng 4. ■Bảng 4: Liên quan số nồng độ crôm độ hấp thụ . Nồng độ Crôm 1,0000 2,0000 3,0000 4,0000 c (ng/ml) Độ hấp thụ (DjJ 0,0252 0,0489 0,0716 0,0924 c (|Lig/ml) Hình 1: Đồ thị đường chuẩn Phương trình tuyến tính: y=2,243.10'2.x+ 3,450.103 R=0,9996 Trong đó: y: Là độ hấp thụ x: Là nồng độ crôm (|ig/ml) R: Là hệ số tương quan Nhân xét: Từ kết xây dựng đường chuẩn cho thấy hàm lượng crôm độ hấp thụ có phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ khoảng nồng độ crôm từ 1- |ig/ml. Trong khoảng nồng độ tiến hành định lượng crôm. 15 2.2.3. Chuẩn bị mẫu thử 2.2.3.I. Xác định khối lượng trung bình dầu thuốc viên Tiến hành cân 20 nang thuốc cân phân tích, khối lượng m . Tách riêng phần dầu thuốc chứa viên. Rửa vỏ nang ether ethylic sấy nhẹ để loại ether đem cân, khối lượng mvo. Khối lượng thuốc trung bình dầu thuốc m tính theo công thức. Trong đói - m : Là tổng khối lượng 20 viên (g) - mvo: Là tổng khối lượng vỏ (g) - m : Là khối lượng trung bình dầu thuốc viên (g/viên) Bảng 5: Khối lượng trung bình dầu thuốc viên. Thuốc Số Tổng KL Tổng KL Tổng KL KL trung bình nang nang m (g) vỏ mvo(g) thuốc dầu thuốc m (g/viên) Silvicom 20 27,1844 7,4088 19,6756 0,9888 Prucell 20 24,9012 7,6592 17,2420 0,8621 2.2.3.2. Xử lý mẫu thử Trộn dầu thuốc 20 nang (sau xác định khối lượng trung bình). Cân lượng mẫu thử tương ứng khoảng viên vào bình có nút mài, thêm 10 ml H N 10%, thêm lm l tween 80 để giảm môi trường dầu viên. Đun cách thuỷ lh, lắc bình. Sau vô hoá để nguội lọc vào bình định mức 50ml, tráng bình vô hoá nhiều lần, thêm nước cất vừa đủ 50ml, thu dung dịch thử đem định lượng. 16 2.2.4. Tiến hành định lượng Sau khi-lập đường chuẩn mục 2.2.2, đo độ hấp thụ dung dịch thử. Dựa vào đường chủân lập, máy tự động tính nồng độ mẫu thử. Nếu độ hấp thụ mẫu thử cao điểm cao đường chuẩn tiến hành pha loãng mẫu thử dung dịch acid HNO 2% đo lại. 2.2.5. Kết định lượng crôm viên Silvicom viên Prucell Trên loại viên tiến hành làm mẫu (n=5), đem xử lý mẫu thử mục 2.2.3, định lượng mục 2.2.4. Kết tính theo công thức: c.v.m mMg/v = ^ ~ mt Trong đó: : hàm lượng crôm viên (ng/viên) c : Là nồng độ crôm dung dịch thử xác định phương pháp đường chuẩn (|ug/ml) V: Là thể tích bình định mức tạo dung dich thử (ml) mt : Là khối lượng dầu thuốc đem định lượng (g) ĩn :Là khối lượng trung bình dầu thuốc viên (g) Kết định lượng crôm viên silvicom, với V = 50ml, m =0,9888(g) Bảng 6: Hàm lượng Crôm viên dầu nang mềm silvicom Stt mẫu s Nồng độ Cr KL dầu d2thử thuốc đem cân mt (g) c(ng/ml) 2,6604 2,0116 2,7157 1,9969 1,9666 2,6419 2,5727 1,9792 2,5496 1,9724 Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn(S) Phương sai (S2) Độ lêch chuẩn tương đối(RSD%) Hàm lượng Cr tìm thấy viên m^g/v 65,4 67,2 66,4 64,3 63,9 65,4 1,39 1,93 2,12% Kết định lượng crôm viên Prucell, với v= 50ml, m =0,8621(g). Bảng 7- Hàm lượng crôm viên nang mềm Prucell stt mẫu p KLdầu thuốc đem cân mt (g) Nồng độ Cr d2 thử c (ng/ml) Hàm lương Cr viên m^g/v 2,0820 2,0044 1,9634 2,0638 2,0911 56,0 53,8 52,6 55,1 55,6 54,6 1,40 1,96 2,56% 1,6014 1,6062 1,6097 1,6134 1,6224 Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn (S) Phương sai (S2) Độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) 18 Nhân xét: Qua trình khảo sát định lượng hai mẫu Silvicom Prucell với RSD 2,12% Silvicom 2,56%của Prucell cho thấy phương pháp có độ lặp lại tốt. 2.2.6. Khảo sát độ phương pháp Để đánh giá độ phương pháp, tiến hành: thêm lượng xác định dung dịch chuẩn biết trước nồng độ vào dung dịch thử (sau xác định nồng độ crôm dung dịch thử), cho tổng lượng crôm chuẩn lượng crôm có sẵn mẫu thử nằm khoảng nồng độ tuyến tính phương pháp khảo sát. Sau đó, định lượng theo mục 2.2.4. Tiến hành: Làm mẫu: hút 10 ml dung dịch thử Silvicon Sj, S2, S3, S4, s5 mục 2.2.5 (có nồng độ c đo dược bảng 2.4) cho vào bình định mức 20ml. Mỗi mẫu thêm 3ml dung dịch chuẩn crôm 10|Lig/ml thêm vào mẫu 2ml dung dịch H N 10%, thêm nước cất vừa đủ. Kết định lượng thu bảng Bảng 8: Kết tìm lại chất chuẩn. % Cr tìm lại stt Lượng Cr chuẩn Hàm lượng Cr mẫu thêm vào (ng/ml) tìm lại (ng/ml) s, 1,5 1,5 1,5886 1,5148 105,9 1,5 1,5794 105,3 1,5 1,5679 104,5 1,5 s5 Giá trị trung bình 1,5794 105,3 ^2 S3 S4 101,0 104,4 Độ lệch chuẩn (S) 1,97 Phương sai (S2) 3,86 Độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) 1,89 19 Nhân xét: Qua kết cho thấy phương pháp nghiên cứu có độ cao với khả tìm lại từ , % đến 105,9%. 2.2.7. So sánh phương pháp đường chuẩn phương pháp thêm chuẩn định lượng crôm phổ hấp thụ nguyên tử Để khảo sát xem mẫu thử có ảnh hưởng tói kết định lượng crôm hay không, tiến hành định lượng crôm phương pháp thêm chuẩn. - Chuẩn bị dung dịch thử mục 2 . - Chuẩn bị dung dịch chuẩn: từ dung dịch chuẩn crôm |ig/ml hút xác 0, 1, 2, 3, 4ml vào bình định mức 10ml, thêm xác 5ml dung dịch thử chuẩn bị thêm dung dịch acid HNO 2% vừa đủ, lắc đều. Tiến hành: Chuyển chế độ đo từ chế độ đo đường chuẩn (w curve) sang chế độ đo thêm đường chuẩn (Stdd add) tiến hành đo mục 2.2.4. Thu kết bảng 9. Bảng 9: Hàm lượng crôm viên nang mềm Silvicom theo phương pháp thêm chuẩn. stt mẫu s KI dầu thuốc Nồng độ Cr đem cân mt (g) d2 thử c (^Ig/ml) 1,6883 1,7242 1,7046 1,7007 1,7096 Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn (S) Phương sai (S2) 2,2366 2,3537 2,1497 2,2540 2,1106 Độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) 20 Hàm lượng Cr viên mng/v 65,5 67,5 62,3 65,5 61,0 64,4 2,65 7,00 4.11 Ở đây, để so sánh độ xác hai phương pháp khác phù hợp hai giá trị trung bình sử dụng Test-T Test-F . Bảng 10: Kết quảđịnh lượng crôrn viên Siỉvicom theo phương pháp. Hàm lượng viên Hàm lượng viên (ng/viên) pp đường (jig/vien) pp thêm chuẩn chuẩn Giá trị trung bình 65,4 64,4 s s2 1,39 2,64 1,93 7,00 RSD% 2,12 4,10 ♦ So sánh độ xác củahai phương pháp sử dụng Test-F C2 So sánh tỉ số phương sai theo công thức F= ^ mức tin cậy p= 95% sl n =n2=5 ta có Fa =6,39. Ta có F=3,86 < Fa, chứng tỏ sai khác độ xác hai phương pháp ý nghĩa thống kê. ♦ So sánh giá trị trung bình Test-T Để so sánh giá trị trung bình có phù hợp hay không, ta so sánh |3cj-3c2| s . Trong đó, £ = ta.sdvói Sd =J^—! - ^Sl + (ĩl2 ~ 1-^2 . y ĩ i j + n2 - ’ynj — n2 mức tin cậy p=95%, bậc tự dD n +n -2=8. Ta có ta=2,36 =>£=3,07 |jc, - x 2| = \[...]... qua môi trường hấp thụ (Ix): Ix= I 0 (1) Trong đó: Kx: Hệ số hấp thụ nguyên tử của nguyên tố N0: Số nguyên tử tự do L: Bề dày lớp hấp thụ Cường độ của vạch hấp thụ nguyên tử : D = log— = 2.303 KX L.N0 (2) D: Là cường độ vạch phổ hấp thụ nguyên tử Độ tắt cuả chùm sáng cường độ I sau khi đi qua đám hơi chứa No 0 nguyên tử tự do có bể dày L(cm) Nhưng trong máy đo quang phổ hấp thụ nguyên tử thì chiều dài... học của crôm trong cơ thể và các bệnh lý có liên quan khi thiếu hụt vi lượng này trong dinh dưỡng + Các phương pháp định lượng crôm, đặc biệt là phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử (phương pháp đường chuẩn và phương pháp thêm chuẩn) ♦ Lựa chọn được phương pháp định lượng crôm bằng phương pháp đường chuẩn Đã tìm được điều kiện phân tích thích hợp: Các thông số của máy Hitachi-Z5000 cho định lượng crôm... • Nhưng cần acid có độ tinh khiết cao 2.1.2.2 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp định lượng crôm bằng phương pháp hấp thụ nguyên tử: áp dụng kỹ thuật nguyên tử hóa ngọn lửa - Xác định hàm lượng crôm dựa trên phương pháp đường chuẩn 2.2 Thực nghiệm và kết quả 2.2.1 Điều kiện phân tích Qua quá trình khảo sát trên máy quang phổ hấp thụ nguyên tử cho định lượng crôm, chúng tôi chọn điều kiện phân tích... diphenylcarbazide trong môi trường acid tạo phức chất có màu tím đỏ Đo độ hấp thụ của phức chất tạo thành ở bước sóng 540 nm 1.7.3 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử [9],[11],[13],[4] 1.73.1 Cơ sở của phương pháp Theo qui tắc Kirschoff: Nguyên tử chỉ hấp thụ chọn lọc những tia bức xạ đặc trưng mà chính nó cố thể phát ra trong quang phổ phát xạ Phổ hấp thụ nguyên tử của một nguyên tố thường ít vạch hơn phổ. .. của nó Vì vậy, phổ hấp thụ nguyền tử cố độ chọn lọc cao hơn phổ phát xạ” Cường độ phổ cho phép xác định nồng độ của nguyên tố trong mẫu 1.73.2 Các phương trình cơ bản của phép đo phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Quá trình hấp thụ nguyên tử : Ề - * No lo - ► L(cm) ^ Ta thấy cường độ chùm sáng lo đi qua đám hơi No nguyên tử tự do của nguyên tố cần phân tích có bề dày L(cm) Theo định luật Lamber-Beer... crôm trong dung dịch thử xác định được bằng phương pháp đường chuẩn (|ug/ml) V: Là thể tích bình định mức khi tạo dung dich thử (ml) mt : Là khối lượng dầu thuốc đem định lượng (g) ĩn :Là khối lượng trung bình dầu thuốc trong một viên (g) Kết quả định lượng crôm trong viên silvicom, với V = 50ml, m =0,9888(g) Bảng 6: Hàm lượng Crôm trong viên dầu nang mềm silvicom Stt mẫu s Nồng độ Cr KL dầu trong. .. thuộc vào số nguyên tử N trong môi trường hấp thụ D = KịN (3) Kịilà hệ số thực nghiệm và phụ thuộc vào các yếu tố: hệ số hấp thụ nguyên tử Kx của vạch phổ hấp thụ nguyên tử, nhiệt độ của môi trường hấp thụ, bề dày của môi trường hấp thụ Theo biểu thức của Winerfordner và Vicker cho thấy mối quan hệ giữa nồng độ đám hơi nguyên tử N và nồng độ c trong mẫu: N = 3.102ì F W 'SMr £ h o (4) Q.T.n, Trong đó:... sánh phương pháp đường chuẩn và phương pháp thêm chuẩn trong định lượng crôm bằng phổ hấp thụ nguyên tử Để khảo sát xem nền mẫu thử có ảnh hưởng tói kết quả định lượng crôm hay không, chúng tôi tiến hành định lượng crôm bằng phương pháp thêm chuẩn - Chuẩn bị dung dịch thử như mục 2 2 3 2 - Chuẩn bị dung dịch chuẩn: từ dung dịch chuẩn crôm 1 0 |ig/ml hút chính xác 0, 1, 2, 3, 4ml vào các bình định. .. nghị các cơ quan có thẩm quyền xem xét, nghiên cứu thêm để công nhận phương pháp định lượng crôm trong viên nang mềm bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử là phương pháp ngoài dược điển, có tính pháp quy khi kiểm tra các thuốc nang mềm có chứa thành phần crôm trên thị trường 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 Bùi Long Biên (1995), Phân tích hoá học định lượng, NXBKHKT tr 174-181 2 Hoàng Văn Bính (1998), Độc chất công... từng vạch phổ của từng nguyên tố Từ (3) và (5) suy ra: D = a.ơ (6) a = k tk2: là hệ số thực nghiệm phụ thuộc vào điều kiện hóa hơi nguyên tử hóa mẫu phân tích ở trong một điều kiện nhất định nó là một hằng số Phương trình ( ) là cơ sở cho phép định lượng các nguyên tố theo phổ 6 hấp thụ của nó Đó chính là mối quan hệ giữa D và c 1.7.3.3 Các phương pháp xử lý mẫu trước khi phân tích - Phương pháp vô cơ . Định lượng crôm trong nang mềm bằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử với những mục tiêu sau: - Xây dựng phương pháp định lượng crôm bằng đo phổ hấp thụ nguyên tử. - Áp dụng phương pháp. cao. 2.1.2.2. Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp định lượng crôm bằng phương pháp hấp thụ nguyên tử: áp dụng kỹ thuật nguyên tử hóa ngọn lửa. - Xác định hàm lượng crôm dựa trên phương pháp đường. Các phương pháp định lượng crôm 8 1.7.1. Phương pháp chuẩn độ thể tích 8 1.7.2. Phương pháp đo màu 8 1.7.3. Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử 9 Phần II THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12 2.1. Nguyên